신경 회로 토대 메모리 형성을 해부에 대한 신생아 흰쥐의 편측 냄새 학습 모델

이 프로토콜은 급성 단일 폐색을 사용하여 쥐에서 측면화된 조기 냄새 선호 학습을 소개합니다. 이것은 먼저 탈착식 폴리에틸렌 노즈 플러그를 구성하여 수행됩니다. 두 번째 단계는 행동 훈련 전에 원하는 양자리를 가리는 것입니다.

다음으로, 향기로운 침구를 준비한 다음 붓으로 쓰다듬으면서 향기가 나는 침구에서 동물을 훈련시킵니다. 마지막 단계는 두 가지 선택 테스트 장치를 사용하여 측면 냄새 선호도를 테스트하는 것입니다. 궁극적으로, 인산화된 C amp 반응 요소 결합 단백질 또는 P 크립의 면역조직화학은 단일 nary 격리 및 방법의 가역성으로 인한 신경 활성의 일방적 침묵을 입증하는 데 사용됩니다.

기존 동물 통제 방법 간의 이 기술의 주요 장점은 두 개의 후각 반구가 연결되어 있지 않은 MA 성숙한 전방 커미스 돌출부가 없기 때문에 출생 후 레이어 11 이전의 동물 통제 내 실험 설계의 특성을 통해 변동성과 동물 수를 줄일 수 있다는 것입니다. 이를 통해 단일 영양 폐색을 통해 한 반구를 다른 반구와 독립적으로 조작할 수 있습니다. 폐색된 반구는 동물 내 통제 역할을 합니다.

이 기술은 신생아 쥐의 후각 학습에 초점을 맞추고 있지만, 그 의미를 통해 시냅스 가소성, 메타 가소성 및 이를 뒷받침하는 분자 메커니즘과 같은 학습 및 기억 중 신경 과정에 관한 근본적인 질문에 답할 수 있습니다. 이 방법을 사용한 연구에서 도출된 결론은 특히 출생 후 중요한 기간 동안 학습과 기억 및 포유류의 기본 원리로 일반화될 수 있습니다. 이것은 병태생리학적 상태와 관련된 기억 상실에 대한 잠재적인 치료법에 대한 유망한 배경을 구축하는 데 도움이 될 것입니다.

이 방법은 냄새 인식 및 냄새 코팅과 같은 다른 후각 관련 공정에도 매우 적합합니다. 코 플러그는 폴리에틸렌 20 튜브와 3개의 제로 실크 봉합사로 구성됩니다. 먼저 폴리에틸렌 22의 작은 조각을 약 0.8cm로 자릅니다.

그런 다음 튜브 섹션의 양쪽에 나사산이 있도록 준비된 튜브를 통해 실크 봉합사를 끼웁니다. 플러그 바깥쪽 나사산의 한쪽 끝에 매듭을 묶습니다. 튜브의 부분을 실의 매듭 위로 아래로 당깁니다.

매듭은 튜브 내부에 고정되어야 합니다. 튜브의 한쪽 끝에서 약 2mm의 실이 튀어나오도록 나사산의 양쪽 끝을 자릅니다. 이 절차를 시작하려면 댐에서 강아지를 제거하고 일반 침구로 덮인 안전한 접시에 넣으십시오.

면 끝 도포구를 사용하여 국소 마취 젤리, 2%Xylocaine을 양자리에 두드려 막습니다. 강아지를 약 3분 동안 접시에서 쉬게 합니다. 강아지의 루신은 이 절차에서 가장 중요한 단계입니다.

출혈과 조직 손상을 방지하기 위해 코 마개를 삽입하는 동안 치료를 받아야 합니다. 다음으로, 강아지를 집어 들고 주로 사용하지 않는 손으로 부드럽지만 안전하게 잡고 코를 집어 들고 실이 튀어 나오지 않는 끝 부분에 동일한 국소 마취 젤리를 꽂고 두드립니다. 이것은 플러그 삽입과 관련된 경미한 통증에 대한 마취제와 nes 내부의 윤활제 역할을 합니다.

강아지를 단단히 잡고 플러그가 완전히 삽입되고 양자리에서 2mm 실만 돌출될 때까지 매우 부드럽게 밀어 플러그를 천천히 돌려 코 플러그를 부드럽게 삽입합니다. 이 과정에서 양자리에서 출혈이 없어야 합니다. 코 마개 삽입 중 출혈이 있는 강아지는 실험에 사용할 수 없습니다.

동물이 플러그에 익숙해지도록 접시에서 5분 동안 휴식을 취하십시오 냄새 오염을 방지하기 위해 교육을 시작하기 전에 흄 후드에 향이 나는 침구를 준비하고 새 장갑을 낀 상태에서 500ml의 나무 조각 침구를 비닐 봉지에 넣습니다. 주사기를 사용하여 0.3ml의 페퍼민트 추출물을 추출하고 이를 비닐 봉지의 침구에 뿌립니다. 가방을 닫고 세게 흔든 다음 침구를 가방 안에 5분 동안 두고, 향이 나는 침구를 흄 후드에 덮이지 않은 투명하고 얕은 20 x 20 x 5cm 아크릴 트레이닝 상자에 넣기 전에 5분 동안 사용합니다.

침구가 준비되면 사용한 장갑은 버리십시오. 장갑이 동물과 접촉하지 않도록 하십시오. 500ml의 무향 침구를 다른 깨끗한 아크릴 트레이닝 상자에 넣고 향이 나는 침구나 중고 장갑과 접촉하지 않도록 합니다.

실험적인 냄새를 위해 습관화된 강아지를 향기로운 침구에 올려 놓음으로써 냄새 조절 패러다임을 시작하십시오. 게다가 뇌졸중 OS 양성 강아지. 30초 동안 강아지를 쓰다듬습니다.

작은 붓을 사용하여 주로 강아지의 뒷부분 주변에서 빠른 원 운동을 사용하십시오. 쓰다듬는 것은 후각구와 후각 피질로 노르에피네프린 방출을 유도합니다. 이것은 무조건적인 자극으로 작용한다.

강아지를 30초 동안 쉬게 합니다. 30초간 쓰다듬기를 반복한 후 30초간 휴식을 취해 총 10분간 휴식을 취한다. 쓰다듬는 것과 냄새의 10쌍이 완료되면 컨디셔닝 박스에서 강아지를 꺼냅니다.

코 플러그를 제거하고 강아지를 댐으로 돌려보내 방제하십시오. 냄새는 OS 음성 강아지 만 있습니다. 습관화된 강아지를 쓰다듬지 않고 10분 동안 향이 나는 침구 위에 올려 놓습니다.

10분 후 컨디셔닝 박스에서 강아지를 꺼냅니다. 코 플러그를 제거하고 강아지를 댐으로 되돌립니다. 측면 냄새 선호도 테스트는 최종 교육 세션 후 다양한 시점에서 수행됩니다.

테스트는 30 x 20 x 18cm 스테인리스강 테스트 챔버에서 수행되며, 2cm 중립 영역으로 분리된 두 개의 아크릴 교육 상자 위에 놓입니다. 한 트레이닝 상자에는 향이 나는 침구가 들어 있고 다른 상자에는 깨끗하고 무향 침구가 들어 있습니다. 앞서 보여준 것처럼 페퍼민트 향이 나는 침구 하나와 무향 침구 하나를 준비하고 각 상자를 실험실의 반대쪽 아래에 놓습니다.

2cm 떨어져 있습니다. 테스트 챔버의 금속 격자 바닥에 플라스틱 메쉬를 놓습니다. 댐에서 P를 제거하고 막힌 양자리에 무취의 실리콘 그리스를 단단히 바르십시오.

교육 중에는 필요에 따라 첫 번째 테스트 절차 전반에 걸쳐 그리스를 다시 도포할 수 있습니다. 강아지를 시험실의 중립 구역에 놓습니다. 강아지가 1분 동안 방을 탐험하도록 허용하여 강아지가 방의 양쪽에서, 즉 페퍼민트 또는 중성 향이 나는 침구 위에서 보낸 시간을 기록합니다.

강아지를 덮개가 있는 플라스틱 보관실로 옮기고 1분 동안 그대로 두십시오. 총 10분 동안 테스트 테스트를 반복하고 방향 선호도를 제어하기 위해 챔버에서 강아지의 초기 방향을 전환합니다. 테스트 직후 양자리에서 기름을 닦아내십시오.

앞에서 시연된 것과 동일한 RY 격리 절차에 따라 반대쪽 양자리에 폴리에틸렌 코 마개를 삽입하고 동물을 10분 동안 쉬게 합니다. 그 후, 강아지에 대해 측면 냄새 선호도 테스트가 수행됩니다. 다시. 테스트가 완료되면 플러그를 뽑고 강아지를 댐으로 되돌립니다.

냄새와 쓰다듬는 훈련 중 한 번의 좁은 격리는 보존된 NRI에 국한된 측방화된 냄새 기억으로 이어집니다. 새끼가 훈련 중과 동일한 외딴 곳에서 냄새 선호도를 테스트하면 조건화된 냄새에 대한 선호도를 보여줍니다. 이것은 반대쪽 외딴 곳에서 테스트를 수행했을 때 관찰되지 않았습니다.

대조적으로, 냄새만 있는 대조군은 어떤 니즈가 폐색되었는지에 관계없이 냄새 선호도를 보이지 않습니다. 테스트하는 동안, 측방화된 냄새 훈련은 냄새 노출 동안 후각 시스템의 측방화 활성화를 초래하며, 후각구 또는 OB 및 전방 이상형 피질의 면역조직화학작용 또는 PC는 반대쪽 여분 반구에 비해 악취 노출 후 폐색된 반구에서 인산화된 Créb이 현저히 적은 것을 보여주었습니다. Nissel 염색은 OB의 승모세포층과 양쪽 반구의 PC의 피라미드 세포층에서 유사한 세포체를 보여줍니다.

콧대 제거 후 24시간 후 완두콩 게 발현: OB의 승모세포와 PC의 피라미드 세포에서 냄새 노출 후 발현은 폐색된 반구와 절약된 반구 간에 비슷합니다. 이는 단일 임상시험의 무분별한 격리의 영향이 일시적이고 되돌릴 수 있으며 테스트 중 냄새 인식 및 냄새에 대한 신경 세포 활성화에 영향을 미칠 수 있는 눈에 띄는 장기적 신경 손상을 초래하지 않음을 나타냅니다. 일단 마스터되면 NA 오클루전이 제대로 수행되면 5분 이내에 완료할 수 있습니다.

이 절차를 시도하는 동안 콧구멍을 막을 때 매우 조심하는 것이 중요합니다. 과도한 힘이나 부적절한 기술은 출혈을 일으켜 콧구멍이 손상될 수 있습니다. 이 절차를 따르십시오. 생체 외 전기생리학 및 분자 기술과 같은 다른 방법을 사용하여 시냅스 가소성에 관한 추가 질문에 답할 수 있습니다.

이 비디오를 시청한 후에는 냄새 학습을 측면화하고 기억 형성을 뒷받침하는 신경 회로를 해부하기 위해 일시적인 편측 협 폐색을 사용하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.