Name: 신경 퇴행성 질환의 마우스 모델에 대한 후각 분석 실험 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 27 s
Description: 학습하세요 신경 퇴행성 질환 마우스 모델에서 후각 기능을 평가하는 매장 펠릿 테스트, 블록 테스트 및 습관화-비습관화 테스트 방법을 통해. 이 기법은 유전적 마우스 모델의 후각 능력을 측정하고 잠재적 치료제 효능을 평가하는 데 활용됩니다.

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이 프로토콜은 신시내티 대학의 IACUC에서 정한 모든 동물 관리 및 사용 지침 및 규정을 따릅니다. 이 연구는 NIH/NINDS NS07722와 파킨슨병 및 운동 장애를 위한 가드너 가족 센터(Gardner Family Center for Parkinson's Disease and Movement Disorders)의 자금 지원을 받습니다.

프로토콜의 모든 단계는 동물 보호를 수행 신시내티 대학의 IACUC가 설정 한 가이드 라인과 규정을 사용합니다. 1 일반 고려 사항 <ol><li> 가능하면 어두운 사이클에서의 활성 단계에서 쥐를 테스트합니다. 일반적으로 어두운주기에 낮은 조명 적어도 1 시간에서 테스트를 수행합니다. 어둠 사이클 시험이 가능하지 않을 경우, 광주기 동안 모두 세 가지 테스트를 수행. 쥐가 자신의 수면주기 동안 시험 때 시간을 스니핑 감소시킬 수 있음을 알아 두셔야합니다. 참고 : 테스트는 수면주기 동안 수행 될 수 있지만 마우스가 묻혀 펠렛, 블록, 또는 향기 카트리지에 덜 관심을 표시 할 수 있습니다. </li><li> 외부 후각 큐들의 영향을 줄이기 각 시험 내내 항상 장갑의 염기쌍을 착용하고 각 마우스를 각각의 시험에 대한 염기쌍 장갑 위에 깨끗한 쌍을 배치하기 위하여. 의심의 장갑 깨끗한 세트에 넣어 원칙적으로. 장갑 한 상자가 읽게그들이 자주 변경되기 때문에 ILY 가능합니다. 참고 : 우리는 모든 동물 처리를 위해 니트릴 장갑을 사용합니다. </li><li> 시험 물질 및 살균제와 피사체 사이의 케이지를 클리닝 / 살균제도 질병 확산 가능성을 감소시킬뿐만 아니라 후각 원하지 않는 신호를 제거하기 위해이 테스트 전지의 중요한 단계이다. </li></ol> 2 매장 펠렛 테스트 <ol><li> 적어도 이일 실험 전에, 각 마우스의 무게를 기록하고 음식은 체중의 90 %로 제한한다. 시험 전에 및 음식 제한 동안 마우스에게 각 시험 동안 사용되는 펠릿의 1-2 개를 제공 (예를 들면, 청량 시리얼 편). 쥐가 음식 neophobic 그리고 그들은 이전에 알약을 먹게하지 않은 경우 시험 중에 펠렛를 검색 할 수 있기 때문에이 단계를 생략하지 마십시오. </li><li> 모든 테스트 일에, 아니 물 한 병 또는 공급 장치 B를 테스트 룸에서 자신의 새장을 배치하여 시험을하기 전에 1 시간 동안 마우스를 길들인치 필터 만 상단 뚜껑을 자신의 홈 케이지에서 그들을 집. </li><li> 습관화하는 동안, ~ 깨끗한 침구 침구 균일하게 케이지에 걸쳐 분산되어 특정 만들기 높은 3cm를 깨끗한 마우스 케이지를 입력합니다. 5 분 동안 타이머를 설정합니다. </li><li> 이 표시되지 않도록 습관화의 1 시간 후, 침대 아래에 하나 가당 시리얼 펠렛 0.5 cm 묻어. </li><li> 그 홈 케이지에서 테스트 마우스를 제거 테스트 케이지의 중앙에 배치, 케이지에 필터 상단 덮개를 놓고 타이머를 시작합니다. </li><li> 마우스가 펠렛을 폭로하고 그것을 먹고 시작하면 타이머를 중지합니다. 매장 펠렛을 발견하는 시간이 있습니다. </li><li> 마우스는 5 분 내에 펠렛을 찾지 못하는 경우, 시험을 종료하고 해당 마우스의 300 초 점수를 참고. 마우스가에 액세스 할 수 있도록 침대의 상단에 펠렛을 이동하고 마우스 펠렛을 먹을 수 있습니다. </li><li> 재판에 따라, 자신의 홈 케이지에 마우스를 반환합니다. </li><li> 테스트 케이지에서 침대를 비우고 C를 청소동물 방 청소 솔루션을 세. </li><li> 반복 각 마우스 2.9에 2.4 단계, 그리고 전에 각 마우스 후 장갑을 변경합니다. </li><li> 모든 생쥐는 실험 후, 그들에게 90 % 체중에서 그들을 유지하기에 충분한 음식을 제공한다. </li><li> 한 가지 예외가 시험 당일 1로 2-5 일에 같은 방법으로 테스트를 수행; 각 시험에 대한 케이지에서 다른 자리에 펠렛을 묻어. </li><li> 테스트 일 6 일, 표면 펠릿 시험을 수행합니다. </li><li> 표면 펠릿 시험의 경우, 대신에 침대 위에 이불 대신 그 아래에 펠렛을 매장의 테스트 일 1의 절차를 따릅니다. 마우스가 찾아 펠렛을 먹고 시작하는 시간을 기록한다. </li></ol> 3 블록 테스트 <ol><li> 개별적으로 깨끗한 케이지에 마우스를 수용하고 각 케이지를 설정하기 전에 장갑을 변경 (AE로 표시) 케이지에서 5 블록을 배치합니다. </li><li> 나중에 시험 24 시간을 수행합니다. , 시험 영역 시험 마우스를 이동 물 병 및 공급 장치 함을 제거하고 알을 배치리터 동물의 식별 표지 비닐 봉지에 침구의 소수와 함께 케이지에서 5 블록. 마우스의 홈 케이지의 상단에 밀봉 된 비닐 봉투를 놓습니다. </li><li> 시험을하기 전에 1 시간 동안 물 병, 피더 함없이 자신의 홈 케이지에 동물, 그리고 블록을 길들. </li><li> 냄새가 동물 / 블록 사이에 교환되지 않도록 각 케이지 사이에 장갑을 변경합니다. </li><li> 각 케이지 사이에 최소 10cm가있는 테이블에 서로 옆에 마우스 케이지를 라인업. 케이지 (되지 케이지의 긴 변)의 전면은 깨끗한 시야에 있도록 비디오 카메라를 배치. </li><li> 30 초 동안 타이머를 설정하고 중요한 실험 정보 (날짜, 마우스 ID, 재판 등) 카드를 레이블을 붙입니다. 비디오 테이프 2 ~ 3 초 동안 레이블입니다. </li><li> 그 마우스의 식별과 플라스틱 가방에서 블록 광고를 제거하고 명확하게 비디오 카메라에 볼 수 있도록 케이지의 중앙에 배치합니다. 확인이 ~ 1cm 오 확인각 블록 사이에 F 공간입니다. 케이지에 필터 상단을 다시 배치합니다. 30 초 동안 타이머와 비디오 테이프를 시작합니다. </li><li> 30 초 후, 녹음을 중지하고 케이지에서 블록을 제거하고 다시 비닐 봉지에 배치합니다. </li><li> 장갑을 변경 한 후 첫 번째 시험에 사용 된 것과 동일한 절차를 반복, 다음 마우스로 이동합니다. 각 마우스 ~ 5 분 간 시험 간격이 있는지 만들기위한 여섯 시험의 총에 대해이 작업을 수행합니다. </li><li> 일곱 번째 재판에서 대신 마우스에서 A, B, 그리고 C 블록에 노출되도록 다른 마우스의 케이지에서 블록 E를 추가 마우스 자신의 케이지에서 블록 D를 배치하는 것을 제외하고 시험 1-6에 대해 동일한 절차에 따라 그 다른 마우스의 케이지에서의 자신의 가정 케이지와 블록 E. 그 블록 E 각 마우스가 블록 E 각 마우스의 케이지 (예를 들어, ABCE 또는 AEBC)에 배치됩니다 및 대체에 노출되는 실험실 책에 있습니다. 원래 cagemate에서 동성하지만의 마우스에서 블록 E를 가져 가라. 바이올렛30 초 동안 deotape. </li><li> 7 시련에 따라, 원래 cagemates으로 새로운 깨끗한 케이지에 동물을 반환합니다. 청소 블록은 중성 세제와 물 시험에 사용하고 나중에 테스트에 사용하기 위해 공기 건조 할 수 있습니다. </li></ol> 4 요법 이니 / Dishabituation <ol><li> 블록 테스트와 유사한 방식으로 습관화 / dishabituation 테스트를 수행하는 대신 마우스의 냄새가 블록을 사용하는 추출물의 다른 쌍 향도면 채 조직 카트리지를 사용한다. </li><li> 대신 블록의 단일, 무향 조직 카트리지를 사용 단계 3.1-3.4를 수행합니다. </li><li> 테스트 룸에서 쥐를 길들. </li><li> 별도의 방에서 냄새가 조직 카트리지를 준비합니다. 깨끗한 카트리지에 작은 목화 공을 배치 한 다음면으로 추출물의 5 μL (예를 들어, 아몬드 추출물)를 추가합니다. 그 향기가 표시된 전용 상자 나 가방에면과 장소를 통해 카트리지 상단을 스냅. </li><li> 동일한 절차 F를 수행또는 초 향기 (예를 들어, 아니스 추출물). 서로 다른 냄새를 처리하는 사이에 장갑을 변경합니다. 목화 공을 완전히 조직 카트리지 쌌다되어 있는지 확인합니다. 참고 : 목화 공에서 노출 된 섬유는 동물이 중첩 목적이 아닌 향기 자체에 대한 목화 공에 관심이 될 수 있습니다. </li><li> 그런 다음 한 첫​​ 번째 여섯 시험에 대한 향수 조직 카트리지, 그리고 일곱 번째 재판에 대한 두 번째 향수 조직 카트리지를 사용하는 단계 3.6-3.10를 따릅니다. </li></ol> 비디오 테이프의 5 분석 <ol><li> 블록 및 습관화 / dishabituation 시험의 경우, 실험 조건에 레이터 블라인드가 블록 코 접점으로 정의 스니핑과 각 블록을 스니핑 소요되는 시간을 측정한다. 원하는 경우, 이러한 재판 (7) 및 전체 실험 기간 동안 활동 각 (길이 및 홈 케이지의 폭을 따라 만들어진 이동 횟수) 중에 신규 블록 (E)에 접근하는 시간에 따라 다른 동작을 측정한다. 스니핑 소요되는 시간을 점수D 시간은 스톱워치를 사용하여 비디오 테이프에서 접근합니다. </li><li> 마찬가지로, 습관화 / dishabituation 시험에, 실험 조건에 레이터 블라인드 카트리지 및 운동 활성 접근하는 카트리지, 시간 스니핑 소요되는 시간을 측정한다. </li></ol> 6 통계 <ol><li> 대기 시간 점수 분산 얼룩이 보여 경향 펠렛을 알 수 있기 때문에 비모수 통계를 이용하여 매립 된 펠릿을 시험 분석. 맨 - 휘트니 U-test를 이용하여 쥐의 그룹 간 비교 후 3-5 일에 걸쳐 펠렛을 찾아 할 수있는 대기 시간을 평균. 마찬가지로, 테스트 표면 펠릿의 경우, 유전자형과 비교 만 - 휘트니 (Mann-Whitney) U-test를 이용하여 펠렛을 찾는 지연을 분석한다. </li><li> 블록 시험의 경우, 시험 칠 (소설 냄새가 블록의 소개)의 데이터를 분석 할 수 있습니다. 일반적으로, 분산의 이질성을 설명하기 위해 비모수 적 분석을 사용한다. 시간의 차이를 분석하기 위해 제 스니핑 보냈다전자 소설 블록은 물론 다른 실험군에 대해 블록을 접근하는 시간으로서, 맨 - 휘트니 U 시험을 사용한다. 친숙한 블록을 스니핑 소요되는 시간에 새로운 블록을 스니핑 소요되는 시간을 비교하기 위해 윌 콕슨 부호 순위 테스트를 사용합니다. </li><li> 습관화 / dishabituation의 테스트를 위해 실시 파라 메트릭 시험 이전의 연구 (20)과 유사 하나, 6, 7에 분석합니다. 마우스가 더 스니핑 (sniffing)에 조금 보이면, 비모수 분석을 사용합니다. </li></ol>

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</ol>

우리는 이해 상충이 없습니다.

이 연구에 기술 된 시험의 각 마우스에서 후각 기능의 다양한 측면을 측정한다. 매장 펠릿 시험은 침대 밑에 매장 가당 시리얼의 입에 조각을 진단 (제한 음식이 아닌 음식 박탈) 배고픈의 능력 쥐를 테스트, 후각의 음식 동기 부여 측면을 측정합니다. 블록 테스트 자신 향기 conspecific의 구별하는 마우스의 능력을 시험, 후각 기능의 사회적 형태를 더 측정한다. 습관화 / dishabituation 테스트, 친숙하고 새로운 무해한 냄새를 구별 할 수있는 마우스의 능력을 평가한다. 음식 동기 부여 공포에 이상이 대조군에 비해 돌연변이 생쥐에서 관찰 된 차이에 기여할 수 있기 때문에 새 모델을 특성화 여러 테스트를 사용하는 것이 중요합니다. 단 블록 테스트가 수행되고 다른 마우스의 악취는 관찰했다 블록의 냄새 감소하는 경우, 예를 들어, 그것은 olfact가 있는지 불분명모리 적자 또는 블록의 회피로 이어질 수 conspecific에 강화 된 공포 반응. 여러 테스트를 수행하고 적자가 모든 시험에서 관찰 할 때, 강하게 후각 장애의 해석을 지원합니다. 차이가 있지만 다른 하나의 시험에서 관찰되는 경우, 다음이 더 미묘한 후각 장애의 경우가 있습니다 만, 그것은 다른 설명을 배제하는 것이 필수적이 될 것이다 (즉, 강화 된 두려움이나 감소 식품 동기 부여). 후각 기능 쥐를 테스트 할 때 명심해야 할 추가 중요한 요소는 마우스의 배경 변형, 성별을 포함한다. 다른 유전 적 배경 균주 (예, C57BL / 6, DBA 등)이 전체 실험을 수행하기 전에 같은 배경의 야생형 마우스의 각 프로토콜을 적용하는 것이 좋습니다 따라서 마우스의 행동에 지대한 영향을 미칠 수 있습니다. 또한 남성 후각 시스템이 높기 때문에 그 암수 마우스는 서로 별개로 테스트 될 권장발정에서 여성의 발정과 후각 탐지 여성에 민감한 LY는 세 가지 테스트에서 성능을 방해 할 수 있습니다. 일부 단계는 마우스의 후각을 테스트 할 때 따라야 할 절대적으로 중요하다. 이 실험은 동물에게 소개하고 냄새를 인식하는 것이 중요합니다. 절차 장갑을 착용하는 것은 동물 사이의 장갑 필수적이고 자주 변화가 필요하다. 항상 후각 테스트 일에 향수 또는 향수를 착용하지 않는 실험을위한 좋은 방법입니다. 절차의 일부가 유연성이있는 반면, 검사의 유효성 또는 감도를 저하시키지 않고 수정되고 적응 될 수있는 다른 부분이있다. 예를 들어 습관화 된 시도 횟수가 증가 될 수 또는 마우스의 변형에 따라 시험되고 감소하는 속도가 자극에 길들. 이러한 테스트의 주요 제한은 그들은 모두 동기 부여의 형태에 의해 주도된다는 것입니다, 그것을 음식 또는 사회 만들기를 할 수변경된 응답을 관찰 할 때 어려운 완전히 설명으로 의욕에 이상 현상을 배제합니다. 이것은 테스트 및 자극을 접근하는 동안 이러한 활동과 같은 추가 파라미터를 분석함으로써 최소화 될 수있다. 마스터 일단 테스트 용이 신경 퇴행성 질환의 신규 한 마우스 모델의 표현형 검사에 사용될 수있다. 또한, 가장 높은 능력을 가지고 테스트를 테스트 잠재적 치료제 전임상 연구에 포함될 수있다 (예컨대 REF 참조. 25).

후각 장애는 파킨슨 병 (PD), 알츠하이머 병 및 헌팅 톤병을 포함 하나 신경 퇴행성 질환의 수에 연결된다. PD에서 후각 장애는 냄새 식별, 탐지 및 차별의 적자를 포함하고 환자 2-5 70 내지 95 %까지에서 발견된다. 이러한 적자는 후각 장애는 PD 6-10의 초기 단계 신호를 수 있음을 나타내는 최대 4 년까지 PD의 추기경 운동 증상에 선행 할 수 있습니다. PD의 후각 적자의 초기 발생은 후각 기능 장애에 관심과 참여 기전을 주도하고있다. 설치류에 전임상 연구에서 후각 장애는 새로운 치료 전략의 치료 가능성을 예측하는 중요한 결과 측정 될 수있다. 많은 실험 설계 및 광범위 PD의 설치류 모델과 TES에 감각 손상을 특성화하는데 사용되어왔다소설 치료 11-15의 치료 가능성을 t. 후각 적자가 잘 PD에 설명되어 있지만, 후각 기능은 일상적으로 많은 모델에서 측정되지 않았습니다. 이보기는 PD의 유전 양식의 발견과 PD 단지 감각 기능 이상에 영향을 미치는 전신 질환이 있음을 더 허용 개념과 불구하고 변화하고 있습니다. 현재, 지금 특성화 16-24에서 후각의 분석을 포함 PD 및 기타 신경 퇴행성 질환의 유전 마우스 모델에서 많은 연구가있다. 신경 퇴행성 질환에서 후각 장애의 관심 증가를 감안 전임상 연구에서 신경 퇴행의 신규 모델뿐만 아니라 시험 전위 질병 변경 요법을 특성화하는데 사용될 수있는 후각 시험 전지를 조립하기 위해 노력했다. 본 연구에 설명 된 테스트가 특성화 및 전임상 연구 18,25 모두에서 사용되어왔다. 테스트 highl본 연구에서 ighted 파킨슨 병 (18)의 자주 이용 알파 시누 클레인 과발현 마우스 모델에서 후각 장애 검출에 민감한 것으로 나타났다. 그들은 매장 펠릿 시험 (26, 27), 블록 테스트 23,24,28,29의 적응 버전 및 습관화 / dishabituation 테스트 (30)을 포함한다. 그것은 생쥐의 후각 기능의 중요한 조치 아르 본 연구에 설명 된 테스트의 몇 가지 적응이 있다는 것을 주목하는 것이 중요하다,이 연구에서 강조하는 사람이 시험은 실험실이 함께 가장 경험이 일상적으로 사용할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>Cap'n Crunch</td><td>퀘이커 귀리</td><td>30000065310</td><td></td></tr><tr><td>나무 블록</td><td>Lara's Crafts</td><td>10144</td><td></td></tr><tr><td>아몬드 향 추출물</td><td>Kroger</td><td>011110664716</td><td></td></tr><tr><td>아니스 향 추출물</td><td>Kroger</td><td>011110615619</td><td></td></tr><tr><td>바나나 향 추출물</td><td>Kroger</td><td>011110669919</td><td></td></tr><tr><td>코코넛 향 추출물</td><td>Kroger</td><td>011110669889</td><td></td></tr><tr><td>레몬 맛 추출물</td><td>Kroger</td><td>011110669957</td><td></td></tr><tr><td>오렌지 맛 추출물</td><td>Kroger</td><td>0011110669964</td><td></td></tr><tr><td>티슈 카트리지</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z672122-500EA</td><td>Simport 제조 번호 : M490-2</td></tr><tr><td>면봉</td><td>Kroger</td><td>11110793119</td><td></td></tr><tr><td>마우스 케이지</td><td>Ancare</td><td></td><td>19 x 29 x 12.7cm</td></tr><tr><td>캠코더</td><td>Sony</td><td>HDR-HC9</td><td></td></tr><tr><td>MiniDV 테이프</td><td>Sony DVC 프리미엄</td><td>27242523432</td><td>60분 롱 플레이</td></tr></tbody></table>

신경 퇴행성 질환의 마우스 모델에 대한 후각 분석 실험

Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease

많은 신경퇴행성 질환, 특히 파킨슨병에서 후각의 결핍은 질병 진행 초기에 발생하는 것으로 보고되며 조기 발견을 위한 유용한 행동 지표가 될 수 있습니다. 신경퇴행성 질환을 조기에 발견하는 것은 신경 보호 요법이 가장 효과적일 수 있는 시기이기 때문에 이 분야의 주요 목표입니다. 따라서 신경퇴행성 질환의 설치류 모델에서 새로운 신경 보호 전략을 테스트하는 전임상 연구에서 후각 평가는 화합물의 치료 가능성을 결정하고 임상으로 전환하는 데 매우 유용할 수 있습니다. 본 연구에서는 생쥐의 후각 기능을 측정하는 데 유용한 일련의 후각 분석법을 설명합니다. 이 연구에서 제시된 테스트는 음식 냄새, 사회적 냄새 및 비사회적 냄새와 관련된 쥐의 후각 능력을 측정하기 때문에 선택되었습니다. 이러한 검사는 파킨슨병의 새로운 유전자 마우스 모델을 특성화하고 잠재적인 질병 수정 요법을 테스트하는 데 유용한 것으로 입증되었습니다.

매장 펠렛, 블록, 및 습관화 / dishabituation 테스트는 모든 생쥐의 후각의 매우 유리 평가입니다. 이 테스트를 사용하여, 우리는 알파 - 시누 클레인의 과발현 (Thy1-aSyn) 18 Atp13a2 녹아웃 마우스를 포함하여 파킨슨 병의 여러 유전자 ​​마우스 모델에서 후각에 큰 변화를 발견했다. 두 Thy1-aSyn 및 Atp13a2 녹아웃 마우스는. 컨트롤 (18)보다 매장 펠렛을 검색하는 데 시간이 오래 걸릴 야생형 및 Atp13a2 녹아웃 마우스에서 수집 1-3은 데이터를 수치입니다. 매장 펠릿 테스트에서, Atp13a2 녹아웃 마우스는 야생형 제어 마우스 (그림 1)에 비해 매장 펠렛을 찾기 위해 대기 시간은 커지고있다. 블록 테스트에서 야생형 및 Atp13a2 녹아웃 마우스는 모두 자신의 홈 케이지 (그림 2)에서 블록에 비해 다른 마우스의 케이지에서 새로운 블록을 도청. 습관화 / dishabituation 테스트 야생형 생쥐에서 한 냄새에 습관화를 표시하고 다음 소설 냄새가 (그림 3)을 도입 할 때 스니핑 증가했다. <img alt="그림 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51804/51804fig1highres.jpg" width="500"> 펠릿 시험. 대기 시간 매장 그림 1은 야생형에서 (N = 10)와 Atp13a2 KO (N = 14) 나이 20-27미터에서 펠렛을 찾을 수 있습니다. * P &lt;0.05, 맨 - 휘트니 U. <img alt="그림이" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51804/51804fig2highres.jpg" width="500"> 그림 2 블록 테스트 시간은 야생형에 블록 시험에서 새로운 블록 (E)를 스니핑 (N = 10)와 Atp13a2 KO (N = 12) 20에서 여성 마우스 -. 나이 27 남성. ΔΔ 동일 유전자형에서 블록 A, B 및 C에 비해 P는 &lt;0.01 나타낸다. 맨 - 휘트니 U. "SRC ="/ 파일 / ftp_upload / 51,804 / 51804fig3highres.jpg "너비 ="500 "/&gt; 그림 3 습관화 / dishabituation 테스트. (= 7 N 세 9m)에서 6 시련과 시험 7에 새로운 향기 카트리지의 도입을 시간 야생형 마우스의 향기 카트리지를 스니핑 평균.

후각 기능의 손상은 파킨슨병, 알츠하이머병, 헌팅턴병을 포함한 많은 신경퇴행성 질환에서 흔히 나타나는 특징입니다. 본 기사에서는 신경 퇴행성 질환의 마우스 모델에서 후각 능력을 측정하는 데 사용할 수 있는 마우스의 후각 구별 및 감지를 평가하기 위한 일련의 테스트에 대해 설명합니다.

In many neurodegenerative diseases and particularly in Parkinson&#8217;s disease, deficits in olfaction are reported to occur early in the disease process ...

이 절차의 전반적인 목표는 생쥐의 후각 기능을 평가하는 것입니다. 이것은 먼저 쥐를 음식 제한 또는 개별 주택에 놓음으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 후각 자극을 준비하고, 시험실을 설정하고, 검사를 수행할 수 있도록 쥐를 검사 구역에 습관화하는 것입니다.다음으로, 마우스에 대한 테스트 절차를 수행하고 비디오에 기록된 데이터를 분석합니다. 궁극적으로 이러한 검사는 신경퇴행성 질환의 유전자 마우스 모델과 잠재적 치료법을 테스트하기 위한 임상 약물 연구에서 후각 능력을 측정하는 데 사용할 수 있습니다. 후각 결핍은 신경퇴행성 질환에서 잘 입증되어 있지만, 후각은 많은 질병 모델에서 일상적으로 측정되지 않습니다.따라서 우리의 목표는 실험에 쉽게 구현할 수 있는 후각과 마우스의 여러 측면을 측정하기 위해 일련의 테스트를 조립하는 것입니다. 이러한 검사는 신경퇴행성 질환, 병리학 및 후각 간의 관계와 관련된 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있을 뿐만 아니라 새로운 화합물의 치료 가능성을 식별하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 절차를 시작하려면 매일 테스트 중에 사용할 펠릿 1-2개를 마우스에게 제공합니다.그런 다음 테스트하기 최소 이틀 전에 모든 테스트 일에 마우스의 체중과 체중의 90%로 제한된 음식을 기록하십시오. 테스트 전 1시간 동안 필터 상단 뚜껑만 있는 가정용 케이지를 테스트실에 배치하여 마우스에 익숙해지게 합니다. 서식하는 동안 깨끗한 케이지에 3cm 높이의 깨끗한 침구를 채우고 침구가 케이지 전체에 고르게 분포되어 있는지 확인하십시오.가당 시리얼 알갱이 1개를 테스트 케이지의 침구 아래 0.5cm에 묻어 보이지 않도록 합니다. 그런 다음 마우스를 홈 케이지에서 테스트 케이지로 옮기고 케이지에 필터 상단 덮개를 놓습니다. 타이머로 5분 카운트다운을 시작하세요.마우스가 펠릿을 발견하고 먹기 시작하면 타이머를 중지하십시오. 마우스가 5분 이내에 펠릿을 찾지 못하면 시험을 종료하고 해당 마우스에 대해 300초의 점수를 기록합니다. 펠릿을 침구 상단으로 옮겨 마우스가 먹을 수 있도록 합니다.시험이 끝나면 마우스를 가정용 케이지로 되돌립니다. 이제 테스트 케이지에서 침구를 비우고 세척액으로 케이지를 청소하십시오. 각 마우스에 대해 절차를 반복하고 각 마우스 전후에 장갑을 교체하십시오.그런 다음 체중의 90%를 유지할 수 있을 만큼의 음식을 쥐에게 줍니다. 2일차부터 5일차까지 1일차 테스트와 동일한 방식으로 테스트를 수행하되, 각 테스트 시험에 대해 펠릿을 케이지의 다른 위치에 묻습니다. 여섯째 날에는 펠릿을 침구 아래에 두는 대신 침구 위에 올려 놓습니다.이 단계에서 마우스가 펠릿을 찾아 먹기 시작하는 시간을 기록합니다. A부터 E까지 표시된 5개의 블록을 깨끗한 마우스 홈 케이지에 24시간 동안 놓습니다. 다음 날과 실험 1시간 전에 물병과 사료통을 제거하고 한 줌의 침구와 함께 우리에서 5개 블록을 모두 동물의 신분증이 표시된 비닐 봉지에 옮깁니다.그런 다음 물병, 급이통, 쓰레기통 없이 동물을 집 우리에 넣고 테스트하기 전에 1시간 동안 차단합니다. 이제 케이지 사이에 최소 10cm의 간격을 두고 테이블 위의 모든 마우스 케이지를 정렬합니다. 그런 다음 카드에 중요한 실험 세부 정보를 적고 2-3초 동안 라벨을 비디오 테이프로 녹화합니다.해당 마우스의 ID가 있는 비닐 봉지에서 블록 A부터 D까지 제거하고 비디오 카메라에서 명확하게 볼 수 있도록 케이지 중앙에 놓습니다. 블록 사이에 약 1cm의 공간이 있는지 확인합니다. 이제 필터 상단을 케이지에 다시 놓습니다.타이머와 비디오 테이프를 30초 동안 시작합니다. 30초 후에 녹음을 중지합니다. 케이지에서 블록을 제거하고 시도 사이에 케이지 외부에 놓습니다.장갑을 끼고 다음 마우스로 이동합니다. 각 마우스에 대해 총 6번의 시도에 대해 이 작업을 수행하고 약 5분의 시도 간 간격이 있는지 확인합니다. 일곱 번째 시도에서, 자신의 케이지에서 블록 D를 제거하고 다른 마우스의 케이지에서 블록 E를 추가합니다.따라서 마우스가 자신의 홈 케이지에서 블록 A, B, C에 노출되고 다른 마우스의 케이지에서 블록 E에 노출된 경우, 각 마우스가 노출된 블록 E와 각 마우스의 케이지 E.In 블록의 대체 배치를 30초 동안 비디오 테이프에 기록합니다. 7번의 시도가 끝나면 동물을 원래 케이지 동료와 함께 새로운 클린 게이지로 되돌립니다. 테스트에 사용된 블록을 중성 세제와 물로 세척하고 사용하기 위해 자연 건조시킵니다.이후 테스트에서는 블록 테스트와 유사한 방식으로 습관화 습관화 테스트를 수행합니다.그러나 쥐 냄새가 나는 블록을 사용하는 대신 다른 추출물 쌍으로 향이 나는 면이 들어 있는 티슈 카트리지를 사용하십시오. 그런 다음 시험실에서 마우스를 습관화하십시오. 향이 나는 티슈 카트리지는 별도의 방에서 준비합니다.깨끗한 카트리지에 작은 면봉을 넣은 다음 면에 추출물 5마이크로리터를 추가합니다. 카트리지 상단을 면 위에 끼우고 해당 향이 표시된 전용 상자나 가방에 넣습니다. 향을 다루는 사이에 장갑을 교체하십시오.그런 다음 처음 6번의 시도에는 1센트, 조직 카트리지, 7번째 시험에는 두 번째 센트를 조직 카트리지를 사용하여 블록 테스트의 절차를 따릅니다. 이 그림은 야생형에서 펠릿을 찾는 대기 시간과 매몰 펠릿 테스트에서 A TP 13 A 2개의 녹아웃 마우스를 보여줍니다. 이 그림은 야생형과 ATP 13 A 2 녹아웃 마우스 사이의 블록 테스트에서 새로운 블록 블록 E를 스니핑하는 시간을 보여줍니다.그리고 이것은 6 번의 시험에 걸쳐 야생형 마우스에서 동의 카트리지를 스니핑하고 습관화 습관화 테스트에서 7 번 시험에서 새로운 향기를 가진 카트리지를 도입했습니다. 이 일련의 테스트를 수행하는 동안 외부의 후각 신호를 줄이기 위해 모든 조치를 취하는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 항상 가능한 한 자주 장갑을 교체하고 향수나 향수를 착용하지 마십시오.이 비디오를 시청한 후에는 이 간단한 테스트 배터리를 사용하여 신경퇴행성 질환의 후각 기능과 마우스 모델을 평가하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

쥐 후각 시스템의 기본, 아직 고유의 특성은 생물학 자 사이의 증가 공부를 주도했습니다. 그 함수의 비교적 간단 평가 그때도 필요합니다. 여기 마우스 후각 감성과 선호도의 특성에 대한 민감한 테스트를 설명합니다.

성인 마우스의 후각 행동 테스트

일반적으로 파킨슨 병 및 운동 장애에 민감하고 안정적​​인 행동 분석은 새로운 잠재적 인 치료를 테스트하기 위해 필수적입니다. 여기, 우리는 흑질 선조체 시스템에 손상의 정도를 변화와 전임상 연구에 유용에 민감한 쥐를위한 감각 테스트의 관리 배터리를 설명합니다.

파킨슨 병의 마우스 모델에서 감각 기능의 평가

이 원고는 설치류의 후각 시스템을 조사하는 프로토콜을 설명합니다. 후각 습관화/습관 제거 테스트를 통해 조사관은 마우스가 반복적으로 제시된 냄새에 습관화되어 있는지, 그리고 새로운 냄새가 나왔을 때 마우스가 습관 해제를 보이는지 여부를 결정할 수 있습니다.

마우스에서 냄새 차별과 요법 이니에 대한 테스트

우리는 쥐를 대상으로 간단하고 편견 없는 후각 테스트를 제시합니다. 이 프로토콜을 사용하면 물과 비교되는 새로운 냄새에 대한 후각적 구별, 선호도, 회피 및 민감도를 단일 행동 세션으로 평가할 수 있습니다. 이 방법은 단일 실험자에 대해 표시되며 분석은 컴퓨터 지원 비디오 처리를 기반으로 합니다.

간단하고 컴퓨터 지원 마우스에 대한 후각 테스트를

우리는 인간의 중앙 후각 시스템에서 신뢰할 수있는 기능적 자기 공명 영상 (fMRI) 데이터를 얻기위한 기술적 난제와 해결책을 제시합니다. 여기에는 후각 fMRI 패러다임 디자인, MRI 호환 감각 계의 fMRI 데이터 수집, 악취 선택 및 데이터 후 처리를위한 특수 소프트웨어 도구에 대한 특수 고려 사항이 포함됩니다.

인간의 후각 기능을 연구하기위한 자유 호흡 fMRI 방법

여기에는 β- 아밀로이드증 및 타우 병증 유전자 변형 마우스 모델에서인지 및 기능 운동 행동에 대한 생체 내 효능을 나타내는 화합물을 스크리닝하는데 사용될 수있는 단계적 행동 스크리닝 방법이 기재되어있다. 이 방법은 단기 및 작업 메모리 작업에서 활동을 위해 화합물을 스크리닝하기 위해 최적화됩니다.

아밀로이드 -β 및 타우 신경 병증의 유전자 변형 마우스 모델에서 자발적 교대, 새로운 대상 인식 및 사지 걸림의 평가

이 종이 쥐에 음식 특혜의 사회적인 전송의 조사에 대 한 프로토콜을 제공합니다. 장점 및이 절차에 대 한 가능한 응용 프로그램 예를 들어, 광고 마우스 모델에서 초기 변화를 감지에 강조 표시 됩니다. 결론 하려면, 중요 한 세부 사항에 비추어 결과의 해석 설명 되어 있습니다.

식품 환경 설정 행동의 사회적인 전송에 대 한 평가

여기, 우리는 쥐 냄새 차별 테스트는 연관 학습 작업에 기차. 이 프로토콜은 또한 두뇌에 구조적인 변화를 유도 하는 학습에 대 한 연구에 대 한 수 있습니다.

후 각 학습 및 쥐에 있는 차별의 객관적이 고 재현성 시험

본 논문은 흡입된 환경오염물질 노출이 마우스의 후각 기능에 미치는 영향을 평가하기 위한 매몰식품 검사와 사회적 악취 차별 실험에 대해 자세히 설명한다.

흡입된 환경 오염 물질이 마우스의 후각 기능에 미치는 영향 연구

이 프로토콜은 go/no-go 후각 행동 실험을 위한 후각계의 구성을 설명합니다. olfactometer의 성공적인 구성을 보장하기 위해 이미지와 함께 단계별 지침이 제공됩니다. 프로세스 중에 발생하는 문제를 해결하기 위한 정보도 포함되어 있습니다.

설치류 후각 행동 연구를 위한 후각계 구축

여기에서는 우울증의 마우스 모델에서 식욕 자극과 혐오 냄새 자극에 대한 부정적인 후각 편향을 평가할 수 있는 후각 선호도 테스트 프로토콜을 제시합니다.

An Olfactory Preference Test for measuring Olfactory Hedonic Biases in Mouse Models of Depression(우울증의 마우스 모델에서 후각 쾌락 편향을 측정하기 위한 후각 선호도 테스트)

학습하세요 신경 퇴행성 질환 마우스 모델에서 후각 기능을 평가하는 매장 펠릿 테스트, 블록 테스트 및 습관화-비습관화 테스트 방법을 통해. 이 기법은 유전적 마우스 모델의 후각 능력을 측정하고 잠재적 치료제 효능을 평가하는 데 활용됩니다.

신경 퇴행성 질환의 마우스 모델에 대한 후각 분석 실험

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