2014년 12월 13일
여기에서는 스트레스를 받는 개인의 회피를 정량화하는 프로토콜을 제시합니다. 이 패러다임은 강력하면서도 사용자 친화적이며 Drosophila melanogaster의 한 종류의 사회적 상호 작용에 대한 유전자와 환경의 영향을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.
이 절차의 목표는 스트레스를 받은 개인이 방출하는 사회적 신호에 대한 파리의 반응을 정량화하는 것입니다. 이것은 실험 2일 전에 먼저 수집, 반응자 및 이미터 비행을 통해 수행됩니다. 두 번째 단계는 실험 2시간 전에 이미터와 반응 파리를 모두 새 바이알로 옮기고 분석이 수행될 환경 제어실에 습관화하는 것입니다.
다음으로, 반응자 파리를 TMA에 넣고 이전에 파리에게 스트레스를 가하여 초파리 스트레스 냄새 물질이 들어 있는 바이알과 새 바이알 중에서 선택할 수 있으며, 마지막 단계는 DSO 바이알의 새 바이알과 엘리베이터에 있는 응답자 파리의 수를 세어 DSO에 대한 반응을 정량화하는 것입니다. 궁극적으로 T 미로는 사회적 스트레스 신호, 특히 길로 스트레스 냄새 물질의 파리에 의한 회피를 측정하는 데 사용됩니다. 이 방법에 대한 아이디어는 Caltech에서 박사후 연구원으로 일할 때 처음 떠올랐습니다.
그 당시, Greg Sue와 그의 박사후 과정 지도교수인 David Anderson은 Phyla에 대한 두려움 또는 사회적 회피를 연구하고 있었지만, 이에 대한 기존 분석법은 없었습니다. S 브랜드 랩에서 많은 행동 분석을 하고 있었고, 사진 택시와 후각 학습 실험을 하는 동안 당시 전기 충격으로 스트레스를 받았던 파리가 있는 바이알을 피하면서 다른 파리들이 방해받지 않는 시간을 보내는 바이알에 파리가 끌린다는 것을 알아차렸기 때문에 그들은 저에게 접근했습니다. 비숍. 사회적 회피 분석법의 실험 과정에서는 파리나 DSL을 잃지 않고 BIOS를 빠르고 효율적으로 전송하기 위해 몇 가지 연습이 필요하기 때문에 이 방법의 시연은 매우 중요합니다.
컴퓨터 보조 비디오 추적과 같은 기존 방법에 비해 사회적 상호 작용을 조사하는 이 기술의 주요 장점은 이것이 마스터하고 구현하기 쉬운 분석이지만 스트레스를 받는 개인의 사회적 회피를 정량화하는 데 매우 강력하다는 것입니다. 실험을 시작하려면 다공성 폴리에틸렌 시트를 잘라 12.7cm x 10.2cm 상자를 덮습니다. 상자에 으깬 얼음을 채우고 시트로 덮으면 초파리 냉 마취 장치가 완성됩니다.
균일한 조명 조건을 보장하기 위해 흰색 벤치 커버와 앞에 화이트보드로 덮인 벤치에서 실험을 수행합니다. 다음으로, 와류 파리 흡인기 팀원 장치, 온도계 및 타이머를 준비합니다. 실험 1-2일 전에 결장 마취 파리.
깔때기가 있는 파리를 50ml 튜브로 옮기고 튜브를 얼음 높이 아래의 단열 얼음 양동이에 넣습니다. 파리가 오한 혼수 상태에 빠질 때까지 5분 동안 기다립니다. 그런 다음 실온에서 다공성 폴리에틸렌 시트에 파리를 옮기고 실체 현미경으로 응답자 파리를 분류합니다.
3-7 일 된 수컷 파리와 암컷 파리를 분리하고,이 파리를 40 마리의 그룹으로 유지하십시오. 입 흡입기를 사용하여 파리가 날아갈 수 있도록 합니다. 수집이 행동에 미치는 혼란스러운 영향을 최소화하기 위해 하룻밤의 회복.
다음으로, 테스트 바이알 백을 열어 백 내의 오래된 플라스틱 냄새가 나는 공기를 신선한 공기로 교체합니다. 실험 전에 실험실의 온도가 섭씨 25도인지, 실내 조명이 균일한지, 습도가 30% 이상인지 확인합니다.실험 2시간 전에 반응자와 방출기를 신선한 식품 바이알로 옮기고 파리가 실험이 수행될 벤치의 환경에 적응할 수 있도록 합니다. 파운딩 패드에 차 미로를 놓고 엘리베이터가 안정되도록 나사 클립을 조입니다.
다음으로, 응답자 파리를 새 테스트 바이알로 옮기고 응답자 파리가 들어 있는 바이알을 차 미로 위에 스냅합니다. 그런 다음 차 미로 장치를 비스듬히 기울이고 두드리는 매트를 두드려 초파리가 엘리베이터에 떨어지도록 합니다. 엘리베이터의 상단 부분을 아래로 이동하여 TMA의 상단 부분과 하단 섹션 사이에 파리를 배치하고 엘리베이터가 선택 지점 위에 있는지 확인하여 응답자 파리가 새로운 환경에 적응하는 동안 파리가 탈출하지 못하도록 합니다.
이미터 파리를 새 테스트 바이알에 넣고 그 위에 솜 조각을 얹습니다. 이런 식으로 미니 소용돌이에서 바이알을 교반합니다. 파리는 DSO를 방출하여 파리를 식품 바이알로 옮기고 DSO가 채워진 바이알을 팀의 양쪽 중 하나에 빠르게 놓습니다.
DSO가 채워진 바이알의 배치 측면입니다. 새로운 실행을 할 때마다 팀 A의 반대편에 새 테스트 바이알을 놓고 엘리베이터를 완전히 내려 초파리가 새 테스트 바이알과 DSO가 채워진 바이알 중에서 선택할 수 있도록 합니다. 즉시 타이머를 시작하십시오.
1분 후 엘리베이터를 위로 올려 새 바이알과 DSO 바이알에 있는 파리와 엘리베이터에 갇힌 파리를 분리합니다. 각 바이알과 엘리베이터에 있는 파리의 수를 세십시오. 이 작업을 반복합니다.
각 유전자형 및/또는 질환 그룹에 대해 반응 파리의 크기는 DSO 회피에 영향을 미치지 않습니다. 10마리에서 80마리의 파리에 대해 실험을 수행한 후, T-테스트는 응답자 파리의 성능 지표 또는 PI에서 통계적 유의성을 보여주지 않았습니다. 이미터 파리의 수는 이 그래프에서 알 수 있듯이 DSO의 파리 회피에 영향을 미치며, 이는 다양한 시도를 나타냅니다.
각각 10-160 개의 이미터 비행을 사용합니다. 상당한 회피는 여전히 10마리의 스트레스를 받은 파리에서만 감지되었습니다. 초파리의 선택, 시간 및 유전적 배경은 이 그래프에서 알 수 있듯이 DSO에 대한 반응에 영향을 미치며, 이는 Canton s 및 Elwood 균주의 반응을 보여줍니다.
두 유전자형 모두 오레곤보다 DSO를 더 강하게 회피하고 발달 후 일부 마킨 균주를 나타냅니다. 이 기술은 신경과학 분야의 연구자들이 DSO의 구성 요소 중 하나인 CO2에 대한 인식과 회피의 기저에 있는 신경 회로를 식별할 수 있는 길을 열었습니다. 또한 사회적 행동에 영향을 미치는 자폐증 후보 유전자의 역할을 연구하는 데 사용되었습니다.
조셉 아노 가스터에서. 이 기술을 완전히 익히면 반복당 5분 이내에 수행할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 이미터 및 응답자 파리를 테스트하기 전에 준비부터 DSL 필드 바이오스 생성 및 응답자에게 이진 선택을 제공하기 위한 팀원 조작에 이르기까지 사회적 회피 분석을 수행하는 방법을 잘 이해해야 합니다.
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이 프로토콜은 스트레스를 받은 개체로부터의 사회적 신호에 대한 Drosophila melanogaster의 회피 행동을 정량화합니다. 이는 사회적 상호작용에 대한 유전적 및 환경적 요인의 영향을 효과적으로 평가합니다.
This assay enables high-throughput quantification of social avoidance behavior in Drosophila, providing a genetically tractable model for de-risking target validation in neuropsychiatric drug discovery. By linking genetic and environmental modulation to measurable behavioral outputs, it supports early-stage mechanistic screening for compounds affecting social cognition pathways. The low-cost, robust design facilitates scalable screening of mutant libraries or environmental conditions relevant to social deficit phenotypes.
The assay fits within early discovery workflows, supporting hypothesis testing in target validation and enabling scalable screening prior to lead identification efforts.