Name: 신경 회로 토대 메모리 형성을 해부에 대한 신생아 흰쥐의 편측 냄새 학습 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-18T16:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 42 s
Description: 학습하세요 신생아 흰쥐의 편측 냄새 학습 모델을 통해 신경 회로와 메모리 형성 메커니즘을 연구하는 방법을 배우세요. 단측 비강 폐쇄 기법으로 행동 및 생물학적 평가를 동일 개체에서 수행하여 변이성을 최소화합니다.

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이 작업은 Q. Y에 대한 CIHR 운영 보조금(MOP-102624)의 지원을 받았습니다. 연구 전반에 걸쳐 유익한 토론을 해주신 Carolyn Harley 박사님, 기술 지원을 해주신 Qinlong Hou 박사님, Amin Shakhawat 박사님, Andrea Darby-King 박사님께 감사드립니다.

남녀의 스프 라그 돌리 쥐 (찰스 리버) 새끼가 사용된다. 새끼는 (출생 PD0 인) PD1에 12 도태된다. 댐은 음식과 물에 대한 광고 무제한으로 액세스 할 수있는 12 시간 명 / 암주기에 유지됩니다. 실험 절차는 기념 대학의 기관 동물 관리위원회에 의해 승인되었습니다. 1 코 플러그 건설 참고 :.이 절차는 적응 커밍스 외로부터 수정 (1997) 35. <ol><li> Aquire 폴리에틸렌 20 튜브 3-0 실크 봉합사 실. </li><li> 약 0.8 mm에 폴리에틸렌 20 튜브의 작은 조각을 잘라. </li><li> 스레드는 튜브 섹션의 양쪽에 존재하도록 제조 된 튜브를 통해 달기 실크 봉합사. </li><li> 플러그의 외부 실의 한쪽 끝에서 스레드에서 매듭을 묶어. </li><li> 실의 매듭을 통해 아래로 튜브의 섹션을 당깁니다. 매듭은 튜브 내부에 제출해야한다.</li><li> 스레드 ~ 2mm가 튜브의 일단 부로부터 돌출되도록 실의 양단을 트림 (도 1a 참조). </li></ol> 교육 전에 2 나리스 폐쇄 <ol><li> 일반 침구로 덮여 안전한 접시에 댐과 장소에서 강아지를 제거합니다. </li><li> 콧 구멍에 국소 마취제 젤리, 2 % Xylocaine을 가볍게 두 드리하는면 팁 응용 프로그램을 사용하는 폐색합니다. </li><li> 강아지가 ~ 3 분 동안 접시에 휴식을 허용합니다. </li><li> 비 지배적 인 손에 부드럽게 안전하게 강아지를 잡으십시오. </li><li> 지배적 인 손을 사용하여, 코 플러그를 픽업 스레드가 돌출되어 있지 않은부터 팁 주위 같은​​ 국소 마취제 젤리를 두드려. 이 플러그 삽입과 관련된 약간의 통증이 모두 마취제 역할을하고 콧 구멍 안쪽에 윤활제 역할을합니다. 참고 : Xylocaine의 효과는 몇 분 내에 시작하고 20 ~ 30 분 동안 지속됩니다. xylocaine 젤리 사용 후 플러그 삽입의 일반적인 쇼 좋은 내성 새끼 (minimum 어려움을 겪고와 발성). </li><li> 조심스럽게 단단히 강아지를 들고와 플러그가 완전히 삽입 만 2mm 스레드가 콧 구멍에서 돌출 될 때까지 천천히 아주 부드러운 푸시와 플러그를 회전하여 코 플러그를 삽입합니다 (그림 1B 참조). 이 과정에서 두 콧 구멍에서 더 출혈이 없어야합니다. 코 플러그 삽입시 출혈 새끼 제외하고 댐으로 돌아갑니다 </li><li> 동물이 플러그에 길들하기 위해 5 분 동안이 접시에 휴식을 허용합니다. </li><li> 습관화 요리에서 강아지를 제거하고 에어컨 패러다임 (24)를 시작합니다. </li></ol><img alt="그림 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51808/51808fig1highres.jpg" width="500"> 코 플러그의 그림 1 건설. A) 회로도 코 플러그의 제조 단계를 도시. 스레드는 폴리에틸렌 튜브를 당겨; 매듭이 만들어 PUL된다이를 차단하는 튜브 중앙으로 이끄는; 두 끝)가 호스. B 중 한 쪽 끝에서 2mm의 잔류와 함께 전면 및 한 콧 구멍에 코 플러그가있는 쥐의 측면보기를 잘립니다. 3 향기 침구 준비 <ol><li> 새 장갑을 착용하고, 악취 오염을 방지 비닐 봉지에 우드 칩 침구 500 ㎖에 배치 할 흄 후드. </li><li> 0.3 ml의 박하 추출물을 그릴 주사기를 사용하고, 비닐 봉투에있는 침구를 통해이 스프레이. </li><li> , 가방 차단 타이 적극적으로 가방을 흔들어 침구는 5 분 동안 가방에 휴식을 할 수 있습니다. </li><li> 사용하기 전에 5 분 동안 흄 후드에서 발견 명확한, 얕은, 아크릴 훈련 상자 (20 × 20 × 5cm 3, 그림 2A)에서 냄새가 침대를 배치합니다. 침구가​​ 준비되면,이 장갑을 폐기하고,이 장갑은 동물과 접촉하지 않도록하십시오. </li><li> 동일한 투명한 플라스틱 상자에 무향 침대를 놓고 엉이 향수 침구 또는 사용 장갑에 접촉하지 않는지 확인하십시오. </li></ol> 4 냄새 컨디셔닝 패러다임 (그림 2A에서 그림 참조) 새끼는 PD 6, 또는 여러 시험 세션 (하루에 하나의 세션, PD 3-6)에, 하나 하나의 조화 세션을받을. <ol><li> 냄새가 침대에 길들여 강아지를 놓습니다. 제어 냄새 만 (O / S -)의 경우 새끼, 다음 4.5 단계로 이동, 10 분 동안 침대에서이 새끼를 둡니다. 실험 냄새 + 스트로크 (O / S +) 새끼는,이 섹션에서 다음 단계를 계속합니다. </li><li> 스트로크 30 초 동안 강아지는 작은 붓을 사용. 주로 강아지의 뒷다리 지역 주위에 빠른 원형 동작을 사용합니다. </li><li> 강아지가 30 초 동안 휴식을 허용합니다. </li><li> 반복 4.2 및 10 분의 총 4.3 (쓰다듬어 + 냄새 즉, 10 페어링) 단계를 반복합니다. </li><li> 컨디셔닝 상자에서 강아지를 제거 코 플러그를 제거하고 댐에 강아지를 반환합니다. </li></ol> &lt;P 클래스 = "jove_title"&gt; 5. 편측 냄새 환경 테스트 (그림 2B에서 그림 참조) 테스트는 최종 트레이닝 세션 다음 다양한 시점 (예를 들면, 24 또는 48 시간)에서 발생한다. 테스트는 2cm 중성 영역으로 구분이 훈련 박스 (훈련 박스 3.4에서 설명된다)의 상단에 배치되는 스테인리스 테스트 실 (30 X 20 X 18cm 3)에서 수행된다. 다른 상자가 깨끗하고, 무향의 침대를 포함하는 동안 하나의 훈련 상자가 박하 향기 침구가 포함되어 있습니다. 테스트 챔버의 바닥은 플라스틱 메쉬 분리형 시트 (도 2b)에 의해 커버되는 금속 격자이다. <ol><li> 한 박하와 제 3 당 한 무향 침구를 준비하고, 2cm 간격 테스트 챔버의 양측에서 각 상자를 배치합니다. 테스트 챔버의 금속 격자 층에있는 플라스틱 메시를 놓습니다. </li><li> 댐에서 강아지를 제거하고 콧 구멍에 무취 실리콘 그리스의 회사 명인를 배치그는 훈련 기간 동안 폐색된다. 재 적용 필요에 따라 제 1 검사 절차 내내 그리스. 참고 : 교육 및 테스트하는 동안 임의 콧 구멍 폐쇄는 편견을 피하기 위해 고려 될 수있다. </li><li> 테스트 챔버의 중립 영역에 강아지를 놓습니다. </li><li> 강아지가 챔버의 양측 지출 한 시간을 기록, 강아지가 1 분 동안 챔버를 탐험 할 수 있도록 허용 (예 : 박하 또는 중립적 향기 침구 이상). </li><li> 강아지가 덮여 플라스틱 보유 챔버에서 1 분 동안 휴식을 허용합니다. </li><li> 반복은 10 분의 총 5.2 &amp; 5.3 단계 (즉, 5 나머지 실험에 의해 분리 실험 5 실험) 방향 선호도에 대해 제어하기 위해 챔버 내에서 강아지의 초기 방향 전환. </li><li> 즉시 시험 다음, 콧 구멍에서 그리스를 닦아. </li><li> 2 절에 따라 반대 콧 구멍에 폴리에틸렌 noseplug를 삽입하고 동물이 10 분 동안 휴식을 할 수 있습니다. </li><li> 에서와 같이 다시 한번 강아지를 테스트 5.3 -5.6는 플러그를 제거하고 댐에 강아지를 반환합니다. 제거하고 95 % 에탄올로 테스트 챔버의 플라스틱 메쉬를 청소하고 액체가 증발 할 수있다. 다음 강아지를 테스트하기 전에 다시 메시를 놓습니다. 참고 : 테스트 중 첫 번째 콧 구멍 폐쇄에 실리콘 그리스를 적용 출혈과 코의 플러그 삽입과 관련된 스트레스의 가능성을 방지 할 수 있습니다. </li></ol><img alt="그림이" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51808/51808fig2highres.jpg" width="500"> 그림 2 초기 악취 환경 교육 및 테스트. 패러다임을 쓰다듬어 + 냄새를 사용하여 A) 초기 악취 환경 교육. B) 한면에 박하 침구와 함께 두 개의 선택 냄새 환경 테스트, 반대편에 무향 침대를 제어 할 수 있습니다. 2cm 중립 영역은 사이에 배치됩니다. (6) 단일 나리스 폐쇄의 효과를 테스트 NT는 "&gt;이 실험은 하나의 콧 구멍 폐쇄가 후각 시스템의 편측 활성화로 연결 여부를 결정하기 위해 수행된다. <ol><li> 2 절에 설명 된대로 PD 6 또는 7 새끼에 일방적 콧 구멍의 폐색을 수행합니다. </li><li> ~ 5 분의 습관화 후, 해당 플라스틱 용기에 강아지를 배치하고 10 분 동안 조직의 조각에 담가 30 ㎕의 순수 박하유에 노출. </li><li> 즉시 박하 냄새에 노출 된 후, 복강 내 (IP) 클로 랄 전신 마취로 수화물 (400 ㎎ / ㎏), 또는 pentobarbitol (150 ㎎ / ㎏)와 강아지를 주입. </li><li> 완전히 (꼬리 부분 또는 발 핀치에 대한 응답을 보여주는) 마취 후 transcardially 0.1 M 인산 완충 용액, PBS에 용해 파라 포름 알데히드 (4 % 다음에 ~ 1 분 식염수 (0.9 %)의 얼음처럼 차가운 솔루션 강아지, 관류 ). </li><li> 다음 트랜스, 파라 포름 알데히드 관류 10 분 후 뇌를 수집하고 4 ° C에서 하룻밤 파라 포름 알데히드에 배치추가로 24 시간 동안 자당 용액 (PBS에서 20 %)로 뇌를 FER. </li><li> 저온 유지 장치와 30 μm의 두께로 관상 뇌 조각을 잘라. OB와 PC 조각을 수집하고 pCREB 항체 21,25,30 표준 면역 조직 화학 염색 뒤에 젤라틴 코팅 슬라이드에 탑재합니다. </li></ol> 7 단일 나리스 폐쇄의 가역성 테스트 차단 효과는 코 플러그를 제거 다음 24 시간에서 뒤집을 수 있는지 여부를이 실험 테스트합니다. <ol><li> 2 절에 설명 된대로 PD 6 또는 7 새끼에 일방적 콧 구멍의 폐색을 수행합니다. </li><li> (훈련 중에 콧 구멍 폐쇄의 기간에 해당 - 5 분​​의 습관화 + 10 분 교육) 15 분 후, 코 플러그를 제거하고 댐에 강아지를 반환합니다. </li><li> 6.2에 설명 된대로 24 시간 후, 10 분 동안 덮여 플라스틱 용기에 박하 냄새에 강아지를 노출합니다. </li><li> 종파에서 동일한 단계를 수행6.3-6.6를 이온. </li></ol>

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중요한 시간 창 내 쥐 새끼의 편측 냄새 학습과 기억 모델은 첫번째 홀과 동료들에 의해 설립되었습니다. 연구 33,34,36의 시리즈, 그들은 냄새 기본 메모리가 쥐 새끼에서 PD 6에 하나의 콧 구멍으로 냄새 + 우유 짝에 의해 편측 될 수 있음을 보여 주었다. 기본 설정 메모리는 같은 콧 구멍 교육 및 시험 동안 열려있을 때 강력한했지만, 폐쇄 된 콧 구멍이 차단을 해제하고 테스트 때 관찰되지. 더 이상했을 정도로 그러나, 전방 후각 피질 앞쪽에 교련 연결 기능 (32)가 PD (12)에서, 교육을받지 않은 콧 구멍 혼자 전방 교련의 6 병변이 편측 메모리를 복원 PD에서 획득 한 냄새 환경의 발현을 지원할 수 없었다 훈련받지 않은 콧 구멍 (33)에서 액세스 할 수. 이 편측 학습 모델이 성공적으로 패러다임 24,25,31를 쓰다듬어 + 냄새로 복제되었습니다. 냄새 + 하나의 콧 구멍의 OCC와 교육을 쓰다듬어PD에 lusion는 PD에 편측 ...

후각은 성공적으로 탐색하거나 자신의 환경에서 살아남을 수 없을 것이다없이 설치류의 기본 감각 양상이다. 그것은 일을 공급하기 위해 자신의 어머니를 찾기 위해 후각을 사용하여, 첫번째 산후 주 동안 참조되지도들을 수 있습니다 둘 신생아 새끼에 특히 중요합니다. 결과적으로, 신생아 래트 새끼가 간단한 조작으로 실험을 선호하는 냄새 조절 될 수있다. 자극의 다양한 중첩 환경 2,3, 우유, 유아 4-6, 쓰다듬어 촉각 자극 7-을 포함하여 신생아에서 새로운 냄새에 대한 조건 반응 (조건 자극, CS)를 유도하는 무조건 자극 (UCS)로 사용되어왔다 12, 꼬리 핀치 (13), 산모의 타액 13, 가벼운 발 충격 14-18, 두개 내 뇌 자극 19. 본 연구는 잘 설립 초기 냄새 환경 패러다임을 고용하고있어서,이 경우 박하의 냄새,, 난박하 24 시간 후 10,11,20에 대한 선호를 생산하기 위해 촉각 자극과 결합 될 수있다. 이 냄새의 기억은 주로 후각 전구 (OB) 21 ~ 23과 전방 배 모양의 피질 (APC) (24, 25)를 포함하여, 그대로 후각 회로에 따라 달라집니다. 초기 냄새 환경 학습의 실험 연구 심화 및 포유 동물 메모리의 분자 및 생리 학적 토대에 대한 우리의 이해를 넓혔다. 이 포유 동물 모델은 메모리 메커니즘을 연구하는 여러 가지 장점이 있습니다. 먼저, UCS 신호의 소스는 신경 확인되었다. 위에서 언급 한 바와 같이 다양한 자극 차례로 22,27,28 학습 지원 세포 및 생리 학적 효과를 일으키는 원인이되는 OB와 APC에서 여러 아드레날린 수용체를 활성화 궤적 coeruleus 노르 에피네프린 릴리스 26를 자극한다. 둘째, 메모리지지 메커니즘은 잘 정의 된 층류 신경 구조에서 일어난다.신생아 쥐의 후각 회로의 단순 시냅스 가소성과 관련된 복잡한 프로세스를 발견 할 수와 이상적인 프레임 워크와 연구자를 제공합니다. 다른 구조 29 중 OB와 ipsilaterally 측면 후각 기관 (LOT)를 통해 배 모양의 피질 (PC) 차례 프로젝트에서 이러한 승모판 / 술 세포에서 승모판 / 술 세포 상에 후각 상피 프로젝트의 후각 감각 뉴런 (OSN). OSN의 OB (30, 31)에서 시냅스와 LOT는 APC에서 (24, 25)을 시냅스 모두 시냅스 학습 지원 변경 및 메모리에 중요한 서식처로 확인되었습니다. 셋째, 쥐의 초기 시대에, 후각 입력은 쉽게 편측 할 수 있습니다. 각 APC는 한 번이 흰색 물질이 완전히 산후 12 일 (PD12) (32)에 형성되고, 전방 교련을 통해 양국 간 냄새 정보에 액세스 할 수 있습니다. PD 12 전에 냄새 입력은 하나의 콧 구멍 폐쇄 24,25,31,33,34 &lt;을 통해 OB와 APC를 ipisilateral하기 위해 분리 할 수있다/ SUP&gt;. 단일 콧 구멍 폐쇄 오픈 콧 구멍에서 냄새가 기억 형성을 허용하고, 12 (33) PD하기 전에 가려 콧 구멍에서 동일한 메모리를 방지 할 수 있습니다. 냄새의 기억은 모두 OB 및 APC를 포함한 동측 반구에 격리됩니다. 따라서 각 쥐 강아지 학습 및 생리학의 토대에 대한 자신의 제어 할 수 있습니다. 본 연구에서는, 편측 이른 악취 기본 학습 프로토콜이 도입된다. 이 방법은 이에 필요한 동물의 수와 일반적인 편차 모두를 줄일 인트라 동물 24,25,31 제어를 제공하여 악취를 뒷받침 신경망 학습 메카니즘을 연구하기위한 강력한 도구로서 기능한다. 나리스 폐쇄는 그리스 나 코 플러그가 적용되는 최소한의 스트레스 또는 동물의 손상으로 제거 할 수 있다는 점에서 가역적이다. 여기에서, 첫째, 초기 악취 환경 교육 및 테스트의 자세한 절차는 번호와 함께 하나의 콧 구멍 폐쇄를 사용하여 편측 프로토콜을 중심으로 설명되어 있습니다전자 플러그. 그런 다음 결과는 냄새 입력을 분리하고 편측 냄새 메모리를 생산하는 하나의 콧 구멍 폐쇄의 효과를 보여주기 위해 제공됩니다. 마지막으로, 모두가 학습 및 지원 메모리 표현을 생성 후각 시스템의 생리적 변화를 연구하기 위해 편측 학습 모델을 사용의 가능성이 논의된다.

<table><tbody><tr><td>Polythylene 20 tubing</td><td>Intramedic</td><td>427406</td><td>Non-radiopage, Non-toxic</td></tr><tr><td>3-0 Silk 봉합사 실</td><td>Syneture</td><td>Sofsilk</td><td>Non-absorbent</td></tr><tr><td>Silicone grease</td><td>Warner Instrument</td><td>64-0378</td><td>무취</td></tr><tr><td>2% Xylocaine gel</td><td>AstraZeneca</td><td>Prod. No 061</td><td>Lidocaine hydrochloride jelly, 현지 약국에서 구입</td></tr><tr><td>페인트 브러시</td><td>Dynasty</td><td>206R</td><td>유사한 크기/다른 브랜드도 작동합니다</td></tr><tr><td>페퍼민트 추출물</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W284807</td><td>다른 브랜드도 괜찮습니다</td></tr><tr><td>트레이닝 박스</td><td>맞춤형</td><td>N/A</td><td>아크릴 상자(20 x 20 x 5 cm3), 그림 2A 참조. 상자의 매개 변수와 재질은 중요하지 않으며 수정할 수 있습니다. 사용된 재료는 무취여야 하며 냄새를 흡수하지 않아야 합니다</td></tr><tr><td>테스트 챔버</td><td>맞춤형</td><td>N/A</td><td>스테인리스강(30 x 20 x 18cm3), 그림 2B 참조. 챔버의 매개변수와 재료는 중요하지 않으며 수정할 수 있습니다. 예를 들어, 스테인리스강 챔버 대신 아크릴 챔버를 사용할 수 있습니다</td></tr>: <tr><td>pCREB 항체</td><td>Cell Signaling</td><td>9198</td><td>Ser 133 (87G3) Rabbit mAb</td></tr><tr><td>Chloral hydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8383</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Paraformaldehype</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9378</td><td>N/A</td></tr></tbody></table>

신경 회로 토대 메모리 형성을 해부에 대한 신생아 흰쥐의 편측 냄새 학습 모델

A Lateralized Odor Learning Model in Neonatal Rats for Dissecting Neural Circuitry Underpinning Memory Formation

중요한 출생 후 기간(≤ 10일) 동안의 새끼 쥐들은 모성 보살핌을 모방한 자극과 관련된 냄새를 쉽게 선호합니다. 이러한 선호 기억은 훈련 매개변수에 따라 몇 시간에서 며칠, 심지어 평생 동안 지속될 수 있습니다. 조기 냄새 선호 학습은 자연적 형태의 학습에 대한 중요한 변화가 후각 회로에서 발생하는 모델을 제공합니다. 기억 과정 분석을 위한 강력한 도구가 되는 또 다른 기능은 조기 냄새 선호 학습이 임계 기간 내에 단일 나리스 폐색을 통해 측면화될 수 있다는 것입니다. 이것은 이 어린 나이에 후각 반구의 성숙한 전방 연결이 부족하기 때문입니다. 이 작업은 코 플러그를 사용하여 측면화된 냄새 학습을 위한 행동 프로토콜을 간략하게 설명합니다. 급성 가역적 나리스 폐색은 장기간의 폐색 및 소작과 같은 보다 공격적인 방법과 관련된 조직 및 신경 손상을 최소화합니다. 측면화된 냄새 학습 모델은 동물 내 비교를 허용하므로 동물 간 설계에 비해 분산을 크게 줄일 수 있습니다. 이 방법은 훈련에 의해 생성된 후각 시스템의 회로 변화를 조사하는 데 성공적으로 사용되었습니다. 향후 방향에는 이 측방화 학습 모델을 사용하여 냄새 기억의 분자 토대를 탐색하는 것이 포함됩니다. 생리적 변화를 기억력 및 지속 기간과 연관시킵니다.

여기에서 우리는 냄새 입력을 분리하고 하나의 반구 학습에 콧 구멍 폐쇄의 효과 및이 방법의 가역성을 보여주기 위해 이전에 설정된 결과 (24)의 일부를 검토합니다. 초기 냄새 환경 설정 훈련 도중 단일 콧 구멍 폐쇄는 편측 냄새 메모리 (24)에 연결됩니다. 메모리 스페어 나리스 (그림 3)으로 제한됩니다. 강아지가 훈련 도중으로 폐색 같은 콧 구멍으로 냄새 기본 설정에 대해 테스트 할 때, 그들은 에어컨 냄새 (예를 들어, 박하)에 대한 기본 설정을 보여줍니다. 새끼 가려 반대 콧 구멍에서 테스트 할 때, 그들은 에어컨 냄새에 대한 선호를 표시하지 않습니다. 함께, 이러한 결과는 냄새 기본 메모리 만 형성과 연관 조화를 쓰다듬어 + 냄새를 시행 아끼지 콧 구멍을 통해 표현하는 것이 좋습니다. <p class="jove_content" fo:keep-together.within-pag...

이 프로토콜은 급성 단일 나리스 폐색을 사용하여 쥐에서 측면화된 조기 냄새 선호 학습을 소개합니다. 수평적 학습은 동일한 동물 내에서 행동 결과를 조사하고 생물학적 메커니즘을 뒷받침할 수 있도록 하여 동물 간 설계로 인한 분산을 줄입니다. 이 프로토콜은 조기 냄새 학습을 뒷받침하는 분자 메커니즘을 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

Rat pups during a critical postnatal period (&#8804; 10 days) readily form a preference for an odor that is associated with stimuli mimicking maternal ...

이 프로토콜은 급성 단일 폐색을 사용하여 쥐에서 측면화된 조기 냄새 선호 학습을 소개합니다. 이것은 먼저 탈착식 폴리에틸렌 노즈 플러그를 구성하여 수행됩니다. 두 번째 단계는 행동 훈련 전에 원하는 양자리를 가리는 것입니다.다음으로, 향기로운 침구를 준비한 다음 붓으로 쓰다듬으면서 향기가 나는 침구에서 동물을 훈련시킵니다. 마지막 단계는 두 가지 선택 테스트 장치를 사용하여 측면 냄새 선호도를 테스트하는 것입니다. 궁극적으로, 인산화된 C amp 반응 요소 결합 단백질 또는 P 크립의 면역조직화학은 단일 nary 격리 및 방법의 가역성으로 인한 신경 활성의 일방적 침묵을 입증하는 데 사용됩니다.기존 동물 통제 방법 간의 이 기술의 주요 장점은 두 개의 후각 반구가 연결되어 있지 않은 MA 성숙한 전방 커미스 돌출부가 없기 때문에 출생 후 레이어 11 이전의 동물 통제 내 실험 설계의 특성을 통해 변동성과 동물 수를 줄일 수 있다는 것입니다. 이를 통해 단일 영양 폐색을 통해 한 반구를 다른 반구와 독립적으로 조작할 수 있습니다. 폐색된 반구는 동물 내 통제 역할을 합니다.이 기술은 신생아 쥐의 후각 학습에 초점을 맞추고 있지만, 그 의미를 통해 시냅스 가소성, 메타 가소성 및 이를 뒷받침하는 분자 메커니즘과 같은 학습 및 기억 중 신경 과정에 관한 근본적인 질문에 답할 수 있습니다. 이 방법을 사용한 연구에서 도출된 결론은 특히 출생 후 중요한 기간 동안 학습과 기억 및 포유류의 기본 원리로 일반화될 수 있습니다. 이것은 병태생리학적 상태와 관련된 기억 상실에 대한 잠재적인 치료법에 대한 유망한 배경을 구축하는 데 도움이 될 것입니다.이 방법은 냄새 인식 및 냄새 코팅과 같은 다른 후각 관련 공정에도 매우 적합합니다. 코 플러그는 폴리에틸렌 20 튜브와 3개의 제로 실크 봉합사로 구성됩니다. 먼저 폴리에틸렌 22의 작은 조각을 약 0.8cm로 자릅니다.그런 다음 튜브 섹션의 양쪽에 나사산이 있도록 준비된 튜브를 통해 실크 봉합사를 끼웁니다. 플러그 바깥쪽 나사산의 한쪽 끝에 매듭을 묶습니다. 튜브의 부분을 실의 매듭 위로 아래로 당깁니다.매듭은 튜브 내부에 고정되어야 합니다. 튜브의 한쪽 끝에서 약 2mm의 실이 튀어나오도록 나사산의 양쪽 끝을 자릅니다. 이 절차를 시작하려면 댐에서 강아지를 제거하고 일반 침구로 덮인 안전한 접시에 넣으십시오.면 끝 도포구를 사용하여 국소 마취 젤리, 2%Xylocaine을 양

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

Drosophila의 애벌레는 gustatory 보상과 냄새 자극을 연결 할 수 있습니다. 여기 appetitive 연관 후각 학습의 분석을 할 수있는 간단한 행동 패러다임을 설명합니다.

에 Appetitive 연관 강한 학습<em&gt; Drosophila</em&gt; 애벌레

우리는 뉴런 형태와 시간 경과에 따른 발달을 시각화하기 위해 전기천공법과 후속 컨포칼 레이저 스캐닝 또는 다광자 현미경에 의한 후각 감각 뉴런의 생체 내 라벨링 프로토콜을 설명합니다.

모델로 후각 시스템은 축삭 성장 패턴 및 형태를 연구하는 생체

이 프로토콜의 목표는 설치류의 공간 인지를 조사하는 것입니다. double-H water maze는 새로운 테스트로, 학습, 통합 및 기억의 다양한 구성 요소와 기억 시스템의 상호 작용을 설명하는 데 특히 유용합니다.

더블 H 미로 : 설치류의 강력한 행동 학습에 대한 테스트 및 메모리

이 프로토콜은 쥐가 학습 및 기억 작업에 참여하는 동안 개별 뇌 영역의 뉴런 활동을 일시적 및 원격으로 침묵시키는 방법을 설명합니다. 이 접근법은 약물 유전학(Designer-Receptors-Exclusively-Activated-by-Designer-Drugs)과 학습의 다양한 구성 요소를 구별하도록 설계된 행동 패러다임(감각 사전 조건화)을 결합합니다.

학습의 개별 단계에서 설치류에서 원격 음소거 신경 활동하는 방법

여기, 우리는 쥐 냄새 차별 테스트는 연관 학습 작업에 기차. 이 프로토콜은 또한 두뇌에 구조적인 변화를 유도 하는 학습에 대 한 연구에 대 한 수 있습니다.

후 각 학습 및 쥐에 있는 차별의 객관적이 고 재현성 시험

여기에서 우리는 Drosophila 학습 및 기억의 맥락에서 pre-및/또는 후성 칼슘이 구상될 수 있는 프로토콜을 제시합니다. 합성 국소화 된 칼슘 센서를 사용하여 생체 내 칼슘 이미징은 이러한 유형의 연관 학습의 기초가되는 시냅스 가소성이 결정될 수 있도록 고전적인 후각 조절 패러다임과 결합됩니다.

초파리 멜라노가스터에서 학습 유발 시냅스 가소성의 생체 내 광학 칼슘 이미징

우리는 이전에 Caenorhabditis elegans 가 각각 대량 및 간격 훈련을 통해 단기 및 장기 연관 기억을 형성하는 프로토콜을 개발했습니다. 여기에서는 1- 프로판올과 염산을 각각 조건 자극과 무조건 자극으로 짝을 지어 혐오 연관 기억을 형성함으로써 C. elegans 의 컨디셔닝에 대한 자세한 프로토콜을 설명합니다.

Caenorhabditis elegans에서 두 가지 화학 물질을 짝을 지어 혐오스러운 연관 학습 및 기억 형성

여기에서는 초파리 청소년 뇌에서 더듬이엽 시냅스 사구체의 후각 경험 의존적 리모델링을 유도하고 분석하는 방법을 설명합니다.

Experience-Dependent Remodeling of Juvenile Brain Olfactory Sensory Neuron Synaptic Connectivity in an Early-Life Critical Period(어린 뇌 후각 감각 뉴런 시냅스 연결성의 경험 의존적 리모델링)

이 프로토콜은 go/no-go 후각 행동 실험을 위한 후각계의 구성을 설명합니다. olfactometer의 성공적인 구성을 보장하기 위해 이미지와 함께 단계별 지침이 제공됩니다. 프로세스 중에 발생하는 문제를 해결하기 위한 정보도 포함되어 있습니다.

설치류 후각 행동 연구를 위한 후각계 구축

여기 방법 C. 엘레간스 연관 학습과 단기 및 장기 연관 메모리를 테스트하기 위해 설명합니다. 이러한 인구 assays은 휘발성 odorants 향해 chemotax에 웜 기능을 채용하고 chemoattractant butanone과 함께 음식을 페어링에 긍정적인 연관 관계를 형성하고 있습니다. 에어컨 기간의 수를 늘리면 장기 기억을 유도.

C. 엘레간스 긍정적인 Butanone 학습, 단기 및 장기 연관 메모리 Assays

학습하세요 신생아 흰쥐의 편측 냄새 학습 모델을 통해 신경 회로와 메모리 형성 메커니즘을 연구하는 방법을 배우세요. 단측 비강 폐쇄 기법으로 행동 및 생물학적 평가를 동일 개체에서 수행하여 변이성을 최소화합니다.

신경 회로 토대 메모리 형성을 해부에 대한 신생아 흰쥐의 편측 냄새 학습 모델

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