Name: 절차 흰쥐의 파블로프 에어컨 알코올 추구 행동의 상황에 의한 갱신을 준수합니다 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 24 s
Description: 학습하세요 쥐를 이용한 파블로프 알코올 추구 행동의 상황에 의한 갱신 방법을. 청각 신호와 환경 맥락을 활용하여 중독 재발 메커니즘을 연구하는 신경과학 동물 모델입니다.

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이 연구는 미국 캘리포니아주 샌프란시스코 캘리포니아 대학의 Patricia H. Janak 박사에게 수여된 미국 국립 알코올 남용 및 알코올 중독 연구소(RO1 AA014925), Fonds de recherche du Quebec – Santé(NC) 및 자연 과학 및 공학 연구 위원회(NC, 387224-2010)의 지원을 받았습니다. 이 기사의 오픈 액세스 출판은 Med Associates Inc.의 후원으로 가능했습니다.

모든 절차는 콩 코디 아 대학에서 동물 연구 윤리위원회의 승인 및 동물 관리에 캐나다위원회의 추천과 동의합니다. 1 동물 <ol><li> (- 도착 240 g을 220) 남성 긴 에반스 쥐를 얻습니다. </li><li> 오전 7:00 조명 12 시간 명암주기에 온도 (21 ° C)와 습도 (44 %) 제어 동물 보호 시설에서 쥐에 유지한다. </li><li> 도착시 페어 - 집 쥐. 삼일 후, 개별적으로 베타 - 칩 침구, 나일론 뼈, 표준 쥐 차우와 물을 무료로 이용할 플라스틱 신발 상자 케이지의 집 쥐. 물병에 더하여, 제 병의 후속 배치를 허용하는 두 고리가 케이지 뚜껑을 사용한다. 참고 : 개별적으로 즉시이 동물 보호 시설에 도착 쥐를 수납 할 수있다. </li><li> 매일 쥐를 처리하기 시작합니다. 참고 : 가이드로 취급 일주는 파이 인에게 적응 충분합니다최대 cked 및 실험자에 의해 처리. </li></ol> 홈 케이지에서 2 간헐적 에탄올 액세스 참고 : 홈 케이지에서 실시 간헐적 에탄올 접근을 쥐 실험의 행동 훈련 단계는 17 ~ 19을 시작하기 전에 에탄올의 생리 학적으로 관련 양을 마실 수 있도록. 이 밝거나 어두운주기 동안 언제든지 초기화 할 수 있지만, 빛 단계에서이 절차를 시작합니다. <ol><li> 각 쥐​​에 대한 두 병을 준비합니다. <ol><li> 100 ml의 플라스틱 에탄올 병 473 ㎖의 표준 플라스틱 물병으로 실린더를 졸업 사용합니다. 때문에 누설 및 증발에 에탄올의 손실을 최소화하기 위해, 거의 최대 볼륨 용량을 가득 상대적으로 작은 용량의 에탄올 병을 사용합니다. </li><li> 수돗물에 95 % 에탄올을 희석하여 만든 15 % 에탄올, 한 병을 채 웁니다. NOTE : 다른 에탄올 농도, 예컨대 10 % 또는 20 %로, 15 % 에탄올 대신에 사용될 수도있다. </li><li> 인터넷수돗물 제 병 것이다. </li><li> 각 병에 누설을 최소화하기 위해 볼 베어링을 포함하는 sipper 튜브, 고무 마개를 삽입합니다. </li></ol></li><li> 제어 케이지 쥐 또는 침구 류를 포함하지 않는 제외하고 홈 케이지와 동일하게 취급이 제어 케이지를 설정합니다. <ol><li> 2.1.4 - 2.1.1 단계에 지정된대로 제어 케이지 에탄올과 물을 병을 준비합니다. </li><li> (- 2.8.2 단계 2.8.1에 설명 된대로) 에탄올 액세스 세션의 과정을 통해 발생할 수있는 유출 및 / 또는 증발 제어하는​​ 제어 케이지에서 얻은 방법을 사용하십시오. </li></ol></li><li> 모든 에탄올과 물을 병의 무게를 측정. 모든 무게를 기록한다. </li><li> 모든 쥐의 무게를 측정. 모든 무게를 기록한다. </li><li> 에탄올 병 및 각 가정 케이지의 물 한 병을 놓고 동시에 케이지를 제어 할 수 있습니다. 24 시간 동안 케이지에 두 병을 둡니다. </li><li> 24 시간주기의 끝에서, 두 병에서 제거동시에 케이지. </li><li> 모든 에탄올과 물을 병의 무게를 측정. 모든 무게를 기록한다. </li><li> 이를 24 시간 이전에 각 래트의 홈 케이지에 배치 될 때이 병의 중량으로부터 집 케이지로부터 분리 할 때 24 시간 동안 소비 된 양의 에탄올과 물을 결정하기 위해, 각각의 병의 중량을 뺀다. <ol><li> 이 제어 케이지에 대한 동일한 작업을 수행하고 각 유체에 대한 유출의 평균 금액을 계산합니다. </li><li> 각 쥐​​에 해당하는 에탄올과 물 소비 측정에서 각각 에탄올과 물 유출의 평균 금액을 뺍니다. </li><li> g / kg, 물의 소비 및 에탄올 선호도 에탄올 소비량을 계산하기 위해 이러한 차이 유출 제어 수단을 사용한다. </li></ol></li><li> 에탄올 소비량 (g / kg), 제 전체 용액 (에탄올 + 물 성분)의 농도에 기초하여 부피 (㎖) 에탄올로 소비 된 용액의 중량 (g)으로 변환을 계산하기있어서식 볼륨 (ML) = 무게 (g) / 밀도 (g / ㎖). NOTE : 용액의 에탄올 농도는 농도의 함수로서 변할 것이다. <ol><li> 다음으로, 소비 중량 (g) 에탄올을 수득하기 위해 사용되는 특정 비율 솔루션 스케일링 에탄올의 밀도 (g / ㎖)에 의해 소비 에탄올 용액의 양 (ml)에 곱한다. </li><li> 에탄올 소비량 g / kg 측정 값을 얻기 위해 래트 체중 (kg)에 의해 소비되는 에탄올의 중량 (g)을 나눈다. </li></ol></li><li> 에탄올 선호도를 계산하기 위해, 전체 유체 (에탄올 + 물, ML) 흡기의 비율로 에탄올 섭취 (ml)로 표현한다. </li><li> 쥐의 홈 케이지 만 다시 물병을 돌려줍니다. 다음 24 시간 동안 물에 쥐에 대한 액세스 권한을 부여하지만, 에탄올 없습니다. 대신 에탄올 병의 홈 케이지에 미리 무게 초 물병을 배치합니다. </li><li> 24 시간주기의 끝에서, 동시에 케이지에서 모두 물병을 제거. </li><li> 물 병의 두 세트의 무게를. 녹음 모든 웨이ghts. </li><li> 이 단계 2.8.1에서 설명 된 바와 같이 제어 케이지에서 얻은 평균 유출 측정 값을 감산하는, 24 시간 이전 홈 케이지에 배치 될 때이 병의 중량으로부터 집 케이지로부터 분리 할 때 각각의 병의 중량을 빼기 - 2.8.2. </li><li> 물 소비를 계산하기 위해이 유출 제어 차이 방법을 사용하십시오. </li><li> 2.14 단계 2.1에 기재된 바와 같이, 래트를 에탄올과 물 병 모두를 제공하여 다시 사이클을 시작한다. <ol><li> 에탄올 소비의 높은 안정적인 수준을 유도하는 다수의 (약 12) 세션이주기를 반복합니다. 홈 케이지에서 에탄올 소비의 대표적인 결과 (g / kg)는 그림 1을 참조하십시오. </li><li> 사이드 환경의 발달을 방지하기 위해 세션을 통해 케이지 뚜껑에 에탄올과 물을 병의 공간적 위치를 교대. </li><li> 걸쳐 정확하고 안정적​​인 에탄올 농도가되도록 일주일에 한 번씩 신선한 에탄올 용액을 만들기세션. 이 방법을 사용하는 시간의 연장 기간 동안 에탄올을 증발의 영향을 최소화한다. </li></ol></li></ol> 3 장치 <ol><li> 통풍, 사운드 감쇠 부스 내부 하우스 각 조절 실. </li><li> 각 조절 스테인레스 스틸 금속 막대 바닥의 실, 명확한 폴리 카보네이트 천장, 명확한 폴리 카보네이트 다시 벽과 현관 문, 알루미늄 금속 패널 측벽을 구축합니다. <ol><li> 중앙에서 오른쪽 금속 측벽의 기지 근처에 유체 포트를 설치합니다. 포트에 항목을 감지하는 적외선 광전지와 유체 포트에 입구를 착용. </li><li> 뭉툭한 팁 바늘을 사용하여 에탄올을 포함하는 20 ML의 주사기에 유체 포트의 뒷면에서 폴리에틸렌 튜브를 연결합니다. 음향 감쇠 부스 밖에있는 주사기 펌프에 주사기를 놓습니다. 파블로프 차별 교육 세션의 경우, 펌프로 배치하기 전에 주사기로 에탄올을로드합니다. 프라임 튜브 나y를 수동으로 펌프를 진행하고 유체 포트에서 초과 에탄올을 닦아. </li><li> 왼쪽 사이드에서 챔버의 천장 근처 중앙 흰색 houselight를 설치합니다. </li><li> 식자 (2 Hz에서 사이클)와 왼쪽 사이드의 왼쪽 상단 모서리에 스피커와 화이트 노이즈 발생기를 설치합니다. </li></ol></li><li> 독특한 상황을 만들 시각, 후각, 촉각 자극의 특정 구성으로 각 조절 챔버 복장. <ol><li> 두 개의 서로 다른 문맥, 상황에 맞는 하나와 문맥이 같은 다른 절반 조절 실의 지정된 컨텍스트 일​​ 및 상황에 맞는 2 구성의 절반을 사용합니다. </li><li> 페트리 접시에 검은 마분지 천장과 전면을 통해 패널과 후면 챔버의 벽 (수돗물에 희석 레몬 오일로 만든 10 % V / V) 스프레이 레몬 냄새를 배치하고 중앙에 배치, 상황에 맞는 하나를 만들려면 챔버의 바닥 아래 금속 폐기 트레이, 그리고 금속 R 위에 투명한 폴리 카보네이트 층 패널을 삽입외경 층. 흡수 종이 타월이나 벤치 라이너 폐기물 트레이 라인. </li><li> 상황이를 만들려면, 그들은 분명 있도록 페트리 접시에 (수돗물 벤즈알데히드를 희석하여 만든 10 % V / V) 아몬드 냄새 스프레이 중앙 배치, 발견 챔버의 천장과 전면 및 후면 벽을두고 챔버의 바닥 아래 금속 폐기 트레이 및에 금속봉 위에 바닥 천공 금속 플로어 패널을 삽입한다. 흡수 종이 타월이나 벤치 라이너 폐기물 트레이 라인. </li></ol></li></ol> 4 습관화 행동 훈련 방에 쥐 습관화 및 공기 챔버 내에서이 컨텍스트의 각. 실험이 단계의 경우, 20 ml의 주사기로 에탄올을로드하지 않습니다. <ol><li> 이 짧은 습관화 세션의 실험실에서 행동 훈련 방에 동물 보호 시설에서 이송되는 과정에 쥐를 길들. <ol><li> 첫 번째 세션에서, 래트를로드 나n은 그들의 집 동물 관리 시설에서 휠 카트 상 케이지, 및 실험실 행동 트레이닝 실에 전송. , 실내 조명을 밝히는 각 사운드 감쇠 부스에서 팬을 켜고 방을 종료하고, 문을 닫고 카트에 자신의 홈 케이지에 남아있는 동안 쥐가 20 분 동안이 새로운 환경에 적응 할 수 있습니다. 이 20 분의 기간이 종료되면, 동물 관리 시설에 쥐를 반환. </li><li> 두 번째 세션에서, 실험실에서 행동 훈련 방에 쥐를 가지고. 이전으로, 객실의 조명과 칸막이 팬을 둡니다. 문이 혼란을 최소화하기 위해 폐쇄와 함께 방에 남아 있고, 처리하고 행동 훈련 방에 각각 쥐의 무게. 무게를 기록하고 동물 보호 시설로 쥐를 반환합니다. </li></ol></li><li> 이 짧은 습관화 세션에서 조절 챔버에 쥐를 길들. <ol><li> , 행동 훈련 방에 쥐를 운반 각 쥐의 체중을 기록,그리고 그 지정 조절 실에 각각 쥐를로드합니다. </li><li> 첫번째 습관화 세션에서 절반 상황 1과 챔버와 문맥이 같은 나머지를 설정합니다. </li><li> 제 습관화 세션에서 이전 세션에서 사용하지 않은 콘텍스트 각 챔버를 설정. </li><li> , 쥐의 이러한 절반은 제 이상적 상황 1이어서 제 문맥이 노출되는 상황이, 다른 절반이어서, 콘텍스트 (1)에 노출되어, 카운터 방식 습관화 세션을 수행 모두 습관화 세션을 수행 필요한 경우가 이일에 분산 될 수 있지만 같은 날. </li><li> 습관화 세션의 경우, 프로그램이 실행 된 후 1 분 houselight을 조명하는 컴퓨터 프로그램을 사용한다. 20 분 세션 중에 유체 포트 항목의 총 수를 기록한다. 세션의 끝에서, 해제 houselight 프로그램. 습관화 세션 중에 에탄올 또는 단서를 제공하지 마십시오. </li></ol></l난&gt; <li> , 챔버에서 쥐를 제거 자신의 홈 케이지에 반환하고, 동물 보호 시설로 다시 운반 할 것. </li><li> 장비 (예를 들면, 플로어 패널, 폐기물 운반, 페트리 접시)를 청소합니다. 자세한 내용은 단계 5.7를 참조하십시오. </li></ol> 5 파블로프 차별 교육 (PDT) 행동면에 기차 쥐 에탄올이 아닌 초 청각 신호와 결합되어 한 청각 신호를 구별합니다. 실험이 단계의 경우, 15 % 에탄올로 20 ml의 주사기를 입력합니다. <ol><li> 단계 3.3.2 및 3.3.3에 기술 된 바와 같이, 특유의 콘텍스트를 생성하는 시각적, 후각의 특정 구성, 및 촉각 자극과 각 조절 실을 옷 <ol><li> 에탄올 소비 및 선호도에 따라, 컨텍스트 1과 카운터 방식이 문맥에 나머지 절반에 쥐의 절반이 할당 홈 케이지 에탄올 액세스 과정의 마지막 2 세션에서 평균화. 계속 참조내선 상황에 맞는 A. 참고로 PDT 동안 사용 : 각 쥐은 훈련이 단계에서 하나의 상황을 경험해야합니다. </li><li> 후각 자극이 각 조절 실에 추가 할 수있는 마지막 상황에 맞는 자극이 있는지 확인합니다. 후각 자극을 포함하는 서로 다른 냄새의 comingling을 최소화하기 위해 챔버와 음향 감쇠 부스의 문을 닫습니다. </li></ol></li><li> , 행동 훈련 방으로 쥐를 가져와 각 쥐의 체중을 기록하고 그 지정 조절 실에 각각 쥐를로드합니다. </li><li> 각 PDT 세션 동안 다음과 같은 일련의 이벤트를 제어하는​​ 컴퓨터 프로그램을 시작합니다. <ol><li> 프로그램 후 5 분가 발급 된에서, houselight을 밝히는. </li><li> 백색 잡음 자극을 제시하고 리모콘은 16 회를 자극. CS +로 이러한 청각 자극 중 하나를 지정하고 다른 두 컨텍스트 걸쳐 카운터 방식, CS-한다. </li><li> 각 CS + 및 CS - 시험 리터를 확인대서양 표준시 10 초. </li><li> CS +의 마지막 6 초 동안 유체 포트에 0.2 ㎖의 에탄올을 제공합니다. CS- 중에 에탄올을 제공하지 마십시오. </li><li> 각 PDT 세션 평균 마지막 58 분을합니다. 변수 시간 67 초 일정에 CS + 및 CS - 각을 제시한다. </li><li> 10 초 CS 간격 동안 기록 유체 포트 항목 (CS 프레 젠 테이션 도중 10 초), 10 초 미리 CS 간격 (직전 CS 발병에 10 초), 그리고 10 초 후 CS 간격 (즉시 10 초 다음 CS는 CS + 및 CS - 프리젠 테이션뿐만 아니라, 전체 세션에 대한 총 유체 포트 항목 모두에 대해) 오프셋 (offset). 또한 이러한 간격 중에 각 포트 항목의 지속 시간을 기록한다. </li><li> 세션의 끝에, houselight을 해제. </li></ol></li><li> , 챔버에서 쥐를 제거 자신의 홈 케이지에 반환하고, 동물 보호 시설로 다시 운반 할 것. </li><li> 쥐가 각 PDT의 배달 에탄올 3.2 ml의 소비되도록 유체 포트 확인ession. </li><li> 소량의 물을 함유하는 60 ml의 시린지로 폴리에틸렌 튜브에서 에탄올 세척. 그리고, 건조 있는지 확인하기 위해, 둘째, 빈 주사기를 사용하여 튜브를 통해 공기의 60 ML을 전달합니다. </li><li> 장비를 청소합니다. 매일 청소를 들어, 바닥 패널, 폐기물 트레이 및 배양 접시를 씻으십시오. 주되면 전체 조절 챔버 청소. 실험 장치에 원치 않는 냄새를 도입 피하기 위해 향수 청소 제품을 사용하지 마십시오. </li><li> 쥐 CS- 대 CS +에 자신의 포트 항목 응답 안정적 차별을 표시 할 때까지 매일 PDT 세션을 계속합니다. 참고 : CS-에 대한 응답으로 만든 포트 항목이 낮게 유지해야하는 반면 CS +에 대한 응답으로 만든 포트 항목이 세션을 통해 증가 할 전망이다. 필요한 PDT 세션의 정확한 수는 가이드로에 약 20 세션을 계획 다를 수 있습니다 응답 조건 차별, 그러나 달성하기 위해. </li></ol> 6 소멸 <ol><li> 각 조절을 참 복장BER 시각, 후각, 촉각 자극으로 쥐 PDT 세션 동안 경험 한 별개의 컨텍스트를 만들 수 있습니다. 컨텍스트 1 PDT에 사용 된 경우, 예를 들어, 소쇠 세션 문맥이 같은 챔버를 구성. B. 콘텍스트로서 흡광 동안 사용 컨텍스트를 참조 </li><li> 동일 PDT 세션에 멸종 세션을 실시하지만, 연사 + 중에 에탄올을 제공하지 않습니다. <ol><li> CS +와 CS-을 제시 PDT 동안 사용 된 동일한 컴퓨터 프로그램을 사용합니다. </li><li> 실험 단계에 걸쳐 일관성을 유지하기 위해, 주사기 펌프에 빈 주사기를로드하고, 펌프를 온 떠난다. 폴리에틸렌 튜브 멸종 세션 전에 에탄올이 포함되어 있는지 확인합니다. </li></ol></li><li> 쥐가 더 이상 쇼 CS + 및 CS - 사이에 응답 차별까지 매일 멸종 세션을 계속합니다. 참고 : 더 differe이 없을 때까지 CS +에 대한 응답으로 만든 포트 항목은 점차 멸종 세션에 걸쳐 감소 할 전망CS-에 대한 응답으로 만든 CS +에 대한 응답으로 만든 포트 항목 및 포트 항목 사이 후부. 다를 수 있습니다 응답 이었지만, 가이드로에 약 8 세션을 계획 소화 필요한 멸종 세션의 정확한 숫자. </li><li> 단계 14.4에 기재된 바와 같이, 각 세션의 끝에 장비를 청소한다. </li></ol> 7 컨텍스트에 의한 갱신 테스트 <ol><li> PDT 세션 동안 경험 한 상황을 만들 시각, 후각, 촉각 자극 각 조절 챔버를 착용. 예를 들어, 주어진 쥐 PDT 세션에서 문맥을 경험 한 경우, 테스트 세션 컨텍스트 한 그의 챔버를 구성. 컨텍스트 A와 갱신 테스트 중에 사용되는 컨텍스트를 참조하십시오 </li><li> 동일 PDT 세션에 상황에 의한 갱신 시험을 실시하지만, 갱신 테스트 중에 에탄올을 제공하지 않습니다. 제시 에탄올을 보류 CS +와 PDT 세션 동안 이전과 CS-하지만. <ol><li> 같은 컴퓨터의 홍보를 사용하여CS + 및 CS -을 제시 PDT 동안 사용되었다 ogram. </li><li> , 단계에 걸쳐 일관성을 유지 주사기 펌프에 빈 주사기를로드하고 나가려면 펌프가 켜져. 폴리에틸렌 튜브 테스트 세션 전에 에탄올이 포함되어 있는지 확인합니다. </li></ol></li><li> 파블로프 에어컨 알코올 추구 행동의 맥락에 의한 갱신을 준수하십시오. 주 :이 갱신 효과는 CS + 및 CS- 상대적 CS-에 응답하여 만들어진 포트 엔트리 동작 변경없이, CS +에 응답하여 만들어진 포트 항목의 수를 선택적 증가에 의해 명백 할 것이다는 관찰이 응답 멸종 훈련의 끝. </li><li> 단계 14.4에 기재된 바와 같이, 세션의 끝에서 장비를 청소한다. </li></ol>

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모든 실험 절차는 콩 코디 아 대학 (Concordia University) 동물 연구 윤리위원회의 승인 및 동물 관리에 캐나다 협의회 지침에 따라 아르되었다.이 기사의 오픈 액세스 출판은 메드 어소 시에이 츠 주식 회사에서 후원에 의해 가능하게되었다

이 절차의 결과는 정기적으로 알코올 배달을 함께 분리 된 환경 자극은 알코올 추구 행동을 구동 할 수있는 능력을 획득 할 수 있음을 알 수있다. 그들은 또한 유용성 또는 알코올의 부재와 관련된 문맥 자극 이산 알코올 예측 신호에 행동 반응을 조절 안내 할 수 있음을 보여줍니다. 프로토콜 내에서 중요한 단계 본 작업의 컨텍스트는 쥐 외부의 자극을 통합합니다. 그러나 시험에서 쥐의 interoceptive 상태도 갱신 (20)에 영향을 미칠 수있는 &#39;맥락&#39;을 구성 할 수있다. 그것은 두개 내 미세 주입하거나 전신 주사처럼, 갱신 시험 전에 발생과 interoceptive 상태를 변경할 수있는 절차에 쥐 습관화하는 것이 중요하다. 또한, 미세 주입하거나 전신 주사에 습관화 멸종와 PDT의 모두 이전에 수행되어야한다essions는 실험의 하나의 특정 단계와 연관되는 것을 같은 절차를 방지합니다. 이러한 CS 기간, CS-US 간격 및 intertrial 간격 (ITI)와 같은 시간적 매개 변수는, 긴 에어컨 패러다임 21-26의 다양한 반응 조절에 영향을 미칠 것으로 알려져있다. 마찬가지로, 시간 매개 변수는 우리의 절차의 갱신 효과의 관찰에 영향을 미칠 수있다. 계획서에 명시되지 않은 매개 변수의 세트는 실험적으로 더 큰 수사를 고용하기 전에 파일럿 연구에서 검증해야합니다. 수정 및 문제 해결 이전 연구는 쥐 홈 케이지 소비 에탄올의 양은 17,27 쥐를 구입하는 보조 장비의 기능에 따라 달라질 수 있다는 것을 발견했다. 공급자는 따라서이 단계의 연구를위한 중요한 고려 사항이다. 유사하게, 랫트 균주의 선택은 협력해야에탄올 소비 28 ~ 31의 변형 차이의 수많은 보고서가있는 한,주의 깊게 nsidered. 혐오 에어컨 패러다임의 이전 작업은 쥐의 발달 연령은 파블로프 조건화 된 공포 반응 (32)의 갱신의 관찰에 영향을 미치는 것으로 나타났습니다. (생후 20 일 미만) 아주 어린 쥐의 갱신 효과의 부족으로 인해 문맥 정보 (33)의 장애인 인코딩으로 제시되고있다. 본 절차에 사용되는 래트의 발달 나이 따라서 고려해야한다. 10 % 9,16, 15 % 14, 또는 20 ~ 15 % 에탄올 솔루션은 홈 케이지 에탄올 접근과 실험의 PDT 단계 동안 사용했을 때 파블로프의 조건화 알코올 추구 행동의 연장이 관찰되었다. 연구자들은 실험 실용에서이 절차를 확립 할 목적으로 이러한 에탄올 농도 중 하나를 사용할 수도이거 야. 파블로프 차별 교육의 취득시는 전달 된 모든 에탄올 소비되었는지 확인하기 위해 각 세션 후에 유체 포트를 확인하는 것이 중요합니다. 추가로 10에 대한 조절 챔버에서 쥐를 떠나 - 각 세션 후 15 분은 세션 동안 소비되지 않은 모든 에탄올의 소비를 장려하기 위해 초기 PDT에서 수행 할 수 있습니다. PDT이 진행됨에 따라 사용되지 않은 포트에 에탄올을 떠나는 쥐의 수는 감소한다. PDT 쥐의 말에 어느 경우 () 모든 에탄올을 소비하지 및 / 또는 (b)는이 주제는 연구에서 제외해야 다음 CS +에 응답하지 않습니다. 대부분의 쥐 안정적으로 CS-보다 연사 +에 더 반응한다. 그러나 일부 쥐함으로써 차별의 증거를 보여주는하지, 두 신호에 높은 수준에 응답 할 수 있습니다. 높은 PDT 동안 CS + 및 CS - 모두에 반응 보여 쥐 연구에서 제외되지 않습니다. 우리의 경험에 의하면,이 주제는 현저한 차별을 보여PDT시 CS- 응답의 높은 수준의 유체 포트에서 에탄올의 존재에 의해 구동되는 것을 시사 에탄올의 부재하에 제 소등 세션 동안. 이 과목은 강력한 재생 효과를 표시하는 경향이있다. 절차의 한계 내구성 시험은 에탄올의 부재하에 수행되기 때문에, CS +에 의해 유도 된 조건 포트 항목 서서히 테스트 세션에 걸쳐 감소. 따라서, 행동의 전체 양이 실험적으로 유발 된 변화가 평가 될 수있는에 대해 테스트에서 생성 상당히 낮습니다. 응답이 태스크에 테스트 세션의 단부 대 시작에서 높게되는 경향이 있기 때문에 시험 별 시험 기초 응답 조건화 실험 조작에의 영향을 조사하는 것이 중요하다. 유체 콘센트에 항목이 작업의 주요 종속 측정을 제공합니다. 그러나, 잘못된 포트 항목은 REGI 수 있습니다동물의 수염이 유체 개항에 걸쳐 적외선 빔을 깰 유체 용기에 충분히 가까운 경우 st​​ered. 자주, 잘못된 응답이 분명하지만 전체 포트의 극적인 증가는 이전 세션에서 피사체의 동작을 기준으로 항목으로. 동물을 동영상으로 녹화하는 것은 가능합니다 잘못된 응답의 검출을 용이하게하고, 교육 및 테스트를 통해 쥐에 의해 전시 된 행동의보다 세분화 된 분석을 허용합니다. 기존의 / 대안적인 방법에 대한 기술의 중요성 약물 추구 행동의 상황에 의한 갱신은 대부분 이러한 레버를 눌러 8,34 또는 12 코를 찌를으로 차 종속 변수가 조작 적 반응 인 수단 조절 작업을 사용하여 연구되고있다. 본 절차에서, 약물 - 추구 응답의 프레젠테이션에 의해 유도되는 유체 포트 &#39;방식은 에어컨&#39;이다CS의 +. 이 응답은 가능성이 환경 자극과 인간의 남용 약물의 약리 효과 사이의 연결의 형성을 매개하는 학습 과정이다 파블로프 학습을 통해 획득된다. 미래의 응용 프로그램 이 작업은 파블로프 에어컨 알코올 추구 행동 16의 상황에 의한 재생에 관여하는 신경 메커니즘을 연구하는 신경 약리학, optogenetics 및 신경 화학과 함께 사용할 수 있습니다. 또한, 파블로프 에어컨 알코올 추구 행동의 수집 및 멸종을 조절 행동 및 신경 메커니즘을 조사 할 수 있습니다. 마지막으로,이 작업은 인간의 ADDI의 큐 노출 치료 후 약물 예측 신호에 반응에 환경 상황을 관련 약물의 영향을 감소하기위한 중개 연구를위한 중요한 방향을 갱신하지 못할 수 있습니다 멸종의 조작을 탐구하는 데 사용할 수 있습니다CTS.

깨어 남은 알코올 남용 장애로 고통 개인이 직면 상당한 도전이다. 금욕은 파블로프 조절을 통해 취하게 1, 2와 관련 될 수있는 일상적으로 음주를 함께 환경 적 자극의 행동 심리학 적 및 생리 학적 영향에 대한 취약성의 시간입니다. 알코올 예측 단서에 노출되면 재발 3,4을 촉진 알코올을 추구하는 행동을 촉진 할 수 있습니다 알코올 갈망과 같은 조건 반응을 유도 할 수 있습니다. 알코올 소비로 이어질 행동의 틀에 박힌 순서는 자극의 특정 유형의 일상적 알코올 섭취의 약리 효과되기 직전에 발생 될 수 있습니다. 예를 들어, 시각, 냄새와 알코올의 맛이 확실하게 중독 앞에 알코올의 감각 속성입니다. &#39;불연속&#39;또는 &#39;PROXIMA로 지칭되는 이러한 신호 이외에리터 &#39;큐, 마약 정기적으로 또한 갈망 5,6을 자극 할 수 있습니다 사용되는 환경 상황. 약이 이전에 따라서 재발 칠위한 중요한 트리거 될 수 있습니다 사용되어왔다있는 물리적 위치에 노출. 동물 모델은 약물 - 추구 행동 8-13 약물에 관련된 컨텍스트의 영향을 중재 신경 기전을 연구하기 위해 개발되었다. 여기에 설명 된 절차는 알코올 소비와 관련된 상황은 이산, 알코올 예측 파블로프 큐에 의해 유발되는 알코올 추구 행동을 조절하는 방법의 조사를 할 수 있습니다. 파블로프 차별 교육은 쥐가 행동면이 청각 조건 자극, 알코올과 짝을 이루는 CS의 +, 그리고 아닌 CS-을 구별하는 훈련 특정 환경 컨텍스트에서 수행된다. 멸종 세션은 다음 CS에 응답하는 다른 문맥에서 실시하고 있습니다알코올의 결과 보류 된 것으로 +는 줄어든다. 그 후, 알코올 관련, 파블로프 교육 컨텍스트에 재 노출은 CS-에 응답에 변화와 CS +에 의해 유도 된 알코올 추구 행동의 선택적 증가를 트리거합니다. 우리는 지속적으로 9,14-16를 복제 한이 결과는, 약물 컨텍스트 약물 전달 10,13와 관련된 조작 적 반응의 재생을 촉진하는 것으로 밝혀졌다있는 수단이 조절 절차에서 연구 결과를 확장합니다.

<table><tbody><tr><td>헤비 듀티 유틸리티 카트</td><td>Rubbermaid</td> <td># 4520-88</td><td>식민지 방에서 행동 실 또는 기타 시설로 가정용 케이지의 쥐를 운반하는 데 사용됩니다</td></tr><tr><td>쥐, Long-Evans</td><td>Harlan</td><td></td><td>쥐는 도착 시 220-240g의 무게를 잰</td></tr>다 <tr><td>Ohaus 저울</td><td>Fisher</td><td>#S402421</td><td>쥐의 무게를 재기 위해; 먼저 플라스틱 용기의 바닥을 솟은 다음 쥐를 그 안에 넣어 무게를 잰</td></tr>다 <tr><td>베타 칩, 아스펜</td><td>할란</td><td>#7090A</td><td>가정용 케이지용 침구</td></tr><tr><td>Nylabone</td><td>Bio-Serv</td><td>#K3580</td><td>가정용 케이지에서 제공되는 강화</td></tr><tr><td>가능 오토클레이브 가능한 설치류 차우</td><td>Agribrands, Charles River</td><td>#5075</td><td>쥐 먹이용</td></tr><tr><td>와이어 바 케이지 뚜껑</td><td>Ancare</td><td>#R20SS2B</td> 병 케이지 바닥 Ancare<td>를 위한 두 개의 슬롯으로 맞춤 제작</td></tr><tr><td></td><td></td><td>#R20PC</td><td>쥐를 기르기 위해</td></tr><tr><td>스토퍼</td><td>Ancare</td><td>#8.5</td><td>물병 및 눈금이 매겨진 실린더의 개구부를 막는 고무 스토퍼; 볼포인트 시퍼 튜브와 잘 어울립니다&nbsp;</td></tr><tr><td>볼 포인트 튜브, 1.5" 길이</td><td>Ancare</td><td>#TD-99</td><td>스토퍼에 삽입되어 쥐가 물병과 눈금이 매겨진 실린더에서 마실 수 있습니다</td></tr><tr><td>물병</td><td>Ancare</td><td>#FSPC8HT</td><td>473ml(16oz) 용량, 스토퍼로 막아야 합니다</td></tr><tr><td>눈금이 매겨진 실린더, 100ml</td><td>Fisher</td><td>#0300741</td><td>가정용 케이지에서 알코올에 노출되는 동안 에탄올을 함유하기 위해; 스토퍼로 폐색할 수 있도록 주둥이가 있는 끝을 잘라야</td></tr> 합니다. <tr><td>메틀러 스케일</td><td>메틀러 톨레도</td><td>#MS6001S</td><td>물병과 에탄올 실린더를 계량하기 위해</td></tr><tr><td>폴리에틸렌 튜빙, 1/32" 내경,&nbsp; 1/32" 벽 두께, 3/32" 외경</td><td>Fisher</td><td>#14-169-1A</td><td>20 ml 에탄올 주사기를 유체 포트에 연결하기 위해</td></tr><tr><td>바늘, 18 g, 1.5" 길이</td><td>Fisher</td><td>#B305199</td><td>폴리에틸렌 튜빙을 에탄올 주사기에 연결하려면; 파일링</td></tr><tr><td>이 필요합니다. 주사기, 20 ml, Luer-Lok 비멸균</td><td>Fisher</td><td>#1482316J</td><td>유체 펌프에 에탄올을 포함하려면; 18 G 1 1/2 바늘</td></tr><tr><td>주사기, 60 ml, Luer-Lok 비멸균</td><td>Fisher</td><td>#14-820-11</td>로 폴리에틸렌 <td>튜빙을 플러시해야 합니다. PDT 세션 후에 폴리에틸렌 튜빙을 플러시하려면</td></tr><tr><td>단일 속도 주사기 펌프, 3.33rpm</td><td>메드 어소시에이츠 Inc.</td><td>#ENV-018MD</td><td>20ml 에탄올 주사기를 보관하고 에탄올 유체</td></tr><tr><td>포트</td><td>Med Associates Inc.</td>를 전달하기 위해<td>#ENV-254-CB</td><td>PDT 세션 중 에탄올 전달을 가능하게 함; 폴리에틸렌 튜브가 있는 에탄올 주사기에 연결</td></tr><tr><td>포트 입구 적외선 감지기</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-215M</td><td>유체 포트의 양쪽에 고정; 유체 포트당 2개 필요</td></tr><tr><td>Houselight, 28 V, 100 mA</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-135M</td><td>컨디셔닝 챔버에 일반 조명 제공</td></tr><tr><td>클리커 모듈</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-225SM</td><td>컨디셔닝 챔버용 청각 자극</td></tr> 스피커<tr><td>가 있는 백색 소음 발생기</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#PHM-100</td><td>컨디셔닝 챔버를 위한 청각 자극</td></tr><tr><td>바 바닥</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-009A-GF</td><td>모듈 식 테스트 챔버</td></tr><tr><td>벤치 코트, 흡수성</td><td>VWR</td> <td># 89126-790</td><td>금속 트레이에 넣을 흡수 종이, 금속 트레이</td></tr><tr><td>폴리 카보네이트 시트, 1/8 "두께, 12-5 / 8"x 10"</td><td>Johnston Plastics</td> <td># 30102515</td><td>컨텍스트에 사용되는 부드러운 투명 바닥 삽입물을 만들기 위해 1. 11.5" x 12.25" 조각으로 절단해야 합니다</td></tr><tr><td>천공 알루미늄 시트, 0.063" 두께, 48" x 96", 0.250" 구멍 x 0.375" 센터</td><td>Anica Steel</td><td></td><td>컨텍스트에 사용되는 천공 바닥 인서트를 만들기 위해 2. 11.5" x 12.25" 조각으로 절단해야</td></tr> 합니다 <tr><td>검은색 판지, 0.053" 두께, 28" x 44"</td> <td>Omer DeSerres</td><td>#P1909</td><td>컨텍스트에서 컨디셔닝 챔버의 천장, 문 및 뒷벽을 덮는 패널을 구성합니다 1. 크기에 맞게 잘라야 합니다. 각 챔버에는 약 11.5" x 13.25" 크기의 패널 3개가 필요합니다. 패널은 덕트 테이프를 사용하여 더 좁은 쪽으로 결합할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>다목적 강도 덕트 테이프, 1.88" x 45 yd.</td><td>오리 테이프</td><td></td><td>뒷벽, 천장 및 문을 문맥에서 덮는 데 사용되는 검은색 판지 패널을 연결하는 접착 재료 1.</td></tr><tr><td>모듈형 테스트 챔버</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-009A</td><td>컨디셔닝 챔버</td></tr><tr><td>소음 감쇠 큐비클</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#ENV-200R3AM</td><td>설치된 28 V DC 팬 (#ENV-025F)</td></tr> <tr><td>페트리 디쉬</td><td>Fisher</td><td>#08748B</td><td>냄새 자극을 제공하는 스프레이 용액을 담기 위해 바닥에만 해당; 컨디셔닝 챔버의 금속 트레이 중앙에 있어야 합니다</td></tr>. <tr><td>PCI 인터페이스 패키지</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#DIG-700P2-R2</td><td>테이블탑 인터페이스 캐비닛을 컴퓨터에 연결, 인터페이스 카드 1개, 디코딩 카드 1개, 리본 케이블 1개 및 28V DC 전원 케이블 1개 포함</td></tr><tr><td>대형 테이블탑 캐비닛 및 전원 공급 장치</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#SG-6510D</td><td>SmartCrtrl 12 입력, 8 출력 패키지</td></tr><tr><td>SmartCtrl 8 입력, 16 출력 패키지에 포함된 16</td>개의 카드를 포함하는 데 사용됩니다<td>.</td><td>#DIG-716P2</td><td>컨디셔닝 챔버의 장치를 연결하고 제어하는 데 사용됩니다. 패키지에는 모든 케이블, 인터페이스 모듈 및 연결 패널이 포함되어 있습니다.</td></tr><tr><td>Med PC IV 소프트웨어</td><td>Med Associates Inc.</td><td>#SOF-735</td><td>프로그램을 실행하는 소프트웨어입니다. 컴퓨터에 설치해야 합니다.</td></tr><tr><td>모니터 LG, 19 "LCD</td><td>Concordia 컴퓨터 저장소</td><td>#W1942TQ-BF</td><td>컴퓨터 모니터; Med PC IV</td></tr><tr><td>HP Z200 타워 워크 스테이션</td><td>Concordia 컴퓨터 저장소</td><td>#BZ788US#ABA</td><td>Med PC IV가 실행되는 컴퓨터</td></tr><tr><td>벤즈 알데히드, &ge; 99%</td><td>Les produits chimiques OMEGA 화학 회사 Inc.</td><td>#B37-50</td><td>아몬드 컨텍스트 냄새를 위해 수돗물에 희석</td></tr><tr><td>레몬 오일, 냉간 압착, 캘리포니아</td><td>시그마 알드리치</td><td>#W262528-1KG-K</td><td>레몬 컨텍스트 냄새를 위해 수돗물에 희석</td></tr><tr><td>에틸 알코올, 95%</td> <td>상업용 알코올</td><td></td><td>수돗물에서 원하는 농도로 희석</td></tr></tbody></table>

절차 흰쥐의 파블로프 에어컨 알코올 추구 행동의 상황에 의한 갱신을 준수합니다

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

환경 상황은 학대의 약물 갈망, 절제 약물 사용자의 약물 추구 행동과 프롬프트 재발을 촉진 할 수있는 주관적인 파블로프 에어컨 반응을 일으킬 수 있습니다 소비된다. 우리는 쥐에서 알코올을 추구하는 행동의 내용이 영향을 중재하는 행동 및 신경 프로세스를 연구하기위한 절차를 개발했다. 맛에 순응하고 홈 케이지에서 15 % 에탄올의 약리학 적 효과에 따라, 남성 롱 에반스 쥐 조절 챔버에서 파블로프 차별 교육 (PDT)를받을 수 있습니다. 각 매일 (월 - 금) PDT 세션에서 16 시험이 다른 10 초 청각 조건 자극의 각이 발생합니다. 한 자극 중에 + CS는, 15 % 에탄올 0.2 ㎖를 경구 섭취 유체 포트에 전달된다. 두 번째 자극, CS-에탄올와 연결되어 있지 않습니다. 세션에 걸쳐, CS- 동안 항목 반면 CS + 증가하는 동안 유체 포트에 항목, predi 것을 나타내는 낮은 수준에서 안정CS + 에탄올 간의 연관은, 중지 취득한다. PDT 동안 각 챔버는, 시각 후각 및 촉각 상황에 맞는 자극의 특정 구성을 갖추고있다. PDT에 따라, 멸종 훈련은 지금 상황에 맞는 자극의 다른 구성을 갖추고 동일한 챔버 내에서 수행된다. CS + 및 CS -는 이전과 같이 제시되어 있지만, 에탄올은 CS +시 포트 항목의 점진적인 감소가 발생하는 원천 징수된다. 시험에서 쥐 PDT 컨텍스트에 다시 배치됩니다 및 이전과 CS + 및 CS - 제시하지만, 에탄올없이. 이 조작은 CS- 동안 응답에 변화와 예측 CS + 알코올 중에 포트 항목의 수를 강력하고 선택적 증가를 트리거합니다. 문맥 유도 갱신이라고도이 효과는, 파블로프 알코올 큐에 응답하여 알코올 추구 행동을 자극하는 알코올 섭취와 관련된 컨텍스트의 강력한 능력을 나타낸다.

홈 케이지에서 간헐적 에탄올 액세스 : - 12 회 (그림 1) 에탄올 소비 (g / kg) 및 홈 케이지에서 간헐적 인 에탄올 액세스 세션에서 에탄올 선호도 증가는 일반적으로 8 내에서 안정적인 수준에 도달. 도 1에 도시 된 데이터 세트의 안정된 에탄올 소비량 홈 케이지 에탄올 액세스의 마지막 세션에 걸쳐 평균이 1.33에서 ranged - 개별 쥐 6.44 g / kg을. g / kg 소비 plateaued 일단 실험의 홈 케이지 에탄올 소비 단계는 중단 될 수 있고, 쥐의 세션 수를 마시는이 안정된 수준으로 유지된다. 이 단계에서 데이터를 분석하기 위해, 에탄올 소비 (g / kg)과 에탄올 기본 설정에 대한 세션의 피험자 내 요인에 걸쳐 분산 (ANOVA)의 별도의 회 반복 측정 분석을 실시하고 있습니다. 문맥 유도 갱신 절차의 개략도 : 각 위상실험 절차 (PDT, 소멸, 갱신 시험) 그림 2에 도시되어있다. 자세한 내용은 그림 캡션을 참조하십시오. 응답 방법 및 데이터 분석 : 아래 설명 된 모든 행동 단계에서는 CS + 및 CS- 중에 포트 엔트리 응답은 기준선 입항 응답-CS 사전을 참조하여 정규화된다. 정규화 된 CS 조치를 만들려면 사전 CS 기준 간격 중에 포트 항목의 수를 CS +와 CS-의 프리젠 테이션 중에 포트 항목의 수와 (CS 발병 직전 10 초)을 뺍니다. 행동의 지표가 기준선 수준 이상으로 상승 CS 프레 젠 테이션에 의해 구체적으로 도출으로 표준화 된 CS + 및 표준화 CS- 조치는 역할을한다. 별도의 회 반복 측정 ANOVA는 PDT 멸종 단계에 대한 세션 및 CS 유형 (CS-대 CS +)의 반복 피험자 내 요인으로 실시한다. 단계에 걸쳐 비교를 들어 (PDT는 멸종 갱신알 검사) 사용 데이터 PDT 및 소등의 마지막 두 세션 및 회 반복 측정 ANOVA의 내구성 테스트 데이터 중 하나의 세션에 걸쳐 평균화. 다중 비교를 위해 보정 독립적이거나 쌍 샘플에 대한 중요한 주 효과 및 상호 작용, 사용 후 임시의 t-테스트를 ​​추적합니다. 중요성에 대한 기준은 α = 0.05로 설정된다. PDT : PDT 세션에서 CS + 증가 포트 항목의 응답은, CS-포트 항목 응답은 전반적으로 낮고 안정적​​으로 유지하는 반면. PDT 훈련의 초기 세션에서 약간 증가 할 수 CS-에 해당 포트 항목의 응답을 참고; 그러나 CS-에 응답하여 만들어진 항목은 포트의 CS +에 응답하여 만들어진 것보다 더 낮은 수준에서 안정화. 성공적인 차별 CS 동안 포트 항목에서 통계적으로 유의 한 상승에 의해 입증 + CS- (그림 3)에 비교된다. 이 결과는 파블로프 에어컨 알코올을 추구하는 행위가 될 수 있음을 나타냅니다엉 CS-을 CS +에 설립 있지만. 멸종 : CS + 포트 항목의 응답이 점차 멸종 세션에서 거절합니다. CS-포트 항목의 응답은 멸종 세션에서 낮고 안정적​​으로 유지. 이상적으로, CS + 및 CS -에 포트 항목 사이에 통계적으로 유의 한 차이의 부족에 의해 입증, 멸종 훈련의 말에 폐지 응답 차별. 그러나, 심지어 흡광 트레이닝의 끝에서, 남아 응답 판별 어느 정도 드문 일이 아니다. 이 경우,이 소등 훈련, 소등의 시작에서 CS + 포트 엔트리 응답에 비해 통계적으로 더 낮뿐만 아니라 PDT의 끝의 끝에서 CS + 해당 포트 엔트리 응답을 확인하는 것이 중요하다 (도 3) . 결과의이 패턴은-파블로프 조절 알코올 추구 행동이 크게 소멸되었음을 나타냅니다. 상황에 의한 갱신 시험 : 포트흡광 트레이닝의 끝에서 관찰 CS + 포트 항목에 대하여 컨텍스트 유도 내구성 시험에서 CS + 증가에 진입 응답. CS-에 포트 항목이 변경되지 않고 남아있는이 증가는 CS +에 선택적이다. 또한, CS +에 포트 항목은 상황에 의한 갱신 시험에서 CS-에 포트 항목 (그림 4)에 비해 통계적으로 상승합니다. CS + 포트 멸종 및 테스트 사이의 항목뿐만 아니라 CS + 및 테스트 내 CS- 포트 항목의 비교 비교의 통계 확인이 테스트에서 알코올 관련 상황에 의해 유도 파블로프 에어컨 알코올 추구 행동의 선택 갱신을 나타냅니다. <img alt="그림 1" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig1highres.jpg" width="400"> 에탄올 소비와 홈 케이지에서 간헐적 인 에탄올 액세스에 의해 유도 선호도 1 에스컬레이션 그림. 및 평균# 177; SEM (A) 에탄올 소비 (g / kg) 및 홈 케이지에서 간헐적 인 에탄올 액세스의 12 회에 걸쳐 (B) 에탄올 환경. 두 조치는 일반적으로 세션에 걸쳐 증가하고 안정. 개별 쥐 6.44 g / kg - 안정 에탄올 소비량은 1.33에서 원거리 홈 케이지 에탄올 액세스의 마지막 두 세션에 걸쳐 평균. 이 데이터는 15 % (v / v)로 에탄올을 마시는 남성 긴 에반스 쥐를 사용하여 얻을 수 있었다. <img alt="그림이" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig2highres.jpg" width="400"> . 그림 2 실험 절차의 개략적 인 절차는 세 단계로 구성 파블로프 차별 훈련 (PDT), 멸종 및 상황에 유도 갱신 시험. 각 PDT 세션 동안 쥐 에탄올의 제공 및 16 시련의 신호를 하나의 청각 조건 자극 (CS +)의 16 시련을받을에탄올 전달과 관련되지 않은 초 청각 자극 (CS-). PDT 세션은 시각, 후각의 특정 구성, 및 촉각 자극 이루어지는 문맥에서 일어난다. 시각 후각, 촉각 자극의 다른 세트로 구성 컨텍스트 B에서 수행되는 소등 세션 동안, CS + 및 CS- 제시되지만 에탄올을 보류한다. 상황에 의한 갱신 테스트를 위해 쥐 상황에 반환하고, CS + 및 CS - 에탄올을받지 않고있다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51898/51898fig2highres.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig3highres.jpg" width="400"> 그림 3 수집 및 차별 파블로프 에어컨 에탄올에 대한 응답. 평균 ± SEM 표준화 된 포트 항목의 m의 멸종컨텍스트 및 멸종 (세션 19-26) - PDT에서 CS + 및 CS - 동안 (18 세션 1) 에이드 컨텍스트 B의 이러한 데이터는 10 % 훈련, 남성 롱 에반스 쥐를 사용하여 얻을 수 있었다 (v / v)로 PDT 동안 CS의 +와 관련하여 제시 하였다 무조건 자극 (US) 에탄올. * p &lt;0.05, CS- 대 CS +. 그림은 원래 Chaudhri, Sahuque, 및 JANAK (2008)에서 출판. 엘스 비어의 허가와 함께 사용됩니다. <img alt="그림 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51898/51898fig4highres.jpg" width="500"> 그림 4 컨텍스트에 의한 문맥 A. 데이터에 파블로프 에어컨 에탄올에 대한 응답. 평균 컨텍스트에서 PDT 세션에서 CS + 및 CS - 중에 ± SEM 표준화 된 포트 항목, 컨텍스트 B에서 멸종 세션 및 갱신 시험의 갱신 아르 PDT와 멸종에 대해 마지막 두 세션에 걸쳐 평균; 내구성 시험은 단일 세션이다. 이데이터 PDT 동안 CS +와 관련하여 제시 하였다 무조건 자극 (US)로서 10 % (v / v) 에탄올로 훈련 수컷 롱 - 에반스 래트를 사용하여 수득 하였다. * p &lt;0.05; ** P &lt;0.001, CS- 대 CS +. #p를 &lt;0.05, CS + 멸종 대 CS + PDT. ^ P &lt;0.05, CS + 시험 대 CS + 멸종. 그림은 원래 Chaudhri, Sahuque, 및 JANAK (2008)에서 출판. 엘스 비어의 허가와 함께 사용됩니다.

절차는 쥐에서 알코올 추구 행동의 갱신을 설명한다 트리거 알코올 연관된 환경 콘텍스트의 용량을 연구.

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

이 절차는 파블로프의 알코올 추구 행동의 재생을 유발하는 알코올 관련 컨텍스트의 능력을 조사합니다. 이것은 먼저 에탄올에 경험이 있는 쥐를 두 가지 고유한 컨텍스트로 구성된 컨디셔닝 챔버에 습관화함으로써 달성됩니다. 절차의 두 번째 단계는 두 가지 다른 청각 신호가 알코올 가용성 또는 알코올 부족을 나타내는 한 가지 맥락에서 파블로프 차별 교육 세션을 수행하는 것입니다.세 번째 단계는 멸종 훈련을 실시하는 것입니다. 두 청각적 단서가 알코올 없이 제시되는 두 번째 맥락에서, 마지막 단계는 쥐를 원래의 훈련 맥락으로 되돌리고 알코올 없이 두 청각적 단서를 모두 제시하는 것입니다. 이 조작은 이전에 알코올과 관련되었던 청각 신호에 의해 유발된 알코올 추구 행동의 재생을 유발합니다.도구적 조건화와 같은 기존 절차에 비해 이 기술의 주요 장점은 알코올을 예측하는 파블로프의 단서에 의해 유도된 알코올 추구 행동의 동물 모델을 제공한다는 것입니다. 이 방법은 중독 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다., 예를 들어 알코올과 관련된 맥락이 재발을 유발합니까 훈련하기 전에 쥐를 시험장에 습관화하고 그들이 경험하게 될 두 가지 환경적 맥락을 습관화하십시오. 항상 일관된 방식으로 동물 보호 시설에서 실험실로 쥐를 운반하십시오.첫 번째 세션에서는 24시간 후에 실내 조명을 켜고 음향 감쇠 칸막이실의 선풍기를 켠 상태에서 쥐를 20분 동안 실험실에 둡니다. 두 번째 습관화 세션은 첫 번째 세션과 마찬가지로 수행하되 이제 각 쥐의 무게를 측정하고 다룹니다. 세 번째 세션은 24시간 후에 실시합니다.이를 위해 각 조절 챔버를 시각, 후각 자극과 촉각 자극의 두 가지 독특한 조합 중 하나로 설정하십시오. 일관된 맥락을 제공하기 위해, 후각 자극은 각 방에 추가되는 마지막 맥락적 자극이어야 합니다. 서로 다른 후각 자극의 혼합을 최소화하려면 챔버의 문과 각 챔버가 있는 소음 감쇠 칸막이를 닫으십시오.세 번째 세션에서 후각 자극을 가한 직후, 각 쥐의 무게를 측정하고 20분 동안 컨디셔닝 챔버에 넣는다. 쥐의 절반은 맥락을 경험해야 하고, 나머지 절반은 맥락을 경험해야 한다. 둘째, 쥐와 쥐의 방 사이의 일관성에 대한 중요한 요구를 유지하기 위해 쥐에게 특정 방을 식별하는 번호를 표시하는 것이 유용합니다.모든 쥐를 방에 넣은 후 1 분 후에 방의 집 조명을 켜십시오 20 분 동안 쥐가 만든 모든 유체 포트 입구를 기록하십시오. 그런 다음 불을 끄고 쥐를 내리고 보호 시설로 돌려보냅니다. 같은 날 늦게, 컨디셔닝 챔버의 맥락이 역전되는 세 번째 세션과 거의 동일한 네 번째 습관화 세션을 수행합니다.마지막으로, 매 세션 후에는 항상 후각 상황 자극이 적용된 컨디셔닝 챔버와 페트리 접시의 쓰레기통과 바닥 패널을 씻으십시오. 매주 무향 세척액만 사용하십시오. 이 훈련을 위해 챔버를 완전히 청소하십시오.쥐를 마지막 두 번의 에탄올 접근 세션에서 동일한 평균 에탄올 섭취량을 가진 두 그룹으로 나눕니다. 한 그룹은 맥락에서 훈련되고 다른 그룹은 맥락에서 훈련됩니다. 2. 파블로프식 차별 훈련에 사용되는 맥락을 맥락 A라고 한다.이 세션 동안 쥐는 에탄올과 쌍을 이루는 것과 그렇지 않은 두 가지 청각적 신호를 구별하는 방법을 배운다.따라서 첫 번째 단계는 에탄올이 함유된 20ml 주사기를 준비하는 것입니다. 유체 포트의 경우 유체 포트 뒤쪽의 튜브를 적재된 주사기에 연결합니다. 뭉툭한 바늘을 사용하여 각 주사기를 소리 감쇠 칸막이 밖에 있는 자체 펌프에 넣습니다.그런 다음 펌프를 수동으로 전진시켜 튜브를 프라이밍하고 유체 포트에서 과도한 에탄올을 닦아냅니다. 이제 쥐를 실험실 실험실로 데려오십시오. 습관화하는 동안과 마찬가지로, 할당된 조절 챔버에 넣기 전에 각 쥐의 무게를 잰다.각 챔버 내의 컨텍스트 구성을 다시 확인하고 올바른 챔버에 올바른 쥐를 로드해야 합니다. 잘못된 컨텍스트 또는 잘못된 CS plus에 노출된 쥐는 연구에서 제외되어야 할 수도 있습니다. 모든 쥐의 무게를 측정하고 로드하면 훈련 세션의 이벤트를 제어하는 컴퓨터 프로그램을 시작합니다.프로그램이 시작되고 5분이 지나면 각 세션마다 각 챔버의 하우스 조명이 켜지고 16, 10초의 백색 소음과 16, 10초의 딸깍 소리가 표시됩니다. 각 쥐에 대해 에탄올에 대한 이러한 청각 자극 중 하나를 지정하고 Cs의 마지막 6초 동안 두 가지 조건화 맥락에서 이러한 지정의 균형을 맞추면 펌프는 0.2ml의 에탄올을 유체 포트로 전달합니다. 가변 시간 67초 일정으로 자극을 설정하여 1시간 세션을 만듭니다.Cs 이전 10초, Cs 기간 동안, Cs 이후 10초 동안 시작하는 모든 유체 포트 항목을 기록합니다. 또한 전체 Pavlovian 차별 교육 세션에 대해 만들어진 총 유체 포트 항목 수를 기록합니다. 세션이 끝나면 집 조명을 끄고 쥐를 컨디셔닝 룸의 동물 보호 시설로 되돌려 보냅니다.유체 포트를 점검하여 쥐가 세션 중에 전달된 3.2ml의 에탄올을 섭취했는지 확인하십시오. 쥐가 챔버에서 꺼낸 후 유체 포트를 확인하여 에탄올을 소비하지 않는 에탄올 쥐를 섭취하고 있는지 확인하고 CS 플러스 동안 낮은 수준의 포트 입구를 보여 주므로 연구에서 제외해야 할 수도 있습니다. 평소와 같이 컨디셔닝 챔버를 청소하십시오.먼저 튜브를 물로 씻어낸 다음 빈 60ml 주사기를 사용하여 튜브에 공기를 통과시켜 튜브를 청소합니다. 쥐가 포트 진입 반응으로 표시된 두 가지 청각 자극을 구별할 때까지 매일 세션을 반복합니다. 16-20 세션 내에서 안정화되는 CS plus에 대한 포트 항목의 선택적 증가가 예상됩니다.멸종 세션의 경우. 모든 쥐의 조건화실은 파블로프식 차별 훈련에서 사용된 것과는 다른 맥락으로 설정되어야 한다. 소멸이 이루어지는 맥락을 맥락 B라고 한다.소멸 세션을 차별 세션과 동일하게 동일한 컴퓨터 프로그램을 사용하여 수행하되, CS Plus 중에는 에탄올을 전달하지 않는다.일관성을 위해 펌프에는 에탄올이 없는 튜브로 챔버에 연결된 빈 20ml 주사기가 로드됩니다. 쥐가 CS 플러스와 마이너스를 구별하지 않을 때까지 매일 멸종 세션을 수행합니다. 이것은 항상 그렇듯이 약 8 개의 세션이 소요될 수 있으며 갱신 테스트를 진행하기 전에 필요에 따라 장비를 청소하십시오.CS 기간 동안과 멸종 훈련이 끝날 때 처음과 비교하여 포트 진입을 크게 줄이는 것이 중요합니다. 맥락 유도 갱신 테스트는 파블로프 차별 훈련에서 사용된 것과 동일한 챔버 컨텍스트 구성을 사용하며, 이는 멸종 훈련의 맥락과 다른 맥락입니다. 이 단일 세션 테스트는 에탄올이 전달되지 않고 주사기가 비어 있다는 점을 제외하고는 Pavlovian 차별 교육 세션과 동일하게 수행됩니다.동일한 컴퓨터 프로그램을 사용하여 청각 자극을 제시합니다. 예상되는 결과는 CS에 선택적인 알코올 추구 행동의 갱신과 테스트가 끝날 때 장비를 청소하는 것입니다. 이전과 마찬가지로 쥐가 가정용 케이지에서 주기적으로 에탄올에 간헐적으로 접근했을 때 에탄올 소비와 에탄올 선호도가 8-12회의 훈련 세션 후에 안정적인 수준으로 증가했습니다.파블로프식 차별 훈련 기간 동안, CS 플러스에 대한 항구 진입 반응은 훈련 세션 전반에 걸쳐 증가했고, CS 마이너스에 대한 반응은 약간 증가했지만, 쥐는 멸종 훈련 동안 두 청각 신호를 구별하는 법을 배웠고, CS 플러스에 대한 항구 진입 응답은 점차 감소한 반면 CS 마이너스에 대한 응답은 낮게 유지되었습니다. 쥐를 파블로프 차별 훈련과 관련된 맥락으로 되돌려 놓았을 때, 멸종 훈련 후의 결과에 비해 CS 플러스 동안 포트 진입의 선택적 증가가 발생했습니다. 반면, CS 마이너스에 대한 응답에는 변화가 없었습니다.이러한 결과는 신중한 신호에 의해 유발된 알코올 추구 행동이 환경적 맥락에 의해 강력하게 조절될 수 있음을 보여줍니다. 이 절차를 시도하는 동안 연구자는 향수, 향수 또는 기타 향이 나는 제품을 사용하지 않는 것이 중요합니다. 쥐는 매우 후각적인 생물이며 연구자와 관련된 후각 신호는 이 작업의 행동에 방해가 될 수 있습니다 이 방법을 따라 뇌 영역이 무엇에 관여하는지와 같은 추가 질문에 답하기 위해 두개내 마이크로 주입과 같은 다른 절차를 수행할 수 있습니다.맥락은 파블로프식 조건화된 알코올 추구의 재생을 유도했습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

복직 절차로 알려진 재발의 동물 모델은, 약물 추구하는 재발 스트레스의 역할을 연구하기 위해 널리 사용되었습니다. 여기, 우리는 온화, 간헐적인 전기 footshock에 급성 노출을 통해 실험실 쥐에서 찾는 코카인의 복직을 유도하는 방법에 대한 리포트입니다.

실험실 쥐의 추구 코카인 Footshock 유발 복직을 유학을위한 절차

음식이나 약물 이점 단서에 대한 응답을하는 것은 금욕의 기간 동안 증가하고 이것은 재발 행동으로 증가 자화율과 관련 있습니다. 자기 관리 자당을 가지고 쥐이 '갈망의 배양 "을 평가하기위한 우리가 세부 절차를.

쥐에서 자당의 갈망의 보육을 평가하기위한 일반적인 방법

음식 제한 쥐에서 추구하는 약물의 강력한 확대의 데모를 허용하는 절차가 설명되어 있습니다. 헤로인 자기 관리 교육에 이어, 쥐들은 약간 제한하는 음식이 기간 동안, 마약없는 환경에서, 금욕 기간을 통해 이동합니다. 약물 추구는 다음 약물 관련 환경에서 테스트됩니다.

헤로인은 절제 쥐의 추구에 장시간 음식 제한의 효과를 연구하기위한 절차

이 프로토콜은 빨리 물 부족하거나 응답을 시작하는 페이딩 사카린 / 크로스를 필요로하지 않는 표준 방법과 달리, 쥐에서 에탄올에 대한 응답 조건화를 시작하는 새롭고 효율적인 방법을 설명합니다.

물 박탈, 사카린 페이딩 또는 확장 액세스 교육을받지 않은 쥐에 에탄올의 강화 속성을 평가하는 방법

여기에서는 쥐에서 파블로프식 조건화 접근 행동을 유도하는 프로토콜을 제시합니다. 이 절차는 보상 관련 단서에 접근하고 인센티브 현저성을 부여하는 경향의 개인차를 측정하고 중독 취약성을 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

흰쥐의 파블로프 조건 접근 교육

추적 eyeblink 클래식 컨디셔닝 (ECC) 평가 하는 데 사용 되었다 hippocampal 종속 연관 학습 했다 성인 쥐에 투여 초기 신생아 두뇌 개발 하는 동안 알코올의 높은 농도 (11.9 %v / v). 일반적으로, ECC 절차는 많은 심리적, 생물 의학 설정을 통해 뇌 기능 장애를 탐지 하기 위한 사운드 진단 도구입니다.

태아 알코올 스펙트럼 장애의 쥐 모델에서 Hippocampal 기능 장애를 평가 하기 위해 추적 Eyeblink 클래식 컨디셔닝의 사용

이 원고는 강력한 보상 기억을 약화 하 고 그들의 reconsolidation 이전 counterconditioning 함께 그들을 다시 쓰기 위한 메모리 검색 절차를 설명 합니다.

불안정 하 고 위험한 마시는에 Maladaptive 보상 메모리를 다시 쓰기에 대 한 예측 오류 기반 검색 절차

이 프로토콜 재발의 모델로 단련 장소 특혜 (CPP)를 설명합니다. 이 절차 갈망으로 마약 관련 환경 단서의 영향을 고려 하는 실험실 동물에서 재발의 측정을 허용 하 고 기권 중독자에 재발은 현재 약물 남용 치료 프로그램의 초점 이다.

바른된 장소 기본 패러다임을 사용 하 여 마우스에 마약 추구의 복직

여기, 모 르 핀 조절 장소 특혜 (CPP) 프로토콜은 쥐에 갈망의 부 화를 측정 하는 설명입니다.

쥐에 갈망의 부 화를 측정 하기 위한 바른된 장소 설정 프로토콜

처벌이 부과 된 금욕을 추구하는 헤로인에 대한 강력한 급성 식량 박탈로 인한 재발을 보여주는 절차가 설명되어 있습니다. 처벌 부과 금욕 모델은 헤로인 자기 관리를위한 추구 및 테이크 체인 일정을 사용하여 성공적으로 구현되었습니다. 헤로인 추구 테스트는 24 시간의 식량 부족 스트레스 후에 수행됩니다.

처벌 부과 금욕 후 헤로인의 스트레스로 인한 재발을 연구하는 절차

학습하세요 쥐를 이용한 파블로프 알코올 추구 행동의 상황에 의한 갱신 방법을. 청각 신호와 환경 맥락을 활용하여 중독 재발 메커니즘을 연구하는 신경과학 동물 모델입니다.

절차 흰쥐의 파블로프 에어컨 알코올 추구 행동의 상황에 의한 갱신을 준수합니다

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