Tandem High-pressure Freezing and Quick Freeze Substitution of Plant Tissues for Transmission Electron Microscopy

Krzysztof Bobik; John R. Dunlap; Tessa M. Burch-Smith

doi:10.3791/51844

JoVE Journal
Biology

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Tandem High-pressure Freezing and Quick Freeze Substitution of Plant Tissues for Transmission Electron Microscopy

탠덤 고압 냉동 및 투과 전자 현미경을위한 식물 조직의 빠른 동결 교체

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12:52 min

October 13, 2014

DOI: 10.3791/51844-v

Krzysztof Bobik¹, John R. Dunlap², Tessa M. Burch-Smith¹

¹Department of Biochemical, Cellular and Molecular Biology,University of Tennessee, Knoxville, ²Advanced Microscopy and Imaging Facility,University of Tennessee, Knoxville

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

고품질 투과 전자 현미경 이미지를 얻는 것은 특히 물이 채워진 큰 액포와 폭기 공간이 풍부한 식물 세포의 경우 어렵습니다. 직렬 고압 동결 및 급속 동결 대체는 TEM을 위한 식물 샘플의 준비 시간을 크게 단축하는 동시에 탁월한 초구조 보존력을 가진 샘플을 생성합니다.

다음 실험의 전반적인 목표는 투과 전자 현미경에 의한 후속 시각화를 위해 고압, 동결 및 급속 동결 치환으로 식물 세포의 세포 구조를 고정시키는 것입니다. 이는 고압 동결 중에 조직이 최소한으로 손상되도록 동결 방지제로 코딩하여 동결을 위해 조직 샘플을 신중하게 준비함으로써 달성됩니다. 두 번째 단계로, 샘플을 고압에서 빠르게 동결하여 세포 구성 요소를 고정시키고 결정질 얼음의 형성을 제한하여 형태가 손상되지 않은 세포를 만듭니다.

다음으로 세포수를 유기 용매로 대체하고 사산화오스뮴과 같은 정착제를 도입하여 세포 초구조를 연결하고 안정화하기 위해 빠른 자유 치환이 수행됩니다. 투과 전자 현미경을 기반으로 고압 동결 및 급속 동결 대체가 식물 세포 구조와 형태를 효과적으로 보존한다는 결과를 얻었습니다. 기존의 화학적 고정과 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 H-P-F-Q-F-S가 밀리초 단위로 세포 내용물을 고정시켜 인공물 형성을 최소화한다는 것입니다.

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