Name: 인간 발달의 세 삼 분기의 상당 기간 동안 알코올에 쥐를 노출하는 데 사용 증기 챔버의 건설 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 27 s
Description: 배우세요 알코올 증기 챔버를 구축하여 임신한 생쥐와 새끼에게 인간 임신 3분기에 해당하는 기간 동안 알코올 노출을 모델링하는 방법을. 이 기술은 태아 알코올 노출의 발달 영향을 연구하는 데 활용됩니다.

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R01-AA015614, R01-AA014973, T32-AA014127 및 K12-GM088021는 건강의 국립 연구소에 의해 부여 지원. 저자는 기술 지원 및 박사 부부를위한 사만다 L. Blomquist 감사합니다. 비판적 원고와 비디오를 평가하는 케빈 콜드웰 도널드 자고.

모든 동물의 절차는 뉴 멕시코 - 건강 과학 센터 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 1. 증기 챔버 어셈블리 <ol><li> (그림 1 및 표 1) 위, 아래, 앞, 뒤, 옆, 도어 용 비디오에서 제공하는 차원에 원형 톱 또는 실톱으로 잘라 폴리 카보네이트 시트. </li><li> 원형 톱 또는 퍼즐로, 전면 패널의 중앙에있는 넓은 십육인치 8 인치 높이 개구부를 잘라. </li><li> 측정 챔버의 문이 될 것입니다 10 인치 폴리 카보네이트 시트에 의해 18 인치에 피아노 경첩 구멍을 표시합니다. </li><li> 문에, 5 / 16 인치 드릴 비트 카운터 싱크 구멍을 드릴, 및 3 / 16 인치 드릴 비트와 나사 구멍을 뚫습니다. 나사 머리의 도어 안쪽의 카운터 싱크 구멍을 드릴 수 있는지 확인하십시오. </li><li> 용접 용 폴리 카보네이트 시트를 준비합니다. </li><li> 이리저리 조립NT, # 16 용접에를 사용하여 하단 패널에 백업하고, 측면 패널. </li><li> # 16 용접에와 패널 사이의 틈새를 밀봉. </li><li> # 16 용접에와 상단 패널을 연결합니다. </li><li> 용접은 치료하는 동안 자리에 모든 것을 잡아 바 클램프 또는 무거운 교과서를 사용합니다. </li><li> 문 경첩의 첨부 파일 열기 아래의 전면 패널의 1 인치에 폴리 카보네이트 (polycarbonate)의 12 인치 조각으로 1 인치를 연결합니다. </li><li> 치료 용접에 적어도 24 시간을 허용합니다. </li><li> 십이인치 길이 1 인치 길이 PEX 배관의 1 개 PEX 배관의 2 개 조각을 잘라. </li><li> 5 / 16 드릴 비트, 일 단부로부터 12 인치 PEX 튜브의 각 약 1-2인치에 구멍을 드릴. </li><li> 멀리 커넥터에서있는 구멍 3 / 8 인치 T-커넥터에 2 × 12 인치 PEX 튜브를 연결합니다. </li><li> 3 / 8 인치 플러그와 PEX 튜브의 개방 단부를 모자. </li><li> 4-40 기계 나사와 너트를 사용하여 전면 패널과 도어에 피아노 경첩을 연결합니다. </li><li> 참조 문을 사용하여, m챔버의 전면 패널의 1 인치 스페이서 상 피아노 힌지 필요한 구멍 방주. </li><li> 3 / 16 인치 드릴 비트, 피아노 경첩에 대한 전면 패널에 구멍을 뚫습니다. </li><li> 4-40 기계 나사와 너트를 사용하여 전면 패널에 문 피아노 경첩을 연결합니다. </li><li> 사이드 아암의 양쪽에 와셔와 너트 비디오 같이 토글 클램프를 조립한다. </li><li> 마크와 드릴 토글 3 / 16 인치의 구멍은 전면 패널 클램프 및 4-40 기계 나사와 너트와 클램프 토글 연결합니다. </li><li> 도어 안쪽에 3 / 8 인치 고무 전구 씰을 추가합니다. </li><li> 5 / 8 인치 천공 드릴 비트와 함께, 유입구위한 상부 패널의 중앙에 구멍을 드릴. </li><li> 출력 포트에 대한 백 패널의 하단 / 중앙에 1 / 2 인치의 구멍을 드릴. </li><li> 출구 포트 구멍 증기 챔버의 상부 벽을 통해 관통 벽 어댑터 3 / 8 인치의 나사부를 추진하여 출력 포트를 조립한다. 에서 너트를 부착장소에서 개최 챔버의 내부. </li><li> 폴리 카보네이트 시트에서 보호 덮개를 제거합니다. </li><li> T-커넥터에 PEX 배관의 1 인치 조각을 부착하고 내부에서 챔버의 상부에있는 구멍을 통해 PEX 튜브를 강제로. </li><li> 외부로부터의 1 인치 PEX 배관의 상단에 3 / 8 인치 (90) 팔꿈치를 연결합니다. 참고 : 문에 1 / 2 인치의 구멍을 뚫고 구멍에 1 / 2 인치 씰 격막을 삽입합니다. </li><li> 공기는 챔버 제어를위한 반복 1-22 단계를 반복합니다. </li></ol> 2. 랙 및 공기 공급 어셈블리 <ol><li> 물질리스트에서 언급 카트 / 선반에 챔버를 배치하면, 제조업체의 지시에 따라 카트를 조립한다. </li><li> 여분의 볼트와 너트로, 공기 조절기를 장착 할 랙에 폴리 카보네이트 (polycarbonate)의 스크랩 조각을 연결합니다. </li><li> 어디서나 폴리 카보네이트 (polycarbonate), 마크 드릴 공기 조절기 3 / 4 인치 구멍의 스크랩 조각과 견과류와 레귤레이터를 부착제공. </li><li> 공기 유동 조절기의 입구 및 출구 포트를 통해 벽 어댑터 3 / 8 인치를 부착. </li><li> 폭기 돌, # 8 스토퍼 라인 커넥터 빠른 릴리스 에탄올 플라스크를 조립합니다. </li><li> 도 1에 도시 된 바와 같이 3 / 8 인치 타이곤 튜브를 사용하여, 에어 펌프 및 에탄올을 플라스크에 유량 조절기를 연결한다. </li><li> 도 1에 도시 된 바와 같이 공기만을 챔버를 들면, 입구 (3) / 8 인치 3 / 8 인치 타이곤 튜브와 엘보우 (90)에 공기 조절기의 출력 포트를 연결. </li></ol><img alt="그림 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51839/51839fig1highres.jpg" width="500"> 증기 챔버의 구성도 1. 도식 표현. T-커넥터는 저잡음 공기 펌프에 부착된다. T-커넥터의 한쪽은 직접 공기 ​​만 증기 챔버에 대한 공기 흐름 레귤레이터에 접속된다. 기타의IDE를 다시 분할 및 2 개의 다른 공기 조절기, 공기 하나는 에탄올 하나에 연결되어 있습니다. 도시 한 바와 같이 기실 직접 레귤레이터에 접속된다. 에탄올 증기 챔버를 들어, 하나의 기류 레귤레이터 필터 플라스크에서 액체 에탄올에 침지 폭기 돌에 접속된다. 표시된 바와 같이 필터 플라스크의 측면 팔 포트는 공기 조절기의 출력과 연결된다. 병합 에탄올 증기 및 공기이어서 에탄올 증기 챔버의 입구에 연결된다. (도시하지 않음) 출구 관은 방에있는 공기 배출구에 연결되어 있습니다. 3. 테스트 증기 챔버와 에탄올의 레벨을 조정 <ol><li> 필터 플라스크에 190 증거 에탄올 600 mL를 넣고 폭기 돌을 삽입하고 플라스크의 측면 팔에 튜브 입구까지 연결. </li><li> 닫기 실 문 및 공기 펌프의 전원을 켭니다. </li><li> 약 절반 정도 공기가 혼합 된 공기와 같은 액체 알코올을 통해 흐르도록 공기 조절기를 조절합니다. Adjus에탄올 챔버의 주류와 공기의 조합 플로우에 공기보기에만 기류를 t. </li><li> 챔버 공기 에탄올 농도를 측정하기 전에 적어도 30 분 동안 평형을 허용합니다. </li><li> 격막을 통해 18G 바늘과 60 ML의 주사기로 공기를 5 ㎖를 추출하여 공기의 에탄올 농도를 측정한다. 다시 60 ㎖ (1시 12분 희석)에 플런저를 그림으로써 실내 공기에 그 샘플을 희석. 제조업체의 지시에 따라 음주 측정기를 사용하여 공기 에탄올 레벨을 측정한다. 챔버 공기의 희석은 측정기의 감지 범위 내에 알코올 증기 수준을 달성하기 위해 필요하다. 참고 : 알코올 노출의 다른 수준을 사용하는 경우 희석 조정해야 할 수 있습니다. </li><li> 약 4.5-5 g / DL (공기의 DL 당 기화 알콜 g)의 공기 알코올 농도를 달성하기 위해 필요에 따라 출발점으로, 공기 조절기를 조절한다. </li></ol> 4. 동물 사육 <ol><li> 그룹 하우스 여성은 난소주기를 동기화하는 데 최소 1 주일 / 6 마​​우스 (2 ~ 3 개월)을 C578BL. </li><li> 개별적으로 최소 2 주 동안 남성 C57BL / 6 마​​우스 (2-5 개월)을 수용. </li><li> 동기화 한 후, 짝짓기 수 있도록 5 일 동안 한 남성과 한 여성을 넣어. </li><li> 짝짓기 후, 남성을 제거하고 개별적으로 집 여성과 챔버에 배치합니다. </li></ol> 5. 전 및 출생 후 에탄올 증기 노출 <ol><li> 강아지의 죽음을 방지하기 위해 탄생 한 날을 제외하고 빛을주기 동안 오전 10시에 시작하여 1 일 4 시간 (오전 6시에서 오후 6시까지부터 점등) 에탄올 증기에 임신 댐 노출. </li><li> 임신을 모니터링하기 위해 임신의 날 (G) 5, G13-G14 및 G18-G20에 댐의 무게; 침구는 여성이 취급을 최소화하기 위해 칭량 (일)에 변경되었습니다. </li><li> 매일 그들에 흡수하는 에탄올로 펠렛의 소비를 방지하기 위해 에탄올 노출 그룹에 대한 음식을 교체합니다. </li><li> 의 날탄생은 동물에 노출하지 마십시오. 출산 후 P1-P12에서 오전 10시에 시작하여 하루에 4 시간의 댐과 새끼를 노출합니다. </li><li> P2, P8, P12 및 P25에 새끼의 무게; 추가 처리를 최소화하기 위해 P8 및 P12에 침구를 변경합니다. </li><li> 즉시 마지막 노출 (P12) 한 후, 표준 동물 주택 방에 새장을 전송합니다. </li></ol>

저자가 공개하는 게 없다.

여기, 우리는 세부 사항에서 증기 흡입 챔버의 건설을위한 방법을 설명합니다. 챔버를 구축하는 데 필요한 자재와 공구는 상업 공급 업체의 숫자에서 쉽게 사용할 수 있으며, 챔버의 건설을위한 단계는 비교적 간단하다. 우리가 여기에서 설명하는 시스템은 역류 및 혼합을 방지하기 위해 모든 인라인 체크 밸브가 포함되어 있지 않습니다. 우리는 공중에 우리가 공기 만 실에 어떤 혼합 또는 에탄올의 역류가없는 것을 제안 만 실을 모든 검지 에탄올을 측정 할 수 없습니다. 단 챔버가 주기적 에탄올 증기에 대해 검사되어야한다 공기는 (그것이 기실 항상 측정기 및 / 또는 주사기에 존재하는 잔류 에탄올 증기의 검출을 피하기 위하여 종래 에탄올 챔버 테스트해야 주목해야한다). 이상적으로, 챔버는 마우스 케이지 연속적 E의 기간 동안 보관 될 수있는 동물 관리 시설에서 전용 실에 배치해야생쥐를 운반 할 필요없이 xposure 패러다임, 이에 스트레스를 감소시킨다. 공기 배출구에있는 스탠다드 룸이 패러다임에 필요한 모든 것입니다. 룸은 다른 연구자들과...

임신 중 음주는 크게 영향을받는 개인과 그 가족의 삶의 질을 감소 많은 기관과 시스템의 지속적인 변화를 일으키는 원인이 태아에 나쁜 영향을 줄 수 있습니다. 그것은 여성의 약 30 %가 파티 패턴 1,2 1-8 % 년 음주와 함께, 미국에서 임신 중에 마시는 것으로 추정된다. 태아 발달 동안 에탄올 노출에 의해 생산 효과의 범위는 공동으로 태아 알코올 스펙트럼 장애 (FASDs)로 알려져있다. 최근 추정 FASDs 미국 3 2-5 %의 높은 유병률과 주요 공중 보건 문제가 있다는 것을 나타냅니다. FASDs의 가장 심각한 증상은 성장 지연, 두개 안면 기형, 학습 장애 등의 신경 행동 학적 결손 특징으로 태아 알코올 증후군 (FAS)입니다. FAS의 유행은 미국 3에서 0.2 ~ 0.7 %로 추정하고있다. FASDs의 현재 치료는 부분적으로 만 효과가 있습니다보다 효과적인 치료법의 개발은 질환의 복잡한 스펙트럼의 세포 및 분자 토대의 이해 부족에 의해 제한됩니다. 국립 출생 결함 예방 연구 (NBDPS)의 데이터는 임신이 임신 2 이후 단계에서 감지 절제 다음되기 전에 임신 한 여성은 가장 일반적으로, 1 일의 임신 기간 중에는 술을 나타냅니다. NBDPS은 회임 기간 동안 에탄올 소비의 두 번째 가장 일반적인 패턴은 임신 2의 모든 삼보 격에 걸쳐 술을 포함 것으로 나타났습니다. 그 이유는 태아 에탄올 노출 (도 낮은 복용시), 태아 치료에 대한 제한된 액세스, 신경 정신 질환에 대한 긍정적 인 역사, 그리고 남용 또는 에탄올 4에 대한 의존도의 잠재적으로 해로운 영향에 대한 인식의 부족이 (가) 있습니다. 흥미롭게도, NBDPS 소비의 세 번째 가장 일반적인 패턴은 1시 절제를 포함보고 <sup&gt; 성 및 종종 기관 형성이 대부분 완료되어 있기 때문에 마시는 안전하다고 가정 3 차 학기 동안 소비 한 다음 2 차 삼보 격. 이 신경 회로는 깊은 정제 2를 받아야 기간이기 때문에, 3 차 학기는 에탄올에 의한 신경 손상에 높은 감수성의 기간입니다. NBDPS 또한 1 차 및 3 차 임신 2시 절제 한 다음 2 차 삼보 격에 걸쳐 소비를 포함하여 임신 중에 발생하는 알코올 소비의 다른, 덜 자주 패턴을 확인했다. 임산부에서 관찰 에탄올 소비량 다른 패턴을 모델링하기위한 시도에서 개발 에탄올 노광 패러다임 수가 가장 일반적인 5,6 되 래트 및 마우스 함께, 다양한 동물 종을 사용하여 구축되었다. 이 동물의 임신 기간 일반적으로 라스약 2 주, 1 일 및 임신 여성의 2 차 삼보 격에 해당하는 ts를. 많은 설치류 연구는이 기간 동안 다양한 투여 량 및 에탄올 노광 패턴의 영향을 평가 하였다. 자주 임신 한 마우스에 에탄올을 관리하는 데 사용되는 방법과 쥐의 예는 액체 다이어트 7,8, 식수 9,10에 에탄올을 첨가, 사카린 연유 솔루션의 자발적인 음주 11, 위 위관 (12), 증기 흡입 (13)를 통해 관리를 포함 , 피하 또는 복강 내 주사 14. 이러한 연구의 결과는 임신의 초기 단계 (6,15에서 검토) 뇌를 통해 신경 회로를 손상시키기에 충분한이 노출되어 보여 FASDs와 인간에서 관찰 된 적자의 여러 가지를 효과적으로 요약했다. 설치류 실험도 입증이 3 번째에 해당하는 기간 동안 노출 </sup&gt; 약 쥐와 생쥐에서 출생 인생의 첫 1~2주에 해당하는 사람의 임신의 임신은 크게 뇌 발달을 저해 할 수 있습니다. 이 기간 동안 노출 신생아 쥐 또는 마우스에 에탄올을 투여하여 모델링되었다. 에탄올은 인위적으로 사육 한 동물 16-18, 위내 삽관 19, 피하 주사 (20)에 위루를 통해 먹이 등의 다양한 방법, 증기 흡입 (21, 22)를 사용하여 이러한 동물에 투여되었다. 이러한 연구는 설득력 두뇌 성장기 에탄올 (6)의 개발 효과가 높은 취약점의 기간임을 증명하고있다. 전술 한 바와 같이, 임신의 모든 학기 제로 중에 마시는 여성이 에탄올 소비의 일반적인 패턴이다. 그러나, 비교적 소수의 연구는 동물 모델을 이용하여 노광이 패턴의 영향을 평가 하였다. 이러한 연구 중 일부는 advantag를 촬영했다3 차 - 삼 당량 래트 및 마우스의 경우에서와 같이 자궁보다는 신생아시기에 발생하는 큰 동물의 전자. 이 동물 모델은 인간이 아닌 영장류 (23, 24)와 양을 25 ~ 27 있습니다. 그러나, 이러한 동물 모델은 광범위하기 때문에 높은 비용과 전문 의료 시설에 대한 필요성을 부분적으로 FASDs 연구에 사용되지 않았다. 설치류는 더 일반적으로 태아의 발달 5에 모든 임신 에탄올 노출의 효과를 특성화하는 데 사용되었습니다. 기니 돼지는 인간 (28, 29)의 그것과 뇌의 성숙에서의 광범위한 태아 발달과 유사점을 적용하는 경우이 점에서 특히 유리했습니다. 기니아 피그, 그것은 인간 3 차 임신의 등가 개발 기간을 포함 자궁 에탄올 노출의 효과를 특징 짓는 것이 있었다. 이러한 동물의 비교적 높은 비용뿐만 아니라, 임신의 비교적 긴 기간(~ 육십칠일), FASDs 연구 작업을 몇 실험실에 사용을 제한하고있다. 때문에 생물 의학 연구에서의 비용 효율성 및 넓은 사용으로, 연구진은 임신의 모든 삼보 격시 에탄올에 노출을 모델로 쥐를 사용했습니다. 초기 연구에서, 쥐가 0.08 g / DL의 댐에 최대 혈중 에탄올 농도 (BEC)의 결과 위루 인위적으로 사육하는 신생아 (생후 일 (P) 1-10)을 통해 에탄올을 투여 한 다음 액체 다이어트를 통해 임신 중 노출 된 그리고 새끼 0.16 g / DL에. 이 패러다임은 시신경 수초에서 오래 지속되는 변화의 원인과 소뇌 30-32에서 Bergmann은 글리 섬유의 수를 감소시켰다. 3 차 임신 상당 (P4-10) 33, 34의 부분에서 신생아 관리 다음 위내 삽관을 통해 파티와 같은 방식으로 임신 한 쥐의 댐에 에탄올을 투여 인공 사육 조건을 사용하여 유사하게, 마이어와 공동. 피EAK 임산부와 강아지를 BECs는 임신 20 일째와 P6 모두에서 0.3 g / DL했다. 이 모든 임신 노출 패러다임은 임신 33 선택한 기간 동안 노출 된 새끼에서 관찰 된 것보다 훨씬 더 컸다 성장 지연의 결과. 또한, 모든 학기 제로에 상당하는 동안 에탄올에 노출 된 래트 소뇌 조롱박 유용한 기간 (34) 동안 노출 된 동물에서 관찰 된 것보다 큰 과립 세포의 수의 감소를 나타냈다. 해마 세포 수의 감소는이 패러다임으로보고 있지만, 이러한 효과는 35 임신 - 상응하는 제 3 회 동안 주로 노출의 결과로 표시했다. 임신 한 쥐와 신생아 마우스 모두 위내의 위관을 통해 에탄올 관리를 포함하는 방법은 모든 임신의 노출 (36)를 모델로 사용되어왔다. 댐에서 0.13 g / DL (임신 하루 17) 및 P6 새끼 0.24 g / DL, 유도 경도의를 BECs을 산출이 방법은,모노 아민 신경 전달 물질의 해마와 시상 하부에있는 수준과 해마 37,38에 단백질이 결합 된 DNA의 methyltransferases 메틸 소비재의 발현 증가에 G-지속적인 변경. 비슷한 노출 패러다임 (댐 및 새끼에서 0.2 g / DL에 BEC = 0.14-0.2 g / DL)을 사용하여, 길 - Mohapel 등. 39 성인 쥐의 치아 이랑 (dentate gyrus)의 새로운 미성숙 신경 세포의 수의 증가를 감지하는 성인에서 태어난 뉴런의 성숙 에탄올에 의한 신경 세포의 손상이나 변경에 대한 보상 메커니즘을 나타낼 수있다. 조사는 또한 액체 다이어트를 통해 댐을 노출 또는 임신과 수유 9,40 둘 중에 물을 마시는 모든 임신 에탄올 노출을 모델링하기 위해 시도했습니다. 그것은 일반적으로 낮은 강아지를 BECs (, 41, 42 예를 들어, 0.002-0.05 G / DL)에 발생하기 때문에, 자신의 모유를 통해 새끼를 노출의 유용성이 제한됩니다. 마우스는 또한 extens를 사용되었습니다발달 에탄올 노출의 영향을 특성화 ively. 이 동물 모델의 많은 유전자 변형 마우스 종자 5 사용할 수있는 또 다른 장점으로, 쥐 동물 모델 위에서 설명한 장점 중 많은 주식. 마우스는 성공적으로 1 차, 2 차 또는 임신 43, 44의 3 차 학기 제로시 에탄올의 효과를 특성화하는데 사용되어왔다. 기술적으로 더 어려운 인간의 임신의 모든 삼보 격에 해당하는 기간 동안 쥐를 노출하는 것입니다 때문에,이 동물의 모든 임신 노출의 영향은 잘 특징되지 않았습니다. 예를 들어, 쥐에서 성공적으로 사용 된 인공 사육 및 위 위관은 쥐 45보다 전문적인 과정을 필요로한다. 우리가 아는 한, 지금까지 단 하나의 연구는 마우스를 사용하는 모든 임신 에탄올 노출의 효과를 연구하기 위해 시도했습니다; 이 동물은 물 두리를 마시는 에탄올 용액에 노출 된NG 임신 및 수유 46. 모자를 BECs는 0.07 g / DL 및 강아지를 BECs가 결정하지만, 댐 이들의 일부가 될 것으로 예상되지 않은이었다. 여기, 우리는 알코올 증기 흡입 챔버를 통해 임신 댐 및 신생아 모두에게 투여 마우스의 모든 임신 에탄올 노출에 대한 새로운 모델을 설명합니다. 증기 챔버는 이전의 디자인 (47)에 따라 건설되었다. 우리는 흡입 챔버를 구축하고 노출이 절차를 수행하는 방법에 대한 자세한 지침을 제공합니다. 또한 달성 될 수를 BECs와 강아지의 생존 및 성장에 대한 노출의 영향에 대한 정보를 제공한다.

<table><tbody><tr><td>폴리카보네이트 1/4" 투명 48" x 24"</td><td>McMaster-Carr</td><td>8574K23</td><td>10</td></tr><tr><td>폼 고무 전구 씰 3/8"w x 7/32"h</td><td>McMaster-Carr</td><td>93085K67</td><td>10 ft</td></tr><tr><td>용접용 #16</td><td>McMaster-Carr</td><td>7515A11</td><td>3</td></tr><tr><td>피아노 힌지 12" 길이</td><td>McMaster-Carr</td><td>1658A11</td><td>2 x 1 ft</td></tr><tr><td>홀드다운 토글 클램프 표준</td><td>McMaster-Carr</td><td>5126A26</td><td>8</td></tr><tr><td>PEX 튜빙 1/2"</td><td>McMaster-Carr</td><td>51275K88</td><td>10</td></tr>피트 <tr><td>가시 티 튜브 피팅(검정색) 패키지 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K608</td><td>1</td></tr><tr><td>가시 플러그 피팅(검정색) 패키지 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5462K79</td><td>1</td></tr><tr><td>가시 엘보 튜브 피팅(검정색) 패키지 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K596</td><td>1</td></tr><tr><td>3/8 "벽을 통한 어댑터, 튜브 대 나사산 파이프</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K851</td><td>1</td></tr><tr><td>Phillips 기계 나사 4-40</td><td>McMaster-Carr</td><td>91772A112</td><td>1</td></tr><tr><td>기계 나사 육각 너트 4-40</td><td>McMaster-Carr</td><td>90480A005</td><td>1</td></tr><tr><td>패널 장착 유량계 2-20</td><td>McMaster-Carr</td><td>41945K76</td><td>3</td></tr><tr><td>플라스크, 필터 1,000 ml 6 / 팩</td><td>VWR</td><td>89001-800</td><td>2</td></tr> 개<tr><td>정밀 밀봉 격막</td><td>VWR</td><td>89084-490</td><td>1</td></tr><tr><td>VWR 블랙 고무 스토퍼 #8 1-홀</td><td>VWR</td><td>59581-367</td><td>1</td></tr><tr><td>튜브 TYGON R3603 3/8X9/16 50'VWR</td><td></td> <td>89068-556</td><td>1</td></tr><tr><td>TUBE TYGON R3603 1/4X11/16 50'VWR</td><td></td> <td>89068-502</td><td>1</td></tr><tr><td>에어레이터 스톤 P2120</td><td>VWR</td><td>32573-007</td><td>1</td></tr><tr><td>3/8" T-커넥터 Pk of 20</td><td>VWR</td><td>46600-060</td><td>1</td></tr><tr><td>VWR 디스 커넥터 테이퍼 Pk of 10</td><td>VWR</td><td>46600-110</td><td>1</td></tr><tr><td>3/8 호스 바브 밸브 인라인 커플 링</td><td>콜드 제품 회사</td><td>HFCD17612</td><td>1</td></tr><tr><td>에어 펌프 중간 용량</td><td>LMI 제조업체</td><td>DB60L</td><td>1</td></tr><tr><td>Nexelate 와이어 선반 36 "W X 24"D X 63"H</td><td>글로벌 산업용</td><td>T9A990135</td><td>1</td></tr><tr><td>스템 캐스터 세트 (4) 5" 폴리우레탄 휠</td><td>글로벌 산업용</td><td>T9A500591</td><td>1</td></tr></tbody></table>

인간 발달의 세 삼 분기의 상당 기간 동안 알코올에 쥐를 노출하는 데 사용 증기 챔버의 건설

Construction of Vapor Chambers Used to Expose Mice to Alcohol During the Equivalent of all Three Trimesters of Human Development

개발하는 동안 알코올에 노출 공동으로 태아 알코올 스펙트럼 장애 (FASDs)로 알려진 형태 학적 및 행동 이상의 별자리가 발생할 수 있습니다. 스펙트럼의 가장 심각한 끝에 성장 지연, 두개 안면 dysmorphology 및 신경 행동 결손에 의해 특징 태아 알콜 증후군 (FAS)가있다. 설치류 동물 모델과 연구 FASDs의 병태 생리에 관련된 많은 분자 및 세포 메커니즘을 해명했다. 임신 한 쥐에 에탄올 투여는 임신의 제 1 및 제 2 삼보 격 동안의 인체 노출을 모델링하는 데 사용되었습니다. 인간의 세 번째 임신 에탄올 소비는 신생아 설치류를 사용하여 모델링되었다. 그러나, 몇몇 설치류 연구는 인간 임신, 임산부 일반적인 노광 패턴의 세 학기 제로에 상당 동안 에탄올 노출의 효과를 특징으로 하였다. 여기, 우리는 O를 쉽게에서 증기 챔버를 구축하는 방법을 보여줍니다각각 여섯 표준 마우스 케이지까지 수용 할 수있는 btainable 재료. 우리는 모든 세 학기 제로 중에 최소 처리와, 에탄올에 노출을 모델링하는데 사용될 수있는 증기 챔버 패러다임을 설명한다. 우리의 연구는 임신 댐 에탄올에 중요한 대사 내성을 개발 한 것을 보여줍니다. 그러나, 신생아 마우스는 신진 대사 관용과 태아의 수, 태아 무게, 태반 무게, 강아지 / 고양이 모래의 수, 죽은 강아지 / 고양이 모래의 수를 개발하지 않았고, 강아지 무게는 크게 에탄올 노출에 의해 영향을받지 않았다. 이 패러다임의 중요한 장점은 유전자 조작 쥐의 연구에의 적용이다. 또한,이 패러다임은 동물의 취급, 태아 알코올 연구에 큰 혼동을 최소화한다.

그림 2A는 임신 한 쥐와 신생아의 자손 모두가 챔버에서 상대적으로 안정적인 에탄올 증기 농도에 노출 된 것을 보여줍니다. 이러한 원거리 4-6g / DL 사이.도 2b는 시간의 함수로서 임신 한 생쥐에서 달성를 BECs를 나타낸다. 를 BECs는 표준 알코올 탈수소 기반 분석법 (48)를 사용하여 측정 하였다. G5에서를 BECs 신속 노광 개시 후 ~ 60 mM의 2 시간 상승 및 4 시간의 노출 기간의 끝에 만족. 를 BECs 점차 노출의 끝에 다음과 같은 추가 4 시간 후 ~ 12 mm로 감소했다. G13-14으로, G5에서 검출 수준의 약 60 %를 BECs의 극적인 감소가 발생했습니다. 또,를 BECs 레벨이 더 천천히 증가하고 임신 마우스의 혈중 에탄올 짧은 존재의 결과로, 더 빠르게 감소했다. 단기적 (G18-20)에서를 BECs 더욱 G5에서 검출 수준의 약 30 %로 감소했다. 이러한 연구 결과는 developm와 일치임신 한 쥐...

우리는 동시에 6 마우스 새장을 수용 쉽게 사용할 재료를 사용하여 알코올 증기 챔버의 구조를 보여줍니다. 우리는 더 이상 인간의 임신 3의 삼보 격에 해당하는 태아 알코올 노출의 마우스 모델에서의 사용에 대해 설명합니다. 이 패러다임은 임신과 출생 후의 일 1-12 동안 동물을 노출합니다.

Exposure to alcohol during development can result in a constellation of morphological and behavioral abnormalities that are collectively known as Fetal ...

이 비디오에서는 알코올 증기 챔버를 구성하고 조립하는 방법을 보여줍니다. 우리는 또한 인간 발달의 3 분기 모두에 해당하는 동안 maas를 노출시키는 알코올 흡입 패러다임에 대해 설명 할 것입니다. 챔버는 원하는 혈중 알코올 농도 또는 노출 패러다임에 맞게 고도로 맞춤화할 수 있습니다.당사의 챔버 설계는 최대 6개의 표준 크기 마우스 케이지를 수용할 수 있으며, 마우스는 음식과 물에 대한 지질적 접근이 가능합니다. 이 패러다임은 로솔을 사용하지 않은 임신한 생쥐와 새끼 모두에서 상대적으로 높은 혈중 알코올 농도를 생성합니다. 뉴멕시코 대학의 페르난도 발렌수엘라(Fernando Valenzuela) 실험실에서 들려오는 이야기를 듣습니다.이 비디오에서는 폴리카보네이트 에탄올 증기 챔버의 조립을 시연하고 태아 알코올 노출의 3학기 마우스 모델 모두에서 폴리카보네이트 에탄올 증기 챔버의 사용을 설명합니다. 기본적인 목공 기술만 있으면 누구나 챔버를 만들 수 있으며 치수는 개인의 필요에 맞게 수정할 수 있습니다. 챔버는 노출 기간 동안 동물 시설에 수용될 수 있으며 동물의 운송 및 취급과 관련된 스트레스를 최소화합니다.발달 단계의 차이로 인해, 임신한 설치류에 대한 에탄올 투여는 첫 번째 삼 분기와 두 번째 삼 분기 동안의 인간 노출을 모델링하는 데 사용되는 반면, 신생아에 대한 에탄올 투여는 세 번째 삼 분기 노출을 모델링하는 데 사용됩니다. 이 챔버는 여러 개의 마우스 케이지를 동시에 수용하도록 설계되었으며 임신한 댐과 엄마와 함께 수용된 신생아를 노출시킵니다. 이 알코올 노출 패러다임을 사용하는 장점 중 일부는 발달의 3 분기를 모두 모방할 수 있는 능력, 임신한 댐과 새끼에 대한 스트레스 감소, 에탄올 노출 수준에 대한 통제의 유연성을 포함합니다.1/4 인치 두께의 24 x 48 인치 조각 5 개에 투명한 폴리 카보네이트 시트는 상단, 하단, 앞면, 뒷면, 측면 및 도어에 대한 주어진 치수를 측정하고 표시합니다. 이러한 치수는 너비 32인치, 깊이 22인치, 높이 14인치의 하나의 챔버를 구성합니다. 이 크기의 챔버는 11 인치 반 x 7 인치 반 x 5 인치 높이의 6 개의 표준 마우스 케이지에 적절하게 맞습니다.이것은 단일 챔버만 제공한다는 것을 기억하는 것이 중요하며, 이 프로세스를 반복하여 두 개의 동일한 챔버, 즉 알코올 노출을 위한 챔버와 공기 전용 제어 노출을 위한 챔버를 만들어야 합니다. 폴리카보네이트 시트는 80개의 톱니 날이 장착된 원형 톱 또는 플라스틱 또는 플렉시 유리 전용 날이 장착된 퍼즐로 절단할 수 있습니다. 폴리카보네이트 시트를 측정된 치수로 절단하고 직선 절단이 가능하도록 최대한 주의하십시오.이렇게 하면 모든 조각이 절단된 조립 공정 중에 간격이 줄어듭니다. 전면 패널 중앙에서 8인치 x 16인치 직사각형을 측정하여 도어를 위한 개구부를 만듭니다. 3개의 8인치 드릴 비트를 사용하여 각 모서리 안쪽에 구멍을 뚫습니다.구멍은 폴리카보네이트 시트를 통해 지그 서브 블레이드를 삽입하고 개구부를 잘라내는 데 사용됩니다. 원형 톱을 사용하는 경우 플런지 절단을 수행할 수 있습니다. 모서리 근처의 가장자리를 청소하기 위해 몇 가지 뒷부분을 잘라야 할 수도 있습니다.모든 가장자리가 절단되면 중앙 장식을 제거할 수 있으며 전면 패널에 구멍이 남습니다. 도어 조립을 시작하려면 피아노 경첩을 도어에 부착하는 데 필요한 구멍을 표시하십시오. 표시에 5개의 16인치 드릴 비트 드릴 카운터 싱크 구멍을 사용하여 이 카운터 싱크 구멍은 나사 머리를 수용하며 폴리카보네이트 시트의 중간에만 드릴링해야 합니다.3개의 16인치 드릴 비트를 사용하여 조립하기 전에 카운터 싱크 구멍을 가이드로 사용하여 시트를 통해 구멍을 완성합니다. 조각을 용접할 수 있도록 폴리카보네이트 시트의 보호 덮개를 약 2인치 제거합니다. 조립 공정은 빠르게 진행될 수 있으므로 조각을 함께 용접하기 전에 하단, 후면, 전면 및 측면을 배치하는 것이 도움이 될 수 있습니다.폴리카보네이트를 용접하려면 16개의 솔벤트 시멘트에 빠른 경화 용접을 사용하십시오. 조립을 시작하려면 측면 조각의 하단 가장자리에 넉넉한 용접 비드를 추가하십시오. 즉시 종이 타월로 용접물 방울을 닦아내십시오.도움을 받아 측면을 바닥 부분에 놓습니다. 나머지 벽을 챔버 바닥에 조립하십시오. 주어진 치수의 경우 측면 조각이 전면 패널과 후면 패널 사이에 맞는다는 것을 기억하십시오.벽이 조립되면 Weldon으로 내부에서 조인트 사이의 틈을 채웁니다. 챔버 상단을 부착하려면 각 벽 상단에 웰던을 넉넉하게 추가합니다. 상단 패널을 벽 위에 놓고 가장자리를 정렬합니다.용접이 경화되는 동안 모든 것을 제자리에 고정하기 위해 막대 클램프를 사용하십시오. 또는 경화 과정에서 무거운 교과서를 사용하여 도어가 챔버 외부와 같은 높이에 놓이도록 할 수 있습니다. 1인치 x 12인치 크기의 폴리카보네이트 조각은 개방된 위치에서 1인치 아래에 있는 전면 패널에 용접해야 합니다.힌지는 이 스페이서에 부착되고 도어가 챔버를 밀봉할 수 있도록 합니다. 입구 튜브를 구성하려면 12인치 길이의 1/2인치 폴리에틸렌 튜브 두 개를 자릅니다. 또한 기화된 알코올 또는 에어 드릴을 전달하기 위해 1인치 조각의 1/2인치 폴리에틸렌 튜브를 자릅니다.12인치 폴리에틸렌 튜빙 조각의 각 끝에서 약 1인치 떨어진 5개의 16인치 구멍. 2개의 3/8인치 플러그와 1개의 3/8인치 T 커넥터를 사용하여 공기 공급 시스템을 조립합니다. 폴리에틸렌 튜브에 뚫은 구멍이 T 커넥터에서 가장 멀리 떨어져 있는지 확인하십시오.피아노 경첩을 도어에 부착하고 카운터 싱크 구멍이 위를 향하도록 합니다. 4개의 40 기계 나사와 너트를 사용하여 피아노 경첩을 도어에 부착합니다. 도어를 가이드로 사용하고 3개의 16인치 드릴 비트로 전면 패널의 1인치 스페이서에 있는 피아노 힌지 구멍을 표시합니다.전면 패널에 구멍을 뚫어 4개의 40 기계 나사와 너트로 도어를 부착합니다. 도어와 피아노 경첩을 전면 패널에 부착합니다. 렌치로 조입니다.홀드 다운을 조립합니다. 토글 clamp 그림과 같이. 토글 cl의 구멍을 표시하십시오.amp 도어를 가이드로 사용하여 전면 패널에 있습니다.상단을 따라 두 개의 토글 클램프에 대해 이 작업을 반복하고 3개의 16인치 드릴 비트를 사용하여 도어 양쪽에 하나씩 반복합니다. 토글 cl용 구멍을 뚫습니다.amps. 토글 cl 부착amp4개의 40 기계 나사와 너트가 있습니다.챔버 내부에 있는 너트를 사용하여 밀폐된 챔버를 보장하기 위해 렌치로 조입니다. 도어 가장자리를 따라 8인치 너비의 고무 씰 3개를 잘라 부착합니다. 도어가 닫히면 전구가 도어와 챔버 전면 패널 사이에 기밀 밀봉을 형성합니다.상단 패널의 중앙을 표시하여 5개의 8인치 보링 드릴 비트가 있는 챔버의 입구 포트를 만듭니다. 입구 포트의 구멍을 뚫습니다. 후면 패널의 하단 중앙에 1/2인치 구멍을 뚫어 배출 포트를 만듭니다.3 8 인치 벽면 어댑터를 출구 포트에 삽입하고 챔버 내부에서 부착합니다. 이 단계에서 보호 덮개를 제거할 수 있습니다. 외부에서 상단 패널의 구멍을 통해 공기 공급 시스템을 설치하십시오.3개의 8인치 90도 엘보우 삽입 도어 전면에 1/2인치 구멍을 뚫습니다. 그런 다음 구멍에 1/2인치 밀봉 격막을 삽입합니다. 이것은 에탄올 증기를 측정하는 포트 역할을 합니다.이 시점에서 절단 및 드릴링이 완료되고 챔버를 청소할 수 있습니다. 랙을 조립하고 두 개의 챔버와 에어 펍을 랙에 놓습니다. 기류 시스템을 구성하는 데 도움이 되도록 폴리카보네이트 스크랩 조각을 하단 쉘에 부착하면 기류 조절기를 장착하고 3개의 기류 조절기를 위한 3/4인치 드릴 홀드를 폴리카보네이트 스크랩 조각에 장착하고 드릴링하는 데 사용할 수 있습니다.제공된 너트를 사용하여 공기 흐름 조절기를 폴리카보네이트에 부착합니다. 3개의 8인치 스루 벽면 어댑터를 에탄올 증기 챔버용 조절기의 각 포트에 부착합니다. 하나의 기류 조절기는 액체 알코올을 통해 기포되는 공기의 양을 제어하고 다른 하나는 기화된 알코올과 혼합되는 공기의 양을 제어합니다.마지막은 두 번째 공기 전용 챔버의 공기량을 제어합니다. 그림과 같이 알코올 플라스크를 조립합니다. 3 개의 8 인치 튜브를 사용합니다.다이어그램에 표시된 대로 T 또는 Y 커넥터를 사용하여 라인을 분할하여 공기 공급 시스템을 조립합니다. 단일 펌프는 공기 전용 제어 챔버와 알코올 챔버 모두에 충분한 공기 흐름을 제공합니다. 3개의 8인치 튜브를 배출구 포트에 연결합니다.플라스크에 600mil의 90프루프 에탄올 1개를 추가하고 시스템에 연결합니다. 에탄올 증기의 수준을 테스트하려면 주사기와 바늘을 사용하여 셉틴을 통해 5mil의 공기를 빼냅니다. 바늘을 제거하고 주사기를 최대 60mls까지 당겨 공기 샘플을 1에서 12로 희석합니다.실내 공기로 호흡계를 통해 공기를 천천히 밀어 넣어 에탄올 증기를 측정합니다. 기화된 에탄올의 수치는 각 개별 시스템의 동물 혈중 알코올 농도와 상관관계가 있어야 합니다. 챔버가 동물 시설에 배치되면 챔버를 방의 환기 시스템으로 직접 배출하는 것을 잊지 마십시오.생후 2-3개월 된 암컷 쥐는 최소 1주일 동안 집단 수용된 반면, 2-5개월 된 수컷 쥐는 2주 동안 개별적으로 수용되었습니다. 암컷 쥐는 짝짓기를 위해 5일 동안 개별적으로 수용된 수컷과 짝을 이뤘습니다. 짝짓기 후, 암컷은 수컷에서 분리되어 새로운 우리에 개별적으로 수용되어 증기 챔버 안에 놓였습니다.동물들은 하루에 4시간 동안 에탄올에 노출되었습니다. G 5에서 G 20까지의 광 주기 동안. 임신을 모니터링하기 위해 여성은 주기적으로 체중을 측정했습니다.동물들은 새끼의 죽음을 피하기 위해 태어난 날에 노출되지 않았습니다. 출생 후 첫날, 새끼와 어미는 다시 방으로 들어가 출산 후까지 노출되었습니다. 12일차 새끼는 성장을 모니터링하기 위해 주기적으로 체중을 측정했습니다.증기 흡입 장소를 시작합니다. 개별적으로 수용된 임산부는 알코올과 공기 모두에 담아냅니다. 방이 닫히고 문이 닫힙니다.액체 에탄올 플라스크를 추가하고 시스템에 연결한 다음 펌프를 켭니다. 기류 조절기는 액체 에탄올로 들어가는 공기의 양과 에탄올 증기와 혼합되는 공기의 양을 제어합니다. 에탄올 증기와 공기의 비율은 챔버 내부로의 최종 에탄올 증기 수준을 제어합니다.공기 흐름만 제어하며 에탄올과 공기의 결합된 공기 흐름으로 설정됩니다. 에탄올 증기에 노출된 후 기화된 에탄올을 흡수했을 수 있는 차우를 제거하기 위해 식품을 변경합니다. 알코올 및 공기 전용 챔버의 챔버 도어는 챔버와 공기가 교환 될 수 있도록 금이 가 있습니다.이 비디오에서는 에탄올 증기 챔버를 조립하는 방법을 시연하고 3개월에 해당하는 인간 삼 분기 동안 동물을 노출시키는 마우스 알코올 증기 흡입 패러다임에 대해 설명했습니다. 알코올 증기의 수준은 낮거나 높은 혈중 알코올 농도를 모델링하기 위해 쉽게 조정할 수 있습니다. 이 챔버의 장점 중 하나는 챔버가 주어진 지점에 여러 케이지를 수용할 수 있을 만큼 충분히 크다는 것입니다.이를 통해 동물들은 노출 기간 동안 챔버 내에 머물 수 있습니다. 이것은 동물의 취급 또는 운송으로 인한 스트레스를 최소화합니다. 또한, 이 패러다임은 건설 중 관심 기간 및/또는 노출 수준에 맞게 사용자 정의할 수 있습니다.폴리카보네이트 조각을 용접할 때 밀폐된 챔버를 보장하기 위해 모든 절단이 직선과 정사각형이 되는 것이 중요합니다. 용접부가 빠르게 건조되기 때문에 빠르고 효율적으로 움직이는 것이 중요합니다. 이 비디오를 시청한 후에는 자신만의 증기 흡입실을 구성할 수 있을 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

실험 디자인은 태아의 뇌 임신 중 세포 사멸 및 신경성 펩타이드의 응용 프로그램에서 알코올 노출의 효과를 공부에 여기에 초점을 제안했다. 사육에서 태아 뇌의 컬렉션에 대한 자세한 설명이 설명되어 있습니다. 세포 사멸의 결정을위한 기법도 자세히 설명되어 있습니다.

알코올에 의한 C57BL 임신 중 세포 자멸사 / 6 마​​우스에 대하여, 신경 친 화성 펩타이드, ADNF-9의 효과를 테스트하기위한 실험 방법

여기에 제시된 프로토콜의 목표는 태아기 뇌 발달 과정에서 쥐를 중간 수준의 알코올에 노출시키는 절차를 설명하고 성인기 동안 사회적 행동의 변화를 정량화하는 것입니다.

보통 태아 알코올 노출과 성인 쥐의 사회적 행동의 정량화

추적 eyeblink 클래식 컨디셔닝 (ECC) 평가 하는 데 사용 되었다 hippocampal 종속 연관 학습 했다 성인 쥐에 투여 초기 신생아 두뇌 개발 하는 동안 알코올의 높은 농도 (11.9 %v / v). 일반적으로, ECC 절차는 많은 심리적, 생물 의학 설정을 통해 뇌 기능 장애를 탐지 하기 위한 사운드 진단 도구입니다.

태아 알코올 스펙트럼 장애의 쥐 모델에서 Hippocampal 기능 장애를 평가 하기 위해 추적 Eyeblink 클래식 컨디셔닝의 사용

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여기에 제시된 것은 알코올 사용 장애를 연구하기 위한 마우스의 알코올 의존성에 대한 2BC/CIE 모델에 대한 프로토콜입니다.

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