2014년 8월 18일
이 원고는 약리학 제제 또는 신경 자극에 반응하여 평활근 수축을 평가하기위한 시험 관내 방법에있어서, 간단하지만 강력한을 제시한다. 주요 응용 프로그램은 약물 검사 및 이해 조직 생리학, 약리학, 병리학이다.
이 절차의 전반적인 목표는 방광 평활근 조직의 생리학적 및 약리학적 특성을 평가하는 것입니다. 이것은 쥐의 방광을 절개하여 평평한 시트로 열고 요로상피 평활근과 신경이 들어 있는 스트립을 절단하여 수행됩니다. 두 번째 단계에서는 근육 수축성을 측정하기 위해 증폭기 및 자극기에 연결된 힘 변환기에 조직을 부착합니다.
다음 단계에서는 기준선 톤과 조직 생존력을 확립한 다음 스트립을 약리학적 및/또는 전기 자극에 노출시킵니다. 궁극적으로 방광 평활근 조직의 수축성에 대한 자극의 영향을 측정할 수 있습니다. 이 방법은 병리학 및 약리학 적 화합물이 전체 방광뿐만 아니라 요로 상피, 인간 및 동물의 평활근 신경과 같은 특정 방광 조직 구성 요소에 미치는 영향을 특성화하는 데 사용됩니다.
이 기술은 잘 정의되고 통제된 환경에서 약리학적 제제에 대한 빠르고 쉽고 재현 가능한 스크리닝 방법을 나타내기 때문에 다양한 방광 기능 장애에 대한 치료법 개발 중에 광범위하게 사용되었습니다. 뒷다리 상실로 마취를 확인한 후 반사를 철회하고 동물의 복부를 면도한 후 복부 정중절개를 통해 골반 장기를 노출합니다. 다음으로, 방광과 요도를 확인한 다음 근위 요도에 가까운 방광 목을 자릅니다.
방광을 제거하려면 폭기된 크렙 용액으로 채워진 실 가드 코팅 접시에 조직을 즉시 넣으십시오. 그런 다음 동물을 희생 한 후 방광 돔 목 및 요관을 통해 조직 해부 핀을 삽입하여 조직을 늘리지 않고 추가 해부를 위해 조직을 안정화합니다. 방광의 외부 조직을 잘라낸 다음 바닥에서 돔까지 조직을 열어 편평한 시트 간경변 면이 아래로, 내강면이 위로 향하게 만듭니다.
조직의 각 모서리에 박부 핀을 끼운 다음 방광, 목 및 돔 조직을 제거합니다. 다음으로, 바닥에서 돔까지 조직을 세로로 약 2 x 8mm 스트립으로 자르고 각 스트립의 양쪽 끝에 조직 클립을 부착합니다. 스트립을 실험실로 옮기고 각 스트립의 한쪽 끝을 힘 변환기에 연결하고 다른 쪽 끝을 고정 막대에 연결합니다.
이제 기준선 장력이 1g에 도달할 때까지 조직을 부드럽게 늘립니다. 처음에는 조직이 이완되는 경향이 있으며, 이는 기준선 장력의 감소로 기록됩니다. 따뜻한 폭기 크레브로 약 15분마다 스트립을 씻고 기준선 장력을 1g으로 조정합니다.
매번 씻은 후에는 조직이 더 이상 이완되지 않을 때까지 약 1-2시간 동안 평형을 이루도록 합니다. 기준선 장력이 안정되면 5분 동안 또는 안정기 반응에 도달할 때까지 염화칼륨을 수조에 직접 첨가하여 조직 생존력을 테스트합니다. 그런 다음 따뜻한 폭기 틈새로 조직을 3-5회 세척하여 조직이 처리 전 상태로 돌아갈 수 있도록 합니다.
약리학적 평활근 자극을 위해 농축 용액의 약물을 욕조에 직접 첨가하십시오. 예를 들어, 카바홀 자극의 경우, 각 10ml의 조직 수조에 각 자극 농도의 10마이크로리터를 추가합니다. 이전 농도의 반응이 정체기에 도달
하자마자.평행 스트립에서 평활근 또는 전기장 자극의 신경 자극을 위해 동일한 양의 차량을 추가합니다. 기차 시간을 3초에서 10초로 설정하고 기차 간 간격을 최소 1분 간격으로 설정합니다. 기차 자극의 주파수를 설정한 후 0.5에서 50Hz 범위의 주파수 응답 곡선을 실행하여 자극의 강도를 설정합니다.
수축의 진폭이 안정기에 도달할 때까지 전압을 체계적으로 증가시키고 주파수를 일정하게 유지합니다. 자극 매개변수가 설정되면 약물 검사 전에 전기장 자극, 유발 수축이 안정화될 때까지 약 20-30분 동안 기다립니다. 그런 다음 전기장 자극에 대한 알파 베타 메틸렌 TP 및 아트로핀의 효과를 테스트하려면 예를 들어 두 개의 제어 주파수 응답 곡선을 수행 한 다음 10 마이크로 리터의 알파 베타 메틸렌 TP를 테스트 스트립에 추가하고 10 마이크로 리터의 차량을 제어 스트립에 추가합니다.
알파 베타 메틸렌 A TP는 평활근의 순수 수용체를 직접 자극하고 이러한 수용체를 둔감하게 하여 초기 기준선 수축을 유발합니다. 응답이 기준선으로 돌아온 후 모든 스트립에서 주파수 응답 곡선을 반복합니다. 테스트 스트립에 10마이크로리터의 아트로핀을 추가하고 제어 스트립에 10마이크로리터의 차량을 추가하고 전기장 자극이 끝날 때 주파수 응답 곡선을 반복합니다.
나트륨 채널 차단제 테트라로 독소에 대한 신경 전달을 차단하여 전기장 자극의 선택성을 확인합니다. 마지막으로 스트립의 클립을 풉니다. 티슈 페이퍼에 부드럽게 차단하여 여분의 액체를 제거하고 저울에서 각 스트립의 무게를 측정하여 평활근 긴장도에 미치는 영향을 확인하십시오.
적절한 데이터 분석 소프트웨어를 사용하여 약물 유도 반응이 최고조에 달하기 최소 10초에서 30초 전의 창을 선택하고 수축의 진폭을 측정하여 신경 유발 수축에 대한 실험적 치료의 효과를 확인합니다. 약물 유도 반응의 정점 전과 정점에서 최소 3번의 수축 곡선 아래의 진폭, 지속 시간 및 면적을 측정합니다. 마지막으로, 데이터를 정규화하여 스트립과 약물 치료에 대한 결과를 비교합니다.
자발적인 근육 활동은 산후 발달 및 병리학적으로 변하는 평활근 특성입니다. 이 대표적인 실험에서 신생아 쥐의 스트립은 큰 진폭, 저주파 리드미컬한 수축을 나타내는 반면 성인 쥐의 스트립은 척수 손상 후 작은 진폭, 고주파 활성을 나타냅니다. 신생아 패턴이 다시 나타나고, A-K-C-N-Q 채널 오프너는 성체 쥐의 스트립에서 자발적 활동의 진폭을 감소시킵니다., 요로상피와 점막에 의해 영향을 받을 수 있는 수축 특성은 소변 저장 및 배뇨 중 적절한 방광 기능에 중요한 요소입니다.
예를 들어, 이 그래프에서 농도 의존성은 평활근 긴장도에서 증가합니다. 돼지 방광 스트립에서 무스카린 수용체의 caric call에 의한 활성화가 설명됩니다. 카바홀 치료에 대한 반응으로 근육 수축성의 감소는 점막이 있는 곳에서 관찰됩니다.
이 그래프에서 볼 수 있듯이, 5개의 HT 4 수용체는 부교감 신경에서 동맹 전에 발현되며, 이들의 활성화는 아세틸콜린 수치를 증가시킵니다. 이 그래프는 인간의 방광과 회장 스트립에 대한 5개의 HT 4 수용체 작용제 cisapride의 흥분 효과의 다른 효능과 효능을 보여줍니다. 여러 수용체에 존재하는 종 차이는 이 방광 스트립 방법을 사용하여 평가할 수 있습니다.
예를 들어, 이러한 데이터는 봄베신 수용체 길항제가 쥐 방광에 흥분 효과를 일으키는 반면 쥐 또는 돼지 방광 스트립에는 영향을 미치지 않는다는 것을 보여줍니다. 약리학적 자극을 위해서는 약물 적용의 농도, 시기 및 기간에 주의를 기울이는 것이 중요합니다. 신경 자극에 대한 다른 수용체에 대한 불특이적 영향 또는 표적 수용체의 둔감화를 피하기 위해 실험의 목적에 따라 전기장 자극을 위한 올바른 매개변수를 선택하고 자극이 평활근을 직접 활성화하지 않도록 하는 것이 중요합니다.
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이 원고는 방광 평활근 조직의 생리학적 및 약리학적 특성을 평가하는 방법을 제시합니다. 이 기술은 쥐 방광을 해부하고 약리학적 물질이나 신경 자극에 대한 근육 수축성을 측정하는 것을 포함합니다.
Bladder smooth muscle strip contractility assays provide a robust in vitro platform for evaluating pharmacological and physiological responses relevant to lower urinary tract disorders. This method enables precise interrogation of drug effects, neurotransmission, and tissue-specific mechanisms, supporting early-stage target validation and mechanistic de-risking in urological drug discovery. Its reproducibility and adaptability across species and pathological states make it a critical tool for portfolio triage and translational research continuity.
This contractility assay bridges early discovery, lead identification, and preclinical validation by providing a standardized, quantitative readout of bladder tissue function.