Name: 하부 요로 약리학을 평가하는 방법으로 방광 평활근 스트립 수축성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 26 s
Description: 학습하세요 쥐 방광 평활근 스트립을 이용한 수축성 측정 방법으로 하부 요로 약리학을 평가하는 기술입니다. 이 방법은 약물 스크리닝과 방광 생리학 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 연구는 (LB)에 NIH R37 DK54824 및 R01 DK57284 보조금에 의해 지원되었다

여기에 설명 된 모든 절차는 피츠버그 대학에서 IACUC위원회에 의해 승인됩니다. 1 솔루션 <ol><li> 법에 따라 크렙스 솔루션을 준비합니다. 염화나트륨 (118)의 KCl 4.7, 염화칼슘 1.9, 황산 1.2, 탄산 수소 나트륨 24.9, KH 2 PO 4 1.2, 포도당 11.7 : MM의 조성. </li><li> 95 % O 2, 5 % CO 2 크렙스을 공급하십시오 및 실험을하는 동안 사용되는 37 ºC 물을 욕조에 넣습니다. 제쳐 놓고 ~ 실온에서 폭기 된 크렙스 용액 200 ㎖를 조직 절제술에 사용되는. </li><li> 화난 크렙스의 산도 (~ 7.4)와 삼투압 (~ 300 mOsm)를 측정한다. </li></ol> 2 실험 장치 (회로도 그림 1A) <ol><li> (95 % O 2, 5 % CO 2) 10 ㎖의 크 레브와 챔버 화난 채 웁니다. </li><li> 37 ° C에 챔버를 가열하는 순환 수 펌프를 시작합니다; 필요한 장비를 켜 : 앰프 (들), 자극 (들) 및 기록 소프트웨어입니다. </li><li> 1g의 무게와 트랜스 듀서를 보정합니다. </li></ol> 3 조직 (그림 1B) 다음 단계 다음 (~ 10~12주 이전 200~250g) 성인 순진한 여성 스프 라그 돌리 쥐에서 방광을 제거 <ol><li> 해부 영역과 필요한 장비 준비 : 전기 면도기, 치아 포셉, 메스 블레이드, 해부 가위, microscissors을,이 해부 집게, 조직 클립 (또는 실크 봉합사), 크렙스와 함께 실 가드 코팅 해부 접시 (저자는 뒤몽 집게 # 3를 선호) 조직 해부 핀입니다. </li><li> 유도 챔버에서 흡입 이소 플루 란 (2 O 4 %)으로 동물을 마취. 마취 동안 건조 함을 방지하기 위해 눈에 수의학 연고를 사용합니다. 연속 호흡율, 외부 자극에 응답하고, 휘어진 인출 후방 사지의 손실을 관찰함으로써 마취의 레벨을 모니터링한다. </li><li> 동물 면도 하복부 마취 할 때정말이에요. 중간 선 복부 절개를 통해 골반 장기 노출. 방광과 요도를 확인합니다. 근위부 요도에 가까운 방광 경부에서 절단하여 방광을 제거합니다. 화난 크렙스 솔루션을 가득 실 가드 코팅 접시에 즉시 조직을 놓습니다. </li><li> 필요한 경우,이 시점에서 추가적인 조직을 제거 : 요도, 위장 (GI) 관 및 / 또는 전립선 조각 등 </li><li> IACUC 승인 된 방법 (예를 들면, 마취제 또는 과다 보조 방법이어서 질식 CO 2)를 사용하여 동물을 희생한다. </li><li> 더 해부 조직을 안정시키기 위해, 방광 돔, 목, 및 요관을 통해 조직을 해부 핀을 삽입합니다. 조직을 늘리지 않습니다. 지방, 결합 조직, 근위부 요도, 요관하고있는 경우를 제거합니다. </li><li> 플랫 시트를 만드는 돔 기지에서 방광을 열고 장막면이 아래 / 내강면을 위로 (그림 1B). 조직의 각 모서리에 해부 핀을 놓습니다. 방광 돔을 제거전자와 목 조직. </li><li> 실험의 목적은 점막 (요로 상피 및 고유 층 - 다이어그램도 1C 참조)의 기여를 결정하는 경우 평활근 수축을, 함께 및 장착 점막없이 배뇨근 스트립의 특성을 비교한다. 이를 위해, 조직 스트립을 절단하기 전에 신중 홍채 해부 현미경 하에서 미세 가위 집게를 사용하여 스프링 점막층을 제거. 실험의 끝에, 점막의 완전한 제거를 확인하기 위해 H &amp; E 염색 용 스트립을 고정한다. 이 절차는 쥐의 방광에 비해 마우스 방광에서 쉽게합니다. </li><li> ~ 2 × 8mm (그림 1B)의 스트립으로 돔 기지에서 세로로 조직을 잘라. 넥타이 또는 각 스트립의 양단에 조직 클립을 첨부합니다. NOTE : 한 래트 방광은 보통 4 스트립으로 절단 할 수 있지만, 스트립의 수는 증가하거나 감소 동물 / 방광 크기에 따라. </li><li> exper에 스트립 전송imental 실. 한 조직의 수축을 측정하는 힘 센서, 각 스트립의 끝과 고정 유리 / 금속 막대에 다른 연결합니다. 참고 : 조직 챔버의 크기 (20 ㎖의 이상으로 0.2 ml)에 따라 다릅니다. 쥐의 방광에 대한 일반적인 챔버 스트립이 완전히 용액에 침수 될 충분한 높이를 제공하는 5 ~ 20 ㎖의입니다. 일부 챔버 내장 자극 전극, 다른 사람 없습니다에게 제공됩니다. 케어 달리 전계 자극이없는 신뢰성, 전극의 모든 접속 상태가 양호한 것을 확인해야한다. </li><li> 베이스 라인 장력이 1g (~ 10 MN)이 도달 할 때까지 부드럽게 조직을 스트레칭하여 각 스트립에있는 힘의 정의 금액을 적용합니다. 처음에 조직은 기준선 장력의 감소로 기록되어있는 이완되는 경향이있다. 워시 조직은 약 및 따뜻한 폭기 크렙스를 사용하여 15 분마다 각 세척 후 1g 기준선 장력을 조정합니다. (기준 긴장이 안정적 조직 ~ 1-2 시간이나 때까지 평형을 허용즉, 더 이상의 조직 휴식). </li><li> ~ 5 분간, 또는 고원 응답까지 조에 직접의 KCl (80 ㎜)에 추가하여 시험 조직 생존력이 도달된다. 고농도의 KCl에 대한 응답은 또한 실험 동안 또는 실험의 끝에서 반복 (데이터 해석 부 밑에 정규화 참조) 스트립 다른 약물에 대한 반응을 정규화 또는 사이에 사용될 수있다. </li><li> 따뜻한 화난 크렙스 씻을 조직을 여러 번 (3-5x)는 조직 전처리 조건에 반환 할 수 있습니다. </li></ol> 4 자극 프로토콜 <ol><li> 이러한 SCI, BOO 또는 신생아와 같은 다른 동물 모델에서 평활근 스트립을 사용, 자연, 근원 활동이나 평활근에 병리의 효과를 알아보고자 하였다.이 그림은 개발하는 동안 방광 자발적인 활동의 변화를 조사하기 위해이 방법을 사용하는 방법을 보여줍니다 및 SCI 후. 또한, 약학 제제는 SP를 변조하는데 사용될 수있다ontaneous 활동.도 3은 자발 활동 및 평활근 톤 KCNQ 채널 변조기, flupirtine 및 XE991,의 효과를 도시한다. </li><li> 직접 정의 된 시간 간격으로 목욕 농축 원액으로부터 화합물을 첨가함으로써 약리학 평활근 자극 구조체 농도 반응 곡선. 차량 및 시간 효과를 설명하기 위해 병렬 스트립에 약물 및 차량을 사용합니다. <ol><li> 1000X 최종 작업 농도에서 원하는 시험 화합물의 원액을 확인합니다. 10-5 M, 3 × 10-5 M, 10-4 M, 3 × 10-4 M, 10-3 M, 3 × 10-3 M : 카바 콜 (CCH), 무스 카린 수용체 작용제를 들어, 다음과 같은 종목을 준비 10 -2 M. 욕실에서 최종 농도는 10 -5 M (그림 4C, D)에 10 -8 M이다. 10-8 M, 10-7 : 뉴로 메딘의 B (NMB), 봄베 신 수용체 서브 타입 1 작용제를 들어, 다음과 같은 주식을 준비M, 10-6 M, 10-5 M, 10-4 M, 10-3 M 및 욕조에 최종 농도 아르 10 -11 M에서 10 -4 M. CCH와 NMB 모두 조직의 수축력을 증가 할 것으로 예상된다. </li><li> 응답이 고원 (그림 4C, D)에 도달로 10 ml의 조직 목욕하는 순간 각 CCH 원액의 10 μl를 추가합니다. 병렬 스트립에서 차량 (물)의 같은 양을 추가합니다. 마찬가지로, 각 뉴로 메딘의 B 원액의 10 ㎕의 모든 ~ 5 분을 추가합니다. 참고 : 그림 4 종에서 스트립의 평활근에 NMB와 CCH의 흥분성 효과를 관찰한다. </li><li> 흥분 에이전트, 일반적으로 CCH 또는 KCl을 사전 계약 조직의 평활근의 이완 특성을 조사합니다. </li><li> 길항제 반응을 차단하는, 자극 작용제 전에 조직 침투를 허용하기 위해 길항제 10-20 분 동안 조직을 전처리. </li></ol></li><li> 신경 STIM을 위해평활근의 위험률도라는 전기장 자극 (EFS) 3.13에 단계 하나를 따라 아래에 설명 된대로 계속합니다. EFS는 선택적 평활근에 비해 신경을 활성화하기위한 것입니다. 자극 파라미터는주의 깊게 평활근에 직접 자극을 피하도록 선택되어야한다. <ol><li> 자극 매개 변수를 설정 : 아래 단계에 설명도 5A, B에 도시 된 바와 같이 자극 (단일 펄스 또는 기차), 기간 (펄스 지속 시간 및 열차 시간), 빈도와 강도의 유형을. <ol><li> 단일 펄스 자극, 세트 펄스 지속 시간, 간 자극 간격과 원하는 자극의 수하십시오. 통상, 자극 지속 기간 파라메터는 원하는 간격 (도 5a)에 전달 0.05-0.3 msec의 지속 기간의 하나의 펄스이다. 자극 강도에 대한 단계 4.3.1.4을 따르십시오. </li><li> 기차 자극의 경우, 기차 시간 간 열차 간격을 설정합니다. 방광 조직에 대한 일반적인 값은 3-10 초는 적어도 1m를 전달떨어져에서 (그림 5B). 조직의 피로 (즉, EFS 수축 제어 기간 동안 감소)가 발생하는 경우, 간 열차 간격을 증가시킨다. </li><li> 기차에서 펄스의 기차 자극의 주파수 (번호를 설정 - 그림 (b)). 0.5-50 Hz에서 범위의 주파수 응답 곡선을 실행. 방광의 일반적인 주파수는 ATP 및 아세틸 콜린에 의해 매개 재현하고 안정적​​인 수축을주고 10 ~ 20 Hz에서입니다. 이 방법은 콜린성 및 신경 전달에 퓨린 메커니즘의 기여를 평가하는 데 사용할 수있는 방법을 보여주는 그림 5에서 마우스 방광 스트립 EFS의 자극에 따라 주파수 응답을 관찰한다. </li><li> 자극 강도를 확립 : 수축의 진폭이 정체기에 도달 할 때까지 (하여 열차의 주파수를 일정하게 유지하는 경우) 체계적 자극의 세기 (전압)을 증가시킨다. </li><li> 에 따라 자극의 강도를 설정합니다실험의 목표로하고 있습니다. 목표 - 유발 신경을 수축을 증가시키는 경우, 수축의 진폭이 최대 수축 ~ 50 %가되도록 준 최대 강도를 사용한다. 목표 - 유발 신경을 수축을 감소시키는 경우, ~ 최대 진폭의 80 %가 조직의 피로를 방지하기 위하여 강도를 설정한다. </li></ol></li><li> 자극 매개 변수 (기간, 빈도와 강도)가 설립되면, EFS- 20 ~ 30 분 약물 검사 전에 안정 수축을 유발 ~ 수 있습니다. 참고 : (; 0.5 μM TTX) 신경 전송, 나 + 채널 차단제, 테트로도톡신와 블록 신경 전송을위한 EFS의 선택을 확인합니다. TTX 비교적 쉽게 떨어져 세척 같이, 실험의 시작에서이 단계를 수행한다. 또한, (단계 4.3.5 참조. 아래) 실험의 끝에이를 수행. </li><li> 최종 작업 농도가 1,000 배의 재고 솔루션을 준비 : 알파, 베타 - 메틸렌 ATP (ABMA, 퓨린 수용체의 활성화를및 desensitizer) 10 -2 M, 아트로핀 (무스 카린 수용체 길항제) 10 -3 M (그림 5C). 도 6에 다른 예를 관찰한다. 5HT4 수용체 작용제, 시사 프라이드 (3 × 10-6 M, 10-6 M을, 3 × 10-5 M, 10-5 M, 3 × 10-4 M을, 10-4 M, 3 × 10-3 M, 10-3 M)는, 조직 수축성 및 SB-203186 (3 × 10-3 M), 5HT4 수용체 길항제를 증가 시사 프라이드의 효과를 반전. </li><li> EFS (그림 5C)에 ABMA의 효과와 아트로핀을 테스트하려면, 두 개의 제어 주파수 응답 곡선을 수행합니다. 10 μM의 최종 농도에 화장실에 10 -2 M ABMA의 10 μl를 추가합니다. 이는 평활근에 직접 퓨린 수용체의 자극에 조직을 수축한다. 기준에 대한 응답을 반환 한 후, 주파수 응답 곡선을 반복합니다. 최종 정광 10 -3 M의 아트로핀의 10 μl를 추가1 μM의 이온. (무스 카린 수용체를 차단하기 위해 필요한 아트로핀) ~ 10 분, 반복 주파수 응답 곡선 후. 병렬 스트립의 각 단계에서, 차량, 물 10 μl를 추가합니다. NOTE :도 6의 다른 예를 들어, 정의 된 시간 간격들 (~ 15 분마다, 설명을 참조)에서 각 시사 프라이드 스톡 용액 10 μL를 추가 직접 조에 SB-203186 스톡 용액 10 ㎕를 다음과에 미치는 영향을 모니터링 수축을 EFS는 유도. 병렬 스트립에서 자동차, DMSO의 10 μl를 추가합니다. 시사 프라이드의 효과를 관찰,도 6 인간 방광과 회장 조직에서 EFS-유발 된 수축에 대한 5HT4 수용체 작용제는. 또한 인간 방광 및 회장 조직에서 EFS-유발 된 수축에 DMSO의 효과, 시사 프라이드 용 차량을 관찰 . </li><li> EFS 프로토콜의 끝에 나트륨 + 채널 차단제, 테트로도톡신 (TTX으로 신경 전달을 차단하여 EFS의 선택성을 확인; 0.5-1 &amp;# 181; M). TTX에 강한 수축이 남아있을 경우, 이후의 실험에서 자극의 지속 시간과 강도를 조절하는 것이 좋습니다. </li></ol></li><li> 사전 또는 사후 시냅스 사이트 (그림 7A)를 약물의 효과를 결정하기위한 4.3.2 단계 1을 따르십시오. 카르 바콜하는 재현 응답을 설정하고 EFS는 다음 약물 X를 추가 </li><li> 실험의 끝에, 또는 클립을 풉니 스트립을 풀어, 여분의 유체를 제거하고 나머지를 사용하여 각 스트립의 중량을 측정하는 티슈 종이 위에 부드럽게 그들을시킨다. 또한 단면적을 결정하는 캘리퍼스를 사용하여 조직의 길이를 측정한다. 이 정보는 데이터의 정상화를 위해 사용된다 (5.4 절 참조). </li></ol> (5) 데이터 분석 적절한 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하여 (예를 들어, Windaq, LabChart). <ol><li> 자발적 활동의 경우, 이전과 약물에 의한 반응과 나의 절정에 적어도 30 초 창을 선택슈어의 진폭과 근육 조직 활동의 주파수 (그림 3). <ol><li> 방광의 다른 부분 사이의 차이가 수축 반응에 기여하고 있는지 여부의 주파수 스펙트럼을 결정하기 위해 고속 푸리에 변환 분석을 사용하여 (예를 들어, 목 대 돔) 또는 개발 병리 및 약물 8. </li></ol></li><li> 평활근 톤 효과 전에 약물 유발 반응의 피크에서, 적어도 10-30 초간의 윈도우를 선택 및 수축의 진폭을 측정한다. </li><li> 신경을-유발 된 수축에 대한 효과를 위해 전 약물 유발 반응의 피크에서의 수축 곡선 (최소 3) 아래의 진폭, 지속 시간 및 면적을 측정한다. 주 : 퓨린 및 콜린성 다른 성분을 가지고 있기 때문에 반응 속도 EFS 유도 수축 곡선 아래의 면적 및 진폭 모두를 측정 할 필요가있다. 퓨린 성분이 빠르고 일시적인 (ATP는 purinergi를 활성화칼슘의 신속한 유입을 허용 같은 P2X1 C 등의 이온 성 채널, 그들은 이에 곡선 아래 면적에 대한 피크 진폭 응답에보다 덜 기여) 둔감. 콜린성 성분 (ACH 궁극적 수축을 유도하는 평활근 탈분극 이온 채널을 활성화 세포 내 경로를 활성화하기 위해 더 많은 시간을 필요로 대사 무스 카린 성 수용체를 활성화시킨다) 느리고 유지된다. 따라서, 무스 카린 성분 곡선 아래 면적을 측정하여 더 포착된다. </li><li> 스트립 및 약물 치료를 통해 결과를 비교할 수 있도록 데이터를 정규화한다. 정규화를 위해 선택된 파라미터는 병리학 적 조건이 연구 또는 실험 설계, 시험 화합물에 의해 좌우되어서는 안된다. 이러한 매개 변수를 사용 스트립 중량, 단면적, KCl을 응답 (도 4b), 다른 수축성 에이전트 최대 반응의 최대 반응 (도 7b) 또는 %의 % 중에서(예를 들어, CCH) 또는 편안한 에이전트 (예를 들어, 파파 베린). </li></ol>

<ol><li>Fowler, C. J., Griffiths, D., de Groat, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neural+control+of+micturition%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The neural control of micturition.</a> Nat Rev Neurosci. 9, 453-466 (2008).</li>
<li>Andersson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detrusor+myocyte+activity+and+afferent+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol+Urodyn%22%5BJournal%5D)">Detrusor myocyte activity and afferent signaling.</a> Neurourol Urodyn. 29, 97-106 (2010).</li>
<li>Artim, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+and+spinal+cord+injury-induced+changes+in+nitric+oxide-mediated+inhibition+in+rat+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourology+and+urodynamics%22%5BJournal%5D)">Developmental and spinal cord injury-induced changes in nitric oxide-mediated inhibition in rat urinary bladder.</a> Neurourology and urodynamics. 30, 1666-1674 (2011).</li>
<li>Kita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+bladder+outlet+obstruction+on+properties+of+Ca2%2B-activated+K%2B+channels+in+rat+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of bladder outlet obstruction on properties of Ca2+-activated K+ channels in rat bladder.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 298, 1310-1319 (2010).</li>
<li>Barendrecht, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+bladder+outlet+obstruction+on+alpha1-+and+beta-adrenoceptor+expression+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol+Urodyn%22%5BJournal%5D)">The effect of bladder outlet obstruction on alpha1- and beta-adrenoceptor expression and function.</a> Neurourol Urodyn. 28, 349-355 (2009).</li>
<li>Maggi, C. A., Santicioli, P., Meli, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+development+of+myogenic+contractile+activity+and+excitatory+innervation+of+rat+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+journal+of+physiology%22%5BJournal%5D)">Postnatal development of myogenic contractile activity and excitatory innervation of rat urinary bladder.</a> The American journal of physiology. 247, 972-978 (1984).</li>
<li>Ng, Y. K., de Groat, W. C., Wu, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+and+neural+mechanisms+contributing+to+the+downregulation+of+neonatal+rat+spontaneous+bladder+contractions+during+postnatal+development%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Regulatory%2C+integrative+and+comparative+physiology%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle and neural mechanisms contributing to the downregulation of neonatal rat spontaneous bladder contractions during postnatal development.</a> American journal of physiology. Regulatory, integrative and comparative physiology. 292, 2100-2112 (2007).</li>
<li>Szell, E. A., Somogyi, G. T., de Groat, W. C., Szigeti, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+changes+in+spontaneous+smooth+muscle+activity+in+the+neonatal+rat+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Developmental changes in spontaneous smooth muscle activity in the neonatal rat urinary bladder.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 285, 809-816 (2003).</li>
<li>Szigeti, G. P., Somogyi, G. T., Csernoch, L., Szell, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependence+of+the+spontaneous+activity+of+the+rat+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22J+Muscle+Res+Cell+Motil%22%5BJournal%5D)">Age-dependence of the spontaneous activity of the rat urinary bladder.</a> J Muscle Res Cell Motil. 26, 23-29 (2005).</li>
<li>Frazier, E. P., Braverman, A. S., Peters, S. L., Michel, M. C., Ruggieri, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+phospholipase+C+mediate+muscarinic+receptor-induced+rat+urinary+bladder+contraction%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+pharmacology+and+experimental+therapeutics%22%5BJournal%5D)">Does phospholipase C mediate muscarinic receptor-induced rat urinary bladder contraction.</a> The Journal of pharmacology and experimental therapeutics. 322, 998-1002 (2007).</li>
<li>Xin, W., Soder, R. P., Cheng, Q., Rovner, E. S., Petkov, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+inhibition+of+phosphodiesterase+1+relaxes+urinary+bladder+smooth+muscle%3A+role+for+ryanodine+receptor-mediated+BK+channel+activation%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Cell+physiology%22%5BJournal%5D)">Selective inhibition of phosphodiesterase 1 relaxes urinary bladder smooth muscle: role for ryanodine receptor-mediated BK channel activation.</a> American journal of physiology. Cell physiology. 303, 1079-1089 (2012).</li>
<li>Frazier, E. P., Peters, S. L., Braverman, A. S., Ruggieri, M. R., Michel, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signal+transduction+underlying+the+control+of+urinary+bladder+smooth+muscle+tone+by+muscarinic+receptors+and+beta-adrenoceptors%5BTitle%5D)+AND+%22Naunyn-Schmiedeberg%27s+archives+of+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Signal transduction underlying the control of urinary bladder smooth muscle tone by muscarinic receptors and beta-adrenoceptors.</a> Naunyn-Schmiedeberg's archives of pharmacology. 377, 449-462 (2008).</li>
<li>Svalo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+novel+beta3-adrenoceptor+agonist+mirabegron+reduces+carbachol-induced+contractile+activity+in+detrusor+tissue+from+patients+with+bladder+outflow+obstruction+with+or+without+detrusor+overactivity%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+pharmacology%22%5BJournal%5D)">The novel beta3-adrenoceptor agonist mirabegron reduces carbachol-induced contractile activity in detrusor tissue from patients with bladder outflow obstruction with or without detrusor overactivity.</a> European journal of pharmacology. 699, 101-105 (2013).</li>
<li>Yokota, T., Yamaguchi, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+cholinergic+and+purinergic+neurotransmission+in+pathologic+bladder+of+chronic+spinal+rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Changes in cholinergic and purinergic neurotransmission in pathologic bladder of chronic spinal rabbit.</a> J Urol. 156, 1862-1866 (1996).</li>
<li>Bayliss, M., Wu, C., Newgreen, D., Mundy, A. R., Fry, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+study+of+atropine-resistant+contractile+responses+in+human+detrusor+smooth+muscle%2C+from+stable%2C+unstable+and+obstructed+bladders%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">A quantitative study of atropine-resistant contractile responses in human detrusor smooth muscle, from stable, unstable and obstructed bladders.</a> J Urol. 162, 1833-1839 (1999).</li>
<li>Kullmann, F. A., McKenna, D., Wells, G. I., Thor, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+bombesin+receptors+in+urinary+tract+of+rats+and+human+but+not+of+pigs+and+mice%2C+an+in+vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropeptides%22%5BJournal%5D)">Functional bombesin receptors in urinary tract of rats and human but not of pigs and mice, an in vitro study.</a> Neuropeptides. 47, 305-313 (2013).</li>
<li>Sadananda, P., Kao, F. C., Liu, L., Mansfield, K. J., Burcher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acid+and+stretch%2C+but+not+capsaicin%2C+are+effective+stimuli+for+ATP+release+in+the+porcine+bladder+mucosa%3A+Are+ASIC+and+TRPV1+receptors+involved%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Acid and stretch, but not capsaicin, are effective stimuli for ATP release in the porcine bladder mucosa: Are ASIC and TRPV1 receptors involved.</a> European journal of pharmacology. 683, 252-259 (2012).</li>
<li>Maggi, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Species-related+variations+in+the+effects+of+capsaicin+on+urinary+bladder+functions%3A+relation+to+bladder+content+of+substance+P-like+immunoreactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Naunyn-Schmiedeberg%27s+archives+of+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Species-related variations in the effects of capsaicin on urinary bladder functions: relation to bladder content of substance P-like immunoreactivity.</a> Naunyn-Schmiedeberg's archives of pharmacology. 336, 546-555 (1987).</li>
<li>Kullmann, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+5-HT4+receptor+agonist%2C+cisapride%2C+on+neuronally+evoked+responses+in+human+bladder%2C+urethra%2C+and+ileum%5BTitle%5D)+AND+%22Autonomic+neuroscience+%3A+basic+%26+clinical%22%5BJournal%5D)">Effects of the 5-HT4 receptor agonist, cisapride, on neuronally evoked responses in human bladder, urethra, and ileum.</a> Autonomic neuroscience : basic & clinical. 176, 70-77 (2013).</li>
<li>Warner, F. J., Miller, R. C., Burcher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+tachykinin+NK2+receptor%3A+a+comparative+study+of+the+colon+and+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Pharmacol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Human tachykinin NK2 receptor: a comparative study of the colon and urinary bladder.</a> Clin Exp Pharmacol Physiol. 30, 632-639 (2003).</li>
<li>Zoubek, J., Somogyi, G. T., De Groat, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+inhibitory+effects+of+neuropeptide+Y+on+rat+urinary+bladder%2C+urethra%2C+and+vas+deferens%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+journal+of+physiology%22%5BJournal%5D)">A comparison of inhibitory effects of neuropeptide Y on rat urinary bladder, urethra, and vas deferens.</a> The American journal of physiology. 265, 537-543 (1993).</li>
<li>Warner, F. J., Miller, R. C., Burcher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure-activity+relationship+of+neurokinin+A%284-10%29+at+the+human+tachykinin+NK%282%29+receptor%3A+the+effect+of+amino+acid+substitutions+on+receptor+affinity+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Structure-activity relationship of neurokinin A(4-10) at the human tachykinin NK(2) receptor: the effect of amino acid substitutions on receptor affinity and function.</a> Biochem Pharmacol. 63, 2181-2186 (2002).</li>
<li>Warner, F. J., Mack, P., Comis, A., Miller, R. C., Burcher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure-activity+relationships+of+neurokinin+A+%284-10%29+at+the+human+tachykinin+NK%282%29+receptor%3A+the+role+of+natural+residues+and+their+chirality%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Structure-activity relationships of neurokinin A (4-10) at the human tachykinin NK(2) receptor: the role of natural residues and their chirality.</a> Biochem Pharmacol. 61, 55-60 (2001).</li>
<li>Dion, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure-activity+study+of+neurokinins%3A+antagonists+for+the+neurokinin-2+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Structure-activity study of neurokinins: antagonists for the neurokinin-2 receptor.</a> Pharmacology. 41, 184-194 (1990).</li>
<li>Somogyi, G. T., Zernova, G. V., Yoshiyama, M., Yamamoto, T., de Groat, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frequency+dependence+of+muscarinic+facilitation+of+transmitter+release+in+urinary+bladder+strips+from+neurally+intact+or+chronic+spinal+cord+transected+rats%5BTitle%5D)+AND+%22British+journal+of+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Frequency dependence of muscarinic facilitation of transmitter release in urinary bladder strips from neurally intact or chronic spinal cord transected rats.</a> British journal of pharmacology. 125, 241-246 (1998).</li>
<li>Andersson, K. E., Wein, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacology+of+the+lower+urinary+tract%3A+basis+for+current+and+future+treatments+of+urinary+incontinence%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+reviews%22%5BJournal%5D)">Pharmacology of the lower urinary tract: basis for current and future treatments of urinary incontinence.</a> Pharmacological reviews. 56, 581-631 (2004).</li>
<li>D’Agostino, G., Condino, A. M., Gallinari, P., Franceschetti, G. P., Tonini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+prejunctional+serotonin+receptors+modulating+%5B3H%5Dacetylcholine+release+in+the+human+detrusor%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+pharmacology+and+experimental+therapeutics%22%5BJournal%5D)">Characterization of prejunctional serotonin receptors modulating [3H]acetylcholine release in the human detrusor.</a> The Journal of pharmacology and experimental therapeutics. 316, 129-135 (2006).</li>
<li>Hawthorn, M. H., Chapple, C. R., Cock, M., Chess-Williams, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urothelium-derived+inhibitory+factor%28s%29+influences+on+detrusor+muscle+contractility+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22British+journal+of+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Urothelium-derived inhibitory factor(s) influences on detrusor muscle contractility in vitro.</a> British journal of pharmacology. 129, 416-419 (2000).</li>
<li>Chaiyaprasithi, B., Mang, C. F., Kilbinger, H., Hohenfellner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+human+detrusor+contraction+by+a+urothelium+derived+factor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of human detrusor contraction by a urothelium derived factor.</a> J Urol. 170, 1897-1900 (2003).</li>
<li>Testa, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+different+5-hydroxytryptamine+receptor+subtype+antagonists+on+the+micturition+reflex+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+international%22%5BJournal%5D)">Effect of different 5-hydroxytryptamine receptor subtype antagonists on the micturition reflex in rats.</a> BJU international. 87, 256-264 (2001).</li>
<li>Craggs, M. D., Rushton, D. N., Stephenson, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+putative+non-cholinergic+mechanism+in+urinary+bladders+of+New+but+not+Old+World+primates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">A putative non-cholinergic mechanism in urinary bladders of New but not Old World primates.</a> J Urol. 136, 1348-1350 (1986).</li>
<li>Fry, C. H., Bayliss, M., Young, J. S., Hussain, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+age+and+bladder+dysfunction+on+the+contractile+properties+of+isolated+human+detrusor+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+international%22%5BJournal%5D)">Influence of age and bladder dysfunction on the contractile properties of isolated human detrusor smooth muscle.</a> BJU international. 108, 91-96 (2011).</li>
<li>Kennedy, C., Tasker, P. N., Gallacher, G., Westfall, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+atropine-+and+P2X1+receptor+antagonist-resistant%2C+neurogenic+contractions+of+the+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Identification of atropine- and P2X1 receptor antagonist-resistant, neurogenic contractions of the urinary bladder.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 27, 845-851 (2007).</li>
<li>Levin, R. M., Danek, M., Whitbeck, C., Haugaard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+ethanol+on+the+response+of+the+rat+urinary+bladder+to+in+vitro+ischemia%3A+protective+effect+of+alpha-lipoic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+cellular+biochemistry%22%5BJournal%5D)">Effect of ethanol on the response of the rat urinary bladder to in vitro ischemia: protective effect of alpha-lipoic acid.</a> Molecular and cellular biochemistry. 271, 133-138 (2005).</li>
<li>Malysz, J., Afeli, S. A., Provence, A., Petkov, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol-mediated+relaxation+of+guinea+pig+urinary+bladder+smooth+muscle%3A+Involvement+of+BK+and+L-type+Ca2%2B+channels%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Cell+physiology%22%5BJournal%5D)">Ethanol-mediated relaxation of guinea pig urinary bladder smooth muscle: Involvement of BK and L-type Ca2+ channels.</a> American journal of physiology. Cell physiology. 306, 45-58 (2013).</li>
<li>Longhurst, P. A., Briscoe, J. A., Rosenberg, D. J., Leggett, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+cyclic+nucleotides+in+guinea-pig+bladder+contractility%5BTitle%5D)+AND+%22British+journal+of+pharmacology%22%5BJournal%5D)">The role of cyclic nucleotides in guinea-pig bladder contractility.</a> British journal of pharmacology. 121, 1665-1672 (1997).</li>
<li>Takahashi, R., Yunoki, T., Naito, S., Yoshimura, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+botulinum+neurotoxin+A+on+bladder+contractile+responses+to+activation+of+efferent+nerves%2C+smooth+muscles+and+afferent+nerves+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Differential effects of botulinum neurotoxin A on bladder contractile responses to activation of efferent nerves, smooth muscles and afferent nerves in rats.</a> J Urol. 188, 1993-1999 (2012).</li>
<li>Sadananda, P., Chess-Williams, R., Burcher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+properties+of+the+pig+bladder+mucosa+in+response+to+neurokinin+A%3A+a+role+for+myofibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22British+journal+of+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Contractile properties of the pig bladder mucosa in response to neurokinin A: a role for myofibroblasts.</a> British journal of pharmacology. 153, 1465-1473 (2008).</li>
<li>Liu, G., Daneshgari, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+neurogenically+mediated+contractile+responses+of+urinary+bladder+in+rats+with+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Renal+physiology%22%5BJournal%5D)">Alterations in neurogenically mediated contractile responses of urinary bladder in rats with diabetes.</a> American journal of physiology. Renal physiology. 288, 1220-1226 (2005).</li>
</ol>

저자는 그들이 더 경쟁 금전적 이해 관계가 없다고 선언합니다.

본 논문에서는 방광 생리학 및 병리학뿐만 아니라, 방광 기능 장애를 치료하기위한 새로운 약물의 발견을 돕는 관련된 중요한 과학적 문제들을 해결하는데 사용할 수있는 시험 관내 평활근 수축 방법에서 간단한 설명. 우리는 방광 평활근 수축의 발달 병리학 적 및 약리학 적 특성 (그림 2-4), 신경 전달 변조 (그림 5-7A), 종의 차이 (그림 4), 장기의 차이를 평가하는이 방법의 사용을 설명했다 (그림 6) 특정 성분의 방광 관련성 (예를 들어, 점막,도 7b). 여기에 도시되지 않은 부가 기능이 추가되는 약물 3,10,11, 다양한 약 22 ~ 24, 또는 평가 / 송신기 rele의 정량 구조 - 활성 관계를 이용하여 세포 내 경로의 평가를 포함신경 자극 25 후 ASE...

방광 평활근 소변 제거를 유도하기 위해 소변의 저장을 허용하도록 완화하고, 계약. 휴식은 내장 평활근 속성으로하고 배뇨근 베타 아드레날린 수용체 (β 인간의 3 AR)을 활성화 교감 신경에서 노르 에피네프린 (NE)의 토닉 릴리스에 의해 매개된다. 보이드는 교감 입력을 억제하고 아세틸 콜린 / ATP는 방광 평활근 일을 계약을 해제 부교감 신경을 활성화함으로써 달성된다. 뇌 및 / 또는 척수 손상, 신경 변성 질환, 당뇨병, 방광 출구 폐색 또는 간질 성 방광염 등 다양한 병적 상태, 뿌리깊 수명이 환자의 품질에 심각한 영향을주지 않고, 방광 기능을 변경할 수있다. 평활근, 원심성 또는 구 심성 신경 및 / 또는 이러한 조건은 하나의 블래 더에 영향을 미치는 요소에 의해 평활근의 수축을 변경할점막. 생체 내 및 방광 기능을 연구하기위한 생체 외 방법에서 여러 가지가 개발되어왔다. 생체은 방광 내압 측정은 방광 기능의 기본 측정이다. 이는 생리적 조건 하에서 주변 정보의 수집을 허용 그대로 제제이더라도, 평활근 스트립의 사용이 바람직하다하는 상황들이있다. 이러한 수술 및 / 또는 약리학 적 조작이 생존과 생체 제제의 안정성, 또는 영향을 미칠 수있는 상황을 포함 연구는 인간의 조직 또는 고가의 화학 물질의 사용을 필요로 할 때. 이 방법은 또한 방광의 각 구성 요소에 대한 약물, 나이 및 병리 효과 시험을 용이하게, 평활근, 점막, 원심성 및 구 심성 신경 즉. 방광 스트립은 과학적 질문에 대답 할 수 많은 그룹으로 수년에 걸쳐 이용되어왔다. 그들은 에바에 사용되었다근원 성 자발적인 활동 luate 변경 병리에 의해 유도. 이 활동은 과민성 방광 (OAB)의 긴급 및 주파수 증상에 기여하는 것으로, 따라서 OAB 3-9 개발되고 약물의 대상이다. 방광 스트립 또한 이완 또는 평활근 수축를 유도하는 대상이 될 수있는 이온 채널 및 / 또는 수용체 및 / 또는 세포 내 경로를 발견 할 목적으로 평활근 톤을 변조 근육 조직 및 신경 세포의 요인을 조사하기 위해 사용 하였다 3,10- 13. 다른 연구는 병리 (14, 15)에 의해 유도 된 송신기와 관련된 수용체 및 변경을 포함하여 신경 전달 물질의 특성에 초점을 맞추고있다. 또한,이 방법은 장기 19-21과 약물 구조 - 활성 관계의 평가 사이 22-24, 16 종 (18)로부터의 조직 사이의 비교를 위해 사용되어왔다. 이 방법의 확장은 지표 성과 데 사용되었습니다원심성 신경 송신기 (25)로부터 방출에 약물의 효과를 전자. 또한, 조직 (방광, 요도, 위장관, GI) (연구 승인을 수술 또는 장기 기증 조직부터) 동물이나 인간에서 수확 및 척수 손상 (SCI), 방광 출구 폐색을 포함한 동물의 다양한 모델에서 다양한 (BOO), 간질 성 방광염 (IC)은이 기술을 이용하여 조사 할 수있다. 본 논문에서는 위에서 언급 한 여러 과학적인 문제를 해결하기 위해 필요한 실험 프로토콜과 함께이 방법의 사용을 예시한다.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Equipment</td></tr><tr><td>Tissue Bath System with Reservoir</td><td>Radnoti, LLC</td><td>159920</td><td>격리된 조직 목욕 따뜻한</td></tr><tr><td>물 재순환기 펌프</td><td>Kent Scientific Corporation&nbsp;</td><td>TPZ-749</td><td>는 조직 목욕을 37 &#176으로 유지합니다. C</td></tr><tr><td>컴퓨터</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>데이터 수집 시스템</td><td>DataQ 기기</td><td>DI-710-UH</td><td>데이터 보기, 기록 및 분석 트랜스</td></tr><tr><td>브리지 변환기 증폭기</td><td>세계 정밀 기기</td><td>SYS-TBM4M</td><td>변환기 증폭기</td></tr><tr><td>잔디 자극기</td><td>잔디 기술</td><td>모델 S88</td><td>자극기</td></tr><tr><td>마취 시스템</td><td>켄트 사이언티픽 코퍼레이션&nbsp;</td><td>ACV-1205S</td><td>동물을 마취시키기 위해</td></tr><tr><td>마취 상자</td><td>하버드 기구</td><td>500116</td><td>동물을 마취하기 위해</td></tr><tr><td>마취 마스크</td><td>Kent Scientific Corporation&nbsp;</td><td>AC-09508</td><td>동물</td></tr><tr>을 마취하려면<td colspan="4">재료 및 수술 기구</td></tr><tr><td>Sylgard</td><td>Dow Corning Corp</td><td>184 SIL ELAST KIT</td><td>핀, 해부 및 절단 조직</td></tr><tr><td>페트리 접시</td><td>Corning</td><td>3160-152</td><td>조직 해부/절단</td></tr><tr><td>곤충 핀</td><td>ENTOMORAVIA Austerlitz 곤충 핀</td><td>크기 5</td><td>조직 핀 핀</td></tr><tr><td>벤치 패드</td><td>VWR International</td><td>56617-014</td><td>흡수성 벤치 언더패드</td></tr><tr><td>랫 수술 키트</td><td>Kent Scientific Corporation&nbsp;</td><td>INSRATKIT</td><td>조직 제거 및 해부</td></tr><tr><td>2 Dumont #3 Forceps</td><td>Kent Scientific Corporation&nbsp;</td><td>INS500064</td> 조직 집게 Kent Scientific Corporation을 <td>제거하고 해부하기 위해</td></tr><tr><td></td><td>&nbsp;</td><td>INS500092</td><td>조직 제거 및 해부</td></tr><tr><td>Scalpel</td><td>Kent Scientific Corporation&nbsp;</td><td>INS500236</td><td>조직을 제거하고 해부하기 위해</td></tr><tr><td>메스 블레이드</td><td>Kent Scientific Corporation&nbsp;</td><td>INS500239</td><td>조직을 제거하고 해부하기 위해</td></tr><tr><td>전문 클리퍼&nbsp;</td><td>브레인트리 사이언티픽, Inc.</td><td>CLP-223&nbsp; 45</td><td>털을 제거하려면</td></tr><tr><td>봉합사 실</td><td>Fine Science Tools</td><td>18020-50</td><td>타이 티슈</td></tr><tr><td>클립</td><td>Radnoti, LLC</td><td>158802</td><td>막대/변환기에 티슈</td></tr><tr><td>부착 1 g 무게</td><td>&nbsp; Mettler Toledo</td><td>11119525</td><td>변환기 교정</td></tr><tr>용<td colspan="4">Chemicals</td></tr><tr><td>Krebs Solution: Sodium chloride Potassium chloride Monobasic Potassium phosphate Magnesium sulfate Dextrose Sodium bicarbonate Calcium chloride Magnesium chloride</td><td>&nbsp; Sigma Fisher Fisher Fisher Fisher Sigma EMD Baker</td><td>&nbsp; S7653 P217-500 P285-3 M65-500 D16-500 S5761 CX0130-2 2444</td><td>Krebs 용액</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Henry Schein</td><td>029405</td><td>To 동물을 마취하다</td></tr><tr><td>&nbsp; 산소 탱크</td><td>Matheson Tri Gas</td><td>ox251</td><td>마취 시스템과 함께 사용하기 위한</td></tr><tr><td>Carbogen Tank (95% 산소; 5% 이산화탄소)&nbsp;</td><td>Matheson Tri Gas</td><td>Moxn00hn36D</td><td>크렙스 솔루션을 폭기시키기 위해</td></tr></tbody></table>

하부 요로 약리학을 평가하는 방법으로 방광 평활근 스트립 수축성

Bladder Smooth Muscle Strip Contractility as a Method to Evaluate Lower Urinary Tract Pharmacology

우리는 체외 방광 평활근 수축을 측정하는 방법, 및 약리학 적 및 생리 평활근의 성질뿐만 아니라 병리학 적 변화에 의한 조사에 대한 사용을 설명한다. 이 방법은 수술 및 약리학 적 제제의 안정성 및 생존에 영향을 조작, 인체 조직의 사용 및 / 또는 고가의 화학 물질의 사용과 같은 생체 내 실험에서 발생 주요 방법론적인 어려움을 극복하면서, 방광 기능을 이해하는데 중요한 정보를 제공한다. 또한 건강하고 병적 조건의 각 방광 성분 (즉, 평활근, 점막, 신경)의 성질을 조사하는 방법을 제공한다. 방광은 마취 된 동물, 크렙스 용액에 넣고, 스트립으로 절단 제거한다. 스트립 따뜻한 크렙스 용액으로 채워진 챔버에 배치됩니다. 일단 아이소 장력에 부착수축력을 측정하는 n 개의 트랜스 듀서, 타단은 고정 된로드에 부착된다. 티슈 직접 목욕 또는 생체 내에서 방광 수축을 유발 유사한 신경을 활성화 전기장 자극 전극에 의해 화합물을 추가로 자극한다. 우리는이 방법의 사용은 발전 과정 및 실험 척수 손상 후 자발 평활근 수축을 평가 보여, 신경 전달 (관련된 송신기 및 수용체), 평활근 활성의 조절에 관여하는 인자의 성질, 개별 블래 성분의 역할 종 및 약리 에이전트에 응답 기관의 차이. 또한, 송신기는 릴리스 수축 및 / 또는 평활근의 이완, 약물 구조 활성 관계 및 평가에 관련된 세포 내 경로를 조사를 위해 사용될 수있다. 체외 평활근 수축 방법은 광범위하게 사용되어왔다 FO오십년 이상 R, 크게 방광 기능에 대한 우리의 이해뿐만 아니라 현재 방광 관리를 위해 임상 적으로 사용되는 화합물의 제약 발전에 기여 데이터를 제공하고 있습니다.

자발적인 근육 조직 활동 자발적인 근육 조직 활동은 출생 후의 개발 6-9 병리 (예를 들어, SCI, BOO) 3-5으로 변화를 겪는 중요한 평활근 특징입니다. 이 액티비티는 과민성 방광 (OAB) (2)의 증상에 기여하는 것으로 생각되기 때문에, 변조 수용체, 세포 내 경로 및 약리 제의 평가는 OAB 및 기타 평활근 장애에 대한 효과적인 치료법을 개발하기위한 높은 관심사이다. . 여기에 제시된 방법은 쉽게, 청소년이 질문을 조사이 신생아 (I)의 개발 과정, 근원 자연 활동의 다른 패턴을 보여줍니다 수 있습니다 그림 (II) 성인 (III)와 척수 손상 쥐 (SCI, ⅳ). 신생아 쥐에서 스트립은 큰 진폭, 낮은 주파수 리듬 수축 (그림 2AI)를 전시하면서 성인 쥐에서 스트립...

이 원고는 약리학 제제 또는 신경 자극에 반응하여 평활근 수축을 평가하기위한 시험 관내 방법에있어서, 간단하지만 강력한을 제시한다. 주요 응용 프로그램은 약물 검사 및 이해 조직 생리학, 약리학, 병리학이다​​.

We describe an in vitro method to measure bladder smooth muscle contractility, and its use for investigating physiological and pharmacological properties ...

이 절차의 전반적인 목표는 방광 평활근 조직의 생리학적 및 약리학적 특성을 평가하는 것입니다. 이것은 쥐의 방광을 절개하여 평평한 시트로 열고 요로상피 평활근과 신경이 들어 있는 스트립을 절단하여 수행됩니다. 두 번째 단계에서는 근육 수축성을 측정하기 위해 증폭기 및 자극기에 연결된 힘 변환기에 조직을 부착합니다.다음 단계에서는 기준선 톤과 조직 생존력을 확립한 다음 스트립을 약리학적 및/또는 전기 자극에 노출시킵니다. 궁극적으로 방광 평활근 조직의 수축성에 대한 자극의 영향을 측정할 수 있습니다. 이 방법은 병리학 및 약리학 적 화합물이 전체 방광뿐만 아니라 요로 상피, 인간 및 동물의 평활근 신경과 같은 특정 방광 조직 구성 요소에 미치는 영향을 특성화하는 데 사용됩니다.이 기술은 잘 정의되고 통제된 환경에서 약리학적 제제에 대한 빠르고 쉽고 재현 가능한 스크리닝 방법을 나타내기 때문에 다양한 방광 기능 장애에 대한 치료법 개발 중에 광범위하게 사용되었습니다. 뒷다리 상실로 마취를 확인한 후 반사를 철회하고 동물의 복부를 면도한 후 복부 정중절개를 통해 골반 장기를 노출합니다. 다음으로, 방광과 요도를 확인한 다음 근위 요도에 가까운 방광 목을 자릅니다.방광을 제거하려면 폭기된 크렙 용액으로 채워진 실 가드 코팅 접시에 조직을 즉시 넣으십시오. 그런 다음 동물을 희생 한 후 방광 돔 목 및 요관을 통해 조직 해부 핀을 삽입하여 조직을 늘리지 않고 추가 해부를 위해 조직을 안정화합니다. 방광의 외부 조직을 잘라낸 다음 바닥에서 돔까지 조직을 열어 편평한 시트 간경변 면이 아래로, 내강면이 위로 향하게 만듭니다.조직의 각 모서리에 박부 핀을 끼운 다음 방광, 목 및 돔 조직을 제거합니다. 다음으로, 바닥에서 돔까지 조직을 세로로 약 2 x 8mm 스트립으로 자르고 각 스트립의 양쪽 끝에 조직 클립을 부착합니다. 스트립을 실험실로 옮기고 각 스트립의 한쪽 끝을 힘 변환기에 연결하고 다른 쪽 끝을 고정 막대에 연결합니다.이제 기준선 장력이 1g에 도달할 때까지 조직을 부드럽게 늘립니다. 처음에는 조직이 이완되는 경향이 있으며, 이는 기준선 장력의 감소로 기록됩니다. 따뜻한 폭기 크레브로 약 15분마다 스트립을 씻고 기준선 장력을 1g으로 조정합니다.매번 씻은 후에는 조직이 더 이상 이완되지 않을 때까지 약 1-2시간 동안 평형을 이루도록 합니다. 기준선 장력이 안정되면 5분 동안 또는 안정기 반응에 도달할 때까지 염화칼륨을 수조에 직접 첨가하여 조직 생존력을 테스트합니다. 그런 다음 따뜻한 폭기 틈새로 조직을 3-5회 세척하여 조직이 처리 전 상태로 돌아갈 수 있도록 합니다.약리학적 평활근 자극을 위해 농축 용액의 약물을 욕조에 직접 첨가하십시오. 예를 들어, 카바홀 자극의 경우, 각 10ml의 조직 수조에 각 자극 농도의 10마이크로리터를 추가합니다. 이전 농도의 반응이 정체기에 도달하자마자.평행 스트립에서 평활근 또는 전기장 자극의 신경 자극을 위해 동일한 양의 차량을 추가합니다. 기차 시간을 3초에서 10초로 설정하고 기차 간 간격을 최소 1분 간격으로 설정합니다. 기차 자극의 주파수를 설정한 후 0.5에서 50Hz 범위의 주파수 응답 곡선을 실행하여 자극의 강도를 설정합니다.수축의 진폭이 안정기에 도달할 때까지 전압을 체계적으로 증가시키고 주파수를 일정하게 유지합니다. 자극 매개변수가 설정되면 약물 검사 전에 전기장 자극, 유발 수축이 안정화될 때까지 약 20-30분 동안 기다립니다. 그런 다음 전기장 자극에 대한 알파 베타 메틸렌 TP 및 아트로핀의 효과를 테스트하려면 예를 들어 두 개의 제어 주파수 응답 곡선을 수행 한 다음 10 마이크로 리터의 알파 베타 메틸렌 TP를 테스트 스트립에 추가하고 10 마이크로 리터의 차량을 제어 스트립에 추가합니다.알파 베타 메틸렌 A TP는 평활근의 순수 수용체를 직접 자극하고 이러한 수용체를 둔감하게 하여 초기 기준선 수축을 유발합니다. 응답이 기준선으로 돌아온 후 모든 스트립에서 주파수 응답 곡선을 반복합니다. 테스트 스트립에 10마이크로리터의 아트로핀을 추가하고 제어 스트립에 10마이크로리터의 차량을 추가하고 전기장 자극이 끝날 때 주파수 응답 곡선을 반복합니다.나트륨 채널 차단제 테트라로 독소에 대한 신경 전달을 차단하여 전기장 자극의 선택성을 확인합니다. 마지막으로 스트립의 클립을 풉니다. 티슈 페이퍼에 부드럽게 차단하여 여분의 액체를 제거하고 저울에서 각 스트립의 무게를 측정하여 평활근 긴장도에 미치는 영향을 확인하십시오.적절한 데이터 분석 소프트웨어를 사용하여 약물 유도 반응이 최고조에 달하기 최소 10초에서 30초 전의 창을 선택하고 수축의 진폭을 측정하여 신경 유발 수축에 대한 실험적 치료의 효과를 확인합니다. 약물 유도 반응의 정점 전과 정점에서 최소 3번의 수축 곡선 아래의 진폭, 지속 시간 및 면적을 측정합니다. 마지막으로, 데이터를 정규화하여 스트립과 약물 치료에 대한 결과를 비교합니다.자발적인 근육 활동은 산후 발달 및 병리학적으로 변하는 평활근 특성입니다. 이 대표적인 실험에서 신생아 쥐의 스트립은 큰 진폭, 저주파 리드미컬한 수축을 나타내는 반면 성인 쥐의 스트립은 척수 손상 후 작은 진폭, 고주파 활성을 나타냅니다. 신생아 패턴이 다시 나타나고, A-K-C-N-Q 채널 오프너는 성체 쥐의 스트립에서 자발적 활동의 진폭을 감소시킵니다., 요로상피와 점막에 의해 영향을 받을 수 있는 수축 특성은 소변 저장 및 배뇨 중 적절한 방광 기능에 중요한 요소입니다.예를 들어, 이 그래프에서 농도 의존성은 평활근 긴장도에서 증가합니다. 돼지 방광 스트립에서 무스카린 수용체의 caric call에 의한 활성화가 설명됩니다. 카바홀 치료에 대한 반응으로 근육 수축성의 감소는 점막이 있는 곳에서 관찰됩니다.이 그래프에서 볼 수 있듯이, 5개의 HT 4 수용체는 부교감 신경에서 동맹 전에 발현되며, 이들의 활성화는 아세틸콜린 수치를 증가시킵니다. 이 그래프는 인간의 방광과 회장 스트립에 대한 5개의 HT 4 수용체 작용제 cisapride의 흥분 효과의 다른 효능과 효능을 보여줍니다. 여러 수용체에 존재하는 종 차이는 이 방광 스트립 방법을 사용하여 평가할 수 있습니다.예를 들어, 이러한 데이터는 봄베신 수용체 길항제가 쥐 방광에 흥분 효과를 일으키는 반면 쥐 또는 돼지 방광 스트립에는 영향을 미치지 않는다는 것을 보여줍니다. 약리학적 자극을 위해서는 약물 적용의 농도, 시기 및 기간에 주의를 기울이는 것이 중요합니다. 신경 자극에 대한 다른 수용체에 대한 불특이적 영향 또는 표적 수용체의 둔감화를 피하기 위해 실험의 목적에 따라 전기장 자극을 위한 올바른 매개변수를 선택하고 자극이 평활근을 직접 활성화하지 않도록 하는 것이 중요합니다.

bladder-smooth-muscle-strip-contractility-as-method-to-evaluate-lower

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

Cystometry 작은 동물의 방광 기능을 측정 할 수있는 효과적인...

작은 쥐의 Cystometry의 사용 : 방광 Chemosensation의 연구

방광 확대의 외과 단계는 murine와 쥐 모델에서 3 차원 공사장 공중 발판을 사용하여 설명됩니다. 방광 확대에 사용할 biomaterial 구성의 효능을 테스트하려면 깨어 및 anesthetized 모두 cystometry에 대한 기술이 제공됩니다.

각종 설치류 모델에 Cystometric 분석을 사용하여 방광 증원을위한 Biomaterials 평가

이 프로토콜은 격리된 조직 수조 시스템과 컴퓨터 기반 데이터 수집을 사용하여 격리된 평활근 제제에서 등척성 수축을 측정하는 방법을 설명합니다.

약리학 연구에 고립 된 조직 목욕-애플리케이션에서 부드러운 근육 기능의 측정

이 문서에서는 설명 합니다 인간의 myometrium의 수축 비보 전 약물 발견. 에 그들의 응용 프로그램을 공부 하 고 실험 프로토콜을 이 기술은 myometrial 생리학과 소설 연구 조사에서 약리 데이터 유효성 검사로 이상 뿐만의 이해를 개선 하는 데 사용 됩니다 또는 마약 리드.

보조 약물 개발에 인간 자 궁 평활 근의 수축 측정

우리는 방광 부피, 방광 벽 두께, 소변 속도, 공극 부피, 공극 기간 및 요도 직경을 측정하는 방법으로 대조 이미징을 가진 고주파 초음파의 사용을 기술합니다. 이 전략은 더 낮은 요로 역기능 (LUTD)의 각종 마우스 모형에 있는 무효 기능 장애 및 처리 효험을 평가하기 위하여 이용될 수 있습니다.

요로 기능 검사를 위한 성인 남성 요로의 초음파 검사

우리는 2 단계 효소 절차를 채택하는 인간 적인 오줌 방광 견본에서 단 하나 신선하게 고립된 분리근 평활근 세포의 제조를 위한 방법을 기술합니다. 얻어진 생존 가능한 DSM 세포는 생리학적 및 약리학적 특성을 밝히기 위해 기재된 암포테리신-B 패치-클램프 전기생리학을 포함하는 다양한 단일 세포 기술에 의해 연구될 수 있다.

9-페난트롤에 민감한 양이온 전류의 특성화를 위해 갓 분리된 인간 분리기 평활근 세포의 준비 및 활용

detrusor-free 방광 모형은 소변의 저장 그리고 무효화 도중 suburothem/lamina propria에 있는 생물학적으로 활성 매개체 가용성의 규칙에 대한 지역 기계장치를 공부하기 위하여 suburothem에 직접 접근할 수 있습니다. 준비는 밀접하게 손상되지 않은 방광의 채우기를 닮은 및 압력 볼륨 연구는 전신 영향없이 수행 할 수 있습니다.

방광 충진 중 수부에 직접 접근할 수 있도록 제거된 분리기 근육이 있는 분권화된(Ex Vivo) 뮤린 방광 모델

이 프로토콜은 마취 된 설치류에서 방광 내강의 ATP 농도를 측정하는 절차를 설명합니다.

생체 내 설치류에서 팽창 유발 요로 상피 ATP 방출의 내강 측정

마우스 방광 벽 주입은 orthotopically 방광 줄기 세포와 암 생물학을 연구하는 유용한 방법입니다. 이 섬세한 microsurgical 방법은 신중 기술과 연습 마스터하실 수 있습니다.

마우스 블레더 월 주입

급성 호흡 곤란 증후군 (아즈)과 중요한 질병의 생존자가 자주 오랫동안 근육 약점을 개발. 수동 근육 테스트 (MMT)는 일반적으로 주변 골격근 그룹의 강도를 측정하는 데 사용하는 표준화된 임상 시험이다. 이 비디오는 6 포인트 의학 연구위원회 척도를 사용하여 MMT을 보여줍니다.

수동 근육 시험 : 끝단 근육 강도를 측정하는 방법은 매우 불길한 환자에게 적용

학습하세요 쥐 방광 평활근 스트립을 이용한 수축성 측정 방법으로 하부 요로 약리학을 평가하는 기술입니다. 이 방법은 약물 스크리닝과 방광 생리학 연구에 활용됩니다.

하부 요로 약리학을 평가하는 방법으로 방광 평활근 스트립 수축성

더 많은 동영상 탐색