Name: 여러 제브라 피쉬에의 약국 (FDA)의 새로운 방법 ( 다니오의 레 리오 (rerio))와 철수의 정량화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 52 s
Description: 학습하세요 제브라피쉬(Danio rerio) 집단 동시 투여법을 이용한 에탄올 금단 행동 정량화 방법입니다. 정확한 투여 일정과 광/암 선호 검사로 신경약리학 연구의 변이성을 줄이고 금단 관련 불안 행동을 분석할 수 있습니다.

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모든 절차 및 행동 시험은 관리 및 실험 동물의 사용을 위해 동물 관리의 가이드 라인에 대한 캐나다 협의회 준수 프로토콜 번호 06-11-12, 아래 MacEwan 대학의 동물 연구 윤리위원회에 의해 승인되었습니다. 1. 정량 주입 탱크, 솔루션 및 관리 일정을 준비 <ol><li> 동물은 동일한 환경에서 시각적 자극에 시간이나 편향 어떤 혼동을 피하기 위해 하루 중 같은 시간 동안 투여되도록 관리 스케줄을 준비한다. </li><li> 그룹 크기의 수를 필요한만큼 동일, 1.5 L, 명확한 폴리 프로필렌 산란 탱크를 얻습니다. 물고기의 2 그룹에 대한 수 탱크 당 8 물고기의 사용 그룹이 과정에서 나중에 하루에 테스트 할 (3 단계 참조). 하나의 저장 탱크 및 그룹 당 하나의 투여 탱크 (그룹의 2 배 총 수)를 사용합니다. <ol><li> 모든 저장 탱크에 400 μm의 산란 삽입을 놓습니다. F병 서식지 물이나 올바른 온도에서 삼투 물을 역으로 탱크 (제브라 피쉬를 들어, 25 ~ 28 ° C) 온도 생선과 일치 일반적으로 수용된다. 주 : 일부 약물과 버퍼 서식지 물의 화학 성분 사이의 바람직하지 않은 화학적 상호 작용이있을 수 있습니다. 이 상황에서, 역방향 약물 투여없이 또는 최소한의 수족관 염 버퍼링 삼투 물뿐만 아니라위한 대조군을 사용한다. </li><li> 탱크 투여하는 동안 외부의 시각적 자극에 대한 조절 물고기를 방지하기 위해 중립적 인 환경에 있는지 확인하십시오. </li></ol></li><li> 약물 솔루션을 준비합니다. 산란 탱크에 서식지 물과 약물의 적절한 양을 섞는다. 물 1497 ㎖로 높은 등급의 에탄올 (95 % 비 - 변성 에탄올) 3 ㎖를 조합하여 0.2 % 에탄올 용액을 준비한다. 물 1479 ml의 에탄올 21 ml에 결합하여 1.4 % 에탄올 용액을 준비합니다. </li></ol> 2. 그물 물고기와 잇한올 관리 절차 <ol><li> 조심스럽게 그물 서식지 탱크에서 물고기와 산란 삽입을 포함하는 적절한 보관 탱크에 전송. 이상적으로, 모두 그물 제거하기 위해 산란 삽입에 물고기를 집. </li><li> 각각의 물 탱크에있는 모든 물고기와 부드럽게 산란이 유지 탱크에서 삽입하고 적절한 약액 탱크 (그림 1A)에 배치 올립니다. <ol><li> 필요에 따라 투약 시간을 기록한다. 여기에 기재된 절차에 대한 에탄올 용액에 30 분을 사용한다. </li><li> 가능한 경우, 단말기는 정확한 투약 시간을 보장하기 위해 동시에 약액에 모든 실험군의 전달에 도움이있다. 이와 달리, 한 번에 하나의 그룹을 전송하고 각각의 그룹의 투여 시간 (도 1a)을 추적. </li></ol></li><li> 필요한 투여주기의 끝에서, 신중 산란 삽입물을 올려서 에탄올 용액으로부터 물고기를 제거약액 부드럽게 다시 보유 탱크로 배치 아웃. </li><li> 물 탱크에 물고기와 다음 예약 된 투약 시간까지 다시 서식지로 배치, 또는 산란이 그물을 제거하기 위해 다시 저장 탱크에 삽입 배치 조심스럽게 그물. </li><li> 동물 하우징 장비, 집 보유 탱크로 사용되는 탱크와 같은 산란 인서트 동물 매개 변수 내에서 이전에, 가능한 한 바와 같이. 이 관리 절차를 수행하는 동안 모두 그물 제거됩니다. </li></ol> 3. 행동 테스트 <ol><li> 길이 55cm 흰색 방수 바닥 (그림 1B)와 깊이 9.5 cm에서 9.5 cm 폭 빛 / 어둠 무대를 얻습니다. 경기장 흰색에 덮여와 반 검은 색으로 덮여의 절반, 벨크로를 사용하여 경기장의 내부 벽에 흰색과 검은 색 방수 비 반사 종이를 부착합니다. 25 ~ 28 ° C의 온도에서 서식지 물 5cm의 깊이로 무대를 채 웁니다. MAINT테스트를 통해 온도를 줄 알아. </li><li> 경기장에 위치해 위해 흰색 3면 인클로저를 구성하여 외부의 시각적 자극을 Minimalize. 시험 영역은 물 표면에 반사가 발생하지 않습니다 오버 헤드 조명을 확산이 아직 충분히 이동 추적 소프트웨어, 또는 게시물에 대한 밝은 확인 비디오 이미지에서 -hoc 설명서를 정량화. </li><li> 인클로저에 경기장을 배치하고 동작 추적 소프트웨어의 기록 및 운동 분석 매개 변수를 설정합니다. 연구 문제에 따라 5 ~ 15 분으로 시험 시간을 설정합니다. 참고 : 여기에, 우리는 5 분을 사용했다. </li><li> 물고기의 그룹이 서식지 탱크의 연구 영역으로 테스트 할 전송 및 경기장 인클로저의 외부에 배치합니다. 10 분 동안 물고기를 적응. </li><li> / 암 분야의 중심에 적절한 그룹과 장소에서 부드럽게 그물 물고기가 AVO하는 경기장의 장축에 평행하게 위치 할 때 어류를 해제해야 되밝거나 어두운 영역에 물고기를 바이어스 ID입니다. </li><li> 동물이 출시 직후 기록 동작을 시작합니다. 물고기를 추적하거나 점프 물고기 또는 동결에 대한 소프트웨어 문제에 대한 조심. 대상자의 절반 인해 경기장의 끝이 인클로저의 오픈 엔드를 지향하는로 인한 편견에 어떤 혼동을 방지하기 위해 테스트 한 후 무대를 180도 회전합니다. </li><li> 재판은, 부드럽게 그물 종료 및 저장 탱크 또는 서식지 탱크 경기장에서 물고기를 제거 후. </li></ol> 4. 분석 <ol><li> 어두운 영역에 비해 빛에 소요되는 시간을 검사합니다. 각 그룹 및 각 물고기의 경우, 빛과 어두운 영역에서 소비 된 상대 시간을 획득하고 하나의 샘플 T는 - 테스트를 사용하여 분석 (또는 윌 콕슨은 비모수 데이터 signed rank test를, 차이를 총 시험 시간 (하프) 150 초에서) 그룹이 크게 다른 이상 한 지역을 선호하는 경우 확인합니다. </li><li> prefe을 계산, 환경 설정을 비교하려면어두운 영역에서 소요 된 시간에서 광 영역에서 소요과 그룹 간의 차이를 비교하는 시간을 감산함으로써, 보험료 인덱스. T- 테스트는 두 그룹을 비교하는데 사용될 수있다. Tukey의 HSD 포스트 특별 시험을 활용하여 분산의 한 방법으로 분석을 여러 그룹을 비교하여 필요한 경우 (던의 다중 비교 비모수 데이터에 대한 사후 테스트 또는 크루스 칼 - 월리스 테스트). </li><li> 그룹간에 속도, 사행 영역 전환, 수, 부동 비교. Tukey의 HSD 포스트 혹 시험을 이용 일원 변량 분석을 사용하여 필요한 경우 (던의 다중 비교 비모수 데이터에 대한 사후 시험 또는 크루스 칼 - 월리스 시험). </li></ol>

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</ol>

저자는 그림 1에 사용되는 그의 사진 장비의 사용 여호수아 갤럽을 인정합니다.이 작품은 (TJH에) 자연 과학 및 공학 연구위원회 (NSERC) 캐나다 디스커버리 보조금에 의해 지원되었다.

제브라 피쉬에서 약물 투여와 관련된 이전의 연구는 단순히 약물 솔루션 (12, 16)에 자신의 집 탱크에서 그들을 수송하는 물고기를 그물에 의존했다. 그물은 항상 일치하지 않습니다 종종 인해 상당한 약간의 차이가있는 제브라 피쉬의 탈출 응답하는 데 예상보다 시간이 오래 걸립니다. 기존의 전송 방법은, 유용하지만, 물고기가 물 이외의 총 소요 시간의 양을 감소뿐만 아니라 동물 간의 전송 시간에 변동의 양을 감소시킴으로써으로 향상 될 수있다. 실용성을 향상시킬뿐 아니라,이 방법은 연구자에게 동시에 시간의 정확한 양 용액 물고기의 큰 그룹을 투약 할 수있는 능력을 준다. 이전 방법 중 하나는 하나의 물고기를 투여, 또는 동시에 물고기의 그룹을 전체 그물을 시도해야합니다. 후자는 어색하고 어려운 작업 인 반면 전자는 느리고 처리량을 감소시킨다. 또한, 모션 추적 시스템이 C이 방법의 정밀도 혜택을 누릴 수 있습니다 한 번에 여러 물고기의 행동을 평가. 물고기는 모든 물고기 경기장에 동시에 노출 근처에 확인 할 천수...

제브라 피쉬 (다니오 레 리오 (rerio)는) 행동 1 및 의료 연구 2,3를위한 유용한 모델 생물 인도에서 발생하는 작은 경골 종입니다. 제브라 피쉬는 또한 일반적으로 거동에 미치는 영향을 특성화하기 위해 다양한 약리 물질의 시험에 사용된다. 다양한 투여 량 및 약물 투여 스케줄 같은 자극제 4, 5 및 항불안제 에탄올 6-8과 같은 화합물의 투여 후 지브라 피쉬의 거동을 조사하기 위해 사용되어왔다. 우리 연구소는 또한 일반적으로 scototaxic 분석이라 잘 검증 빛 / 어둠 분석 9, 20,에 제브라 피쉬의 불안과 운동에 에탄올 관리의 일정을 다른의 효과를 조사했다. 에탄올 투여 새로운 방법은 장기간 (이십일일) 6 위에 반복적 인 매일 투여 효율성을 높이기 위해 개발되었다 </s&gt;까지. 이전에 사용 된 방법은 그러나, 우리는 관련 시간 비용, 그물 감소 방법을 개발하고자, 물고기 많은 관심 약물의 동시 투여를 정확하게 타이밍 허용 실용적이었다. 기존의 연구를 사용하여 에탄올, 제브라 피쉬는 그물로하고 에탄올과 물을 10 ~ 12의 적절한 혼합물을 포함하는 다른 하나의 탱크에서 전송. 이 방법은 널리 알려진 방법이지만, 제브라 피쉬 그물 것은 도입 약액으로부터 물고기를 제거하는 데 걸리는 시간에 변동을 증가시킬 수있다. 따라서 관심의 화합물에 대한 정확한 노출을 반복 투여를 포함하는 실험의 과정을 통해 달라질 수 있습니다. 전송 시대에 변화에 따른 오류의 원인을 감소시키는 방법은, 따라서 바람직하다. 우리의 방법으로 우리는 각각의 물고기 동일 투여 시간의 결과로, 동시에 모든 물고기를 이동 할 수 있습니다. (여기에 설명 된)을 에탄올 노출 후, 제브라 피쉬 어떤 접점에서 시험 될 수있다불안을 평가하는 것을 포함하여 행동 분석의 R. 새로운 방법을 사용하여 물고기의 그룹을 투여하는 것은 정확하게 복제 및 물고기의 그룹 주제 사이에 걸쳐 투여를 표준화 할 수있는 기능을 넘어 실제적인 용도를 가지고있다. 연구자들은 실험에서 반복 가능성과 정확성을 보장하기 위해 우리의 방법을 이용하여 볼 수 있습니다 한 번에 여러 물고기의 추적을 허용 새로운 소프트웨어의 등장. 생물 심리학위한 모델 생물로서 지브라 피쉬의 광범위한 사용을 고려하면,이 방법은 향후 약리 시험에서의 효율과 실용성을 증가시킬 것이다. 본 패러다임에서, 반복 투여 일정은 대략 인간 마시는 일정을 반영 것을 사용 하였다. 제어, 매일 중등도, 또는 매주-파티 : 생선은 무작위로 1 ~ 3의 그룹에 할당되었다. 투약 일정은 크게 기존의 연구 7 노출 시간을 초과했기 때문에 선택, 기간 21 일이었다. 제어 물고기는 제로 ALCO을 받았습니다HOL, 매일 적당한 물고기는 하루에 한 번 0.2 %의 알코올을 받고, 주간 - 파티 물고기는 일주일에 1.4 %의 알코올을 한 번 받았다. 빛 / 어둠 작업은 철수 2 일 후에 불안을 평가하기 위해 사용되었다. 이것은 한쪽 벽이 백색과 다른쪽에 9 어둡게되는 직사각형 경기장을 사용하는 관리하는 비교적 간단한 테스트이다. 성인 제브라 피쉬는 견고하게 제어 조건 6,9,13에서 경기장의 어두운면을 선호한다. 증가 불안은 작동에 어두운 영역에서 보낸 훨씬 더 많은 시간으로 정의하고, 물고기가 빛 영역에서 소비 상대적으로 더 많은 시간을 소비 할 때 불안을 가정 할 수 감소. 모션 추적 소프트웨어를 다른 정보 변수는 평균 속도, 부동, 사행 포함, 정량화 및 영역 (14)을 전환 할 수 있습니다. 우리 실험실에서 개발 된 투여 방법은 수용성 화합물은 하나 이상의 zebrafi에게 투여되는 임의의 연구에 적용 할 수있다SH. 이 방법론 혜택을 누릴 수있는 많은 다른 약리 에이전트는 현재 제브라 피쉬에서 테스트되고있다. 일반적으로 시험 화합물을 에탄올과 유사한 방식에 용해 니코틴 chlordiazepoxide, 부스 피론 및 스코 폴라 민을 포함한다; 물에 화학 물질의 적절한 양을 혼합함으로써. 따라서,이 절차의 일반적인 범위는 훨씬 더 넓은 및 에탄올에 제한되지 않는다. 또한, 여러 일에 대한 약물 투여 후, 빛 / 어둠 작업이 이용 될 수있는 많은 행동 검사 중 하나입니다. 약물 투여 후 또는 철회 동안 이용 될 수있는 다른 인기있는 분석은 새로운 탱크 다이빙 테스트 (15) 및 (16) 천수와 같은 사회적 행동의 테스트를 포함한다. 다음 절차를 반복 관심 약리 화합물을 함유 한 용액에 물고기 또는 물고기 개별 그룹을 전송하는 효율적인 방법을 개설 할 것이다. 또한, 빛 / 어둠 테스트와 시험 불안의 과정알코올 투여 긴 스케줄에 노출 된 후 철수에 물고기의 그룹으로 설명한다.

<table><tbody><tr><td>3단 선반 벤치탑 하우징 시스템</td><td><a href="http://aquatichabitats.com/research-systems/z-hab-system/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Aquatic Habitats</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>400 &amp;mu;m 배플이 포함된 1.5 L 산란 탱크</td><td><a href="http://aquatichabitats.com/consumables/tanks-lids-and-baffles/info/nursery-tank-and-baffles/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Aquatic Habitats</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>순수 곡물 에탄올</td><td><a href="http://www.luxco.com/brands/vodka-neutral-spirits-neutral-spirits-everclear" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Luxco, INC</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ethovision XT 동작 추적 소프트웨어</td><td><a href="http://www.noldus.com/animal-behavior-research/products/ethovision-xt" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Noldus Information Technology</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>피펫</td><td><a href="http://eshop.eppendorf.ca/categories/1" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Eppendorf Canada</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>명암 인식 장치(Light/Dark Arena)</td><td>Custom</td><td></td><td>절차 설명서에 따라 제작. 너비 9.5 cm, 깊이 9.5 cm, 길이 55 cm.</td></tr></tbody></table>

여러 제브라 피쉬에의 약국 (fda)의 새로운 방법 ( 다니오의 레 리오 (rerio))와 철수의 정량화

A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish (Danio rerio) and the Quantification of Withdrawal

제브라피쉬의 불안 테스트는 종종 약리학적 물질의 적용과 함께 연구됩니다. 이 연구에서 물고기는 일상적으로 그물에 걸려 가정용 수족관과 투여 탱크 사이에서 운송됩니다. 화합물 투여의 용이성을 향상시키기 위해, 약물 투여를 위해 탱크 간에 물고기를 옮기는 새로운 방법이 개발되었습니다. 산란을 위해 설계된 삽입물을 사용하여 물고기 그룹을 약물 용액으로 옮겨 그룹 내의 모든 물고기를 정확하게 투여할 수 있었습니다. 이는 투여의 정밀도와 효율성을 증가시켜 반복적인 약물 투여의 긴 일정에서 매우 중요합니다. 우리는 21일 일정이 다른 에탄올을 투여한 후 밝은/어두운 테스트에서 제브라피쉬의 행동을 조사하는 연구에 사용하기 위해 이 절차를 구현했습니다. 매일 적당량의 알코올에 노출된 물고기의 경우, 금단 2일 후 대조군과 비교할 때 위치 선호도에 상당한 차이가 있었습니다. 그러나 매주 폭식 투여에 노출된 그룹에서 위치 선호도에 대한 유의한 차이는 관찰되지 않았습니다. 
이 프로토콜은 수용성 화합물의 모든 유형과 함께 사용하도록 일반화 될 수 있으며 긴 약물 투여 일정 중 또는 그 이후의 물고기의 행동을 검사 할 때 모든 상황에서 사용할 수 있습니다. 라이트/다크 테스트는 또한 금단 증상으로 인한 불안의 변화를 평가하는 유용한 방법입니다.

상기 한 바와 같이이 일관되고 정확하게 시간에 에탄올 관리의 지속 시간 중요하다 제브라 피쉬와 약리 연구의 정확성과 제어를 유지합니다. 우리의 절차는 절차 투여의 용이성 및 처리량을 증가시킬 수있다. 주간-파티 또는 매일 중등도 중 일정에 에탄올을 투여 대조군과 비교, 빛 / 어둠 테스트로 측정 변경된 불안 수준, 결과. 이틀 마지막 투여 후 시험 할 때, (어떤 술을받은,하지만 여전히 투여 탱크로 이동 한) 대조군 제브라 피쉬는 (경기장의 어두운면에 제어 물고기 지출 훨씬 더 많은 시간과 행동의 예상 패턴을 표시 다른 연구 6,9,13에서 순진 제브라 피쉬와 유사한 그림 2A). (그림 2B 마지막 에탄올 투여 후 2 일 시험했을 때 주간 파티 그룹의 물고기는 작업에 밝거나 어두운 두 영역에 대한 선호를 보이지 않았다 (그림 2C)의 빛 쪽을 선호; 대조군 대조적. 환경 지수는 제어 및 매일 적당한 그룹 (그림 2D) 사이에 유의 한 차이가 나타...

물고기를 약물에 노출시킬 때 변동성을 줄이는 새로운 방법을 설명합니다. 다양한 패턴의 에탄올 노출에 노출된 물고기는 밝은/어두운 스코토택시 분석에서 금단 기간 동안 불안 수준이 변화된 것으로 밝혀졌습니다.

여러 제브라 피쉬에의 약국 (FDA)의 새로운 방법 ( 다니오의 레 리오 (rerio))와 철수의 정량화

Anxiety testing in zebrafish is often studied in combination with the application of pharmacological substances. In these studies, fish are routinely ...

이 절차의 전반적인 목표는 금단 행동에 대한 반복 투여의 영향을 평가하기 위해 물고기 그룹에 에탄올을 정확하고 효율적으로 투여하는 것입니다. 이것은 정확한 시간 동안 전체 물고기 그룹의 약물에 동시에 노출될 수 있도록 개발된 새로운 방법을 사용하여 얼룩말 물고기를 먼저 투여함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 에탄올 금단의 특정 효과에 대한 테스트를 허용하는 일정에 따라 물고기를 계속 투여하는 것입니다.다음으로, 철수 중에 물고기는 움직임을 기록하기 위해 모션 추적 소프트웨어를 사용하여 밝고 어두운 작업에서 개별적으로 테스트됩니다. 마지막 단계는 에탄올 인출이 제브라 피쉬의 행동에 미치는 영향을 조사하기 위해 데이터를 분석하는 것입니다. 궁극적으로 설명된 절차를 사용하여 에탄올 투여를 반복하면 이틀 동안 금단 증상이 나타난 후 제브라 피쉬의 행동에 일시적이지만 현저한 영향을 미쳤습니다.이 기술의 주요 장점은 대규모 물고기 그룹에 동시에 약물을 투여할 수 있다는 것이며 장기간에 걸쳐 반복적인 약물, 약물 또는 독소 노출과 관련된 연구에 이상적이라는 것입니다. 이 방법은 금단 현상 관련 행동의 정량화와 같은 신경 약리학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 우리는 여러 물고기에게 동시에 에탄올을 투여하려고 시도했을 때 그물이 약물 투여에 있어 부정확하고 부정확한 방법이라는 것을 발견했을 때 이 방법에 대한 아이디어를 처음 떠올렸습니다.시작하자면. 시간의 혼란이나 시각적 자극에 편향되지 않도록 동물이 동일한 환경과 같은 시간에 투여되도록 투여 일정을 준비합니다. 다음으로, 하루에 두 그룹의 물고기를 테스트할 수 있도록 그룹 크기 수에 필요한 만큼 동일한 1.5리터 투명 폴리프로필렌 산란 탱크를 확보하십시오.수조당 8마리의 물고기 그룹을 사용하고, 그룹당 1개의 저장 탱크와 1개의 투여 탱크가 필요합니다. 따라서 탱크의 수는 그룹 수의 2 배입니다. 그런 다음 모든 저장 탱크에 400미크론 생성 인서트를 배치합니다.여기에서 적절한 온도의 서식지, 물 또는 역삼투수로 탱크를 채웁니다.얼룩말 물고기에는 섭씨 25도에서 28도가 사용됩니다. 탱크가 컨디셔닝을 피하기 위해 중립적인 환경에 있는지 확인하고 투여 중 외부 시각적 자극에 낚시를 하십시오.다음으로, 여기 투여 탱크에 적당량의 약물을 서식지 물과 혼합하여 약물 용액을 준비하고, 0.2 % 에탄올 용액과 1.4 % 에탄올 용액을 탱크의 물과 결합하여 제조합니다. 서식지 탱크에서 물고기를 조심스럽게 그물로 잡고 산란 인서트가 들어 있는 적절한 저장 탱크로 이동합니다. 이상적으로는 산란 삽입물에 물고기를 수용하여 각각의 저장 탱크에 있는 모든 물고기와 함께 그물을 완전히 제거하는 것이 좋습니다.저장 탱크에서 산란 삽입물을 부드럽게 들어 올려 적절한 약물 용액 탱크에 넣습니다. 가능한 경우, 정확한 투여 시간을 보장하기 위해 모든 그룹을 동시에 약물 용액으로 이송하는 데 도움을 받으십시오. 필요에 따라 투여 시간을 기록합니다.에탄올 용액의 30분은 필요한 투여 기간이 끝날 때 여기에 설명된 절차에 사용됩니다. 약물 용액에서 산란 삽입물을 조심스럽게 들어 올려 저장 탱크에 부드럽게 다시 넣어 에탄올 용액에서 물고기를 제거합니다. 너비 9.5cm, 길이 55cm, 깊이 9.5cm의 밝고 어두운 경기장을 흰색 방수 바닥으로 가져옵니다.경기장의 절반은 흰색으로, 절반은 검은 색으로 덮인 벨크로를 사용하여 경기장 내부 벽에 흰색과 검은 색 방수 무반사 종이를 고정하고 섭씨 25-28 도의 온도에서 서식지 물로 경기장을 5cm 깊이까지 채 웁니다. 테스트하는 동안 이 온도를 유지하고, 경기장을 배치할 흰색 3면 인클로저를 구성하여 외부 시각적 자극을 최소화합니다. 테스트 영역에 확산 오버헤드가 있는지 확인합니다.수면에 반사를 일으키지 않지만 비디오 이미지에서 움직임 추적 소프트웨어 또는 사후 수동 정량화에 충분히 밝은 조명입니다. 그런 다음 연구 질문에 따라 5분에서 15분의 시험 기간으로 행동 추적 소프트웨어의 기록 및 이동 분석 매개변수를 설정하고, 테스트할 물고기 그룹을 서식지 탱크의 연구 영역으로 운반하고 경기장 외부에 배치합니다. 울안. 물고기가 10분 동안 적응하도록 합니다.적절한 그룹에서 물고기를 부드럽게 그물로 잡고 밝고 어두운 경기장 중앙에 놓고 경기장의 긴 축과 평행하게 위치할 때 각 물고기를 풀어줍니다. 물고기가 밝은 영역이나 어두운 영역으로 편향되는 것을 방지하려면 동물이 풀려난 직후 행동을 기록하기 시작하십시오. 물고기를 추적하는 데 소프트웨어 문제가 있거나 시험이 끝난 후 물고기가 점프하거나 얼지 않는지 확인하고 물고기를 조심스럽게 그물로 쳐서 경기장에서 저장 탱크 또는 서식지 탱크로 제거합니다.피험자의 절반을 테스트한 후 투기장을 180도 회전시켜 투기장의 끝이 울챤 울짱의 열린 끝을 향하고 있는 편향으로 인한 혼란을 방지한다. 각 그룹 및 각 물고기에 대해 밝은 영역과 어두운 영역에서 보낸 시간을 조사하여 분석을 시작하고, 밝은 영역과 어두운 영역에서 보낸 상대적인 시간을 구하고, 그룹이 다른 영역보다 한 영역을 유의하게 선호하는지 확인하기 위해 하나의 표본 T-검정을 사용하여 분석합니다. 선호도를 비교하려면 어두운 영역에서 보낸 시간에서 밝은 영역에서 보낸 시간을 빼서 선호도 지수를 계산하고 그룹 간의 차이를 비교합니다.T-test를 사용하여 비모수 데이터 세트에 필요한 경우 두 개의 핵심 변수인 정직한 유의한 차이 사후 검정을 사용하여 분산의 일원 분석으로 여러 그룹을 비교합니다. Resco Wallace 테스트를 Dunn의 다중 비교 사후 테스트와 함께 사용한 다음 그룹 간의 속도, 구역 전환 수, 구불구불한 이동 및 부동성을 비교합니다. 분산의 일원 분석을 사용하여 다시 필요한 경우 두 개의 키, 정직한 유의한 차이 사후 검정을 활용합니다.매주 폭음 또는 매일 적당한 일정으로 에탄올을 투여하면 대조군과 비교할 때 밝고 어두운 테스트로 측정한 불안 수준이 변경되었습니다. 여기에 표시된 것은 각 조건에 대한 5분 라이트 다크 트라이얼 전반에 걸쳐 단일 대조군 얼룩말 물고기 이동 경로의 대표적인 트랙 플롯입니다. 동일한 제브라 피쉬 트랙 플롯은 히트 맵으로 표시되며, 이는 시험 전반에 걸쳐 제브라피시의 움직임을 색상으로 표현한 것입니다.물고기가 각 픽셀로 표시되는 위치에서 보낸 시간을 기반으로 합니다. 마지막 투여 이틀 후 테스트했을 때, 대조군의 제브라피시는 대조군의 제브라피시가 경기장의 어두운 쪽에서 훨씬 더 많은 시간을 보내는 것으로 예상되는 행동 패턴을 보였습니다. 다른 연구에서 순진한 얼룩말 물고기와 유사하게, 매주 폭식 그룹의 물고기는 마지막 에탄올 투여 후 이틀 후에 테스트했을 때 과제의 밝은 영역이나 어두운 영역을 선호하지 않았습니다.흥미롭게도, 매일 중간 정도의 그룹에 속하는 물고기들은 경기장의 밝은 장소를 상당히 선호했습니다. 대조군과 대조적으로, 선호도 지수는 대조군과 일일 중등도 그룹 간에 유의한 차이를 나타냈습니다. 그룹 간에 수영 속도나 부동성에는 큰 차이가 없었으므로 이 효과는 물고기의 운동 결핍 때문이 아니었습니다.이 절차를 시도하는 동안 물고기에게 먹이를 주기 전이나 후에 하루 중 같은 시간에 관심 있는 약리학적 화합물을 투여해야 한다는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 따라서 에탄올이나 다른 약리학적 화합물을 사용한 이 절차에 따라 다른 제브라피시 행동 테스트를 수행하여 중독 및 금단 증상과 같은 것을 평가할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 행동 테스트를 위해 제브라피시 그룹을 효율적이고 정확하게 투여하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.이 절차를 따라 특히 산란 인서트를 사용하는 것은 물고기를 투여할 때 정확성을 보장하는 좋은 방법입니다.

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연구

JoVE Journal

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신경과학

이 비디오는 에탄올에 노출된 후 제브라피시의 불안 관련 행동을 연구하기 위한 명암 선호도 분석을 설명합니다.

라이트-다크 선호도 테스트: 제브라피쉬의 불안 관련 행동을 연구하는 방법

제브라피쉬는 에너지 항상성 연구를 위한 중요한 모델 유기체입니다.  NADH2 민감성 산화 환원 지표인 alamar Blue를 활용하여 제브라피시 유충의 대사 속도를 96웰 플레이트 형식으로 측정하고 약물 또는 유전자 발견에 적용할 수 있는 분석을 개발했습니다.

높은 처리량<em&gt; 다니오 레 리오 (rerio)</em&gt; 에너지 지출 분석

이 프로토콜의 목표 높은 처리량 패션에 애벌레 zebrafish의 용기를 통해 붙일 레이블 음식의 통과 시간을 측정 하는 것입니다.

애벌레 Zebrafish를 사용 하 여 창 자 환승 시간의 높은 처리량 측정

이 원고는 성인 제 브라 피시에서 행동 하는 스트레스를 측정 하는 간단한 방법을 설명 합니다. 이 접근법은 zebrafish가 스트레스가 많은 상태일 때 탱크의 아래쪽 절반을 선호 하는 타고 난 경향을 활용 합니다. 우리는 또한 약리학으로 분석을 결합 하는 방법을 설명 합니다.

제 브라 피시에서 선천적인 스트레스를 연구 하는 행동 접근법

Zebrafish 배아는 화학 화합물의 독성을 평가하는 데 사용됩니다. 그들은 외부에서 개발하고 미묘한 자형기능 변화의 검출을 허용, 화학 물질에 민감하다. 실험은 배아를 함유하는 플레이트에 직접 첨가되는 소량의 화합물만을 필요로 하므로 테스트 시스템이 효율적이고 비용 효율적입니다.

Zebrafish 배아를 이용한 화학 화합물의 독성에 대한 신속한 평가

Zebrafish 이종이식 모델은 생체 내 미세 환경에서 인간 암 세포의 고처리량 약물 스크리닝 및 형광 이미징을 허용합니다. 당사는 자동 형광 현미경 장착 이미징 유닛을 사용하여 제브라피시의 환자 유래 백혈병 시료에 대한 대규모 자동 약물 스크리닝을 위한 워크플로우를 개발했습니다.

제브라피시의 1차 환자 유래 종양 이종이식의 약물 스크리닝

여기에서는 단일 수조를 사용하여 성체 제브라피쉬에 대한 화학 물질(예: 메스암페타민 및 글리포세이트)의 잠재적인 신경 독성 영향을 효과적으로 결정하기 위해 새로운 수조, Shoaling 및 사회적 선호도 테스트를 포함한 포괄적인 행동 테스트 배터리를 제시합니다. 이 방법은 신경 독성 및 환경 연구와 관련이 있습니다.

단일 탱크에서 행동 테스트 배터리를 사용한 성인 Danio rerio 의 신경 독성 평가

성체 제브라피시에서 새로운 복강내(IP) 주사 방법에 대해 설명합니다. 독소루비신(doxorubicin)과 같은 독성 화합물을 취급할 때 이 절차는 이전에 보고된 두 가지 IP 방법보다 더 효과적입니다. 이 기술은 제브라피시 모델에 대한 경험이 제한된 연구원들이 쉽게 채택할 수 있도록 설계되었습니다.

성체 제브라피시의 복강 내 주사 기법으로 신체 손상 및 관련 폐사율을 최소화합니다.

이 프로토콜은 수정 후 3-7일 후에 제브라피시 유충에 대한 약물 스크리닝 절차와 형태학적 평가를 설명합니다.

초기 단계 제브라피시 유충의 소분자 스크리닝 및 독성 테스트

이 연구는 성체 제브라피시에서 정밀하고 비침습적이며 체질량 기반 경구 약물 전달을 가능하게 하는 젤라틴 기반 급식 방식을 제시합니다. 이 프로토콜은 신뢰할 수 있는 피드 수용과 원리 증명으로서 MK-801의 성공적인 전달을 입증하여 예상한 행동 효과를 가져왔습니다.

어류의 경구 약물 전달을 위한 간단하고 정밀한 사료 기반 접근법

학습하세요 제브라피쉬(Danio rerio) 집단 동시 투여법을 이용한 에탄올 금단 행동 정량화 방법입니다. 정확한 투여 일정과 광/암 선호 검사로 신경약리학 연구의 변이성을 줄이고 금단 관련 불안 행동을 분석할 수 있습니다.

여러 제브라 피쉬에의 약국 (FDA)의 새로운 방법 ( 다니오의 레 리오 (rerio))와 철수의 정량화

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