Name: 테스트 시각 기능에 대한 간단한 행동 분석는 Xenopus laevis의 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: 학습하세요 Xenopus laevis 올챙이의 시각 기능을 평가하는 간단한 행동 분석법을. 흑백 수조에서 올챙이가 선호하는 쪽에 머무는 시간을 측정하여 시각 유도 행동을 연구하는 이 방법은 발달 신경생물학 연구에 유용합니다.

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이 작품은 건강의 국립 연구소에서 교부금에 의해 투자되었다 : EY015748, EY017964 (MEZ), 및 EY019517 (ASV). 이 작품은 또한 안과 부서 및 중앙 뉴욕의 사자 실명 무제한 부여를 방지하기 위해 연구에 의해 지원되었다. 우리는 또한 동물의 자신의 우수한 치료를 위해이 비디오에서 주연하는 스테핑에 대한 우리의 동물 기술자, 마 멜리을, 감사의 말씀을 전합니다.

동물 관리 Xenopus의이 연구에 사용 된 올챙이는 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 북부 의과 대학 IACUC 및 가이드에 의해 승인 된 절차에 따라, 성장 제기 및 처리 하였다 laevis의. . 1 전 동작 설정 : 올챙이 <ol><li> 시판 소스에서 수정 된 Xenopus의 배아를 얻거나 이전에 6 바와 같이 체외에서 난자를 비옥. </li><li> 20 mM의 KCl을,, 20 mM의 염화칼슘, 50 mM의 HEPES 0.1X MMR [10 X 마크의 수정 링거 (MMR) 솔루션 주식 (10 mM의 MgCl2를 2를 포함 60mm 배양 접시에 18 ˚ C에서 신경 판 단계의 배아에 blastula를 놓고; 1 M의 NaCl, 50 ㎍ / ml의 젠타 마이신 항생제), pH를 7.5로 조정하고 오토 클레이브 RT에서 보관. 매일 0.1X MMR을 변경하고 죽은 태아를 제거합니다. </li><li> 배아 ~ 27 Nieuwkoop와 페이버 단계에 도달하면 - 30 7 번째 전환항생제없이 0.1X MMR에 전자 배아 장내 박테리아의 성장을 허용합니다. </li><li> 그들은 먹이 단계​​ (단계 45)에 도달 할 때까지 올챙이 성장과 0.1X MMR 가득 100mm 배양 접시로 이동합니다. 그 사이 날에 0.1X MMR을 변경, 일주일 동안 매일 그들에게 쐐기 분말 상층 액을 넣습니다. </li><li> 100mm 페트리 접시에 한 주 후에, 개구리 물이 가득 반 갤런 탱크에 동물 이동 [0.5 g / L 즉시 바다와 2 ㎜ 2 인산 나트륨 (나 2 HPO 4 : 141.96 MW)의 pH 6.8]. 단계 2.4로 피드,하지만 물이 흐린 경우 물에게 일주일에 2-3 시간을 변경합니다. 빛이 오전 6시에 점등과 12 시간의 light/12 어두운 빛의주기에서 동물을 유지합니다. </li><li> 실험실 벤치있는 underpad, 적어도 12 시간의 O / N, 시험 전에 같은 흰색 표면에 시험 과목으로 하프 갤런 탱크를 배치합니다. </li><li> 단계 45-50에서 테스트 올챙이은 아래 3 단계에서 설명. </li></ol> . 2 전 동작 설정 : 기술 장비티 <ol><li> 동작 분석을위한 실험실의 영역을 따로 설정합니다. 그것은 표준 형광 조명 조용하고, 트래픽이 낮은 지역에 있어야합니다. </li><li> 동물 시험 탱크를 준비합니다. 중첩, 하프 갤런 테스트 탱크는 두 부분으로 구성되어있다 : 물과 올챙이를 개최한다 내부 탱크; 그리고 시각적 인 자극과 외부 탱크. <ol><li> 내부 탱크, 빈틈없는, 바닥에서 5cm와 외부 코너에 작은 표시를합니다; 이 물 라인 (그림 1A, 녹색 점선)입니다. </li><li> 또한, 내조에 대해, 실 가드 엘라스토머와 같은 불활성 화합물로 (모서리와 중앙) 탱크 디벳 채우기. 참고 : 그들은 채워하지 않는 경우 올챙이는이 지역에 머무르게됩니다 </li><li> 외부 탱크, 흰색 조직 종이 그림 1B 검은 전기 테이프, 다른 절반 하나의 탱크의 외부의 정확히 절반을 커버합니다. </li></ol></li><li> 에 탱크를 배치턴테이블을 접종. </li><li> 설치 웹캠 / 삼각대는 테스트 탱크 위에 있도록. 도 1C에 도시 된 바와 같이, 테스트 영역의 시각화를 허용하도록 카메라를 조정. </li><li> 5를 설치 퀵타임 플레이어 소프트웨어를 컴퓨터에 웹캠을 연결합니다. 카메라의 전원을 켭니다. QuickTime 플레이어에서 파일에서, &#39;새 동영상 저장&#39;을 선택합니다. 행동 분석 설정은 바로 컴퓨터에 표시됩니다. </li><li> 올챙이 동작에 영향을 미칠 수있는 외부 신호를 줄일뿐만 아니라, 물의 표면에서의 반사광을 감소시키는 전체 셋업 위에 경량 면천 드레이프. </li><li> 확인이 35-50 CD / m 2 사이 피복 대책 하에서 휘도. </li></ol> 3. 행동 분석 <ol><li> 개구리 물 단계 1.2.1 제 5 cm 물 표시로 내부 테스트 탱크를 채우십시오. </li><li> 작은 그물을 사용하여 조심스럽게 내부 테스트 탱크로 동물을 이동합니다. </li><li> 오픈 Q컴퓨터와 가이드로 외부 탱크를 사용하는 방법에 대한 uickTime 소프트웨어는 카메라 테스트 영역을 시각화하고 기록 할 수 있는지 확인합니다. </li><li> 카메라로 종이와 기록의 조각에 동물 이름, 날짜와 시간을 기록합니다. </li><li> 오른쪽 그림 2 탱크의 검은면이 외부 탱크에 시험 탱크를 배치합니다. </li><li> 탱크를 배치 한 후 바로 동영상 촬영을 시작하고 2 분 동안 타이머를 설정합니다. </li><li> 타이머 비프, 내부 시험 탱크를 제거하면, 외부 탱크를 180도 회전과 외부 탱크 내부의 내부 시험 탱크를 배치합니다. 타이머를 시작합니다. 참고 : 검은 색면 지금 다른 측면에 있어야합니다. </li><li> 열 시험의 총 단계 3.7, 여덟 번 이상 반복합니다. 각 시험을 확인, 가이드로 그림 2를 사용합니다. </li><li> 두 개의 분리 된 일에 행동 분석을 반복합니다. </li></ol> 4. 망막 Axotomy <ol><li> 그들은이 응답 할 때까지 0.02 %의 tricaine에 동물을 배치# 3 집게로 꼬리 핀치에. </li><li> 0.1X MMR 1 % 아가로 오스를 용융 한 후 60mm 페트리 접시에 추가합니다. 동물의 일부가 액체에 빠져들도록 냉각되면, 아가로 오스의 작은 직사각형의 잔디를 만들어 작은 0.02 %의 tricaine와 잔디에 올챙이를 추가합니다. </li><li> 피어스 25 G 바늘을 눈의 등쪽 영역 뒤에 45도 각도로 피부, 반대편 집게 대하여 동물을 보강하면서. </li><li> 시신경 옆에 자리 잡고 정맥을 자르지 않도록주의하면서 조심스럽게 # 5 집게로 구멍에 도달 시신경을 싹둑 꺼 그것을 뒤집어. 심한 출혈로 인해 실수로 동맥을 자르는에있는 경우, 다음 신속하게 안락사에 2 % tricaine에 동물을 배치합니다. 주의 : 2 % tricaine 솔루션은 인간의 마비를 일으킬 수 있습니다. 이 솔루션은 장갑으로 취급되어야한다. </li><li> 동물을 복구하기 위해 수술 후, 0.7X MMR과 100mm 배양 접시에 20 분 동안 50 ㎍ / ㎖의 젠타 마이신에 동물을 배치합니다. 네브라스카XT, 개구리 물 회수 탱크로 전송 올챙이. 동물 나머지 O / N.에게하자 </li><li> 다음날 아침, (3.1-3.9 단계) 전술 한 바와 같이 시각 기능을 테스트합니다. </li></ol> 5. 결과 분석 <ol><li> 시험이 종료 된 후, 올챙이는 탱크의 검은면에 남아있는 시간의 양을 측정합니다. <ol><li> 수동으로 시간을 표시하고 자주 일시 중지 할 수 있습니다 소프트웨어를 사용하여 비디오를 볼 수 있습니다. 비디오 디스플레이 시간을 본다. 내부 탱크가 성공적으로 외부 탱크 내부에 둥지와 카메라의 관점에서 제곱 때입니다 두 분 재판의 시작을 기록합니다. </li><li> 동물에 수영 탱크의 어느 쪽이 정의하는 올챙이의 눈의 위치를​​ 사용합니다. 두 눈은 검은 색 / 흰색 선을 넘은 경우에만 다른 탱크의 한쪽면에 교차 정의합니다. </li></ol></li><li> 동물 블랙 측에 소비 한 시간 (초 단위) 각 간격의 시작과 끝을 적는다. 일시 정지 및 재정확도를 보장하기 위해 비디오 감는다. 각 시험에서 초 총. </li><li> 연결된 동작 워크 시트에 입력이 숫자를. 워크 시트는 동물이 초 총 시간으로 총 120 초 시행 분열에서 탱크의 검은면에 소요되는 시간을 빼서 흰색면에 소요되는 시간의 비율을 계산합니다 [(120 - 전체 초에 지출 검은면) / 120 초]. 10 시험에 워크 시트의 평균은이 비율. </li><li> 일 사이의 실험 (0.05 ≤ P) 중요한 있는지 확인하기 위해 학생의 T-테스트, 쌍, 양측 분포를 사용합니다. </li></ol>

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</ol>

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우리는 여기에 쉽게 최소한의 교육을받은 실험실 요원에 의해 주에서 수행 할 수있는 간단한 비전 가이드 행동 분석을보고합니다. 다른 분석은 동물의 행동에 전문 장비와 전문 지식을 필요로하지만,이 분석은 빠른 테스트가 시각 기능을 확인할 수 있습니다. 또 다른 행동 분석, 비주얼 회피 분석은, tectum는 Xenopus의 10에 시각적 인식에 기여하는 방법을 결정하기 위해 개발되었습니다. 안정된 배경 대 이동, 따라서 단순한 분석보다 더 전문적인 비전 기반 동작을 측정 할 수 있습니다에 대한 응답이 분석 측정 공간 조정 및 대비 감도는 여기에보고했다. 자동화 된 동작 시스템은 탱크 (8)의 일측에 소요되는 시간의 양을 측정 할 수있는 것으로보고되었다. 어둡거나 밝은 환경 9에서 보내는 시간 지브라 피쉬의 양을 측정하는 데 사용 된 시판용 소프트웨어 (예 ANY-미로 소프트웨어)도있다.ssay 우리는 고가의 장비 나 소프트웨어의 이러한 유형...

는 Xenopus laevis의 눈 형성을 연구하는 모델 생물로 사용되었습니다. 눈은 시각 발달과 기능에 영향을 테스트하는 유전자 또는 경로에 대한보다 주에 만기 성장하고, 신속하게 개발할 수 있습니다. 시각 기능을 테스트하기 위해 optokinetic 및 optomotor 응답은 각각 1, 2, 제브라 피쉬와는 Xenopus 올챙이에서 사용되었다. Xenopus의 올챙이의 눈이 제브라 피쉬에 비해 상대적으로 작은이기 때문에,이 분석은 Xenopus의 미묘한 꼬리 플립과 눈 운동 동작을 감지하는 특수 장비의 사용과 훈련 된 인력이 필요합니다. Xenopus의의보다 강력한 행동은 여기에 3 설명 흰색 배경에 탱크에서 수영에 대한 기본 설정입니다. 반 블랙 / 반 흰색 탱크에서 올챙이를 배치 할 때 미리 변성 올챙이 신속하게 탱크의 백색 옆에 수영. 우리는 이전에 다 능성 세포 유래 여부를 확인하기 위해이 분석을 사용눈은 4 기능이었다. 여기, 우리는 premetamorphic Xenopus의 올챙이의 시각 기능을 테스트하는 데 사용할 수있는이 분석의 세부 버전을보고합니다. 그것은 단지 대부분의 Xenopus의 실험실에서 발견 탑재 디지털 캠코더, 디지털 카메라 소프트웨어 및 표준 장비를 필요로하기 때문에이 분석은 optomotor 응답 분석보다 간단합니다. 또한, 기록 된 반응은 집계 결과에 특별한 훈련이 필요하지 않습니다. 우리의 대표적인 결과는 두 번 망막 axotomy을 시행 한 올챙이 같은 그룹, 탱크 주위에 무작위로 수영을 보여줍니다. 우리는 또한 하나의 눈은 시각적 인 반응을 테스트 할 수있는 방법을 보여주는 대표적인 올챙이의 행동 분석 결과를 포함했다. 분석 기간 동안 획득 한 숫자를 삽입하고 분석 할 수 있도록 워크 시트가 포함되어 있습니다. 이 워크 시트 테스트 올챙이가 시각적 응답을 가지고 있는지 여부를 결정하는데 사용될 수있다.

<table><tbody><tr><td>1/2 갤런 플렉스-탱크 커버</td><td>eNasco</td><td>SB19271M</td><td>크기: 5-3/8" x 7" x 3-3/4"</td></tr><tr><td>검정 전기 테이프</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>흰색 티슈 페이퍼</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>대형 접종 턴테이블</td><td>VWR</td><td>50809-022</td><td>크기: Dia 114.3 x&nbsp; H 76.2 mm (4 1/2&nbsp; x&nbsp; 3")</td></tr> <tr><td>Durasorb 언더패드</td><td>VWR</td><td>82004-836</td><td>크기: 43.2 x 60.1 cm (17 x 24")</td></tr><tr><td>Kimwipe</td><td>Krackeler Scientific, Inc.</td><td>1945-34155-CS</td><td></td></tr><tr><td>표준 삼각대</td><td></td><td>다양한</td><td></td></tr><tr><td>iSight 카메라 또는 웹캠</td><td>Apple</td><td>M8817LL/A</td><td>큰 올챙이에게는 좋지만 작은 올챙이는 보기 어렵습니다</td></tr><tr><td>휴대용 컴퓨터</td><td>Apple/PC</td><td>다양한</td><td>우리는 13인치 MacBook, 2GHz Intel Core 2 Duo를 사용했습니다. MacOSX Lion 10.7.5</td></tr><tr><td>MiniDV 핸디캠 캠코더</td><td>SONY</td><td>DCR-HC42</td><td>를 실행합니다.6-도체 및 4-도체 알파 FireWire 400&nbsp;</td></tr><tr><td>Handycam station</td><td>SONY</td><td>DCRA-C121</td><td>이것은 파이어와이어를 카메라에 연결하는 데 사용할 수 있습니다</td></tr>. <tr><td>QuickTime Player 소프트웨어</td><td>Quicktime</td><td>버전 10.1</td><td></td></tr><tr><td>26 G 바늘 (5/8" 길이)</td><td>VWR</td><td>BD305115</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 펜치</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>11295-10</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>일회용품</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>겐타마이신 설페이트 [50 mg/ml]</td><td>Fisher Scientific</td><td>17-528Z</td><td>RT에 보관</td></tr><tr><td>Sylgard 184 실리콘 엘라스토머</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9644388</td><td></td></tr><tr><td>Instant ocean</td><td>Doctors Foster and Smith</td><td>CD-116528</td><td>저장 용액 = RT에 100 g/L 저장</td></tr><tr><td>이염기</td><td>성 Sigma Aldrich</td><td>S0876</td><td>저장 용액 = 0.4 M RT에 저장</td></tr><tr><td>체외 수정 배아</td><td>eNasco</td><td>LM00490MX</td><td>100 배아/단위</td></tr></tbody></table>

테스트 시각 기능에 대한 간단한 행동 분석<em&gt;는 xenopus laevis의</em

A Simple Behavioral Assay for Testing Visual Function in Xenopus laevis

개구리의 올챙이의 시각 기능의 측정은,는 Xenopus laevis의, 살아있는 동물의 실명에 대한 검사를 할 수 있습니다. optokinetic 응답은 테스트 한 모든 척추 동물에서 관찰 된 비전 기반의 재귀 동작입니다. 그래서 꼬리 플립 응답이 미묘한 반응을 기록 할 수있는 숙련 된 기술자를 필요로 다른 측정으로 사용 된 올챙이의 눈은 작은 수 있습니다. 우리는 올챙이가 검은 색과 흰색 양면 모두 탱크에 주입 할 때 탱크의 백색 옆에 수영하는 것을 선호한다는 사실에 따라 다른 행동 분석을 개발했다. 여기에 제시된 분석은 쉽게 측정 된 응답을 만들어 저렴하고 간단한 대안입니다. 설치는 대부분의 Xenopus의 실험실에서 쉽게 사용할 수 삼각대, 웹캠과 중첩 된 시험 탱크로 구성되어 있습니다. 이 문서는 이전과 시신경을 단절 한 후, 올챙이의 동작을 보여주는 동영상이 포함되어 있습니다. 한쪽 눈의 기능을 테스트하기 위해, 우리는 또한 스와 템포 포함각각의 눈은 연속적인 일에 망막 axotomy을 시행하는 올챙이의 sentative 결과. 미래 연구는 한 번에 여러 올챙이의 비전을 테스트하기 위해이 분석의 자동화 된 버전을 개발할 수 있습니다.

이전 보고서는이 분석, 우리는 올챙이의 눈을 하나의 시각적 기능을 테스트하기 위해이 분석을 변경 한 배경 색상 기본 설정 분석 3 premetamorphic Xenopus의 올챙이가 검은 색 / 흰색 탱크의 백색 옆에 수영하는 것을 선호하는 것으로 나타와 호출 한 주 미만. 이러한 방식으로, 자신의 눈 조직 학적 검사를 위해 수집 될 수있다. 우리는 응답이 시각 신호에 의한 방법을 여기에 보여줍니다. 영화 1에서, 좌측 및 우측 패널에 올챙이 같은 동물이다. 왼쪽은 수술 전 오른쪽에 동물, 모두 시신경을 절단하는 후 동물입니다. 우리는 아무것도 검은 측면에서 동물을 격퇴 또는 흰색면에 유치하기 위해 추가되지 않습니다 것을 보여주기 위해 물을 소용돌이. 영화에서, 우리는 동물의 각 세트에 대한 시신경의 상태를 보여줍니다 하단 모서리에있는 올챙이의 개략을 제공합니다. 영화 1, 일반,...

제노는 올챙이가 검은 색 / 흰색 탱크의 흰색 측면에서 수영을 선호 ​​laevis의. 이 동작은 자신의 비전에 의해 유도된다. 이 동작을 바탕으로, 우리는 올챙이의 시각 기능을 테스트 할 수있는 간단한 분석을 제시한다.

테스트 시각 기능에 대한 간단한 행동 분석<em&gt;는 Xenopus laevis의</em

Measurement of the visual function in the tadpoles of the frog, Xenopus laevis, allows screening for blindness in live animals. The optokinetic response ...

본 실험 절차의 전반적인 목적은 올챙이가 테스트 수조의 검은색으로 덮인 절반 영역에서 머무는 시간을 기록함으로써 올챙이의 시각 기능을 테스트하는 것입니다. 이를 위해 먼저 올챙이를 45~50단계까지 성장시킵니다. 두 번째 단계는 행동 분석을 위해 절반은 검은색, 절반은 흰색으로 구성된 수조와 카메라를 설치하는 것입니다.다음으로 올챙이가 들어 있는 두 번째 수조를 외부 수조 안에 넣습니다. 각 올챙이에 대해 주변 환경의 배경이 바뀜에 따라 나타나는 시각 유도 행동을 기록합니다. 마지막 단계로 올챙이의 망막 적출술을 시행한 후 행동 분석법을 반복합니다.최종적으로, 이 간단하고 저렴한 분석법에서 얻은 데이터는 광학적 시각(phototop vision) 테스트 하에서 올챙이가 수조의 한쪽 방향으로 수영하는 것을 더 선호한다는 것을 보여주는 데 사용됩니다. 시각 운동 반응(optic kinetic response)이나 꼬리 뒤집기 분석(tail flip assay)과 같은 다른 기술보다 이 방법을 사용할 때의 주요 장점은, 대부분의 실험실에서 쉽게 구할 수 있는 장비를 사용하는 저렴하고 간단한 방법이라는 점입니다. 올챙이를 준비하려면, 먼저 수정된 xenopus 배아를 확보하고, 60 mm 페트리 접시에 50 µg/mL 농도로 10배 희석한 mark's, modified ringers 또는 MMR을 넣습니다.젠타마이신(Gentamycin) 항생제를 처리한 포배기(blastula)부터 신경판(neural plate) 단계의 배아를 준비합니다. 배아를 페트리 접시에서 18°C로 유지하며 2단계에서 15단계까지 배양합니다. 배아가 약 27~30단계의 신경배(neurula) 단계에 도달하면, 장내 세균 성장을 유도하기 위해 항생제가 포함되지 않은 0.1 XMMR 배지로 교체합니다.올챙이가 45단계 전후의 먹이 섭취 단계에 도달하면, 0.1 XMMR이 담긴 100 millimeter 페트리 접시로 옮깁니다. 다음 날, 쐐기풀 가루 상층액을 먹이로 제공합니다. 100 millimeter 페트리 접시에서 일주일이 지나면, 0.5갤런 수조에 frog water를 채웁니다.동물들을 수조로 옮기고 쐐기풀 분말 상층액 급여 일정을 계속 유지하되, 물 교체는 일주일에 2~3회만 수행합니다. 동물들을 0.5갤런 수조에서 사육할 때는 오전 6시에 점등되는 12시간 명기/12시간 암기 주기를 유지합니다. 테스트 전에는 피실험체가 들어 있는 0.5갤런 수조를 흰색 표면 위에 두고 테스트 시작 전까지 최소 12시간 동안 하룻밤 동안 유지합니다. 행동 분석법은 표준 형광등 조명이 설치된 조용하고 통행량이 적은 구역에서 수행해야 합니다.내부 탱크가 될 탱크의 외부 모서리 부분에 겹쳐 놓을 0.5갤런 용량의 테스트 탱크 두 개를 준비하십시오. 샤피(Sharpie) 마커를 사용하여 바닥에서 5 cm 높이에 수위선을 표시하십시오. 또한 내부 탱크의 경우, 내부의 움푹 들어간 부분이 있는지 확인하십시오.올챙이가 그 안에 머무는 것을 방지하기 위해 비활성 화합물로 이를 채웁니다. 이제 두 번째 외부 수조에 주목하십시오. 다음 단계를 위해 검은색 전기 테이프와 흰색 티슈 페이퍼를 준비합니다.여기서 보여주는 것처럼 테이프를 사용하여 탱크 한쪽 외부를 덮고, 조직지를 사용하여 나머지 반대쪽 외부를 덮습니다. 탱크 준비가 완료되면 접종용 턴테이블을 설치하고 그 위에 중첩된 탱크들을 배치합니다. 카메라가 탱크 내부를 위에서 촬영할 수 있도록 삼각대와 웹캠을 배치합니다.비디오 캡처 및 재생 소프트웨어가 설치된 컴퓨터에 웹캠을 연결하십시오. 카메라 전원을 켜고 새로운 동영상 녹화를 준비합니다. 그다음 카메라와 수조 위에 가벼운 면 천을 덮으십시오.올챙이에 전달되는 외부 자극을 줄이기 위해, 조도계를 사용하여 천 아래의 조도가 35에서 50 candles per square meter 사이인지 확인하십시오. 내부 테스트 수조를 꺼내어 행동 분석 시험을 시작하십시오. 수조의 5 cm 표시선까지 개구리 전용수를 채우십시오.그물을 사용하여 동물을 0.5갤런 용기에서 컴퓨터에 연결된 내부 테스트 수조로 옮깁니다. 기록 보관을 위해 녹화 소프트웨어가 실행 중이며 테스트 구역을 녹화하고 있는지 확인하십시오. 종이에 동물의 이름, 날짜 및 시간을 기입하십시오.녹화를 위해 이것을 카메라 아래에 배치하십시오. 배치가 완료되면 타이머를 2분으로 설정하십시오. 다음으로, 검은색 면이 오른쪽에 오도록 턴테이블 위에 외부 탱크를 배치하십시오.이제 테스트 탱크를 외부 탱크 안에 넣습니다. 기록 구역에서 가림막을 닫고 컴퓨터 화면을 통해 외부 탱크의 방향을 확인합니다. 비디오가 녹화되고 있는지 확인한 후 타이머를 시작합니다.타이머가 울리면 드레이프를 그대로 둔 채 내부 테스트 탱크를 꺼냅니다. 다음으로 외부 탱크를 180도 회전시켜 검은색 면이 왼쪽으로 오게 합니다. 테스트 탱크를 다시 외부 탱크에 넣고 2분 타이머를 시작합니다.다시 내부 탱크를 제거합니다. 외부 탱크를 180도 회전시키고, 2분마다 내부 탱크를 교체하는 과정을 총 10회 반복합니다. 완료되면 비디오 녹화를 중단하십시오.올챙이를 0.5갤런 용량의 탱크로 되돌려 놓습니다. 레티놀 절제술(retinol ex sodomy)을 수행하기 위해 현미경을 준비합니다. 60mm 페트리 접시에 0.1 XMMR에 녹인 1%aros를 채우고 굳힙니다.올챙이 크기에 맞게 아가로스(agarose)를 작은 직사각형 모양으로 잘라냅니다. 준비가 되면 실험 동물을 꺼내 0.02% Trica에 넣습니다. 3번 포셉으로 꼬리를 꼬집었을 때 반응이 없을 때까지 대기한 후 계속 진행합니다.그 후 동물을 디쉬로 옮깁니다. 페트리 디쉬를 현미경 위에 올려놓습니다. 핀셋을 사용하여 한쪽에서 동물을 고정할 준비를 합니다.반대편에서 25 gauge 바늘을 사용하여 눈의 등쪽 영역 뒤쪽 피부를 45도 각도로 찌른 다음, 5번 핀셋으로 구멍 안으로 조심스럽게 진입하여 옆에 있는 정맥을 피해 시신경을 절단합니다. 신경을 밖으로 젖혀 밀어내고 수술 후 핀셋을 제거합니다. 0.7 XMMR과 50 µg/mL가 포함된 100 mm 페트리 접시에 동물을 넣어 회복시킵니다.Gentamycin으로 20분 동안 처리합니다. 그 후, 올챙이를 개구리 전용수로 채운 회복 수조로 옮깁니다. 테스트 준비를 위해 수조를 흰색 표면 위에 놓습니다.동물을 하룻밤 동안 휴식하게 합니다. 다음 날 아침, 행동 분석법을 사용하여 시각 기능을 테스트합니다. 이 영상은 실험의 대표 데이터를 보여줍니다.왼쪽은 수술 전의 동물들이며, 오른쪽은 양쪽 눈의 망막 축삭을 모두 절단한 후의 동일한 동물들입니다. 이는 하단 모서리의 모식도로 표시되어 있습니다. 물을 흔들어 동물들을 검은색 쪽에서 멀어지게 하거나 흰색 쪽으로 끌어당기는 물질이 전혀 첨가되지 않았음을 보여주었습니다.수술 전 올챙이는 30초 이내에 배경색에 반응하는 반면, 맹視 올챙이는 수조 안을 목적 없이 헤엄칩니다. 이 차트는 세 가지 조건에서 단일 개체가 흰색 및 검은색 영역에서 보낸 시간의 백분율을 보여줍니다. 먼저, 어떠한 수술도 받기 전의 개체를 해당 분석법을 사용하여 관찰하였습니다.우측 시신경을 절단한 후 이틀 연속으로, 이틀간의 테스트를 통해 행동을 관찰하였습니다. 마지막으로 양측 시신경을 모두 절단한 후, 해당 분석법으로 이틀 더 관찰을 진행하였습니다. 적어도 하나의 시신경이 온전할 때 동물은 수조의 흰색 쪽에서 더 많은 시간을 보냈습니다.이 영상을 시청한 후, 여러분은 대부분의 개구리 실험실에 구비된 간단한 시약과 장비를 사용하여 올챙이의 시력을 테스트하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 실험에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

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제노푸스 laevis 배아에서 눈부안으로 DNA의 미세 주입 및 GFP의 이미징 그대로 광학 축색 아버를 표현, 살아있는 제노푸스 올챙이

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당뇨병 쥐의 Y-미로를 통한 광운동 반응 및 인지 기능을 통한 시각 기능의 행동 평가

학습하세요 Xenopus laevis 올챙이의 시각 기능을 평가하는 간단한 행동 분석법을. 흑백 수조에서 올챙이가 선호하는 쪽에 머무는 시간을 측정하여 시각 유도 행동을 연구하는 이 방법은 발달 신경생물학 연구에 유용합니다.

테스트 시각 기능에 대한 간단한 행동 분석

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