Name: 흰쥐의 동종 혈액 혈전과 허혈성 뇌졸중에 대한 전성 중간 대뇌 동맥 폐색 (MCAO) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: 학습하세요 흰쥐에서 동종 혈전을 이용한 전성 중간 대뇌 동맥 폐색법으로 허혈성 뇌졸중 모델을 수립하는 방법을. 이 기법은 혈전용해 요법 연구에 활용할 수 있습니다.

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이 작업은 미국 국립보건원(National Institutes of Health)의 보조금 HL087990(G.L.)의 지원을 받았습니다.

윤리 선언문 : (330~380g 무게) 남성 성인 흰쥐이 프로토콜에 사용되었다. 이 프로토콜은 LSU 건강 과학 센터 - 슈 리브 포트에서 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인 (제 8 판, 국립 과학 아카데미 2011 &#39;실험실 동물의 관리 및 사용을위한 설명서&#39;을 준수하였습니다 ). 수정 된 PE-50 튜브의 1 준비 <ol><li> 점차적으로 튜브를 부드럽게, 손에 의해 가스 불 위의 30cm 긴 PE-50 튜브를 잡습니다. 부드럽게 튜브를 스트레칭. </li><li> 디지털 캘리퍼스 (그림 1)를 사용하여 연신 튜브에 지점을 선택하고, 그것을 표시하고 (외경 : 0.30-0.34 mm) 1cm 길이 끝이 25cm 긴 세그먼트로 수정 된 PE-50 튜브를 잘라. </li></ol> 동종 혈액 응고 2 준비 <ol><li> 70 % N 2 O 30 % O의 이소 플루 란 (유도 5 %, 유지 보수를 위해 2 ~ 3 %)로 쥐를 마취 &lt;채혈하기 전에 얼굴에 마스크에 의해 서브&gt; 2. 발가락 핀치에 의해 마취를 확인합니다. </li><li> 발행 방법 4 기증자 쥐의 대퇴 동맥 삽관을 수행하고 20cm 긴 PE-50 튜브에 직접 대퇴 동맥의 혈액을 전송합니다. 혈전이 혈액을 실온에서 2 시간 동안 튜브를 놓은 다음 4 ℃에서 22 시간 동안 튜브를 유지합니다. 참고 : 삽관 단계 3.1에 ​​설명 된대로 무균 기술을 사용하여 수행됩니다. 기증자 쥐 더욱 샘플링 회수한다. </li><li> 50mm 세그먼트로 PE-50 튜브를 잘라 생리 식염수가 들어있는 멸균 페트리 접시에 관에서 혈전을 세척하십시오. </li><li> 60mm 긴 PE-10 튜브에 50mm에게 긴 혈전을 전송하고 23 G 바늘을 생리 식염수를 포함하는 1 ML의 주사기에 연결된 20cm 긴 PE-50 관에 PE-10 튜브의 각 끝을 연결합니다 (그림 2) . </li><li> 혈액 세포를 제거 할 수있는, 5 분 동안 다른 하나의 주사기로부터의 연속 교호 이동에 의해 응고 시프트응고와 섬유소 코어를 방해하지 않고, 혈관 외 응고 된 혈전의 허약을 최소화 할 수 있습니다. </li><li> 40mm 긴 세그먼트로 혈전을 자르고 무균 조건 하에서 단계 1.2에 설명 된대로 수정 된 PE-50 카테터로 혈전 세그먼트를 전송합니다. 참고 : 모든 PE 튜브가 산화 에틸렌 살균된다. </li></ol> 3 색전 중간 대뇌 동맥 폐색 (그림 3A, B) <ol><li> (최소 121 ° C, 15 분 15 PSI를) 고압 증기 멸균하여 모든 수술 도구를 소독. 70 % 에탄올을 사용하여 수술 테이블과 연관된 수술 장비를 살균. </li><li> 2.1 단계에 설명 된대로 이소 플루 란과 함께 쥐를 마취. 모두 뒤 발에 발가락 핀치를 수행하여 마취의 깊이를 테스트하고 (발을 인출) 모든 관찰 운동은 동물이 수술을 할 충분히 마취가 아님을 나타냅니다. 마취 동안 건조를 방지하기 위해 두 눈에 수의사 연고의 작은 금액을 적용합니다. 복부 목과 머리 재에 털을 면도전기 면도기와 gions은 피부 영역을 노출시킨다. </li><li> 가열 패드에 누운 자세에서 쥐를 놓습니다. 직장 프로브, 컨트롤을 삽입하고 homeothermic 담요 제어 장치를 사용하여 36.5-37.5 ° C 사이의 체온을 유지한다. </li><li> 70 % 에탄올이어서 10 % 포비돈 - 요오드와 면도 피부와 주변 모피 소독. </li><li> 해부 현미경 목에 2 cm 길이의 중간 선 절개를합니다. 수술 부위를 노출하고 오른쪽 경동맥 (CCA), 외부 경동맥 (ECA), 내 경동맥 (ICA) 및 pterygopalatine 동맥 (PPA) 주변 신경 및 근막 (그림 3A)에서 무료 해부 견인기를 사용합니다. 참고 : 길잡이 동물을 준비하는 데 도움이없는 경우 수술 전에 멸균 장갑을 변경합니다. </li><li> (미주 신경에 손상을주지 않고) 주변 신경에서 CCA 무료 해부 및 동맥에서 멸균 5-0 실크 봉합사를 배치합니다. 슬립 매듭 (# 1)을 묶어 작은 HEMOS을 사용하여 봉합을 파악문신과는 몸으로 가르쳐 당깁니다. </li><li> ECA와 그 두 가지, 후두 동맥 (OA) 및 갑상선 동맥 (STA)을 해부하다. 수의학 전기 수술 장치를 사용하여 두 가지를 응고. ECA에서 멸균 6-0 실크 봉합사의 두 조각을 놓습니다. </li><li> 동맥, 머리를 향해 한 조각 (선단) 몸으로 다른 아래에 위치이 실크를 분리합니다. (2 #) 머리에 가장 가까운 측면에 작은 지혈제와 실크를 잡고 머리를 향해 가르쳐 당겨 꽉 합자 타이. 나중에 사용하기 위해 다른 실크 느슨한 매듭 (# 3)를 준비합니다. </li><li> (미주 신경에 손상을주지 않고) 주변 신경에서 ICA와 PPA를 해부하다. 6-0 봉합사 (# 4)와 PPA를 묶어. ICA (# 5) 약 6-0 봉합과 슬립 매듭을합니다. 다르게는, 미세 혈관 클립을 사용하여 ICA 클립. </li><li> Vannas 스타일의 봄 가위로 꽉 (# 2) 느슨한 (# 3) 합자 사이의 ECA에 작은 구멍 (를 통해 2)를 잘라. 수정 된 PE-50 욕조를 삽입CCA의 분기점에 절개를 사전에 혈전이 포함 된 전자. (3 #) 충분한 루멘 주변에 거주하는 튜브의 이동성을 보존 확보하기 위해 느슨한 합자를 조입니다. </li><li> 그루터기를 해제하고 ECA와 ICA의 분기점 아래의 그루터기를 배치하는 작은 구멍의 사이트에서 ECA를 잘라; 이 개질 관 쉽게 ICA로 밀어 허용 할 것이다. ICA를 열고 카테터의 끝이 MCA의 근원에 도달 할 때까지 부드럽게 (~ 분기점에서 17mm를) ICA에 ECA의 루멘에서 튜브를 진행합니다. 참고 : 전에 ECA, 70 % 에탄올로 튜브의 멸균 외부 표면에 튜브의 끝 부분을 삽입 한 다음 멸균 생리 식염수로 씻어. </li><li> 100 μL 해밀턴 주사기 (그림 3B)를 사용하여 10 초 이상 생리 식염수 10 ㎕를 함께 수정 된 PE-50 카테터를 통해 혈전을 주입한다. </li><li> 5 분 후에 ECA에서 카테터를 철회. ECA를 묶어 CCA를 다시 엽니 다. 목에 절개를 봉합. </li></ol> (4) 모니터링 지역 대뇌 혈류 (rCBF) <ol><li> 이전 MCA 폐색으로, 두개골의 뼈를 노출 두피에 1.2 cm 긴 중간 선 절개를합니다. 치과 스크레이퍼 및 멸균면 스왑과 두개골 뼈의 조직을 제거합니다. 참고 : 수술 전에 노출 된 두피 지역 및 주변 모피는 70 % 에탄올 다음 10 % 포비돈 요오드로 소독한다. </li><li> 2mm 후방 및 0.7 mm 구형 스테인레스 버어 (도 4)를 이용하여 5mm 브레 그마 측방에 위치한 직경 1.5 mm 버 홀을 뚫는다. 주 : 그대로 두라을 유지합니다. </li><li> 프로브에게 경질 표면 위의 0.5 mm를 놓습니다. 0 (베이스 라인)에서 rCBF, 5, 15, 30, 60, 90을 모니터링하고 색전술 후 및 120 분에서 계속 5, 15, 30, 45, 및 tPA의 정맥 내 투여 후 60 분. rCBF의 마지막 측정 후, 두피 절개는 봉합에 의해 폐쇄된다. 참고 : 목 절개를하기 전에 우리가 MCA의 occlus 전 기준으로 rCBF을 측정이온. 포스트 MCA 폐색 우리는 목 절개 봉합 폐쇄 후 rCBF을 측정한다. 따라서, 목 절개 무균 유지된다. </li></ol> (5) 수술 후 케어 <ol><li> 탈수를 방지하고 즉시 수술과 통증 완화에 필요한 모든 6 ~ 12 시간 후 Buprenex (0.05 ㎎ / ㎏, SC)를 주입하는 식염수를 피하의 2.5 ml에 주입한다. </li><li> 이소 플루 란 마취를 중지합니다. 37 ° C 수의학 회수 챔버에 쥐를 놓고 (동물을 따뜻하게 유지) 관찰을 유지합니다. 쥐가 마취에서 회복하는 것은 일반적으로 10 분입니다. 그런 다음, 멸균 케이지에 동물을 넣어 장에 페트리 접시에 약간 젖은 음식을 놓고 동물 살균 방에 케이지를 반환합니다. </li><li> 뇌졸중 후 24 시간이 나트륨 펜토 바르 비탈 (100 ㎎ / ㎏ 체중, IP)의 과다로 래트를 안락사. </li></ol> (6) 신경 적자 점수 <ol><li> 전 색전술 후 2 시간에서 Bederson 점수를 수행합니다. 등급의를 사용하여0-3의 케일이 아니라 이전에 5 설명 : 꼬리 쥐를 올리는 공을 바닥에 두 앞발을 확장하고 다른 적자를 나타내지 않는 동물 (정상 동작); 한, 꼬리 쥐를 제기 반대측 앞다리 플렉스; 도 2는 선회하지 않고 횡 푸시 (및 앞다리 굴곡)에 대한 내성을 감소; 3, 돌고와 등급이 동일한 동작. 참고 : 색전술 후 2 시간에서 Bederson 점수 = 0 (적자)을 보여주는 쥐가 더 많은 연구에서 제외됩니다. </li></ol>

<ol><li>Overgaard, K., Sereghy, T., Boysen, G., Pedersen, H., Høyer, S., Diemer, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+reproducible+cerebral+infarction+using+thrombotic+blood+clot+emboli%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">A rat model of reproducible cerebral infarction using thrombotic blood clot emboli.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 12 (3), 484-490 (1992).</li>
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<li>Florian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+hypothermia+reduces+infarct+volume+in+aged+rats+after+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia.</a> Neurosci Lett. 438 (2), 180-185 (2008).</li>
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</ol>

우리는 공개할 잠재적인 상충되는 이해관계가 없습니다.

본 연구에서 우리는 MCA의 원점이 풍부한 피브린 응고에 의해 폐색 된 쥐에서 색 전성 뇌졸중 MCAO 모델을 수행하기위한 표준 방법을 설명했다. 이 모델의 주요 장점은 : 피브린 풍부한 혈병과 MCA의 줄기의 폐색은 인간에서 혈전 색 전성 뇌졸중 유사 색 전성 뇌졸중 모델 혈전 용해 요법의 전임상 연구를 수행하기에 적합하고,이 모델을 개발할 수 있음 MCA에 의해 공급 영토 내에서 재현하고 예측 경색 볼륨. 색전 MCAO 모델을 행하는, 혈전 도입, 안정성 및 거점은 경색 크기에서의 변화의 영향과 2,3 뇌 영역에 이르게하는, 관리하기가 어렵다. 이전의 연구는 방해 혈전이 MCA 2,3의 줄기에 박혀 때 MCA 영토에서 재현 허혈성 병변 만 달성 될 수 있다는 점을 보여 주었다. 정확하게 응고를 제출하고,재현 색 전성 뇌졸중 모델을 생산하고,이 연구에서, 우리는 수정 된 PE-50 튜브 및 방법 MCA의 기원과 방법을 MCA에 섬유소가...

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The institution "Louisiana State University Health Science Center" was changed to "Louisiana State University Health Science Center, Shreveport".

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Erratum: Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

뇌졸중은 미국에서 사망의 세 번째 주요 원인이지만, 급성 뇌졸중의 치료 옵션이 제한 남아있다. 현재, 혈전을 용해하는 재조합 조직 플라스 미노 겐 활성제 (TPA)의 정맥 주입은 급성 허혈성 뇌졸중에 대한 가장 효과적인 치료법이다. 그러나, tPA의 사용은 좁은 치료 창이과 뇌출혈의 위험 증가에 의해 제한됩니다. 따라서 혈전 용해 연구에 적합한 행정의 모델을 긴급하게 필요합니다. 중대 뇌동맥 (MCA)는 가장 자주 인간 스트로크에 가려 동맥이다. 이 동맥에 초점을 맞춘, 허혈성 뇌졸중의 여러 동물 모델이 설정되어있는 것. 현재, MCA를 폐색에 의해 쥐 초점 허혈 모델의 두 가지 주요 유형이 개발되어 있습니다 : 봉합 MCAO 모델과 전성 MCAO 모델. 관내 봉합 MCAO 기법을 통해 모델 널리기구 구동 스트로크 연구에 사용되어 왔지만, 이러한 봉합 모델 몰라인간의 스트로크의 80 %까지로 모방 인간의 스트로크는, 혈전이나 색전에 의해 발생합니다. 그러나, 혈액 응고를 사용하여 색 전성 뇌졸중 모델은 밀접하게 인간의 스트로크를 모방하고 혈전 용해 연구에 적합한 것으로 간주됩니다. 이 전성 모델은 1992 년에 처음 Overgaard 등. 1 쥐에서 개발 및 추가 장 등을 특징으로했다. 1,997 두와 디 나폴리 등에 의해. 2,006 3. 전성 MCAO 증가 주목을 받았다 있지만, 직면 한 기술적 문제가 많은 실험실에 의해. 이 문서에서는, 우리는 MCA 영토 내에서 예측 경색을 개발할 수 있습니다 성인 쥐에서 동종 혈액 응고와 색전 MCAO을 생산하기위한 표준 방법을 보여줍니다. 이 문서에 제시된 기술은 연구자 뇌졸중 연구를위한이 모델을 설정하기위한 기술적 인 문제를 극복하는 데 도움이됩니다.

<table><tbody><tr><td>rh-tPA</td><td>화학</td><td>Genentech</td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride</td><td>화학</td><td>Sigma</td><td>T8877</td></tr><tr><td>마취 기화기</td><td>장비</td><td>Soma Technology</td><td>Drager Vapor 19.1&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>충전식 고속 마이크로 드릴</td><td>장비</td><td>정밀 과학 도구</td><td>18000-17</td></tr><tr><td>곡선 가위</td><td>장비</td><td>정밀 과학 도구</td><td>14117-14</td></tr><tr><td>Dumont 집게 (의료 # 7)</td> <td>장비</td><td>정밀 과학 도구</td><td>11270-20</td></tr><tr><td>Dumont 집게 (의료 # 5)</td> <td>장비</td><td>정밀 과학 도구</td><td>11251-35</td></tr><tr><td>Vannas 스타일 스프링 가위</td><td>장비</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-03</td></tr><tr><td>수의학 회복 챔버&nbsp;</td><td>장비&nbsp;</td><td>페코 서비스&nbsp;</td><td>V1200&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Genie plus 주사기 펌프</td><td>장비</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td></td></tr><tr><td>쥐 뇌 매트릭스</td><td>장비</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>RBMA-310C</td></tr><tr><td>디지털 캘리퍼스&nbsp;</td><td>장비</td><td>World Precision Instruments</td><td></td></tr><tr><td>501601 해부 현미경</td><td>장비</td><td>World Precision Instruments</td><td>PZMTIII-BS-LWD</td></tr><tr><td>해밀턴 주사기</td><td>장비</td><td>해밀턴</td><td>모델 710</td></tr><tr><td>Homeothermic 담요 제어 장치</td><td>장비</td><td>하버드 장치</td><td></td></tr><tr><td>전기 클리퍼</td><td>장비</td><td>Braintree Scientific</td><td>CLP-9931</td></tr><tr><td>수의학 전기 수술 장치</td><td>장비</td><td>MACAN Manufacturing Company</td><td>MV-9</td></tr><tr><td>혈액 유량계</td><td>장비</td><td>Adinstruments</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab 4/30</td><td>장비</td><td>Adinstruments</td><td></td></tr><tr><td>LabChart 7.2</td><td>소프트웨어</td><td>Adinstruments</td><td></td></tr><tr><td>1 ml 주사기</td><td>소모품</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>309659</td></tr><tr><td>23G 바늘</td><td>소모품</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>305143</td></tr><tr><td>30G 바늘</td><td>소모품</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>305106</td></tr><tr><td>PE-50 튜빙</td><td>소모품</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>427517</td></tr><tr><td>PE-10 튜빙</td><td>소모품</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>427400</td></tr><tr><td>6-0 실크 봉합</td>사 <td>소모품</td><td>하버드 기구</td><td>723287</td></tr><tr><td>5-0 실크 봉합</td>사 <td>소모품</td><td>하버드 기구</td><td>517607</td></tr></tbody></table>

흰쥐의 동종 혈액 혈전과 허혈성 뇌졸중에 대한 전성 중간 대뇌 동맥 폐색 (mcao)

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

재조합 조직 플라스 미노 겐 활성제 (TPA)의 사용과 임상, 혈전 용해 치료는 급성 허혈성 뇌졸중의 가장 효과적인 치료 남아있다. 그러나, tPA의 사용은 좁은 치료 윈도우 의해 출혈성 변형의 위험 증가에 의해 제한된다. 허혈성 뇌졸중의 치료를위한 새로운 혈전 용해제 및 전략을 연구하기 적합한 뇌졸중 모델을 개발하기위한 시급한 필요성이있다. 관내 봉합 MCAO 및 색전 MCAO : 현재, 허혈성 뇌졸중 모델의 두 가지 주요 유형은 쥐와 생쥐에서 개발되었다. 관내 봉합 MCAO 기법을 통해 모델 널리기구 구동 스트로크 연구에 사용되어 왔지만, 이러한 봉합 모델 임상 상황을 모방하지 혈전 및 연구에 적합하지 않는다. 이러한 모델 중 전성 MCAO 모델은 밀접하게 인간의 허혈성 뇌졸중을 모방하고 혈전 용해 치료의 임상 연구에 적합하다. 이 전성 모델은 첫째 OV에 의해 쥐에서 개발 된1992 년. 등 1 ergaard 또한 장 등이 특징. 1,997 2. 전성 MCAO가 관심을 증가 얻고있다하더라도, 많은 실험실에서 직면 기술적 인 문제가 있습니다. 혈전 용해 연구에 대한 증가하는 요구를 충족하기 위해, 우리는 MCA 영토 내에서 예측 경색 볼륨을 개발할 수 쥐에 전성 MCAO의 높은 재현성 모델을 제시한다. 요컨대, 변성 PE-50 튜브 부드럽게 MCA의 원점에 도달 카테터의 팁까지 내 경동맥 (ICA)의 내강에 외부 경동맥 (ECA)에서 전진된다. 카테터를 통해 하나의 동종 혈액 응고는 MCA의 기원에 배치됩니다. MCA 폐색의 성공을 식별하는 지역 뇌 혈류량을 모니터링하고, 신경 학적 결손 및 경색 부피를 측정 하였다. 이 논문에서 제시 한 기술은 뇌졸중 연구를위한 모델을 구축하기위한 기술적 인 문제를 극복하기 위해 수사관을 도움이 될 것이다. &lt;/ P&gt;

레이저 도플러 flowmetry (LDF)는 뇌허혈 6,7의 유도시 rCBF를 모니터링하는 데 사용 하였다. 우리 연구실을 포함한 많은 실험실이 성공 MCA 폐색 동물을 식별 할 수 rCBF를 사용하고 있지만,베이스 라인의 임계 값은 측정 사이트에 관련된 실험실 사이에서 변화. LDF의 프로브는 2mm의 후방에 배치되고, 이전에 설명한 바와 같이 6 5mm는 브레 그마 측방. rCBF 0에서 모니터 된 5, 15, 30, 60, 90, 및 120 분의 주사 후 혈전. 이 데이터를 기초로, rCBF의 감소를 나타내지 만 동물&gt; 기준선의 70 % MCA 폐색의 성공적인 색전 (도 5)로 간주된다. 혈전의 주입 후 2 시간에, tPA의 (10 밀리그램 / kg) 7,8의 표준 래트 도즈는 시린지 주입 펌프 7,8 정보를 사용하여 30 분에 걸쳐 정맥 내 10 % 러스 90 % 연속 주입으로 투여 하였다. 우리는 rCBF...

이 논문에서는 성체 쥐에서 상동 혈전(피브린이 풍부한)을 동반한 색전성 중대뇌동맥 폐색을 생성하는 표준 방법을 보여줍니다. 이 모델은 인간 허혈성 뇌졸중을 밀접하게 모방하며 허혈성 뇌졸중에 대한 혈전용해 요법의 전임상 연구에 적합합니다.

흰쥐의 동종 혈액 혈전과 허혈성 뇌졸중에 대한 전성 중간 대뇌 동맥 폐색 (MCAO)

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

이 절차의 전반적인 목표는 쥐의 색전성 뇌졸중 모델을 개발하는 것입니다. 이것은 먼저 결찰하고, 일시적으로 총경동맥을 슬립 매듭으로 하고, 외부 경동맥을 가능한 한 단단히 조여서 수행됩니다. 그런 다음 분기점 위의 ECA 주위에 느슨한 봉합사를 놓습니다.두 번째 단계는 테고구개동맥과 내경동맥을 분리하고 슬립 매듭으로 임시로 결찰하는 것입니다. 그런 다음 단단하고 느슨한 합자 사이의 ECA에 작은 구멍을 자릅니다. 다음으로, 혈전을 포함하는 변형된 P50 튜브를 ECA에 도입합니다.그런 다음 카테터를 ICA로 반전시키고 카테터의 끝이 MCA의 원점에 도달할 때까지 튜브를 부드럽게 전진시킵니다. 마지막 단계는 식염수와 함께 카테터를 통해 혈전을 주입한 다음 5분 후에 ECA에서 카테터를 빼내는 것입니다. 최종적으로, 뇌졸중 후 24시간이 지나면 TTC 염색을 사용하여 뇌 절편의 경색 부위를 표시합니다.이 기술의 주요 장점, MC 모델과 같은 기존 뇌졸중 모델은 이 색전 뇌졸중 모델이 인간을 밀접하게 모방하여 뇌졸중 및 사용을 모방하여 허혈성 뇌졸중에 대한 SLI 요법의 사전 연구에 적합하며 절차가 내 실험실에서 Dr.A 포트 실패가 될 것임을 입증한다는 것입니다. Dr.Gene은 적색 회로 모델을 수행한 10년 이상의 경험을 가지고 있습니다. 이 방법의 시각적 시연은 중요한 단계이며 이름을 지정하기가 어렵습니다.준비하기 위해 PE 50 튜브를 가스 화재 위로 30cm 길이의 PE 50 튜브를 점차적으로 부드럽게 펴고 늘립니다. 디지털 캘리퍼를 사용하여 스트레치 튜브의 점을 선택합니다. 그런 다음 끝이 1cm이고 외경이 0.30에서 0.34mm 사이인 25cm 길이의 세그먼트로 자릅니다.다음으로, 20cm 길이의 PE 50 튜브로 마취된 쥐의 대퇴 동맥 혈액을 채취합니다. 혈액이 응고될 때까지 튜브를 실온에 2시간 동안 놓습니다. 그런 다음 섭씨 4도에서 22시간 동안 튜브를 유지합니다.PE 50 튜브를 50mm 세그먼트로 자르고 튜브의 혈전을 씻어내어 생리식염수가 들어 있는 멸균 페트리 접시에 넣습니다. 50mm 길이의 혈전을 60mm 길이의 PE 10 튜브로 옮깁니다. 그런 다음 PE 10 튜브의 각 끝을 20cm 길이의 PE 50 튜브에 연결하고, 이 튜브는 피브린 코어를 방해하지 않고 혈액 세포를 제거하기 위해 23게이지 바늘로 일반 식염수가 들어 있는 1밀리리터 주사기에 연결되고, 그 후 5분 동안 혈전을 한 주사기에서 다른 주사기로 또는 그 반대로 계속 이동합니다. 혈전을 40mm 길이의 분절로 절단하고 혈전 분절을 변형된 PE 50 카테터로 옮깁니다.이 절차에서는 모든 수술 도구를 고압멸균으로 소독하고 수술 테이블 및 관련 수술 장비를 70% 에탄올로 소독합니다. 다음으로, 이소 불소로 쥐를 마취하고 뒷발에 발가락 꼬집기를 수행하여 마취 깊이를 확보합니다. 건조를 방지하기 위해 눈에 소량의 연고를 바르십시오.그런 다음 쥐를 가열 패드에 누운 자세로 놓습니다. 그 후, 전기 클리퍼로 복부 목 부위의 털을 면도하고 70 % 에탄올로 피부와 주변 털을 소독합니다. 직장 프로브를 삽입하고 호메오 테마 블랭킷 컨트롤 유닛을 사용하여 체온을 섭씨 37도 정도로 유지합니다.그런 다음 해부 현미경으로 목에 2cm 길이의 정중선을 절개합니다. 견인기를 사용하여 수술 영역을 노출시킵니다. 미주신경에 해를 끼치지 않고 주변 신경으로부터 CCA를 절개하고, 동맥 아래에 멸균 5 제로 실크 봉합사를 놓는다.슬립 매듭을 묶고 봉합사를 몸쪽으로 당깁니다. 다음으로, ECA와 그 두 가지를 해부하고, OA와 STA는 수의학 전기 수술 장치를 사용하여 두 가지를 응고시킨 다음 ECA 아래에 두 개의 멸균 6 제로 실크 봉합사를 배치하고 동맥 아래에 놓인 두 개의 실크 봉합사를 분리하여 한 조각은 머리를 향하고 다른 한 조각은 몸을 향합니다. 머리에 가장 가까운 쪽에 단단히 합자를 묶습니다.작은 지혈기로 실크 봉합사를 잡고 머리 쪽으로 당깁니다. 나중에 사용할 수 있도록 다른 실크 봉합사로 느슨한 매듭을 준비합니다. 이제 미주신경에 해를 끼치지 않고 주변 신경에서 ICA와 PPA를 해부합니다.PPA를 6개의 제로 봉합사로 묶습니다. 그런 다음 ICA 주위에 슬립매듭을 만들거나 미세혈관 클립을 사용하여 ICA를 클립합니다. 다음으로, 베니스 스타일의 스프링 가위로 단단하고 느슨한 합자 사이의 ECA에 작은 구멍을 자릅니다.혈전이 포함된 변형된 PE 50 튜브를 절개 부위에 삽입하고 CCA의 분기점으로 진행합니다. 내강 주위의 느슨한 합자를 유도관의 이동성을 안전하게 보존할 수 있을 만큼만 조입니다. 그런 다음 작은 구멍 부위에서 ECA를 잘라 그루터기를 제거합니다.ECA와 ICA의 분기점 아래에 그루터기를 배치합니다. 이렇게 하면 수정된 튜브가 ICA로 쉽게 미끄러질 수 있습니다. ICA를 열고 카테터의 끝이 MCA의 원점에 도달할 때까지 ECA의 루멘에서 ICA로 튜브를 부드럽게 전진시킵니다.이제 100마이크로리터 해밀턴 주사기를 사용하여 10초 동안 10마이크로리터의 식염수와 함께 변형된 P 50 카테터를 통해 혈전을 주입합니다. 5분 후 ECA에서 카테터를 빼내고 ECA를 묶은 다음 ECA를 다시 열고 목의 절개 부위를 봉합합니다. 이 절차에서는 마취된 쥐의 두피에 1.2cm 길이의 정중선을 절개하여 두개골을 노출시킵니다.다음 드릴은 0.7mm 구형 스테인리스강 버를 사용하여 bgma 뒤쪽 2mm, 측면 5mm에 위치한 1.5mm 직경의 버 홀입니다. 프로브를 경막 표면에서 0.5mm 위에 놓습니다. 색전술 2시간 후 색전술 후 0, 5, 15, 30, 60, 90, 120분에 혈류계를 사용하여 RCBF를 측정합니다.쥐에게 TPA를 투여하고 수술 후 5, 15, 30, 45, 60분에 혈류를 지속적으로 모니터링하고, 탈수를 방지하기 위해 동물에 2.5ml의 식염수를 피하주사하고 수술 직후 kg당 0.05mg의 Bren을 피하주사하고 통증 완화를 위해 필요에 따라 6-12시간마다 Bren을 피하주사합니다. 불소 마취를 중지하십시오. 쥐를 섭씨 37도의 수의학 회복실에 넣고 계속 모니터링하십시오.약 10분 후, 동물을 페트리 접시에 젖은 음식과 함께 멸균된 케이지에 넣은 후 케이지를 동물 살균실로 되돌려 놓습니다. 색전술 2시간 후, BESON 점수를 사용하여 신경학적 점수를 평가합니다. 결핍이 없는 쥐는 추가 연구에서 제외됩니다.이 그림은 레이저 도플러 유량계를 사용한 RCBF 측정을 보여줍니다. 혈전 주입은 기준선 값의 70% 이상의 RCBF 감소로 이어졌습니다. 혈전 후 2시간 후 30분 동안 TPA 치료가 회복되었습니다.RCBF가 기준선에 가깝습니다. 여기 대표적인 사진은 뇌졸중 후 24시간 후에 MCA와 CA의 기원에 있는 혈전을 보여줍니다. 이것이 TTC 염색된 뇌 절편의 대표적인 이미지입니다.뇌졸중 후 24시간 이 기술을 마스터하면 30분 이내에 완료해야 합니다.

embolic-middle-cerebral-artery-occlusion-mcao-for-ischemic-stroke

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

쥐에서 허혈성 뇌 손상 외과 유도는 뇌졸중 연구 널리 사용되는 모델입니다. 여기서 우리는 중간 대뇌 동맥의 폐색에 의해 초점 대뇌 국소 빈혈의 유도를 보여줍니다. histological 얼룩 및 자기 공명 영상에 의해 발생하는 경색의 시각화도 표시됩니다.

쥐 중간 대뇌 동맥의 폐색의 Endovascular 봉합사에 의해 초점 대뇌 국소 빈혈 모델

우리는 비디오 intraluminal monofilament를 사용하여 성인 마우스의 중간 대뇌 동맥 폐색을 생산하는 방법을 보여줍니다. 또한 2,3,5 - triphenyltetrazolium 염화물 (TTC) 염색법에 의해 대뇌 경색의 범위를 평가하는 방법을 보여줍니다.

중간 대뇌 동맥 폐색의 마우스 모델

intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색 (MCAO) 모델은 실험 허혈성 뇌졸중 모델 중 가장 자주 사용되는 모델입니다. 여기서 우리는 전체 레이저 도플러 flowmetry의 가이드와 함께 상세하게 모델 및 대표 결과를 보여줄 것입니다.

마우스의 레이저 도플러 Flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 중간 대뇌 동맥 Intraluminal 폐색 (MCAO) 모델

이 비디오는 허혈성 뇌졸중을 모델링하기 위해 노화된 쥐에서 총경동맥 또는 CCA 결찰술을 사용하여 영구 원위 중대뇌동맥 폐색(MCAO)을 수행하는 절차를 보여줍니다. 이는 뇌로 가는 혈류를 차단하여 신경 세포의 사멸로 이어지며 뇌졸중 메커니즘과 잠재적 치료법을 연구하기 위한 모델을 생성합니다.

쥐 모델에서 중추 및 일반 경동맥 폐색을 통한 허혈 유도

중간 대뇌 동맥의 Intraluminal 필 라 멘 트 폐색 설치류 실험 뇌졸중의 가장 자주 사용 된 vivo에서 모델입니다. 일반적인 경 동맥 복구를 허용 하는 다른 수술 접근 여기, 일반적인 경 동맥의 reperfusion 및 중간 대뇌 동맥 영역 전체 reperfusion 수 있습니다 수행 됩니다.

쥐에 있는 일반적인 경 동맥 수리 통해 Reperfusion를 허용 하는 중간 대뇌 동맥 폐색

여기에서 우리는 내부 경 동맥을 통해 중간 대뇌 동맥을 폐색 하 여 쥐의 사후 뇌졸중 우울증을 유도 하는 프로토콜을 제시. 우리는 Porsolt 강제 수영 시험과 자당 기본 설정 테스트를 사용 하 여 유도 우울한 기분을 확인 하 고 평가 합니다.

쥐의 사후 뇌졸중 우울증을 유도 하기 위한 중간 대뇌 동맥 폐색 기술

이 프로토콜은 중간 크기의 경색과 우수한 생존율을 가진 독특한 마우스 스트로크 모델을 보여줍니다. 이 모델을 통해 전임상 뇌졸중 연구자는 허혈 기간을 연장하고, 노령 마우스를 사용하고, 장기적인 기능적 결과를 평가할 수 있습니다.

늙은 쥐의 뇌졸중 결과를 연구하기 위해 수정된 경두개 중뇌동맥 폐색 모델

이 프로토콜은 중뇌동맥의 내강 내 폐색을 통한 마우스의 일시적인 국소 대뇌 허혈 모델을 설명합니다. 또한 자기 공명 영상 및 행동 테스트를 사용하여 결과 평가의 예를 보여줍니다.

뇌졸중의 일시적인 중뇌동맥 폐색 모델

여기에서는 C57BL/6J 마우스에서 경두개 전기응고를 통해 원위 중뇌동맥 폐색(dMCAO) 모델을 확립하고 후속 신경학적 행동 및 조직병리학적 특징을 평가하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

원위 중동맥 폐색 기법을 사용한 마우스의 급성 허혈성 뇌졸중 유도

현재 프로토콜은 손상을 입히지 않고 뇌 혈관의 해부학적 구조를 보존하는 중대뇌 동맥 폐색/재관류의 쥐 모델을 설명합니다.

대뇌 혈관의 해부학적 구조를 손상시키지 않고 중간 대뇌 동맥 폐색/재관류의 쥐 모델

본 연구의 목적은 쥐에서 두개골 절제술 후 영구적이고 선택적인 중뇌동맥 폐색을 수행하는 재현 가능한 방법을 확립하여 운동 및 공간 기억 결손에 대한 실험 연구에 적용하는 것이었습니다.

쥐의 중뇌동맥 선택적 및 영구 폐색: 운동 및 공간 기억 결손 연구를 위한 실험적 접근법

학습하세요 흰쥐에서 동종 혈전을 이용한 전성 중간 대뇌 동맥 폐색법으로 허혈성 뇌졸중 모델을 수립하는 방법을. 이 기법은 혈전용해 요법 연구에 활용할 수 있습니다.

흰쥐의 동종 혈액 혈전과 허혈성 뇌졸중에 대한 전성 중간 대뇌 동맥 폐색 (MCAO)

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