Name: 오버레이 분석을 사용하여 성적으로 폐렴 구균 박테리오신에 대한 세균의 생산 및 감도를 측정하는 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 5 s
Description: 배우세요 Streptococcus pneumoniae의 박테리오신 활성을 오버레이 분석으로 시각화하는 방법을. 이 기법은 여러 균주를 빠르게 선별하고 항균 전략 연구에 활용됩니다.

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이 연구는 엘리자베스 E. 케네디 연구상(Elizabeth E. Kennedy Research Award)의 지원을 받았습니다.

생산자 균주의 1 준비 <ol><li> 킬 폐렴 구균 균주는 -80 ° C 냉동고 주식에서 5 % 양 혈액 트립 틱 소이 한천 접시에 박테리오신 생산을위한 시험한다. NOTE : 억제를 판정하는 균주의 초기 성장을위한 혈액 플레이트의 사용은 크게 분석의 재현성을 증가시킨다. 성장 조건은 특정 유기체에 대해 수정해야 할 수도 있지만, 또한, 박테리오신을 생산하는 다른 비 - 폐렴 구균 균주를 사용할 수있다. 우리는 성공적으로 오버레이 분석에서 연쇄상 구균 mitis 및 락토 코커스 락 티스의를 사용하고 있습니다. </li><li> 5 % CO 2와 37 ° C에서 밤새 플레이트 (O / N)를 품어. </li><li> 생산자 균주의 배양 후, TSA 25ml를 함유 플레이트에 카탈라제 3,000 4,000 단위를 피펫 팅하여 트립신 콩 한천 (TSA) 판을 제조하고 멸균 유리 비드를 이용하여 용액을 카탈라아제 확산. 약 10 분 아래에 접시를 건조 시키생물 안전 캐비닛. </li><li> 피펫 팁에 박테리아의 가시적 양을 수집합니다. 건조 TSA 플레이트에 피펫 팁을 찔러. 참고 : 하나의 생산 균주 이상은 하나의 TSA 플레이트에 찔 수 있습니다. 결과 후광이 겹치지 않도록 그것은 찢고 밖으로 공간으로 중요합니다. <ol><li> 가능한 경우, 양성 대조군 및 음성 대조군으로서 오버레이에 사용되는 균주로서 프로듀서 박테리오신 알려진 것을 포함한다. 참고 : 양성 및 음성 컨트롤은 이전에 게시 된 아르 요청 10시 사용할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 6 시간 동안 5 % CO 2와 37 ° C에 여러 찌르기를 포함하는 TSA 플레이트를 품어. </li></ol> 오버레이 스트레인의 2 만들기 글리세롤 주식 <ol><li> 오버레이 분석의 일 이전에 (글리세롤의 추가 후 중간 지수 단계로 성장하고 -80 ° C에서 보관 문화) 글리세롤 주식을 준비합니다. 폐렴 구균 STR 5-10 식민지를 접종아인은 0.5 % 효모 추출물 (THY)와 토드 휴잇 매체 감도 또는 페로몬 분비 검사를한다. 참고 : BlpC 유도 기자의 건설 이전에 2를 설명하고 균주의 요청에 따라 사용할 수 있습니다. </li><li> 흔들림없이 37 ° C의 물을 욕조에 단단히 밀폐 뚜껑 THY의 5 ㎖의 유리 튜브에 5 ~ 10 식민지를 품어. </li><li> 그들은 0.5 OD에게 0.3의 620에 도달 할 때까지 37 ° C에서 문화를 품다. 참고 :이 사용되는 균주에 따라 약 4-5 시간이 소요됩니다. <ol><li> 부드럽게 튜브에게 OD를 측정하기 전에 몇 번 반전. </li></ol></li><li> 실험 당일 수행 될 수 없거나 균주는 글리세롤을 보유하고 나중에 실험을 재개, 향후 여러 번 사용할 경우. 글리세롤 축적량 들어, 20 %의 최종 농도로 배양하여 글리세롤을 추가한다. -80 ° C에서 1.5 ML의 microcentrifuge 튜브 및 저장소로 나누어지는 문화. 참고 : 샘플의 할 수있다-80 ° C에서 달 tored. 글리세롤 주식을하지 않는 경우, 오버레이 분석을 위해 직접 샘플을 사용합니다. </li></ol> 3 오버레이 분석 <ol><li> 직전, 응용 프로그램을 오버레이 오버레이 구성 요소를 혼합한다. 15 ML 원뿔 관에서 THY 5 ㎖, 카탈라아제의 3,000 ~ 4,000 U, 그리고 그 중 하나 일 또는 실온에서 해동 된 문화의 글리세롤 주식을 성장시켰다 오버레이 균주 배양액의 200 μl를 추가합니다. 기자 균주를 사용하는 경우, 오버레이 혼합물에 X 갤런의 50 μL (40 ㎎ / ㎖)를 추가합니다. 접시 당 하나의 원뿔 튜브를 사용합니다. </li><li> 이전 용융 TSA의 추가로 실온에서 오버레이 혼합 평형. </li><li> 인큐베이터에서 칼에 찔린 균주 TSA 플레이트를 제거합니다. 전자 레인지에 고체 TSA 녹여 사용할 준비가 될 때까지 55 ° C의 물을 욕조에 보관하십시오. 1.5 % 한천로 용융 TSA 3 ㎖를 추가 혼합물을 오버레이 55 ° C로 냉각. <ol><li> 피펫 직전 오버레이 혼합물을 제조하고, 혼합물은 아주 고화 시작신속. 참고 : 오버레이 도금하기 전에 응고되기 시작하면, 그 결과는 해석 할 수없는 것입니다. </li></ol></li><li> 피펫 팅에 의해 및 5 ㎖의 피펫이 혼합물에 거품을 소개하지 않도록주의 여러 번 아래로 오버레이 혼합물을 섞는다. 천천히 칼에 찔린 TSA 플레이트에 직접 오버레이 혼합물을 피펫. 한천이 굳어 할 수 있도록 몇 분 동안 벤치 탑에있는 플레이트에 보관하십시오. <ol><li> 오버레이 혼합물을 배포 할 수있는 판을 돌리지 마십시오,이 오버레이에 찔 문화에서 성장을 끌어. </li></ol></li><li> 조심스럽게 5 % CO 2 O / N (약 16 ~ 18 시간)을 포함 37 ° C 배양기에 오버레이 TSA 플레이트를 배치합니다. </li><li> 하룻밤 성장 후 번호판을 관​​찰한다. 판 억제 또는 페로몬 신호가 발생한 지역을 제외하고 오버레이 균주의 성장 불투명 나타납니다. 이들은 각각 찔 변형 주위를 청소 또는 청색의 영역으로 표시됩니다. 참고 : 비록 지표 성과청색 또는 정화 직경 ements은 정량적 평가를 위해 결정될 수있다 직경의 차이는 또한 접시에 찔린 박테리아의 양에 따라 달라질 수있다. 오버레이 분석은 정량적 평가는 신중하게 해석되어야한다, 질적 분석이다. 음성 대조군에 비해 눈에 띄는 개간 활동으로 간주된다. </li></ol>

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</ol>

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이 오버레이 분석은 박테리오신 생산자 활동의 범위를 결정하고 폐렴 구균 균주 사이에서 발생할 수있는 경쟁적인 상호 작용을 보여주기 위해 빠른 방법이다. 오버레이 분석은 하나의 플레이트에 대한 여러 박테리오신 생산 균주 선별을 위해 사용하도록 구성 될 수있다. 우리는 성공적으로 96 웰 플레이트의 절반에서 SBA 판을 접종 48 핀 복제기를 사용하여이 분석에 큰 부담 모음을 상영했다​​. 밤새 배양 한 후, 성장 복제기를 사용 리플리케이터의 핀의 접시 한천 표면 피어싱 TSA 플레이트에 전달된다. 란티 바이오 틱은 같은 농도 의존적으로 조절되는 기타 세균 분비하는 항균 펩타이드는 오버레이 방식을 사용 7,12,13 검사 할 수있다. 이 박테리오신 또는 lantibiotic의 정화가 어려운 경우에 특히 유용합니다. 상청액 항균 시험을 할 수 있지만활성은 배양액에서 BLP 유래 박테리오신의 발현은 (데이터는 도시하지 않음) 매...

폐렴 구균, 비 인두의 polymicrobial 지역 사회의 일반적인 식민지 개척자는, 세균 생성 된 항균 펩타이드 (박테리오신)의 생산을 통해 다른 폐렴 구균과 밀접하게 관련 종과 경쟁 할 수있다. 현재까지 조사마다 완전히 순서가 폐렴 구균 균주는 B의 acteriocin- 리터의 이케 페이지의 eptide 궤적, BLP의 버전이 포함되어 있습니다. 폐렴 구균에 의하여 생산 박테리오신은 양의 시험 관내 결과 및 생체 내 경쟁 1-4에 중요한 것으로 입증되었다. 경쟁적인 역학 특정 펩티드 페로몬에 응답하여 동족 내성 단백질과 함께 다양한 박테리오신의 발현에 의해 영향을 받는다. BLP 궤적 유도 펩티드 페로몬, BlpC는, 센서 키나아제, BlpH에 결합되는 정족수 인식 시스템에 의해 제어하고, 그 결과 신호 캐스케이드를 개시한다BLP 궤적 5,6의 전사. BlpC의 사 대립 유전자 변형이 있습니다 자사의 동족 BlpH 6 각 바인드. 셀 자체 박테리오신의 효과 살아남 들어 동족 내성 단백질을 인코딩하는 유전자는 유전자 박테리오신 각각 같은 오페론에 전사된다. 변형 방지에 필요한 특정 내성 유전자를 결여하는 경우 경쟁자 균주는 외인성 페로몬에 응답 BLP 궤적을 상향 조절 할 수없는 경우, 또는 죽이는 발생한다. 수송 복합체, BlpAB이 분비 및 처리 펩타이드 페로몬과 박테리오신 펩티드 2,4 필요합니다. 최근에는 폐렴 구균 균주의 상당한 부분들이없는 그들과 박테리오신 1,2 페로몬 분비 렌더링 blpA 유전자의 보존 된 돌연변이를 의미하는 &quot;사기꾼&quot;가 있다고 밝혀졌다. 이 균주는 울음 소리에 의해 분비되는 외인성 BlpC 2에 응답 할 수 있습니다면역 단백질의 생산을 허용 보링 균주. 상청액으로부터 박테리오신의 조질 제제는 순도를 달성하는 생화학 방법의 단계를 사용하여 제조자 균주로부터 제조 될 수 있지만,이 방법은 균주의 큰 컬렉션을 스크리닝 유용한 아니며 박테리오신 발현 수준은 국물 성장 배양 낮은 경우 2,7- 9. 오버레이 분석은 시험 관내에 존재할 수있는 균주간에 경쟁 역학 조사 신속한 방법으로 사용된다. 그렇게하려면, 폐렴 구균 균주는 미리 접종 한천 플레이트 상과 BLP 궤적의 유도에 충분한 로컬 박테리아 농도를 달성하기 위해 증가시킨다. 두 번째 변형은 다음 다음 감도를 테스트 할 수있는 사전 접종 균주에 걸쳐 적용되는 용융 부드러운 한천 솔루션에 접종한다. (억제 활성 무관) BLP 궤적 행위 평가하기 위해 균주 번째 일련의 오버레이 할 수이전에 설명 BlpC 기자 균주를 REE. 이 균주는 폐렴 구균에 의해 분비되는 가장 일반적인 세 BlpC 페로몬에 반응 세 가지 blpH 대립 유전자 중 하나를 포함하도록 구성되었다. 리포터 균주 BlpH 의존 프로모터의 제어하에 있고 자기 자극을 방지 10,11 blpC 유전자에서 삭제를 수행하는 통합의 lacZ 유전자를 가지고있다.

<table><tbody><tr><td>Trypticase Soy Agar with 5% Sheep</td><td>Blood Fisher</td><td>B21261X</td><td>냉동고 배양에서 성장을 위한</td></tr><tr><td>Catalase</td><td>Sigma</td><td>C100-500mg</td><td>플레이트당 4,741 단위</td></tr><tr><td>Todd Hewitt 육수 + 효모 추출물 (THY)</td><td>Fisher</td><td>DF0492-17-6&nbsp;</td><td>THB 30g, 효모 추출물 5g, 1L ddH2O 오토클레이브</td></tr><tr><td>트립티카제 간장 육수 + 한천 플레이트 (TSA)</td><td>Fisher</td><td>B11768&nbsp;</td><td>TS 30g, 한천 15g, 1L ddH2O 오토클레이브</td></tr><tr><td>5-bromo-4-chloro-3-indolyl &beta;-D-galactopyranoside (X-gal)</td><td>Sigma</td><td>B4252-50MG</td><td>디메틸포름아미드</td></tr><tr><td>페트리 접시</td>에 용해 <td>Fisher</td><td>FB0875712</td><td></td></tr><tr><td>Spectrophometer</td><td></td><td></td><td>배양의 OD620 측정</td></tr><tr><td>37 &deg; C 수조</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>37 &deg; 5% CO2</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>15ml 원뿔형 튜브</td><td></td><td></td><td></td></tr>가 있는 C 인큐베이터</tbody></table>

오버레이 분석을 사용하여 성적으로 폐렴 구균 박테리오신에 대한 세균의 생산 및 감도를 측정하는

Using the Overlay Assay to Qualitatively Measure Bacterial Production of and Sensitivity to Pneumococcal Bacteriocins

Streptococcus pneumoniae는 비인두의 매우 다양한 다미생물 군집을 형성하여 상주 유기체와 경쟁해야 합니다. 우리는 박테리아에서 생산된 항균 펩타이드(박테리오신 신)가 이러한 경쟁적 상호 작용의 결과를 좌우한다는 것을 보여주었습니다. 완전히 서열화된 모든 폐렴구균 균주는 a bacteriocin-l ike peptide (blp) locus를 가지고 있습니다. blp locus는 다양한 박테리오신 및 이들의 조절, 처리 및 분비에 필요한 고도로 보존된 모든 구성 요소를 암호화합니다. 유전자 자리의 박테리오신 면역 영역(BIR)에서 발견되는 박테리오신 항체의 다양성은 폐렴구균 경쟁의 주요 원인입니다. 박테리오신 (bacteriocin)과 함께 면역 유전자(immunity genes)는 BIR에서 발견되며, 이는 생산자 세포를 자체 박테리오신 (bacteriocin)의 영향으로부터 보호하는 데 필요합니다. 오버레이 분석은 박테리오신 (bacteriocin)에 의해 매개되는 경쟁적 상호작용에 대해 많은 수의 균주를 검사하는 빠른 방법입니다. 또한 오버레이 분석을 통해 박테리오신 특이적 면역의 특성을 규명하고 분비된 정족수 감지 펩타이드를 검출할 수 있습니다. 이 분석은 박테리오신 생산을 위해 테스트할 균주를 한천 플레이트에 사전 접종한 후 박테리오신 감수성을 테스트할 균주를 포함하는 부드러운 한천 오버레이를 적용하여 수행됩니다. 찌르기 부위를 둘러싼 여유 영역은 중첩 균주가 사전 접종된 균주에 의해 생성된 박테리오신 균주에 민감하다는 것을 나타냅니다. 클리어런스 영역이 관찰되지 않는 경우, 중첩 균주가 생성되는 박테리오신 균주에 면역이 있거나 사전 접종된 균주가 박테리오신 신을 생성하지 않습니다. blp 자리가 주어진 균주에서 기능하는지 확인하기 위해 오버레이 분석을 조정하여 사전 접종된 균주에 의한 펩타이드 페로몬 분비를 평가할 수 있습니다. 이 경우, 페로몬 특이성이 다른 일련의 4개의 lacZ-reporter 균주가 오버레이에 사용됩니다.

오버레이 분석에서 두 가지 결과가 있습니다. 하룻밤 배양 한 후 칼에 찔린 균주의 성장을 할 수 있어야한다. 그림 1A에서 오버레이 변형 박테리오신이 생산되고에 민감하다. 통관의 영역은 칼에 부담을 둘러싼 시각화 할 수 있습니다. 또한, 오버레이 혼합물에 찔 균주의 소용돌이가 가능하며,도 1a에서 볼 수있다. 그림 1B에서 오버레이 변형은 자상을 둘러싼 후광의 부재에 의해 언급 된 바와 같이 분비되는 박테리오신 영향을받지 않는다. 이 찔 균주 박테리오신을 분비하지 않은 것 또한 가능하다. 신호 분석의 경우, 두 개의 서로 다른 결과들이 가능하다. 찔 균주는도 2a에 도시 된 바와 같이 X-GAL의 분해를 통해 본, 오버레이 균주의 히스티딘 키나아제와 상호 작용 페로몬을 분비 할 수있다. 페로몬의 전사를 활성화하지 않는 경우찔 균주 페로몬 분비되지 않는 경우도 2b에 도시 된 바...

폐렴구균의 경쟁은 폐렴구균 및 기타 관련 종에 대한 억제 활성을 가진 작은 항균 펩타이드인 박테리오신 (bacteriocin)에 의해 매개됩니다. 여기에서는 박테리오신 활성 및 억제 스펙트럼, 박테리오신 특이적 면역 및 분비된 정족수 감지 펩타이드의 검출을 특성화할 수 있는 최적화된 박테리아 오버레이 분석에 대해 설명합니다.

Streptococcus pneumoniae colonizes the highly diverse polymicrobial community of the nasopharynx where it must compete with resident organisms.  We have ...

이 절차의 전반적인 목표는 오버레이 분석을 사용하여 폐렴 연쇄상구균의 박테리아와 활동을 시각화하는 것입니다. 이것은 먼저 생산자 균주를 TSA 플레이트에 찔러 수행됩니다. 두 번째 단계에서, 오버레이 변형주 혼합물을 준비한 다음 계단식 생산자 변형률을 포함하는 TSA 플레이트에 천천히 피펫팅합니다.마지막 단계에서는 박테리아 활동을 평가합니다. 궁극적으로, 오버레이 분석은 관심 있는 찌른 균주에 의한 박테리아 비활성 또는 페로몬 생성을 보여주는 데 사용할 수 있습니다. 박테린의 직접 정제와 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 이 방법이 다양한 박테리아, 비활성 상태를 확립하고 생산 과정에서 박테리아에 대한 여러 균주를 스크리닝하는 빠른 방법이라는 것입니다.이 절차를 시연하는 것은 내 연구실의 대학원생인 Natalie Marchek이 될 것입니다.생산자에서 박테리아를 준비하려면 5% 양의 혈액 TSA 플레이트에 관심 있는 폐렴구균 균주를 줄무늬로 만들고 5% 이산화탄소에서 섭씨 37도에서 밤새 플레이트를 배양합니다. 다음날 아침 3000-4,000 단위의 촉매를 25 밀리리터의 TSA가 들어있는 플레이트에 피펫팅하고 멸균 유리 구슬을 사용하여 플레이트에 촉매를 펴 놓습니다. 생물 안전 캐비닛에서 플레이트를 약 10분 동안 건조시킨 후 피펫 팁에 눈에 보이는 양의 박테리아를 모으고 피펫 팁을 건조된 TSA 플레이트에 찔러 넣습니다.가능하면 알려진 박테리아 sin producer를 positive control로 포함하고 오버레이에 사용할 균주를 negative control로 포함하여 성장 후광이 겹치지 않도록 찌르기 사이에 적절한 공간을 제공합니다. 그런 다음 섭씨 37도에서 5% 이산화탄소로 찌르는 배양물을 6시간 동안 배양하고, 오버레이 분석 전날 5-10개의 폐렴구균 균주 콜로니를 접종하여 0.5% 효모 추출물을 함유한 5밀리리터의 THY 배지가 포함된 유리관에서 테스트합니다. 그런 다음 이러한 글리세롤 균주 배양액의 뚜껑을 닫고 흔들지 않고 섭씨 37도의 수조에서 배양합니다.4-5 시간 후에 튜브를 몇 번 부드럽게 뒤집은 다음 od를 측정합니다. 배양액이 0.3 내지 0.5의 OD 2 60에 도달하면 글리세롤을 최종 농도 20%로 첨가한 다음 배양물을 1.5밀리리터 마이크로 원심분리기 튜브에 분취하고 튜브를 섭씨 영하 80도에서 보관합니다. 다음 날 아침, 글리세롤 스톡의 분취액을 실온에서 해동합니다.그런 다음 오버레이 적용 직전에 5 밀리리터의 THY 3000을 15 밀리리터 원뿔형 튜브에 4, 000 단위의 촉매와 200 마이크로 리터의 글리세롤 스톡을 혼합합니다. 리포터 박테리아 균주의 경우, 플레이트당 하나의 원추형 튜브를 사용하여 오버레이 혼합물에 50마이크로리터의 Xcel을 추가합니다. 혼합물이 전자 레인지에서 용융 고체 TSA를 평형화하는 동안 오버레이 혼합물을 실온에 놓고 섭씨 55도의 수조에 넣습니다.용융된 TSA가 섭씨 55도로 냉각되면 TSA 3ml를 오버레이 혼합물에 빠르게 첨가하고 5ml 피펫으로 여러 번 위아래로 피펫을 만듭니다. 거품이 생기지 않도록 주의한 다음 오버레이 혼합물을 찔러낸 TSA 플레이트에 직접 천천히 피펫팅합니다. 몇 분 후 플레이트가 굳어지고 플레이트를 회전시키지 않고 오버레이된 찌르기 배양을 하룻밤 배양을 위해 인큐베이터에 조심스럽게 다시 놓습니다.다음날 아침에는 하룻밤 사이에 자라는 것을 관찰합니다. 플레이트는 억제 또는 페로몬 신호가 발생한 영역을 제외하고는 오버레이 균주의 성장으로 인해 불투명하게 보여야 합니다. 이 대표적인 실험에서 오버레이 분석에 대해 두 가지 가능한 결과가 있습니다.하룻밤 배양 후, 찔린 균주를 둘러싼 제거 영역이 관찰되었는데, 이는 이 중첩 균주가 생성되는 박테리아 죄에 민감하다는 것을 나타냅니다. 또한 찔린 균주가 오버레이 혼합물로 소용돌이치는 것을 주목하십시오. 이 실험에서, 중첩 균주는 찌르는 부위를 둘러싼 헤일로가 없는 것으로 알 수 있듯이 분비되는 박테린에 대해 면역이었습니다.또한 찌른 균주가 신호 분석을 위해 박테린을 분비하지 않을 수도 있습니다. 두 가지 다른 결과가 발생할 수 있습니다. 이 실험에서, 찌른 균주는 이 이미지에서 xal의 파괴를 나타내는 파란색 영역에 의해 관찰된 바와 같이 오버레이 균주의 히스티딘 키나아제와 상호 작용하는 페로몬을 분비했습니다.페로몬이 리포터의 균주에서 BLP 유전자 자리의 전사를 활성화하지 않거나 찌른 균주가 페로몬을 분비하지 않는 경우, 이 이미지에서 관찰된 바와 같이 X 스케일의 붕괴가 발생하지 않습니다. 돌연변이 분석 또는 염기서열분석과 같은 다른 방법을 수행하여 눈에 띄는 억제 활성이 BLP 유전자 자리에 기인하는지 또는 수송체 유전자의 돌연변이로 인한 활성 부족인지 여부와 같은 추가 질문에 답할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

출처: Hockett, K. L., Baltrus, D. A. 소프트-한천 오버레이 기법을 이용한 박테리아 생성 억제성 화합물 선별. J. Vis. 경험 (2017)이 영상은 항생제 유도 공여자 균주에서 상원액을 검사 균주가 포함된 부드러운 한천 오버레이에 점검하여 박테리오신 매개 살해를 감지하는 절차를 시연합니다. 배양 후 형성된 투명 구역은 박테리아 억제를 나타냅니다.

세우도모나스 시링기에서 박테리오신 매개 살해를 감지하기 위한 연성 한천 오버레이 분석

이 비디오는 쥐의 배설물에서 유래한 박테리오신 생성 유산균의 검출을 보여줍니다. 이 분석은 특정 박테리아 균주에 대한 박테리오신의 항균 활성을 측정합니다.

박테리오신 생산 쥐 분변 세균 분리체의 항균 잠재력 평가

우리는 endomembrane 파열을 추적하는 방법을 설명하면 세포 내 박테리아에 의해...

액포 파열의 단일 세포 측정은 세포 내 병원균에 의해 발생

이 기술은 이전 포유류의 세포의 감염에 대한 자연 protozoan 호스트 세포에 미리 재배되고 세균 병원균의 세포 성장을, 수확 정상화하고 계량화 할 수있는 방법을 제공합니다. 이 메소드는 프라이밍 단계뿐만 아니라 대상 셀 유형에 대한 호스트 세포의 다양한 수용하기 위해 수정할 수 있습니다.

Protozoan - 중이오 박테리아와 취급하기 쉬운 포유류의 세포 감염

진핵 생물에 본 것과 달리, 주로 작은 크기로 박테리아의 세부 막 탈분극 및 이온 농도 변화 측정 어려운 종래의 방법을 만드는 것이 연구의 소수가있다. 여기, 우리 형광 기술을 이용하여 중요한 그람 양성 병원균 폐렴 구균에 이러한 이벤트를 모니터링하기위한 세부 프로토콜.

막 극성, 멤브레인 무결성 및 세포 내 이온 농도의 모니터링 변경<em&gt; 폐렴 구균</em&gt; 형광 염료를 사용

체외에서 준수의 분석은 세포 단층 상피하는 등 폐렴 구균 식민지를 억제하기위한 프로 바이오 틱의 사용과 같은 잠재적 인 개입을 조사하기 위해 폐렴 구균의 부착을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

를 사용하여 폐렴 구균 식민지에서 생균제의 효과를 조사<em&gt; 체외</em&gt; 준수의 분석

Plaque assay는 바이러스 정량화를 위한 황금 표준으로, 호스트 세포 단층의 entrapping overlays를 활용하여 바이러스 역가를 측정합니다. 전통적으로 다양한 반고체 오버레이가 사용되어 왔지만, 여기에서는 반고체 오버레이를 여러 바이러스 계열 중에서 새로운 액체 미정질 셀룰로오스와 비교하는 플라크 기술을 보여줍니다.

사용하여 전통과 소설 오버레이 시스템 : 플라크 분석 실험을 통해 바이러스 농도 결정

지연 성장 억제 분석법은 한 박테리아 분리물이 다른 박테리아에 미치는 경쟁 효과를 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 억제는 억제제를 생산하는 분리물 주변의 정화 영역을 측정하여 정량화하거나 가시적인 억제 정도를 결정하여 정성적으로 평가합니다.

이연 성장 억제 분석은 경쟁에 세균 유래 항생제 효과를 정량화하기

우리는 다른 박테리아에 대한 억제성 화합물의 생산을 위해 박테리아 배양을 스크리닝하는 간단한 방법을 설명합니다.

소프트 한천 오버레이 기법의 사용은 세균 생산 억제 화합물에 대한 화면으로

이 opsonophagocytic 죽이 분석 결과 응답 하 고 다른 치료 조건에 기반 하는 박테리아를 죽 일 phagocytic 면역 세포의 기능을 비교 하는 데 사용 됩니다. 고아 하 게,이 분석 결과 opsonin로 박테리아에 대하여 제기 하는 항 체의 효과 기 기능을 평가 하기 위한 황금 표준 역할을 합니다.

Opsonophagocytic 살해 분석 결과 세균성 병원 체에 대 한 면역학 응답을 평가 하

이 프로토콜에 제시된 공동 문화 상호 작용 분석은 저렴하고 높은 처리량이며 간단합니다. 이 계산은 공동 배양에 있는 미생물 상호 작용을 관찰하고, 상호 작용 패턴을 확인하고, 인간과 환경 병원체에 대하여 관심있는 미생물 긴장의 억제 잠재력을 특성화하기 위하여 이용될 수 있습니다.

미생물 상호 작용의 조사를 위한 높은 처리량 공동 문화 애세서

배우세요 Streptococcus pneumoniae의 박테리오신 활성을 오버레이 분석으로 시각화하는 방법을. 이 기법은 여러 균주를 빠르게 선별하고 항균 전략 연구에 활용됩니다.

오버레이 분석을 사용하여 성적으로 폐렴 구균 박테리오신에 대한 세균의 생산 및 감도를 측정하는

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