마우스의 탁산의 약동학 및 약력 학적 분석을위한 경동맥 팅크

이 절차의 전반적인 목표는 경동맥을 통해 관심 약물을 주입하여 약물의 약동학 프로파일을 분석하는 것입니다. 이것은 먼저 폴리에틸렌 튜브로 맞춤형 카테터를 만든 다음 마우스 경동맥 내에 카테터를 고정함으로써 수행됩니다. 다음으로, 마우스는 경동맥 카테터를 통해 자동 주입 펌프에 연결됩니다.

마지막 단계에서는 약물을 일정한 속도로 마우스에 주입하고 혈액 샘플을 일정한 간격으로 수집합니다. 궁극적으로 액체 크로마토그래피, 질량 분석법은 조직 및 혈장 샘플 내 약물의 농도를 결정하는 데 사용됩니다. 볼루스, 복강내 또는 꼬리 정맥 주사 또는 경정맥 주입과 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 임상 주입 속도를 대표할 뿐만 아니라 일반적으로 경정맥 삽입보다 수행이 더 쉽다는 것입니다.

이 방법은 약물의 생체 내 분포가 무엇인지와 같은 약리학의 주요 질문에 답할 수 있으며, 억제제 또는 조절제가 단백질의 기능에 영향을 미치는지 여부를 결정할 수 있습니다. 실험을 위해 카테터를 준비하려면 먼저 분젠 버너에 낮고 안정적인 불꽃을 설정합니다. 그런 다음 튜브 조각을 화염 가까이에 대고 폴리에틸렌을 부드럽게 합니다.

튜브가 녹기 시작하면 두 끝을 천천히 당겨 직경이 약 0.25mm인 얇은 튜브 부분을 만듭니다. 다음으로, 얇은 부분을 따라 튜브의 비스듬한 끝을 약 0.75cm 정도 자른 다음 끝을 화염에 빠르게 통과시켜 약간 둥글고 커지게 합니다. 팁이 약간 뒤로 젖혀져 동맥에 삽입하는 동안 튜브를 고정하는 데 도움이 됩니다.

튜브가 얇아지기 시작하는 지점에서 6.0cm 떨어진 곳에서 튜브를 잘라 카테터를 만든 다음 무딘 바늘이 장착 된 주사기에 200 마이크로 리터의 헤파린 용액을 채 웁니다. 카테터의 넓은 쪽 끝에 바늘을 삽입하고 카테터에 헤파린을 채웁니다. 거품이 생기지 않도록 주의하세요.

그런 다음 바늘과 카테터를 멸균된 장소에 보관하여 경동맥을 분리합니다. 먼저 동물의 목 정중선 약간 오른쪽으로 1cm를 세로로 자른 다음 집게를 사용하여 지방과 근육을 분리하고 기관을 노출시킵니다. 경동맥은 기관과 평행하게 뻗어 있습니다.

다음으로, 동맥 위에 있는 근막을 조심스럽게 분리한 다음 VA 신경을 가볍게 옆으로 당깁니다. 경동맥과 VA 신경 사이의 공간에 집게를 삽입하고 집게를 부드럽게 열어 근막에 틈을 만듭니다. 신경을 동맥에서 조심스럽게 빼내고, 후두 근처 앞쪽 끝에 있는 갈림길에서 가장 노출된 뒤쪽 끝까지 공간을 확보하여 최소 3mm 길이의 동맥을 분리합니다.

그런 다음 집게를 사용하여 동맥 아래에 실크 봉합사를 당기고 안전한 매듭을 묶어 동맥을 가능한 한 앞쪽 끝으로 닫으십시오. 두 번째 실을 놓은 후 개폐식 매듭을 묶어 동맥을 가능한 한 뒤쪽 끝으로 멀리 임시로 닫습니다. 그런 다음 세 번째 실을 사용하여 처음 두 봉합사 사이에 매우 느슨한 매듭을 묶어 배치 후 카테터를 빠르게 고정하는 데 사용합니다.

카테터를 삽입하려면 아래쪽 봉합사 매듭을 잡고 동맥을 약간 팽팽하게 당깁니다. 그런 다음 위쪽 동맥과 전방 봉합사에 매우 가까운 동맥을 긁습니다. 너무 깊게 자르지 않도록 주의하십시오.

슬릿을 확인하여 개구부가 막히지 않았는지 확인하십시오. 주사기 바늘에서 헤파린이 채워진 카테터를 제거한 다음 큰 공기 주머니가 생기지 않도록 주의하십시오. 양쪽 끝에서 카테터를 조작하여 경사진 끝단을 편안한 각도로 아래쪽으로, 그리고 주로 사용하는 손을 향해 약간 자세하게 배치합니다.

다음으로, 봉합사를 잡고 동맥을 약간 팽팽하게 유지하기 위해 카테터를 슬릿에 부드럽게 삽입합니다. 그런 다음 집게를 사용하여 전방 봉합사 매듭을 잡고 동맥을 카테터 위로 부드럽게 당깁니다. 카테터와 전방 봉합사를 조심스럽게 풀어줍니다.

그런 다음 카테터를 통한 흐름을 막지 않도록 주의하면서 카테터를 동맥으로 들어가는 입구 가까이에 고정하기 위해 중간 매듭을 조입니다. 중간 봉합사로 삼중 매듭을 단단히 만든 다음 전방 봉합사를 사용하여 동맥 입구 아래의 카테터를 제자리에 고정합니다. 이제 커넥터 플러그를 사용하여 식염수 리드를 카테터에 연결하고 기포가 생성되지 않도록 주의하십시오.

그런 다음 후방 봉합사의 끝을 잡고 부드럽게 당겨 매듭을 풀고 실을 제거하지 않고 동맥을 따라 카테터 끝 위로 봉합사를 움직입니다. 혈액의 흐름이 막히지 않은 것처럼 보일 때 카테터로 혈액이 흘러 들어가야 합니다. 후방 봉합사의 실을 사용하여 중간 봉합사보다 약간 위에 추가 매듭을 묶습니다.

그런 다음 카테터의 혈액을 씻어내고 지혈제를 사용하여 카테터 끝을 커넥터 플러그 가까이에 고정합니다. 커넥터를 포트 플러그로 교체하여 카테터 끝을 밀봉하고 지혈제를 제거합니다. 그런 다음 한 쌍의 집게를 사용하여 전방 봉합사 바로 아래에 있는 카테터를 잡고 다른 집게를 사용하여 카테터를 꼬임으로 눌러 두 번째 꼬임을 만든 후 카테터가 쉽게 옆으로 구부러지도록 합니다.

같은 방법으로 마우스를 왼쪽으로 돌리고 동물의 귀 아래와 바로 뒤를 70% 에탄올과 포비돈 요오드로 청소합니다. 해당 부위가 소독되면 피부를 4mm로 작게 절개합니다. 그런 다음 집게를 사용하여 조직의 덮개를 열고 피부 아래에 뭉툭하고 속이 빈 프로브를 사용하여 뺨을 통해 목의 구멍으로 가는 통로를 만듭니다.

집게를 사용하여 프로브가 빠져나갈 공간을 조심스럽게 확보한 다음 프로브를 통해 포트 플러그와 카테터를 출구 구멍에 부드럽게 끼웁니다. 동물이 30-60분 동안 회복되도록 한 후 혈관이나 장기가 부수거나 수축되지 않도록 주의하면서 40cm 폴리에틸렌 튜브 조각의 한쪽 끝에 무딘 바늘을 연결하고 다른 쪽 끝에 커넥터 포트를 연결합니다. 그런 다음 관심 약물을 알려진 내경의 주사기로 끌어옵니다.

주사기에 바늘을 부착하고 바늘과 튜브를 통해 약물을 넣습니다. 주사기를 펌프에 삽입한 후 제조업체의 지시에 따라 약물이 커넥터에서 부드럽게 흘러나오도록 펌프를 프라이밍합니다. 그런 다음 플러그를 꽂아 동물을 펌프에 연결하고 마우스를 안정되게 잡고 지혈제를 사용하여 clamp 카테터를 포트 플러그 가까이에 둡니다.

마지막으로 플러그를 주사기와 튜브에 부착된 커넥터로 교체합니다. 카테터의 부피를 제거하기 위해 고속 펌프를 신속하게 투여한 다음 즉시 원하는 주입 속도로 전환합니다. 이 첫 번째 그림에서는 경정맥 주입과 경동맥 주입 후 Paclitaxel의 혈장 농도를 비교

약물 농도는 초기 대량 주입 후 처음 15분 동안 빠르게 떨어지고 다음 150분에 걸쳐 평준화됩니다. 이에 비해 불량한 주입에서 파클리탁셀 수치는 상대적으로 낮게 시작하여 분석 전반에 걸쳐 위아래로 맴돌았는데, 이는 주입 초기에 라인이 막혔기 때문일 가능성이 큽니다. 여기서, 3시간의 주입 후 간, 뇌 및 혈장에서 파클리탁셀의 상대적 수치가 표시됩니다 예상대로, 동물은 뇌 조직의 낮은 약물 농도와 함께 높은 혈장 단백질 결합을 나타냅니다 일단 숙달되면 이 기술을 적절하게 수행하면 45-60분이 소요됩니다.

동영상을 시청한 후에는 경동맥을 분리하고, 카테터를 삽입하고, 주입을 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.