테스트 시각 기능에 대한 간단한 행동 분석는 Xenopus laevis의

이 절차의 전반적인 목표는 올챙이가 검은색으로 덮인 테스트 탱크의 절반에서 보내는 시간을 기록하여 올챙이의 시각 기능을 테스트하는 것입니다. 이것은 먼저 올챙이를 45-50단계로 올려서 달성됩니다. 두 번째 단계는 행동 분석을 위한 카메라와 함께 반은 검은색, 반은 흰색인 탱크를 설정하는 것입니다.

다음으로 올챙이가 있는 두 번째 탱크를 외부 탱크에 놓습니다. 각 올챙이 레코드에 대해 해당 환경의 배경으로서의 비전 안내 동작이 변경됩니다. 마지막 단계는 올챙이에게 망막 남색(retinal ex sodomy)을 실시한 후 행동 분석을 반복하는 것이다.

궁극적으로, 이 간단하고 저렴한 분석법의 데이터는 올챙이가 포토탑 시력 테스트에서 수조의 한쪽에서 다른 쪽보다 수영하는 것을 선호한다는 것을 보여주는 데 사용됩니다. 광학 운동 반응 또는 꼬리 플립 분석과 같은 다른 기술에 비해 이 방법을 사용하는 주요 이점은 대부분의 opus 실험실에서 쉽게 구할 수 있는 장비를 사용하는 저렴하고 간단한 방법이라는 것입니다. 올챙이를 준비하려면 먼저 수정 된 xenopus 배아를 얻고, 60mm 페트리 접시에 10 배 희석 된 마크, 변형 된 링거 또는 MMR을 밀리리터당 50 마이크로 그램

겐타마이신 항생제는 배반을 신경판 단계 배아에 배치합니다. 페트리 접시에서 섭씨 18도에서 2단계부터 15단계까지 단계. 배아가 약 27-30세의 유리한 단계에 도달하면, 장내 세균이 증식할 수 있도록 항생제를 사용하지 않고 0.1 XMMR로 전환한다.

올챙이가 45단계쯤 먹이 단계에 도달하면 0.1XMMR로 100mm 페트리 접시로 옮깁니다. 다음날, 쐐기풀 가루 상등액을 먹입니다. 100mm 페트리 접시에 일주일 후 반 갤런 탱크에 개구리 물을 채웁니다.

동물을 수조로 옮기고 쐐기풀 가루 상등액 먹이 일정을 계속하되 물은 일주일에 2-3번만 갈아줍니다. 동물이 반 갤런 탱크에 있을 때 12시간 조명, 12시간 어두운 주기로 유지하고 오전 6:00에 조명을 켭니다.테스트하기 전에 테스트 대상과 함께 반 갤런 탱크를 테스트 전 최소 12시간 동안 밤새 흰색 표면에 놓습니다. 거동 분석은 표준 형광등이 있는 조용하고 교통량이 적은 지역에서 수행해야 합니다.

내부 탱크가 될 곳의 바깥쪽 모서리에 두 개의 중첩 반 갤런 테스트 탱크를 준비합니다. Sharpie를 사용하여 바닥에서 5cm 위에 흘수선을 표시합니다. 또한 내부 탱크의 경우 내부에 있는 디봇을 식별합니다.

올챙이가 남아 있지 않도록 불활성 화합물로 채우십시오. 이제 두 번째 외부 탱크로 주의를 돌립니다. 다음 단계에서는 검은색 전기 테이프와 흰색 티슈 페이퍼를 구합니다.

테이프를 사용하여 탱크의 한쪽 바깥쪽을 덮고 티슈 페이퍼를 사용하여 다른 쪽 바깥쪽을 덮습니다. 탱크가 준비되면 접종 턴테이블을 설치하고 그 위에 중첩된 탱크를 놓습니다. 카메라가 위에서 탱크 내부를 이미지화할 수 있도록 삼각대와 웹캠을 배치합니다.

연결 web비디오 캡처 및 재생 소프트웨어가 있는 컴퓨터에 캠. 카메라를 켜고 새 동영상 녹화를 준비합니다. 다음으로 가벼운 면 천을 카메라와 탱크 위에 두릅니다.

올챙이에 대한 외부 신호를 줄이려면 휘도 측정기를 사용하고 천 아래의 휘도가 평방 미터당 35-50 양초 사이인지 확인하십시오. 내부 테스트 탱크를 회수하여 거동 분석을 시작합니다. 개구리 물을 5cm 표시까지 채웁니다.

그물을 사용하여 반 갤런 용기에서 컴퓨터의 내부 테스트 탱크로 동물을 옮깁니다. 녹음 소프트웨어가 열려 있고 기록 보관을 위해 테스트 영역을 기록하고 있는지 확인하십시오. 종이에 동물 이름, 날짜, 시간을 적는다.

녹화를 위해 이것을 카메라 아래에 놓습니다. 이 작업이 완료되면 타이머를 2분 동안 미리 설정합니다. 다음으로 외부 탱크의 방향을 턴테이블에서 향하게 하여 검은색 면이 오른쪽에 오도록 합니다.

이제 테스트 탱크를 외부 탱크에 놓습니다. 녹음 영역에서 드레이프를 닫고 컴퓨터 화면을 사용하여 외부 탱크의 방향을 확인합니다. 비디오가 녹화되고 있는지 확인하고 타이머를 시작하십시오.

타이머에서 신호음이 울리면 드레이프를 제자리에 유지하고 내부 테스트 탱크를 제거합니다. 그런 다음 외부 탱크를 180도 회전하여 검은색 면이 왼쪽에 오도록 합니다. 테스트 탱크를 외부 탱크로 되돌리고 2분 타이머를 시작합니다.

다시 내부 탱크를 제거하십시오. 외부 탱크를 180도 회전하고 2분마다 총 10회 내부 탱크를 교체하십시오. 완료되면 비디오 녹화를 중지합니다.

올챙이를 반 갤런 탱크로 되돌립니다. 레티놀 ex 남색을 수행하기 위한 현미경을 준비합니다. 60mm 페트리 접시에 0.1 XMMR에서 1%aros를 녹여 굳히십시오.

올챙이 크기의 작은 직사각형 조각을 제거합니다. 계속 진행할 준비가 되면 실험 동물을 꺼내 0.02%Trica에 넣습니다. 3번 집게로 꼬리를 꼬집어도 반응하지 않을 때 계속합니다.

그런 다음 동물을 접시에 옮깁니다. 현미경에 페트리 접시를 장착하여 진행합니다. 한쪽에 집게로 동물을 지탱할 준비를 합니다.

반대쪽에서는 25게이지 바늘을 사용하여 눈의 등쪽 뒤 피부를 45도 각도로 뚫고 5번 구멍에 조심스럽게 손을 뻗어 집게로 시신경을 잘라내고 옆의 정맥을 피하면서 시신경을 잘라냅니다. 수술 후 신경을 빼내고 겸자를 집어넣는다. 0.7 XMMR 및 밀리리터당 50마이크로그램의 100mm 페트리 접시에 동물을 넣어 동물을 회수합니다.

겐타마이신을 20분 동안 투여합니다. 그 후, 올챙이를 개구리 물이 담긴 회수 탱크로 옮깁니다. 테스트를 준비하기 위해 탱크를 흰색 표면에 놓습니다.

동물을 하룻밤 동안 쉬게 하십시오. 다음 날 아침에는 행동 분석을 사용하여 시각 기능을 테스트합니다. 이 동영상은 실험의 대표적인 데이터를 보여줍니다.

왼쪽은 수술 전의 동물이고, 오른쪽은 양쪽 눈의 망막 축삭돌기가 절단된 후의 동일한 동물입니다. 이것은 하단 모서리의 회로도로 표시됩니다. 검은 쪽에서 동물을 쫓아내거나 흰 쪽으로 유인하기 위해 아무 것도 첨가되지 않았다는 것을 보여주기 위해 물이 교란되었습니다.

수술 전 올챙이는 30초 이내에 배경색에 반응하는 반면, 눈먼 올챙이는 수조 주위를 정처 없이 헤엄칩니다. 이 차트는 세 가지 조건에서 단일 동물이 흰색 영역과 검은색 영역에서 보낸 시간의 백분율을 보여줍니다. 먼저, 분석을 사용하여 수술 전에 동물을 관찰했습니다.

우측 시신경이 절단된 후 이틀 연속으로 이틀간의 검사에 걸쳐 시신경의 거동을 관찰했습니다. 마지막으로, 양쪽 시신경을 절단한 후 분석으로 이틀 더 관찰했습니다. 그 동물은 적어도 하나의 시신경이 손상되지 않았을 때 수조의 하얀 쪽에서 더 많은 날을 보냈다.

이 비디오를 시청한 후에는 대부분의 개구리 실험실에서 찾을 수 있는 간단한 시약과 장비를 사용하여 올챙이의 시력을 테스트하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 실험에 행운을 빕니다.