Name: 의 고품질의 디지털 비디오 취득 초파리 측면 관점에서 애벌레 및 성인 동작 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: 학습하세요 Drosophila 돌연변이 표현형을 측면 관점에서 고품질 디지털 비디오로 촬영하는 현미경 기법을. 이 방법은 다양한 스테레오 현미경 시스템에 적용 가능하여 유전학 연구의 시각적 데이터 전달을 향상시킵니다.

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저자는 영상 내레이션을 제공하는 기술 지원 및 지원, 제임스 바튼에 대한 알렉산드라 오피을 인정하고자하고, 첨부 된 영상에 나타나는에 대한 라모나 Flatz 및 Joellen 스위니. 이 작품은 MJ 머독 자선 신탁 (JED에 부여 번호 2012205)에 의해 지원되었다.

1 스테레오 현미경 시스템 주 :이 프로토콜은 쉽게 영상을 취득하는 기능과, 디지털 카메라에 결합 된 거의 모든 스테레오 현미경 시스템에 적용 할 수 있지만, 정보는 (재료 / 장비의 도표) 연구실에서 사용되는 시스템에 제공된다. <ol><li> 상업적 디지털 카메라에 결합 안 현미경 스테레오 현미경을 이용하여 디지털 영상을 획득. </li><li> 커플 스테레오 현미경 안 현미경 포트 상업적 디지털 카메라를 위해, 스테레오 현미경 광전관 포트 ½x C-마운트를 제거하고 1X C-마운트로 대체. </li><li> 1X C-마운트에 디지털 카메라 커플러 (43mm 스레드)를 탑재합니다. </li><li> 카메라 커플러에 실장이 스텝 다운 링 48mm까지 58mm, 43mm 및 48mm로는, 디지털 카메라를위한 렌즈 어댑터 키트에 디지털 카메라 커플러에서 연결 다리. </li><li> 렌즈 어댑터 키트에 디지털 카메라를 탑재합니다. </li><li> 약 12 배의 결합 배율 (초당 30 프레임, 640 × 480 픽셀)에 대한 현미경 배율 디지털 카메라 세트의 광학 줌과 비디오를 획득. 참고 : 스테레오 현미경의 배율은 삼안 포트의 새롭게 재구성 1X C-마운트에 따라 보상해야합니다. </li></ol> 2 이미징 초파리 셋째 유충 <ol><li> 테이프 마커 캡의 측면이 대략 차지하도록 디지털 카메라에 결합 스테레오 현미경 검정 스테이지 플레이트 영구 마커 ⅓ 카메라의 LCD 모니터에서 관찰 된 뷰의 수직 필드의 ¼한다. 그들이 색상 코드에 사용 이미지화되는 유충의 유전자형을 구별 할 수있는 색상의 구색에 와서 때문에 애벌레 이미징을 수행 할 수있는 단계로 마커 상판을 사용합니다. </li><li> 미세한 포인트 마커의 상부 표면 상에 디지털 카메라의 LCD 모니터에서 관찰 시야를 구별마커. </li><li> 이미지에 대한 제 령 유충을 선택합니다. 셋째 령 유충을 선택하기위한 기준은 몸체 길이, 생활주기의 애벌레 단계, 전방 및 후방 spiracles의 존재 중에 음식 소스로부터 출현하고, 구강 장치 (11)의 하악 후크의 구조였다. 유충은 물 속에서 철저하게 세척하여 청소합니다. </li><li> 광섬유 조명 시스템으로부터의 광 위에서 영구 마커 위쪽 단을 밝히는. 최적의 조명을 제공하는 입사광의 각도를 조정한다. </li><li> 영구 마커 상단의 가장자리에 현미경 초점을 맞 춥니 다. 디지털 영상을 획득 시작합니다. </li><li> 시야를 향 유충 (그림 1)의 전방으로 바로 시야 밖에서 약 75 ° 떨어진 수직 축에서 마커 캡의 측면에 애벌레를 놓습니다. 주 : 마커 캡의 측면에 배치 유충은 번째의 레코드에 카메라 움직임을 허용측면 관점에서 전자 유충. 그것은 그들이 마커 캡의 측면에서 떨어지지 않도록 물과 습기가 애벌레를 유지하는 데 도움이됩니다. 케어는 들판을 가로 질러 크롤 과도한 양의 유충을 준수하므로 물을 너무 많이 사용하지 않는, 그러나 운동을해야합니다. </li><li> 조심스럽게 찌르고보기의 들판을 가로 질러 크롤링을 강요하는 작은 페인트 브러시와 유충을 자극. 애벌레는 거의 협력하지 않고는 직선 들판을 가로 질러 기어 전에 자주 시작점으로 많은 시간을 반환해야 할 환자로합니다. </li><li> 기록 약 10-15 중단 디지털 비디오 영상과 작물의 분 및 디지털 비디오 편집 소프트웨어와 불필요한 영상의 취득 후 제거합니다. </li></ol> 3 이미징 성인 초파리 <ol><li> 일회용 1.5 ml의 분광 폴리스티렌 큐벳에 하나의 성인 초파리를 놓습니다. 참고 : 성인 초파리의 CO 2 진통제를 즉시 난연성 전에ioral 분석 프로토콜은 결과 (12)을 손상시킬 수 있습니다. 성인 초파리가 행동 검사 (13)에 수행하기 전에 CO 2 진통제를 복구하기 위해 24 시간의 기간을 부여하는 것이이 좋습니다. </li><li> 작은면 공을 큐벳의 끝을 연결합니다. 코튼 볼이 넓은 모자 공간을 차지할 정도로 꽉 포장되어 있는지 확인하고, 베트의 감소 된 구획으로 비행을 제한한다. </li><li> 실체 현미경의 스테이지 흰색 접시에 놓고 큐벳을 적절히 디지털 카메라 LCD 모니터에서 관찰 시야와 큐벳의 감소 된 용적 구획 정렬. </li><li> 광섬유 조명 시스템으로부터의 광 위에서 큐벳 밝히는. 최적의 조명을 제공하는 입사광의 각도를 조정한다. </li><li> 현미경 초점 및 디지털 비디오를 획득 시작합니다. </li><li> 기록 약 30-45 중단 디지털 비디오 영상과 작물의 분, 불필요한 제거디지털 비디오 편집 소프트웨어와 영상의 취득 후. </li></ol>

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</ol>

저자는 경쟁 이해 관계가 존재하지 않는 것을 선언했다.

신경계의 기능을 연구하기위한 모델 시스템으로 초파리 melanogaster의 강도는 크게 유전 가능한 강력한 도구 수렴 및 개발 강력한 행동 분석의 광범위한 유래한다. 여기서 우리는 측면 관점에서 초파리 성인 및 애벌레 기관차 표현형의 고품질 디지털 영상을 획득하는 간단하고 널리 접근 현미경 기술을 제시한다. 우리는 성공적으로 특성화하고 후방 마비의 정도를 정량화하기 위해이 방법을 사용했다 &#39;꼬리 플립&#39;직접 꼬리 크롤링주기 14시 가로 축에서 제기됐다있는 최대 각도를 측정하여 신경 학적 셋째 령 애벌레 돌연변이 체에서 관찰 된 표현형. 여기에 제시된 방법의 장점은 비디오 기관차 비정상적인 행동의 직접 관찰 및 분석을 가능하게 횡 방향 관점에서 획득된다는 것이다, 종종 신경계 및 유충에서 관찰는 Dult 돌연변이, 더 많은 정보를 &#39;사이드 뷰&#39;방향에서. 따라서, 애벌레 초파리 연동 근육의 수축, 성인 초파리...

일반적인 과일 초파리 플라이는 1-3 신경계의 기능을 연구하는 실험 모델 강력한 시스템이다. 구조 진화 및 인간과 신경계의 기능의 보전,뿐만 아니라 유전자 조작의 용이성 및 유전 도구의 광대 한 배열은 초파리보기 인간 신경 퇴행성 질환 (4)를 모델링하는 초연 유기체를 만든다. 신경계의 기능 장애의 원인이 유전자 변이는 종종 장애인 운동으로 가능한 돌연변이 애벌레와 성인 초파리 초래한다. 신경계 결함이있는 돌연변이 체에서 관찰 된 표현형은 운동, 비정상적인 조정하고, 성인의 경련 운동의 속도뿐만 아니라 신체 벽 근육의 연동 수축 적자, 유충의 부분 마비를 감소 등이 있습니다. 이 표현형은 높은 처리량 유전 화면과 돌연변이 유충 5의 운동 분석의 개발에 이용 된, 운동 손상을 정량화하고 신경계의 기능에 필요한 유전자를 식별하기위한 6 성인 7 ~ 10 초파리. 이러한 접근은 유충 및 성인 기관차 동작을 정량화하는 데 매우 유용하지만, 이들은 각각 특정 비정상적인 동작에 대한 정성적인 정보를 전달하지 못한다. 돌연변이 제 령 유충 행동 분석에서 변경된 운동력 파라미터를 나타낼 수있는 반면이 크롤링주기 동안 리듬 연동 수축의 변화, 조정의 일반적인 결여 또는 후방 신체 부분 마비의 결과 인 경우, 예를 들어, 불분명 할 수있다 벽의 근육. 여기서 우리는 측면 관점에서 초파리 성인 및 애벌레 기관차 표현형의 고품질 디지털 영상을 획득하는 간단하고 널리 접근 현미경 기술을 설명합니다. 측면 관점에서 인수 한 디지털 비디오 locomotiv의 미묘한 차이의 직접 관찰 및 분석을 할 수 있습니다더 많은 정보를 사이드 뷰 방향에서 전자의 행동.

<table><tbody><tr><td>삼안 실체 현미경</td><td>Olympus Corporation</td><td>SZ6145TR</td><td>&frac12; C-마운트는 제거되고 1X C-마운트로 교체됨</td></tr><tr><td>1X C-마운트</td><td>Leeds Precision Instruments</td><td>LSZ-1XCMT2</td><td></td></tr><tr><td>디지털 카메라 커플러(43mm 나사)</td><td>Qioptiq 이미징 솔루션</td><td>25-70-10-02</td><td></td></tr><tr><td>58mm - 48mm 스텝 다운 링</td><td>B& H 비디오</td><td>GBSDR5848</td><td></td></tr><tr><td>48mm - 43mm 스텝 다운 링</td><td>B& </td><td></td> 캐논 G10 LensMateOnline.com 캐논 파워샷 G10 디지털 카메라용 H 비디오 GBSDR4843 <td></td></tr><tr><td>렌즈메이트 어댑터 키트</td><td></td> 캐논 U.S.A., Inc.<td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.5ml 분광 폴리스테렌 큐벳</td><td>Denville Scientific</td><td>U8650-4</td><td></td></tr></tbody></table>

의 고품질의 디지털 비디오 취득 초파리 측면 관점에서 애벌레 및 성인 동작

Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective

초파리 melanogaster은 신경계의 기능을 연구하기위한 강력한 실험 모델 시스템이다. 신경계의 기능 장애의 원인이 유전자 변이는 종종 가능한 유충 적절하게 텍스트로 설명하거나 완전히 하나의 사진 이미지로 표현하기 어려운 운동 결함이 표현형이 성인을 생산하고 있습니다. 과학 출판사의 전류 모드는, 그러나, 원고 동행 보조 재료로서 디지털 영상 매체의 제출을​​ 지원한다. 여기에서 우리는 측면 관점에서 모두 초파리 애벌레와 성인 표현형의 고품질 디지털 영상을 획득하는 간단하고 널리 접근 현미경 기술을 설명합니다. 이 탈선 기관차 행동의 관찰과 미묘한 차이와 변화의 분석을 할 수 있기 때문에 사이드 뷰에서 애벌레와 성인 운동의 비디오는 유리하다. 우리는 성공적으로 시각화하고 aberran 정량화하는 기술을 사용했다t는 정리를 포함하여 성인 돌연변이 표현형과 행동뿐만 아니라, 셋째 령 유충의 행동을 크롤링.

우리는 성공적으로 획득하고 stathmin 유전자의 기능의 상실 (그림 2) (14)와 관련된 애벌레 행동 표현형을 정량화하기 위해이 기술을 사용하고 있습니다. stathmin 유전자는 수용성 튜 불린의 풀에서 튜 불린 이량 체를 분할 미세 소관 규제 단백질을 암호화하고, 미세 소관 결합과 해체 (15, 16)을 촉진한다. Stathmin 기능은 말초 신경 축색 돌기 (14)의 미세 소관에서의 무결성을 유지해야한다. 후방 본체 세그먼트 크롤링주기 동안 근육 수축의 각 연동 파도 후 상승 반전하는 표현형 초파리 셋째 령 유충 결과에 stathmin 활동의 중단. 이 후방 마비 또는 '꼬리 플립'표현형에 결함이 축삭 수송의 특징이다. 우리는 서로 다른 일곱 제 3 령 유충의 후방 마비 표현형의 투과도 및 심각도를 정량화 &lt;EM&gt; 수평 테일을 위 각을 측정하여 유전자형을 돌연변이하면 s...

여기서 우리는 측면 관점에서 초파리 성인 및 애벌레 돌연변이 표현형의 고품질 디지털 영상을 획득하는 간단하고 널리 접근 현미경 기술을 설명합니다.

Drosophila melanogaster is a powerful experimental model system for studying the function of the nervous system. Gene mutations that cause dysfunction of ...

현재 과학 출판 방식은 디지털 비디오 미디어 파일을 원고의 보충 자료로 제출하는 것을 지원합니다. 이러한 비디오 미디어 파일은 텍스트나 단일 사진으로 설명하는 것보다 더 쉽게 관찰할 수 있는 독자에게 질적 정보를 전달하는 데 자주 사용됩니다. 여기에서는 측면 관점에서 초파리 돌연변이 표현형의 고품질 디지털 비디오를 획득하기 위한 간단한 방법론을 간략하게 설명합니다.이 프로토콜은 디지털 카메라에 연결된 거의 모든 실체 현미경 시스템에 쉽게 적용할 수 있지만 비디오를 획득할 수 있는 기능을 통해 세부 정보는 실험실에서 사용하는 시스템에 제공됩니다.시판되는 Canon G 10 디지털 카메라와 결합된 Olympus SZ 61 입안 실체 현미경을 사용하여 비디오를 획득합니다. 실체 현미경의 포토 튜브 포트의 1/2 XC 마운트는 1개의 XC 마운트로 재구성되었습니다. 디지털 카메라 커플러가 XC 마운트 1개에 장착되었습니다.58mm에서 48mm 및 48mm에서 43mm의 두 개의 강압 링이 카메라 커플러에 장착되었습니다. Canon G 10 카메라용 어댑터 키트가 장착되었습니다. Canon G 10 카메라에 연결 연결 이미지로.셋째, 측면 관점에서 본 별 유충의 경우, 영구 마커를 실체 현미경 무대에 테이프로 붙입니다. 마커 캡은 카메라 LCD 모니터에서 관찰되는 수직 필드의 약 1/4을 차지해야 합니다. 우리는 마커를 대안 단계로 사용하는데, 이는 마커 캡에서 이미지화되는 유충의 유전자형을 색상 코드로 구분하고 구별할 수 있는 다양한 색상으로 제공되기 때문입니다.카메라 LCD 모니터에서 관찰되는 시야의 왼쪽과 오른쪽 경계를 표시합니다. 이미지화할 세 번째 instar 유충을 선택합니다. 유충을 물로 철저히 씻어 깨끗한지 확인하십시오.마커 캡의 가장자리에 현미경의 초점을 맞추고 디지털 비디오 획득을 시작합니다. 시야 바로 바깥에 있는 마커 캡 측면에 유충을 놓습니다. 마커 캡 측면에 유충을 배치하면 카메라가 유충의 움직임을 기록할 수 있습니다 측면 관점에서 유충이 마커 캡 측면에서 떨어지지 않도록 물로 촉촉하게 유지하는 데 도움이 됩니다.단, 물을 너무 많이 사용하지 않도록 주의하자. 애벌레를 붓으로 부드럽게 찌르고 찌르면 시야를 가로질러 기어 다니도록 강요합니다. 인내심을 가지십시오.유충은 거의 협조하지 않으며 들판을 똑바로 기어 다닐 때까지 여러 번 시작 지점으로 돌아가야 하는 경우가 많습니다. 우리는 일반적으로 1

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

에서 복잡한 운전하는 동작의...

성인 Drosophila Melanogaster의 로코의 고해상도 비디오 추적

이 논문은 직접 번데기를 통해 이미지 세포 행동에 빠른 스캐닝 공 초점 현미경을 사용하는 방법을 보여줍니다. 그대로 번데기 경우를 떠남으로서,이 방법은 직접 공부하기 어려운 초파리 개발의 단계에서 관찰하고 역동적 인 세포 프로세스의 측정을 할 수 있습니다.

의 번데기 케이스를 통해서 영상<em&gt; 초파리</em

이 프로토콜은 살아있는 초파리 번데기 눈 신경 상피를 이미징하는 효율적인 방법을 제시합니다. 이 방법은 조직의 움직임과 불균일한 토폴로지를 보상하고, 여러 GFP 태그가 지정된 접합 단백질을 사용하여 세포 경계의 시각화를 향상시키며, 쉽게 조립할 수 있는 이미징 장비를 사용합니다.

의 라이브 영상 초파리 번데기 눈

여기에서, 우리는 비침습적이고 세부지향적인 방식으로 Drosophila 배아에서 배아 근육 수축을 기록하는 방법을 제시한다.

초파리 배아에서 근육 수축의 라이브 이미징 및 분석

이 프로토콜은 과일 파리가 변형을 겪으면서 Drosophila 복부 상피에서 세포 배향 및 조직 성장의 역학을 이미징 및 분석하기 위해 설계되었습니다. 여기에서 기술된 방법론은 Drosophila 또는 그밖 모형 유기체에 있는 다른 발달 단계, 조직 및 subcellular 구조물의 연구 결과에 적용될 수 있습니다.

푸팔 단계 동안 개발 초파리 에피텔리아에서 조직 방향 과 성장 역학의 이미징 및 분석

이 프로토콜은 그대로 살아있는 동물에서 중단없는 시간 경과 이미징의 10 시간 이상을 달성하기 위해 Drosophila 애벌레를 장착하는 방법을 설명합니다. 이 방법은 애벌레 몸벽에 가까운 많은 생물학적 과정을 이미지화하는데 사용될 수 있다.

LarvaSPA, 장기 시간 경과 이미징을 위한 초파리 유충을 장착하는 방법

여기에 제시된 프로토콜은 플레이트 기반의 고함량 이미저를 사용하여 배아 발달 중에 여러 Drosophila 배아를 마이크로주입하고 동시에 이미지화하는 프로토콜이다.

자동 고함량 분석기를 사용하여 수행된 살아있는 세포 현미경 검사법을 위한 Drosophila 배아 준비 및 미세 주입

이 프로토콜은 간단한 성인 Drosophila 행동 관측실을 만드는 방법, 그리고 상대적으로 간단하고 저렴한 방법을 통해 관찰실에서 과일 파리의 다른 유형의 형태 또는 행동의 고화질 사진 / 비디오를 찍는 방법에 대해 설명합니다.

드로소필라 성인의 행동 연구를 위한 조정 가능한 고화질 화상 진찰 시스템

여기에서는 번데기를 완전히 제거하는 번데기 단계에서 초파리 다리의 장기 라이브 이미징을 위한 프로토콜이 제시됩니다. 이 프로토콜은 다른 조직에도 적용할 수 있습니다.

번데기 제거 후 Drosophila Pupal 다리 발달의 장기 라이브 이미징

Drosophila melanogaster의 애벌레가 애벌레 segmental 신경 이내 axonal 수송의 메커니즘을 조사하기 위해 이상적인 모델 시스템을 제공합니다. 이 절차를 사용하여 다양한 변이를 갖고 제 3 instar의 애벌레는 야생 타입 애벌레 비교할 수 있습니다.

3 애벌레 Segmental 신경의 시각화 차 Instar Drosophila 애벌레 준비

학습하세요 Drosophila 돌연변이 표현형을 측면 관점에서 고품질 디지털 비디오로 촬영하는 현미경 기법을. 이 방법은 다양한 스테레오 현미경 시스템에 적용 가능하여 유전학 연구의 시각적 데이터 전달을 향상시킵니다.

의 고품질의 디지털 비디오 취득 초파리 측면 관점에서 애벌레 및 성인 동작

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