Name: 마우스 태아 간 문화 시스템은 터미널 적혈구의 초기와 후기 단계에서 대상 유전자의 기능을 해부하기 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 40 s
Description: 학습하세요 마우스 태아 간 배아적혈구 배양 시스템을 이용하여 말기 적혈구 생성의 초기와 후기 단계에서 유전자 기능을 분석하는 방법을. 바이러스 매개 유전자 전달과 유세포 분석 기술을 활용합니다.

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이 연구는 NIH R00HL102154 지원 및 P 지행 혈액 학자 수상의 미국 사회되었다.

이 프로토콜에 기술 된 실험은 노스 웨스턴 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 명시된 지침과 규정에 따라 수행되었다. 문화 매체의 1 준비 <ol><li> 피브로넥틴 솔루션을 준비합니다. 인간 피브로넥틴 (1 mg)을 중 하나를 유리 병에 물 1 ㎖를 추가합니다. 교반없이 30 분 동안 조직 문화 후드에서 솔루션을 둡니다. 20 μg / ML의 최종 농도를 만들어 PBS 50 ㎖로 전체 액체를 전송하고 부드럽게 잘 섞는다. 판 (아래 참조)을 코팅하기 전에 피브로넥틴에 신선한 용액을합니다. </li><li> EPO 배지 (SCF 매체) 50 ㎖를 준비합니다. 신선한했을 때 표 1에 열거 된 성분을 결합합니다. 매체 1 달 동안 4 ° C에 저장할 수 있습니다. </li><li> EPO 함유 배지 50 ㎖를 준비합니다. 신선한했을 때 표 2에 나열된 성분을 결합합니다. 매체 1 달 동안 4 ° C에 저장할 수 있습니다. </li></올&gt; 2 피브로넥틴 코팅 플레이트 <ol><li> 6 - 웰 플레이트 (또는 12 웰 플레이트의 각 웰에 0.5 ml)을 각 웰에 1 ml의 피브로넥틴 용액을 추가한다. 1 시간 동안 조직 문화 후드에서 판을 둡니다. </li><li> 두 번 멸균 물 우물을 씻어 공기 판을 건조. </li><li> 접시를 싸서 4 ° C의 추운 방에 저장합니다. </li></ol> 태아 간 적혈구 모세포의 3 정화 참고 : E15에 E13에서 사용 태아의 간은 임신 한 쥐 (C57BL / 6) 시간이 초과되었습니다. E13.5 간은이 CFU-E 전구 세포의 수율을 최대화하기 위해 바람직하다. 시간이 초과 임신 한 쥐를 얻으려면 6~8주 세 남성과 여성의 마우스는 한 케이지 (하나 또는 두 개의 여성 대개 한 남성)에 배치되었다. 여성 질 플러그 결합이 성공적인지 여부를 판별하기 위해 다음 날 아침을 조사 하였다. 플러그가 발견 된 후 임신의 첫 번째 날 일이었다. <ol><li> 총 태아 간 세포의 준비 <ol><li> 양해 각서 (MOU)를 희생CO 2 흡입 자궁 전위에 의해 그 자체. 소독 용 70 % 에탄올로 복부를 스프레이. 자궁을 제거하기 위해 가위를 해부와 복부를 엽니 다. 1X PBS에서 자궁을 씻으십시오. </li><li> 조직 문화 후드 및 멸균 도구를 사용하여 멸균 조건에서 태아를 해부하고 1X PBS에 세척. </li><li> 태아에서 태아의 간을 해부하다. 조심스럽게 다른 집게와 떨어져 몸에서 태아의 간 (컬러 핑크)를 당겨, 한 집게로 태아의 몸체를 잡고. 관련 섬유 성 조직을 제거하기 위해 집게로 태아의 간을 청소합니다. 10 % 소 태아 혈청을 함유하는 신선한 1X PBS로 모든 태아 간을 놓습니다. </li><li> 기계적 피펫 팅 아래에 의해 태아의 간을 방해. </li><li> 50ml의 원뿔형 튜브에 40 μm의 셀 스트레이너를 통해 세포 현탁액을 필터. 5 분 동안 800 XG에서 세포 펠렛. </li><li> FBS를 뜨는을 기음 10 %로 1 ml의 PBS에 세포를 재현 탁 (약 8 E13.5 태아 간) ML 당. </li></ol></li><li> TER119 네거티브 적혈구 모세포의 정화 <ol><li> 15 분 동안 얼음에 쥐 IgG를 가진 세포 (0.2 ㎎ / ㎖)을 막기. </li><li> 세탁기 또는 원심 분리없이 세포 현탁액 (1 μg / ㎖)에 비 오티 닐화 항-TER119 항체를 추가한다. 얼음에 15 분 동안 품어. </li><li> 5 분 동안 800 XG에 10 % FBS (1시 10분)와 원심 분리기 1X PBS에 세척 할 것. 10 % FBS와 1 ㎖의 PBS에 세포를 재현 탁. </li><li> 추가 75 μL은 자성 입자가 결합과 얼음에 10 분 동안 품어 스트렙 타비 딘. </li><li> PBS는 10 % FBS를 함유하는 2.5 ml의 볼륨을 추가합니다. 바닥 튜브 라운드 5 ㎖의 폴리 프로필렌에 세포 현탁액을 전송합니다. </li><li> 자기 세포 정렬 장치에 튜브를 삽입하고 10 분 동안 배양한다. TER119 양성 세포는 관의 측면에 부착된다. 무소속 TER119 부정적인 적혈구 모세포는 서스펜션에 남아있을 것이다. </li><li> 바닥 튜브 라운드 새로운 5 ㎖의 폴리 프로필렌에 세포 현탁액을 붓고. </li><li><html> 반복 잔류 TER119 양성 세포를 제거하는 3.2.6와 3.2.7 단계를 반복합니다. </li><li> 5 분 동안 800 XG에서 세포 펠렛. 뜨는을 대기음. 10 % FBS를 함유하는 1 ml의 PBS에 세포를 재현 탁하고 트리 판 블루 생균 카운트. </li></ol></li></ol> 바이러스 인코딩 된 cDNA 나 shRNA를 가진 4 형질 도입 <ol><li> 3-5에서 정제 TER119 네거티브 태아 간세포 판형 × 105 / 웰의 12 - 웰 플레이트를 코팅 피브로넥틴 (다른 플레이트를 사용할 경우 셀 수를 조정)한다. </li><li> 바이러스의 형질 도입을 촉진하기 위해 10 μg / ㎖의 최종 농도로 폴리 브렌을 추가한다. 회전은 37 ° C에서 1.5 시간 동안 800 XG에, lentiviruses 또는 레트로 바이러스, 인코딩하는 cDNA 나 shRNA를 가진 세포를 감염. </li></ol> 형질 TER119 네거티브 마우스 태아 간 적혈구 모세포의 5 문화 <ol><li> (그림 1은 점선) 단자 적혈구의 초기 단계에서 유전자의 기능을 테스트합니다.&quot;&gt; </ol.><ol><li><ol. li=""> 농경 12 시간 동안 EPO 배지 (SCF 배지)에 세포를 형질 도입 형질 도입 유전자와 전구의 유지 상태의 발현을 허용한다. </ol.></li><li> 5 분 동안 800 XG에서 세포를 원심 분리기. 뜨는을 대기음. 12 - 웰 플레이트의 각 웰에서 배지를 함유하는 1 ml의 EPO에서 세포를 재현 탁. </li><li> 24 또는 48 시간 동안 배양 한 후, 추가 분석을 위해 세포를 수확. </li></ol></li><li> 터미널 적혈구 (그림 1 실선)의 후반 단계에서 테스트 유전자의 기능을합니다. <ol><li> 문화 EPO 포함하는 배지에서 바로 형질 세포. </li><li> 24 또는 48 시간 동안 배양 한 후, 추가 분석을 위해 세포를 수확. </li></ol></li></ol> 유세포 분석을위한 배양 된 태아 간 세포의 스테 이닝 (6) <ol><li> 세척하고 1X PBS에 세포를 재현 탁. 수확 유세포 분석을 위해 2 × 105 세포를 배양 하였다. </li><li> 품다어둠 속에서 실온에서 20 분 동안 형광 공역 항체와 세포. 차별화를 테스트하려면 APC 복합 항 CD71 및 PE 복합 항 TER119를 사용합니다. 안구 적출술을 테스트하려면 다른 항체에 추가 훽스트 33342 얼룩을 사용합니다. </li><li> 1X PBS로 세포를 씻으십시오. 죽은 세포를 염색 및 분석에서 제외하는 1 % FBS 및 요오드화 프로피 듐 (PI) (1 μg / ㎖)를 함유하는 0.5 ml의 PBS에 세포를 재현 탁. </li><li> 행동 흐름 cytrometric 분석. 흐름 cytometer의 조정 및 보상을위한 최초의 단일 컬러 염색 흠없는 대조군 세포를 분석 할 수 있습니다. </li></ol>

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<li>Koury, M. J., Sawyer, S. T., Brandt, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+erythropoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+hematology%22%5BJournal%5D)">New insights into erythropoiesis.</a> Current opinion in hematology. 9 (2), 93-100 (2002).</li>
</ol>

저자는 그들이 더 경쟁 금전적 이해 관계가 없다고 선언합니다.

여기에서 우리는 시간 순으로 마우스 태아 간 터미널 적혈구를 분석 할 수있는 독특한 시스템을 제시한다. 다른 배양 조건의 적용을 통해, 우리는 성공적으로 초기와 후기 단계에서 터미널 적혈구 해부. 이는 다양한 기능을 가진 유전자의 메카니즘을 결정하는데 중요하다. 예를 들어, 라 세미 GTPases 단자 적혈구 생성의 다른 단계에서 중요한 역할을한다. 터미널 적혈구에 영향 세포 분화와 증식의 초기 단계에있는 라 세미 GTPases의 억제. 한편, 세포 분화, 증식, 또는 생존에 영향을주지 않고 13 터미널 적혈구 블록 적출의 후반 단계에서 라 세미 GTPases의 활성을 억제. 이 프로토콜의 몇 가지 중요한 단계는 명심해야한다. 먼저, E13.5 마우스 태아 간은 TER119 음성 세포의 정제를 위해 바람직하다. 이전 배아를 사용하지만 proporti 수 있습니다총 태아 간 세포 밖으로 전구 세포의 부족있을 것입니다. 메커니즘은 명확하지 ...

적혈구는 적혈구 성숙 다 능성 조혈 줄기 세포의 분화 과정이다. 이 단계적인 과정은 최선을 다하고 적혈구 버스트 형성 단위 (BFU-ES), 빠른 속도로 나누어 적혈구 콜로니 형성 단위 (CFU-ES) 및 형태 학적 인식 적혈구 모세포 1,2의 형성을 포함한다. CFU-E의 전구 세포에서 터미널 적혈구는 순차적 에리트로 포이 에틴에 의존하고 독립적 인 단계 2,3을 포함한다. 단말기 적혈구 생성의 초기 단계에서, 에리트로 포이 에틴 (EPO)가 세포 표면 수용체에 결합하고 세포 사멸을 방지하고 빠른 세포 분열 및 유전자 발현을 촉진 1,4 하류 신호 전달 경로의 시리즈를 유도한다. 터미널 적혈구의 후반 단계에서 적혈구 모세포는 매우 응축 핵 5 단자 세포주기의 종료, 크로 마틴과 핵 응축, 압출을받을. 터미널 우리의 이해적혈구가 크게 때문에 체외에서 여러 가지의 성공적인 사용에 생체 마우스 모델 6-9에서 크게이다 지난 수십 년에 향상되었습니다. 이러한 모델 중 마우스 태아 간 적혈구 모세포의 체외 배양 세포 정화, 빠른 증식과 분화의 용이성 등 많은 장점을 제공하며, 인간의 적혈구 10, 11에 가까운 모방. 이 시스템에서, 마우스 태아 간에서 적혈구 전구 세포 다수 용이 TER119의 단일 단계 정제 (성숙한 적혈구 세포에 대한 마커) 네거티브 적혈구 모세포에 의해 단리 될 수있다. 적혈구 모세포의 이틀 동안 배양이 세포의 분화가 트랜스페린 수용체 (CD71) 및 TER119 항원 (12)의 표면 발현에 기초하여 유세포 분석으로 모니터 할 수있다. 또한, 말기 분화 적혈구 모세포 적출술 1 DNA 머신 (훽스트 33342)에 의해 검출 될 수있다3. 또한, 정제 된 전구 세포는 유전자의 cDNA 또는 적혈구 11,13,14에 유전자 발현 기능 역학적 연구를 용이 관심 유전자에 대한 작은 헤어핀 RNA들 (shRNA를)의 외인성 발현에 의해 변형 될 수있다. 그것이 단말 적혈구 생성의 다른 단계에서 유전자의 기능을 특성화하는 것이 곤란하기 때문에, 다른 한편으로는, 고속 셀 성장률 양면성 수있다. 대부분의 경우에, 그것의 cDNA 또는 shRNA를 발현 시간까지 보낸 단말 적혈구 생성의 초기 단계에서 특정 유전자의 기능, 세포가 이미 초기 단계를 통과했는지 여부를 결정하는 것은 곤란하다. 이 문제를 해결하기 위해서, 우리는 터미널 적혈구 생성의 초기와 후기 단계를 해부하는 독특한 시스템을 개발 하였다. 단말기 적혈구 생성의 초기 단계를 들면, 유전자 변형 TER119 네거티브 적혈구 모세포는 EPO 배지 함유하지만 줄기 세포 인자 (SCF)에서 IL-6 및 FLT3 배양리간드는 그들의 선조 상태를 유지하고, 식 (13)로 형질 도입 된 cDNA 또는 shRNA를 허용한다. 세포는 세포 증식 및 분화를 유도하기 위하여 12 시간 후에 EPO 함유 배지로 변경 하였다. 세포를 구별하기 시작할 때 이러한 방법으로, 형질 도입 된 cDNA 또는 shRNA를 이미 발현되었다. 터미널 적혈구의 후기를 들어, TER119 부정적인 적혈구 모세포는 EPO가 전달 후 즉시 매체를 포함에서 배양 하였다. 따라서, 하나의 단말은 적혈구 생성의 후반 단계에서의 관심의 유전자의 기능을 분석 할 수있다. 요약하면, 이러한 시스템의 광범위한 애플리케이션 단말 적혈구 생성의 다른 단계에서의 해부 유전자 기능을 도울 것이다.

<table><tbody><tr><td>Iscove의 수정된 Dulbecco의 MediumIMDM (IMDM)</td><td>Gibco</td><td>12440-053</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청 (FBS)</td><td>GEMINI Bio-product</td><td>700-102P</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신 용액</td><td>Hyclone</td><td>SV30010</td><td>100x</td></tr><tr><td>L-Glutamine</td><td>Hyclone</td><td>SH30034.01</td><td>200 mM</td></tr><tr><td>마우스 FIT3 리간드 (Flt-3L)</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td>14-8001-80</td><td></td></tr><tr><td>마우스 재조합 인터루킨-6 (IL-6)&nbsp;</td><td>GEMINI Bio-product</td><td>300-327P</td><td></td></tr><tr><td>Fibronectin</td><td>BD Biosciences&nbsp;</td><td></td><td></td>354008</tr><tr><td>소 혈청 알부민 (BSA)</td> <td>STEMCELL TECH</td><td>9300</td><td>10% IMDM</td></tr><tr><td>Erythropoietin(Epo)</td><td>PROCRIT</td><td>NOC 59676-303-00</td><td>3,000 U/ml 재고</td></tr><tr><td>Streptavidin 입자 플러스</td><td>BD Pharmingen</td><td>557812</td><td></td></tr><tr><td>EasySep 자석</td><td>STEMCELL TECH</td><td>18000</td><td></td></tr><tr><td>폴리프로필렌 둥근 바닥 튜브, 5ml</td><td>FALCON</td><td></td><td></td>352063</tr></tbody></table>

마우스 태아 간 문화 시스템은 터미널 적혈구의 초기와 후기 단계에서 대상 유전자의 기능을 해부하기

Mouse Fetal Liver Culture System to Dissect Target Gene Functions at the Early and Late Stages of Terminal Erythropoiesis

적혈구가 빠르게 형성 단위 적혈구 식민지 (CFU-ES)를 나누어 다음에 최선을 다하고 적혈구 버스트 형성 단위 (BFU-ES)로 시작하는 역동적 인 과정을 포함한다. CFU-ES 후, 세포는 형태 학적으로 인식 할 수 있으며 일반적으로 터미널 적혈구 모세포라고합니다. 단말기 적혈구의 연구 과제 중 하나는 연대순 방식 유전자 기능을 해부 실험 방법의 부족이다. 이 프로토콜에서는 단말 적혈구 생성의 초기와 후기 단계에서 유전자의 기능을 결정하기 위해 고유의 전략을 설명한다. 이 시스템에서 마우스 태아 간 TER119 (성숙한 적혈구 세포 마커) 부정적인 적혈구 모세포는 정제하고 cDNA를하거나 관심있는 유전자의 작은 머리 핀의 자형의 RNA (shRNA를)의 외생 적 표현 형질 도입. 세포를이어서 cDNA를 외인성 또는 shRNA를 허용하면서 12 시간 동안 그들의 전구 스테이지를 유지하는 에리트로 포이 에틴 (EPO) 이외의 다른 매체를 포함하는 성장 인자에서 배양 하였다표현. 세포는 외인성 유전 물질이 이미 발현 동안 세포 분화 및 증식을 유도하기 위하여 12 시간 후에 EPO 배지로 변경 하였다. 이 프로토콜은 단말 적혈구 생성의 초기 단계에서 유전자의 기능 분석을 용이하게한다. 후기 단말 적혈구 생성을 연구하기 위해, 세포를 형질 도입 후 즉시 EPO 배지에서 배양 하였다. 형질의 유전 물질이 발현 될 때 이러한 방법으로, 세포는 이미 단말기 적혈구의 말기로 분화되었다. 우리는 터미널 적혈구의 다른 단계에서 세부적인 유전자 기능을 이해하는 데 도움이 될 것이다이 전략의 일반적인 응용 프로그램을 권장합니다.

그림 1은 실험적인 전략을 설명합니다. 프로토콜은 단말 적혈구 생성의 초기와 후기 단계에서 시그널링 분자의 기능을 대상으로 두 가지 독립적 인 상태로 구성된다. TER119 부정적인 태아 간 적혈구 모세포는 E13.5 마우스의 태아에서 정제 하였다. 태아 간 적혈구 세포 전과 정제 후의 유세포 분석은 정제 (도 2a 및도 2b) 효율적임을 보여 주었다. 적혈구 단말 (도 1의 점선)의 초기 단계를 들어, 바이러스 형질 도입 후, 세포를 12 시간 동안 EPO 배지 (SCF 배지)에서 배양 하였다. 이 기간 동안 세포는 형질 도입 된 세포에서 관찰되는 뚜렷한 아폽토시스 (GFP 양성) (도 3)과 최소의 분화 (도 2C)를 보였다. 세포 (EPO 함유 매체에 전송 한 후 그림 4를 차별화하기 시작 강한&gt;) (도 1,</stron...

우리는 터미널 적혈구의 초기와 후기 단계를 해부 체외 마우스 태아 간 erythroblast 문화 시스템을 제시한다. 이 시스템은 서로 다른 개발 단계에서 특정 유전자의 기능 분석을 용이하게한다.

Erythropoiesis involves a dynamic process that begins with committed erythroid burst forming units (BFU-Es) followed by rapidly dividing erythroid colony ...

다음 실험의 전반적인 목표는 시험관 내 마우스 태아 간 배양 시스템을 사용하여 말단 적혈구증의 여러 단계에서 유전자 기능을 해부하는 것입니다. 이는 먼저 배아 13.5일 임신 마우스에서 TER 19 음성 마우스 태아 간 적혈구를 정제함으로써 달성되며, 두 번째 단계로, 정제된 적혈구는 관심 유전자의 CD NA 또는 S-H-R-N-A를 암호화하는 바이러스로 형질전환되어 각각 유전자의 기능 획득 또는 손실을 연구합니다. 마지막으로, 형질도입된 TER one 19 음성 세포는 말기 적혈구 형성의 초기 및 후기 단계에서 유전자의 기능을 해부하기 위해 두 가지 다른 조건 중 하나에서 배양됩니다.궁극적으로, 형질도입된 세포의 분화 및 핵형성의 상이한 동역학은 유세포 분석에 의해 평가될 수 있습니다. 따라서 이 방법은 쥐 심방증에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 또한 림프, 오시스 및 근증과 같은 다른 HESI hepo 시스템에도 적용할 수 있습니다.태아의 간을 정화하기 위해 적혈구는 안락사된 E 13에서 E 15 임신한 쥐의 복부를 70% 에탄올로 소독하는 것으로 시작합니다. 그런 다음 해부 가위로 복부를 열어 자궁을 제거하고 자궁을 PBS에 놓습니다. 다음으로 조직 배양 후드에서 멸균 도구를 사용하여 태아를 해부하고 PBS에 넣습니다.그런 다음 하나의 집게로 한 번에 한 태아의 시신을 잡습니다. 다른 집게로 각 분홍색 태아의 간을 몸에서 부드럽게 잡아당깁니다. 겸자를 사용하여 각 간에서 관련 섬유화 조직을 청소한 다음 간을 10% FBS가 포함된 새로운 PBS에 넣고 조직을 위아래로 몇 번 피펫팅하여 간을 기계적으로 파괴한 다음 40마이크로미터 세포 여과기를 통해 생성된 세포 현탁액을 여과합니다.섭씨 4도에서 800Gs로 5분 동안 셀을 회전시킨 후 펠릿을 1밀리리터의 PBS 및 FBS에 재현탁합니다. TER one 19 음성 적혈구를 정제하려면 얼음 위의 쥐 IgG로 세포를 차단하십시오. 15분 후, biotinylated anti TER one 19 항체를 세포 현탁액에 15분 더 추가합니다.그런 다음 PBS 및 FBS Reese에서 세포를 세척한 후 1ml의 새 PBS와 FBS에 세포를 현탁시키고 얼음 위의 자성 입자와 결합된 75마이크로리터의 스트렙타비딘에서 세포를 배양합니다. 10분 후 PBS와 FBS를 사용하여 총 부피를 최대 2.5ml까지 가져온 다음 셀 현탁액을 5ml 폴리프로필렌 원형 바닥 튜브로 옮

mouse-fetal-liver-culture-system-to-dissect-target-gene-functions-at

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

직접 갓 수확 마우스 골수, 비장이나 태아의 간장에서 분화 단계 특정 murine erythroid progenitors의과 엽 성의 전구 물질의 식별 및 분자 분석을 위해 흐름 cytometric 방식입니다. 분석은 세포 표면 마커 CD71, Ter119 및 셀 크기에 의존합니다.

CD71/TER119 흐름 cytometric 어세를 사용하여 마우스 Erythroid Progenitors의 제품 식별 및 분석

Lentiviral - 중재 최저 동안 예 VIVO</em인간 조혈 줄기 세포의> 적혈구 조혈

이 의정서는 세포 계측법, 다중 분광 영상의 흐름에 의해 정색 적혈구 모세포를 탈핵 적혈구 모세포의 핵의 제거 프로세스의 시각화를 제공하는 인구를 식별하는 새로운 방법을 설명합니다.

멀티 스펙트럼 이미징 유동 세포 계측법에 의한 탈핵 이벤트에 쥐의 적혈구 모세포 모집단 인리 치드의 확인

배아줄기세포(ESC)를 분화할 때 시간적 유전자 발현을 조작하는 것은 유도성 유전자 시스템을 사용하여 달성할 수 있습니다. 그러나 이러한 세포주를 생성하는 데는 비용과 시간이 많이 듭니다. 이 프로토콜은 ES 유래 세포를 분화시키고 다운스트림 조혈 분화에 대한 후속 분석에서 전이유전자의 빠른 발현을 달성합니다.

쥐과 배아의 레트로 바이러스 감염은 조혈 분화 분석을위한 세포 유래 배아 바디 줄기 세포

여기에 설명된 프로토콜은 최소 전사 인자 세트의 과발현을 통해 마우스 배아 섬유아세포에서 혈액 프로그램의 유도를 자세히 설명합니다. 이 기술은 조혈, 혈액 질환 및 조혈 줄기 세포 이식에 대한 향후 연구를 위한 플랫폼을 제공하기 위해 인간 시스템으로 변환될 수 있습니다.

전사 인자와 마우스 배아 섬유 아 세포를 재 프로그램하는 것은 Hemogenic 프로그램을 유도하는

침입하는 대 식세포가 순환하는 전구체로부터 성인 조직으로 지속적으로 모집되는 동안, 상주하는 대 식세포는 발달 중에 그들의 조직을 뿌리고, 전구체로부터의 더 이상의 입력없이 유지된다. 상주 대 식세포의 전구 세포는 최근 확인되었다. 여기, 우리는 상주 macrophage progenitors의 유전 적 운명 매핑 방법을 제시한다.

Flow Cytometry에 의한 마우스 태아의 적혈구 전구 세포 (Erythromyeloid Progenitors)와 그 자손의 동정

생산 유발에 대 한 우리의 프로토콜 여기 제시 erythroid 창시자 (Iep) 성인 섬유 아 세포 전사 인자 제어를 사용 하 여 마우스에서에서 직접 혈통 프로그래밍 (DLR).

리니지 Reprogramming 성인 마우스 구와 Erythroid 창시자에의 직접

리보솜 친화도 정제(TRAP)를 번역하면 세포 유형별 번역 mRNA를 신속하고 효율적으로 분리할 수 있습니다. 여기서, 우리는 간 재모독 및 TRAP의 마우스 모델에서 유체역학적 꼬리 정맥 주입을 결합하여 간세포를 재채우는 발현 프로필을 검사하는 방법을 입증한다.

마우스 간에서 세포 유형 별 유전자 발현 프로파일링

여기에서는 신선한 마우스 골수 및 비장에서 직접 조기 파열 형성 단위 적혈구 (BFU-e) 및 콜로니 형성 단위 적혈구 (CFU-e) 전구 세포를 전향 적으로 분리하기위한 새로운 유세포 분석 방법을 설명합니다. 단일 세포 전사체 데이터를 기반으로 개발된 이 프로토콜은 조직의 모든 적혈구 전구체를 고순도로 분리한 최초의 프로토콜입니다.

유세포분석에 의한 마우스 조직으로부터 파열 형성 단위 및 콜로니 형성 단위 적혈구 전구체의 식별 및 분리

적혈구 모델링은 이 과정에서 행위자의 생물학적 중요성을 이해하고 분화 결함을 완화할 수 있는 새로운 치료 접근법을 평가할 수 있는 귀중한 기회를 제공합니다. 여기에서는 CD34+ 조혈모세포와 전구세포를 체외에서 효율적으로 구별할 수 있는 간단하고 신뢰할 수 있는 방법을 설명합니다.

In vitro 및 ex vivo human erythropoiesis의 효율성을 평가하기 위한 포괄적인 파이프라인

학습하세요 마우스 태아 간 배아적혈구 배양 시스템을 이용하여 말기 적혈구 생성의 초기와 후기 단계에서 유전자 기능을 분석하는 방법을. 바이러스 매개 유전자 전달과 유세포 분석 기술을 활용합니다.

마우스 태아 간 문화 시스템은 터미널 적혈구의 초기와 후기 단계에서 대상 유전자의 기능을 해부하기

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