충격 그리드를 사용하지 않고 쥐과 운동 지구력의 평가 : 강제 운동에 대한 대안

이 절차의 전반적인 목표는 자발적인 운동 지구력을 결정하는 것입니다. 실험실 쥐의 경우, 먼저 쥐가 1-2시간 동안 가정용 케이지의 시술실에 적응하도록 함으로써 이를 수행합니다. 그런 다음 마우스는 트레드밀과 모터 소리에 적응할 수 있습니다.

다음으로, 마우스가 최대 지속 속도로 편안하게 작동할 때까지 트레드밀 속도를 점진적으로 높입니다. 마지막 단계는 마우스가 소진된 시점을 확인하는 것입니다. 궁극적으로, 쥐가 지칠 때까지 달리는 시간은 쇼크 그리드 사용으로 인한 스트레스의 혼란스러운 영향이 없는 운동 지구력의 척도를 보여줍니다.

이 기술의 가장 큰 장점은 운동 지구력과 생쥐를 결정하는 기존 방법을 개선한 것인데, 주로 생쥐가 달리도록 장려하기 위해 샷 그리드를 사용하지 않기 때문에 동물과 실험 모두에 대한 스트레스의 혼란스러운 영향을 줄이기 때문입니다. 실험 그룹을 미리 결정하고 마우스에 대한 운동 절차를 사후 결정합니다. 이 절차를 전담하는 조용한 방의 튼튼한 카트나 테이블에 런닝머신을 놓습니다.

달리기 시험 중에는 트레드밀을 마우스 크기의 레인과 프로토콜에 적합한 경사로 설정합니다. 여기에서 양의 5도 경사는 내리막 달리기 중에 발생하는 편심 운동으로 인한 근육 손상을 방지하기 위해 사용됩니다. 트레드밀 벨 아래에 흡수 패드를 놓아 대변을 잡습니다.

생쥐가 1-2시간 동안 케이지 메이트와 함께 운송된 가정용 케이지의 시술실에 적응할 수 있도록 합니다. 단일 마우스를 선택하고 해당 태그 번호를 기록합니다. 또한 마우스의 무게를 측정하고 무게를 기록하십시오.

모터를 켠 상태에서 마우스를 트레드밀에 놓고 약 5분 동안 적응합니다. 트레드밀 벨트를 작동하지 않고 전원을 켜고 마우스가 기계 소음에 5분 더 적응하도록 합니다. 이 시점에서 러닝머신에서 앉아있는 그룹의 쥐를 제거하고 케이지로 되돌리거나 실험 설계에 따라 운동 후 절차를 수행합니다.

적응 후 벨트를 저속으로 돌립니다. 동물이 플랫폼이 아닌 벨트를 탐색하고 있을 때 혀 눌림쇠로 쥐의 뒷다리를 1-3번 부드럽게 두드리거나 들어 올려 주저하는 동물이 러닝머신에 머물면서 달리도록 격려합니다. 실험실 타이머 시작 마우스가 분당 10미터의 초기 속도로 실행되면 속도를 천천히 높입니다.

마우스가 약 2분마다 분당 1미터씩 벨트 상단에 있을 때 속도를 이전 설정으로 낮추십시오. 마우스가 일정한 속도가 아닌 짧은 버스트로 반복적으로 실행되면 대부분의 마우스는 쉽게 달릴 수 있지만 때때로 짧은 시간 동안 멈춥니다. 혀 눌림기를 사용하여 동물의 뒤쪽을 부드럽게 두드리거나 들어 올려 달리기를 재개하도록 격려합니다.

종종 혀 눌림쇠가 있는 손이 그들을 향해 오는 것을 알아차리는 것만으로도 쥐가 더 많이 뛰게 됩니다. 실행 중 일시적인 중단을 위해 타이머를 중지하지 마십시오. 속도를 조정하고 마우스가 이 속도를 기록하는 것을 관찰하여 각 마우스의 최대 지속 실행 속도를 결정합니다.

일부 마우스는 실행을 완전히 거부합니다. 이러한 마우스는 짧은 버스트로 실행됩니다. 그런 다음 플랫폼에 앉아 있는 그루밍이나 페달을 멈추고 벨트에 앞다리를 사용합니다.

거부하는 쥐의 고전적인 자세는 혀 눌림쇠에 의해 러닝머신으로 다시 밀려나지 않도록 네 발을 모두 동물 아래에 심고 구부리는 자세입니다. 때때로 쥐는 달리고 싶지 않을 때 혀 억압자를 향해 공격적으로 변하거나, 혀를 물거나, 억압자를 물거나, 탈출 방법으로 위로 올라갑니다. 재판 시작 후 처음 5분 이내에 마우스가 실행될지 안 될지 명확해집니다.

분석에서 실행하기를 거부하는 마우스를 제거하고 식별하되 좌식 마우스로 계산하지는 않습니다. 실험 설계에 따라 거부하는 마우스는 다른 날에 다시 테스트할 수 있습니다. 탈진은 세 번 연속으로 멈춰 서거나 부드러운 격려에도 불구하고 달리기를 재개하기를 거부하는 것으로 정의됩니다.

또한 호흡 곤란과 쭉쭉 뻗은 자세와 같은 피로의 신체적 징후. 지친 마우스를 식별하고 타이머를 중지합니다. 모든 속도로 달리는 데 소요된 총 시간을 기록합니다.

실험 설계에 따라 마우스를 케이지로 되돌리거나 혈액 또는 조직 채취와 같은 운동 후 즉시 절차를 수행합니다. 기관 지침에 따라 각 개별 마우스를 테스트한 후 살균 수건으로 벨트를 깨끗이 닦아 이전 마우스의 냄새가 테스트된 다음 마우스의 다음 마우스 테스트의 동작에 영향을 미치지 않도록 합니다. 각 마우스에 대해 새로운 혀 억제기를 사용하십시오.

같은 케이지에 있는 마우스는 시술실에 대한 추가 적응 없이 같은 날 순차적으로 테스트할 수 있습니다. 운동 지구력은 근육 유래 사이토카인 IL 15의 발현이 다른 C 57 블랙 6 마우스의 다양한 균주의 분자 및 대사 프로파일을 정확하게 반영하며, IL 15를 과발현하는 형질전환 마우스는 먹은 대조군에 비해 탈진까지의 실행 시간이 현저히 증가한 반면, IL 15가 없는 마우스는 탈진 야생형 대조군에 도달하기 전에 실행 시간이 현저히 감소한 것을 나타냅니다. 두 개의 다른 출처에서 나온 57 개의 검은 6 마리의 마우스는 크게 다른 런타임을 나타내지 않습니다.

최대 지속 달리기 속도는 IL 15 녹아웃 마우스에서만 달랐습니다. 이 기술의 피할 수 없는 한계는 일부 마우스가 자발적으로 달리기를 거부한다는 것입니다. 달리기를 거부하는 어린 야생형 대조군 쥐의 비율은 약 10%입니다.생후 4개월이 되면 거부 비율이 8개월에 20%로 증가하고 16개월이 되면 60% 이상으로 증가합니다.

그러나 고령 연령 그룹에서의 거부 비율은 IL 15 형질전환 마우스에서 현저히 낮다. 이 절차를 시도하는 동안 침착하고 편안한 상태를 유지하고 마우스의 행동에 주의를 기울이는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 이 비디오를 시청한 후에는 전자 차크라를 사용하지 않고 트레드밀을 사용하여 운동 지구력과 마우스를 결정하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.