Name: Neuropathogenic의 비 침습 모델 대장균 신생아 쥐에 감염 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 27 s
Description: 배우세요 신생아 쥐에서 대장균 K1 비침습 감염 모델을 구축하는 방법을. 경구 투여와 직장 면봉 채취를 통해 세균 정착과 전이를 연구하고, 조직 균량을 정량화하여 신생아 패혈증의 병원성 메커니즘을 규명합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 작품은 의학 연구위원회 (Medical Research Council)에서 연구 보조금 G0400268 및 MR / K018396 / 1 지원하고, 행동 의학 연구로했다. 또한 지원은 건강 연구 런던 대학 병원 바이오 메디컬 연구 센터의 국립 연구소에 의해 제공되었다.

본 연구에서 수행되는 모든 동물 실험은 국내 및 유럽 법률을 본 및 약국의 UCL 대학의 윤리위원회와 영국 홈 오피스 (HO)에 의해 승인되었다. HO 프로젝트에서 수행 된 모든 동물의 작업은 PPL 2천2백43분의 80과 PPL 7천7백73분의 70 라이센스. 1. 쥐 준비 <ol><li> 무균 위 스타 신생아 쥐를 사용하는 모든 생체 실험을 수행하십시오. </li><li> 21 ° C, 45 - - 55 % 습도, 15-20 공기 변화 / 시간 및 최적의 조건 (19에서, - (11 주 오래 된 여성 9) 자신의 양모 개별 케이지에있는 모든 쥐 새끼 (식민지 당 12 신생아를) 유지 12 시간 명 / 암주기). </li></ol> 2. 박테리아 세포 준비 <ol><li> 스토어 E. -80 ° C에서 20 % (v / v) 글리세롤에서 대장균 K1 주식. 각각의 실험을 위해, 접시 한천 뮬러 - 힌튼 (MH) 위에 재고 세균을 판, 37 ° CO / N 부화. </li><li> 먹이, inocu 전날하나의 E.와 MH 국물의 후반 10 ml의 대장균 K1 식민지 문화 O / 37 ° C, 200 rpm에서 N. 매체 오염 컨트롤로서 uninoculated MH 액체 배지 10 ㎖를 준비하고, 200 rpm에서 37 ° C에서 배양한다. </li><li> 전송 MH 액체 배지 9.9 ml를으로 O / N 세균 현탁액 100 ㎕ (1 : 100 v / v)로하고, 중간 지수 상 0.6의 광학 농도에 대응하여, 도달 할 때까지 37 ° C, 200 rpm에서 부화 600 nm의 (OD 600)의 파장에서 측정. </li></ol> E.와 신생아 쥐의 3 급지 대장균 K1 <ol><li> 조심스럽게 입을 열 수 있도록, 목덜미에서 한 손으로 수직으로 동물을 잡아. 천천히 동물의 입에 멸균 피펫 팁을 삽입하고 30 초 기간 동안 동물의 입에 접종 (~ 37 ° C)의 피펫 20 μL. 즉시 공급 한 후 어머니에 동물을 돌려줍니다. </li><li> 8 × 10 6 박테리아 t을 공급 한 - (4)가 있는지 확인O 시리얼 PBS에서 접종의 희석과 MH 한천 플레이트에 잡아 내 각 강아지. </li></ol> E.에 의해 식민 4. 평가 대장균 K1 <ol><li> 부드럽게 목덜미에서 한 손으로 동물을 잡아. 멸균 PBS에 멸균 면봉을 적셔 부드럽게 항문 주위 영역을 채취. 바로 보라고 한 후 어머니에 동물을 돌려줍니다. </li><li> 멸균 PBS 300 μl를 포함하는 튜브에 면봉 팁을 놓고 얼음에 저장합니다. </li><li> PBS에서 시리얼 희석 가능한 박테리아의 수를 결정하고 맥 콘키 배지 플레이트에 도금. </li><li> 가능한 E.를 결정 박테리오파지 감수성 검사에 의한 대장균 K1. 멸균 미생물 루프를 사용하여 개별 식민지를 선택, 와류 혼합에 다음 주제 멸균 PBS 200 μL로 감소했다. </li><li> 직선으로 MH 한천 위에 멸균 미생물 루프, 하위 문화를 사용. 판은 30 초 동안 건조하고 혈중 알코올 농도의 10 μl를 피펫 허용teriophage의 K1E 라인의 중심 상 (109 플라크 단위 / ㎖ (PFU / ㎖)을 형성 함). 37 ° C에서 판 O / N을 품어. </li><li> 다음 날, 박테리오파지 매개 용해에 대한 판을 검사합니다. </li></ol> 질병 심각도 5. 평가 <ol><li> 표 1에 요약 7 점의 점수 시스템을 사용하여 5 회 일일 - 4 각 동물의 중증도를 평가. </li><li> 동물 점수가 7에서 ≥3 경우, 즉시 고통을 최소화하기 위해 동물을 추려. 죽은 동물을 기록합니다. </li></ol> 신생아 쥐와 혈액 수집 6. Euthanization <ol><li> 부드럽게 머리와 목을 노출, 한 손으로 동물을 잡아. 알코올 면봉으로 닦아 동물의 목을 소독. 미량의 에탄올을 제거하는 멸균 PBS로 세정 전에 70 % 에탄올을 사용하여 위의 큰 쌍 소독. </li><li> 조심스럽게 페트리 접시 위에 직접 동물을 누르고 있습니다. 날카로운 surgi를 사용하여 신생아 목을 벨혈액 배양 접시에 똑똑 떨어지는 것을 보장 칼 가위,. 피부 식물과 혈액의 오염을 방지하기 위해 머리와의 접촉을 피하십시오. </li><li> 즉시 멸균 피펫을 사용하여 혈액을 수집하고 (20)의 농도로 헤파린 나트륨 염과 혼합 - 0.5 ml의 마이크로 원심 튜브에 50 단위 / ㎖. </li><li> PBS에서 시리얼 희석 가능한 박테리아의 수를 결정하고 맥 콘키 배지 플레이트에 도금. 가능한 E.의 수를 결정 박테리오파지 K1E에 가능한 세균의 감수성을 테스트하여 대장균 K1. </li></ol> 7. 해부 <ol><li> 신생아 쥐의 잘린 후, 절제와 관심의 조직을 수집하기 위해 무균 조건을 사용합니다. 70 % 에탄올과 멸균 PBS에서 (그림 1) 모든 악기를 씻으십시오. </li><li> 해부 보드를 청소하고 70 % 에탄올로 완전히 복부 젖은. 왼쪽 뒷다리에 피닝의 뒷면에있는 시체를 놓고 (I)에 의해 해부 보드에 고정멸균 바늘 동작 테이블, (ⅱ) 시체 스트레칭 동작 테이블 우측 앞다리 피닝, (ⅲ) 작업 테이블 오른쪽 뒷다리와 좌측 앞다리 피닝. </li><li> 집게를 사용 하복부의 왼쪽 측면을 따라 피부를 당겨, 박리 한 후 작은 가위를 사용 흉골 하복부로부터 시체의 왼쪽을 따라 절단. </li><li> 흉골에 걸쳐 절제를 확장 한 다음 기본 구조 중에 손상되지 않도록 보장하는 집게와 작은 해부 가위를 사용하여 하복부에 흉골에서 시체의 오른쪽, 아래로. </li><li> 마지막으로, 부드럽게 복막을 노출 홍채 곡선 해부 집게를 사용하여 복부에 흉골에서 피부 덮개를 아래로 당깁니다. </li><li> 기본 장기 중에 손상되지 않도록 보장, 부드럽게 집게로 복막을 제기하고 내부 장기를 노출 수직으로 잘라. </li></ol> 8. 수집GI 요로 <ol><li> 위, 소장, 맹장, 결장 및 장간막 림프 시스템을 확인합니다. </li><li> 부드럽게 양쪽에에 병행하여 배를 제거한 다음 멸균 집게를 사용하여 멸균 PBS의 1.6 ml의를 포함하는 장식품에 배치합니다. </li><li> 직장에서 콜론을 가로로 쪼개다. 조심스럽게 멸균 페트리 접시에 해부 포셉과 장소를 사용하여 시체에서 전체 장 질량을 당깁니다. 장 구조 및 장간막 림프 구조가 분리되지 않도록이 부드럽게 수행되었는지 확인합니다. </li></ol> GI 요로 및 장간막 림프 시스템 9. 분리 (그림 2) <ol><li> GI 관이 완전히 잠기 보장 페트리 접시로 멸균 PBS 30 ㎖에 붓고. </li><li> 장간막 림프 시스템의 중심 질량을 식별하고 미세 해부 집게를 사용 꼬집어. 소장의 가장 근위부를 식별하고 미세 해부 집게를 사용 꼬집어. </li><li> 천천히 센트라를 당겨장간막 림프계 및 두 조직까지 반대 방향 말단부 소장 리터 매스 서로 완전히 분리된다. 이 근위부, 중간 및 말단 지역의 재현 수집을 방지로, 작은 창자가 늘어되지 않도록주의하여이 과정을 수행합니다. (300)에 장간막 림프 시스템을 배치 - 멸균 PBS 500 μL와 얼음에 배치합니다. </li></ol> GI 요로 10. 단면 <ol><li> 결장로부터 소장을 분리 맹장에서 GI 트랙트를 횡단면. </li><li> (300)에 결장 장소 - 500 μL 멸균 PBS를 얼음에 배치합니다. </li><li> 소장의 근위 중간 및 말단 지역의 대표 조직을 수집합니다. 중앙으로부터 소장을 맞 춥니 다. </li><li> 이어서, (i)는 원위 소장 등 맹장에 앞서 조직의 마지막 2cm를 수집, (ⅱ) 5 내지 조직 수집 - 근위 소장 등의 중간 지점 위에 7 센티미터, 및중간 소장 등 중간 지점 아래 5 센티미터 - (III) 3의 조직을 수집합니다. </li></ol> 11. 간 수집 <ol><li> 위의 제거 후 쥐의 간 세 로브를 식별합니다. </li><li> 멀리 미세 해부 집게를 사용하여 복강에서 로브를 당깁니다. </li><li> 미세 가위를 사용하여 부착하는 인대를 절단하여 간을 제거합니다. 얼음에 500 ㎕의 멸균 PBS 및 장소 - (300) 간을 놓습니다. </li></ol> 12. 비장 수집 <ol><li> 비장을 확인합니다. </li><li> 멀리 배에서 비장을 당겨 gastrosplenic 인대를 잘라 미세 가위를 사용합니다. </li><li> 얼음에 500 ㎕의 멸균 PBS 및 장소 - (300)에 비장를 놓습니다. </li></ol> 제 12 항에있어서, 상기 신장을 수집 <ol><li> 위장관 및 다른 장기의 제거시 복강의 뒤쪽에 가시 상태가 신장을 확인합니다. </li><li> 컷 요관 및 부착 인대 U미세 해부 가위를 노래하고 미세 집게를 사용하여 신장을 제거합니다. 부신 및 미세 집게 및 해부 가위를 사용하여 (아직도 붙어있는 경우) 지방산 물질을 제거합니다. </li><li> 300 ~ 500 ㎕의 멸균 PBS에 모두 신장을 놓고 얼음에 배치합니다. </li></ol> 14. 뇌를 수집 <ol><li> 잘린 후, 곡선 집게를 사용하여 수직으로 머리를 잡아. 종 곡선 집게의 또 다른 세트를 사용하여 머리 꼭대기에 피부를 꼬집어, 미세 해부 가위를 사용하여 절개를. 목 근처에 남아있는 피부, 다시 길이 방향으로 미세 해부 가위를 잘라. </li><li> 미세 해부 가위를 사용하여 피부 플랩을 두개골을 공개하고 제거하기 위해 양쪽에 미세 집게를 사용하여 바깥 방향으로 피부를 당겨. 척추 개방에 미세 해부 가위를 놓고 연단쪽으로 두개골을 따라 절개를합니다. </li><li> 미세 집게를 사용하여 바깥 방향으로 두개골의 양쪽 부분을 잡아 당깁니다. 두개골 세그먼트를 제거하기 위해 잘라. </li><l난&gt; 연단을 향해 척추 오프닝에서 위쪽으로 떠서 동작을 사용하여, 폭 넓은 집게를 사용하여 뇌를 제거합니다. 잘린 절차에서 모든 혈액을 제거하기 위해 두 번 PBS의 뇌를 씻으십시오. </li></ol> 15. 조직 처리 및 균질화 <ol><li> 멸균 PBS를 포함하는 튜브에 생존 횟수 또는 DNA 추출, 장소 조직을 필요로하는 실험. 즉시 단기 20 % 글리세롤과 -20 ° C에서 시리얼 PBS에 희석과 맥 콘키 배지 플레이트에 도금, 또는 상점에서 가능한 박테리아의 수를 결정합니다. DNA 추출, -20 ° C에서 저장 조직 용. </li><li> RNA 추출, RNAlater 솔루션의 적절한 볼륨으로 장소 조직 (1 MG 조직 당 10 μL)을 필요로하는 실험을 위해, 다음 단기 또는 -80 ° C 장기 기억에서 -20 ° C에 바로 저장할 수 있습니다. </li><li> 10 ml의 용액에 Methacarn 촬상이 필요한 실험 도시 조직 (60 % 메탄올, 30 %의 클로로포름, 10 % 아세트산)의 경우, 다음을 저장할T RT - 최대 3 주 (20 ~ 25 ° C에서). </li><li> 전 조직의 첨가 한 후 튜브의 무게를 비교하여 조직의 무게를 계산합니다. 균질기를 사용하여 조직을 균질화. 각 시료의 균질화 사이에 멸균 PBS에 한 번 70 % 에탄올에 두 번 균질을 씻으십시오. NOTE : Methacarn 고정술 뮤신 관련 점막 방어 구조를 보존하기 위해 장내 샘플의 고정을 위해 바람직하다; 포르말린 고정 전신 조직에 사용될 수있다. </li></ol>

<ol><li>Harvey, D., Holt, D. E., Bedford, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+meningitis+in+the+newborn%3A+a+prospective+study+of+mortality+and+morbidity%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Bacterial meningitis in the newborn: a prospective study of mortality and morbidity.</a> 23 (5), 218-225 (1999).</li>
<li>Brouwer, M. C., Tunkel, A. R., van de Beek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+diagnosis%2C+and+antimicrobial+treatment+of+acute+bacterial+meningitis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Epidemiology diagnosis, and antimicrobial treatment of acute bacterial meningitis.</a> Clin. Microbiol. Rev. 23 (3), (2010).</li>
<li>Silva, L. P. A., Cavalheiro, L. G., Queirós, F., Nova, C. V., Lucena, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+newborn+bacterial+meningitis+and+sepsis+during+the+pregnancy+period+for+public+health+care+system+participants+in+Salvador%2C+Bahia%2C+Brazil%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Prevalence of newborn bacterial meningitis and sepsis during the pregnancy period for public health care system participants in Salvador, Bahia, Brazil.</a> J. Infect. Dis. 11 (2), 272-276 (2007).</li>
<li>Levy, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immunity+of+the+newborn%3A+basic+mechanisms+and+clinical+correlates%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Innate immunity of the newborn: basic mechanisms and clinical correlates.</a> Nat. Rev. Immunol. 7 (5), 379-390 (2007).</li>
<li>Robbins, J. B., et al. Escherichia coli K1 capsular polysaccharide associated with neonatal meningitis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRobbins%2C+JB+%22N.+Eng.+J%22">N. Eng. J</a>. Med,, et al. 290 (22), 1216-1220 (1974).</li>
<li>Korhonen, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((hemolysin+production%2C+and+receptor+recognition+of+Escherichia+coli+strains+associated+with+neonatal+sepsis+and+meningitis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">hemolysin production, and receptor recognition of Escherichia coli strains associated with neonatal sepsis and meningitis.</a> Infect. Immun. 48 (2), 486-491 (1985).</li>
<li>Rutishauser, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polysialic+acid+in+the+plasticity+of+the+developing+and+adult+vertebrate+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Polysialic acid in the plasticity of the developing and adult vertebrate nervous system.</a> Nat. Rev. Neurosci. 9 (1), 26-35 (2008).</li>
<li>Koedel, U., Pfister, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+experimental+bacterial+meningitis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Dis.+Clin.+North+Am%22%5BJournal%5D)">Models of experimental bacterial meningitis.</a> Infect. Dis. Clin. North Am. 13 (3), 549-577 (1999).</li>
<li>Tunkel, A. R., Scheld, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+pathophysiology+of+bacterial+meningiits%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and pathophysiology of bacterial meningiits.</a> Clin. Microbiol. Rev. 6 (2), 118-136 (1993).</li>
<li>Kim, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+K1+capsule+is+the+critical+determinant+in+the+development+of+Escherichia+coli+meningitis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">The K1 capsule is the critical determinant in the development of Escherichia coli meningitis in the rat.</a> J. Clin. Invest. 90 (3), 897-905 (1992).</li>
<li>Obata-Yasuoka, M., Ba-Thein, W., Tsukamoto, T., Yoshikawa, H., Hayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaginal+Escherichia+coli+share+common+virulence+factor+profiles%2C+serotypes+and+phylogeny+with+other+extraintestinal+E.+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Vaginal Escherichia coli share common virulence factor profiles, serotypes and phylogeny with other extraintestinal E. coli.</a> Microbiology. 148 (9), 2745-2752 (2002).</li>
<li>Sarff, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+Escherichia+coli+K1+in+healthy+and+diseased+newborns%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of Escherichia coli K1 in healthy and diseased newborns.</a> Lancet. 305 (7916), 1099-1104 (1975).</li>
<li>Schiffer, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review%3A+relation+between+invasiveness+and+the+K1+capsular+polysaccharide+of+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr.+Res%22%5BJournal%5D)">A review: relation between invasiveness and the K1 capsular polysaccharide of Escherichia coli.</a> Pediatr. Res. 10 (2), 82-87 (1976).</li>
<li>Palmer, C., Bik, E. M., DiGuilio, D. B., Relman, D. A., Brown, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+human+infant+intestinal+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of the human infant intestinal microbiota.</a> PLoS Biol. 5 (7), 1556-1573 (2007).</li>
<li>Nassif, X., Bourdoulous, S., Eugène, E., Couraud, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+do+extracellular+pathogens+cross+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">How do extracellular pathogens cross the blood-brain barrier.</a> Trends Microbiol. 10 (5), 227-232 (2002).</li>
<li>Moxon, E. R., Glode, M. P., Sutton, A., Robbins, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+infant+rat+as+a+model+of+bacterial+meningitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">The infant rat as a model of bacterial meningitis.</a> J. Infect. Dis. 136, 186-190 (1977).</li>
<li>Birchenough, G. M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+innate+defenses+in+the+neonatal+gastrointestinal+tract+in+response+to+colonization+by+neuropathogenic+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Altered innate defenses in the neonatal gastrointestinal tract in response to colonization by neuropathogenic Escherichia coli.</a> Infect. Immun. 81 (9), 3264-3275 (2013).</li>
<li>Ganz, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defensins%3A+antimicrobial+peptides+of+innate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Defensins: antimicrobial peptides of innate immunity.</a> Nat. Rev. Immunol. 3 (9), 710-720 (2003).</li>
<li>Bevins, C. L., Salzman, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paneth+cells%2C+antimicrobial+peptides+and+maintenance+of+intestinal+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Paneth cells, antimicrobial peptides and maintenance of intestinal homeostasis.</a> Nat. Rev. Microbiol. 9 (5), 356-368 (2011).</li>
<li>Moxon, E. R., Smith, A. L., Averill, D. R., Smith, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haemophilus+influenzae+meningitis+in+infant+rats+after+intranasal+inoculation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Haemophilus influenzae meningitis in infant rats after intranasal inoculation.</a> J. Infect. Dis. 129 (2), 154-162 (1974).</li>
<li>Bortolussi, R., Ferrieri, P., Björkstén, B., Quie, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capsular+K1+polysaccharide+of+Escherichia+coli%3A+relationship+to+virulence+in+newborn+rats+and+resistance+to+phagocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Capsular K1 polysaccharide of Escherichia coli: relationship to virulence in newborn rats and resistance to phagocytosis.</a> Infect. Immun. 25 (1), 293-298 (1979).</li>
<li>Glode, M. P., Sutton, A., Moxon, E. R., Robbins, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+neonatal+Escherichia+coli+meningitis%3A+induction+of+bacteremia+and+meningitis+in+infant+rats+fed+E.+coli+K1%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of neonatal Escherichia coli meningitis: induction of bacteremia and meningitis in infant rats fed E. coli K1.</a> Infect. Immun. 16 (1), 75-80 (1977).</li>
<li>Pluschke, G., Mercer, A., Kusećek, B., Pohl, A., Achtman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+bacteremia+in+newborn+rats+by+Escherichia+coli+K1+is+correlated+with+only+certain+O+%28lipopolysaccharide%29+antigen+types%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Induction of bacteremia in newborn rats by Escherichia coli K1 is correlated with only certain O (lipopolysaccharide) antigen types.</a> Infect. Immun. 39 (2), 599-608 (1983).</li>
<li>Zelmer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+of+capsule-selective+endosialidase+E+minimizes+changes+in+organ+gene+expression+induced+by+experimental+systemic+infection+with+Escherichia+coli+K1%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Administration of capsule-selective endosialidase E minimizes changes in organ gene expression induced by experimental systemic infection with Escherichia coli K1.</a> Microbiology. 156 (7), 2205-2215 (2010).</li>
<li>Zelmer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+expression+of+the+polysialyl+capsule+during+blood-to-brain+transit+of+neuropathogenic+Escherichia+coli+K1%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Differential expression of the polysialyl capsule during blood-to-brain transit of neuropathogenic Escherichia coli K1.</a> Microbiology. 154 (8), 2522-2532 (2008).</li>
<li>Mushtaq, N., Redpath, M. B., Luzio, J. P., Taylor, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+and+cure+of+systemic+Escherichia+coli+K1+infection+by+modification+of+the+bacterial+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob.+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Prevention and cure of systemic Escherichia coli K1 infection by modification of the bacterial phenotype.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 48 (1), 1503-1508 (2004).</li>
<li>Achtman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Six+widespread+bacterial+clones+among+Escherichia+coli+K1+isolates%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Six widespread bacterial clones among Escherichia coli K1 isolates.</a> Infect. Immun. 39 (1), 315-335 (1983).</li>
<li>Mushtaq, N., Redpath, M. B., Luzio, J. P., Taylor, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+experimental+Escherichia+coli.+infection+with+recombinant+bacteriophage-derived+capsule+depolymerase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Antimicrob.+Chemother%22%5BJournal%5D)">Treatment of experimental Escherichia coli. infection with recombinant bacteriophage-derived capsule depolymerase.</a> J. Antimicrob. Chemother. 56 (5), 160-165 (2005).</li>
<li>Gross, R. J., Cheasty, T., Rowe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+bacteriophages+specific+for+the+K1+polysaccharide+antigen+of+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Isolation of bacteriophages specific for the K1 polysaccharide antigen of Escherichia coli.</a> J. Clin. Microbiol. 6 (6), 548-550 (1977).</li>
</ol>

저자는 그들이 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

여기에 설명 된 동물 모델은 자연스럽게 인간 감염 발생의 현저한 특징을 재현하는 것을 목표로 이전 작업을 기반으로. 신생아 쥐 처음 H.에 의한 유아 수막염을 연구하기 위해 사용되었다 종은 감염의 강력한 모델에 대한 주요 기준을 만족으로 B 형 인플루엔자. 따라서, 관련 병원체의 항목의 포털은 자연 인간 감염의를 반영해야하고 재현성 치료 개입을 할 수 있도록 충분한 기간의 유사한 병리 상승 제공합니다. 기술 절차의 적용 가능성을 제한해서는 안 사용 질병 결과 (20)에 기여해서는 안된다. H.의 모델 Moxon과 동료들에 의해 개발 된 유아 쥐에 인플루엔자 뇌수막염은이 기준 (20)을 만족; 상부 호흡기와이 중요한 기능의 점막의 식민지가 아닌 외상에 의해 쥐의 새끼에서 복제 된 후 자연 감염 발생비강의 점막 위에 박테리아의 TIC 점안. 중요한 것은, 감염의 나이에 의존하는 특성은 모델에서 복제되었다. 동일한 그룹은 E.의 비 침습 모델을 개발 최초로 신생아 쥐 (22)에서 대장균 K1 NBM. 무균의 Sprague-Dawley 계 새끼는 구두 위 튜브를 통해 10월 8일에서 10월 10일까지 박테리아를 먹이의 식민지가되었다; 접종 그러므로 우리가 고용보다 상당히 높았다. 세 K1 균주를 조사하여 식민지, C94 (O7 : K1 : H-), EC3 (O1 : K1 : H-)와 LH (O75 : K1 : H3)은 상대적으로 높은 비율 (48~74%)의 발생 동물 K1은 먹이하지만, 균혈증, 수막염과 사망률의 빈도는 변수와 식민지의 비율보다 훨씬 낮았다. E.의 클론 본질 대장균 K1 실험 감염 후 23 일에 설립되었으며, 그것은 단지 Ø18 것이 이제 명백하다 : K1이와, 조금 적게, O7 : K1 혈청 형이 할 수 있습니다일관 전신 감염을 야기한다. 이러한 이유로, neuropathogenic E.의 병인의 이러한 수사 K1 스트레인 A192PP : 대장균 K1은 병독성이 향상된 Ø18의 사용을 기반으로했다. E.의 비교 에 의한 점막 표면으로 인한 손상에 거의 확실하게, 이전 방법을 사용하여 죽음의 과도한 숫자를 Achtman의 그룹 (23)에 의해 고용으로 Glode와 동료 (22), 및 액 공급 방법에 의해 사용되는 계시 위 튜브를 통해 신생아 쥐의 대장균 K1 공급 위 튜브. 식민지의 비율이 두 방법과 비교되기 때문에이 통신에 설명 된대로, 그것은, 살균 팁과 피펫을 사용하여 박테리아를 공급 덜 침습적 인 방법을 사용하는 것이 좋습니다. 우리의 연구에서 사용 된 대장균 균주 A192PP는 Ø18입니다 : K1. 이는 임상 적 균주 E.보다 독성 유도체 인 원래 27 패혈증 환자로부터 회수 된 대장균 A192 </&gt; SUP. 균주의 증가 된 독성 신생아 래트 (26)를 통해 직렬로 통과 얻었다. 이일 된 동물 (28)에게 투여 할 때 변형은 100 % 균혈증과 사망률, 연령에 따라 질병의 심각도를 이끌어 낸다. 반면 9 일 이전 동물 질병에 완전히 저항하는. K1 특정 용균 박테리오파지는 E.를 구별하는데 사용될 수있다 다른 E.에서 대장균 K1 대장균 29 균주. 본 연구에서는 박테리오파지 K1E에 가능한 세균의 감수성은 E.의 순도를 확인 (I)로 사용되어야한다 대장균 K1 현탁액 동물 먹이로 제조하고, (ⅱ)는 E. 차별화 항문 면봉, 혈액과 조직 샘플에서 가능성을 계산하기 위해 다른 대장균 군에서 대장균 K1. 식민지 E. 경우 대장균 K1, 그것은 박테리오파지 K1E 용해에 민감 할 것이며, 세균 성장은 박테리오파지 접종 부위에서 억제 될 것이다. 식민지 E.없는 경우 대장균 K1, 그것은 ㄴ 것KIE 박테리오파지 용해에 강한 전자, 그리고 박테리오파지 접종의 사이트에있는 박테리아의 성장의 영역이 있어야합니다. 이 동물 모델은 자연적으로 발생하는 질병의 모든 기능을 반영 할 수 있음을 명심해야한다. 현재의 모델은 E. 이외 neuropathogenic 박테리아의 독성 특성을 조사하기 위해 수정 될 수있다 콜라이 A192PP 및 식민지화 균액의 크기 변화는 수용 될 수있다. 기술의 미래의 애플리케이션은 많이 필요한 약물의 평가 상태를 치료하고 집락 조직 내습 숙주 반응의 세부 사항을 밝히기 위해서 포함될 수있다. 여기에 설명 된 방법은 간단하지만 효과적이다. (10)의 단일 새끼 - 12 새끼는 테스트 또는 대조군으로 사용 하였다이 내-쓰레기 접근 방법은 재현성 및 통계 유효성의 높은 수준을 보장합니다. 이 새끼가 어떤 procedur 후 가능한 빨리 자연의 어머니에 반환하는 것이 필수적이다전자와 새끼 그러므로 다른 개입을받은 동물을 포함하지 않아야합니다. 그것은 공급 접종 그렇지 않으면 새끼가 제공하는 문화를 거부합니다 따뜻하게하는 것이 중요하다. 새끼는 빠르게 복잡한 미생물을 개발하고 출생 두 일 이내에 위장관은 유아와 성인 장에서 가장 풍부한 미생물로 설립 문 (門)에서 박테리아의 넓은 범위의 식민지가된다. E.을 공급하지 않은 새끼 대장균 A192PP는 E.을 수행하지 않습니다 식민지의 속도의 대장균 K1 위장관에서 17 등 결정은 비교적 간단합니다. 그러나, 네우스는 E.을 식민지화의 검출을위한 qPCR의 방법을 기반 대장균 K1은 전통 문화의 방법이 훨씬 더 민감하고 강하게 (17)를 권장합니다.

전신 세균 감염은 웰빙과 신생아의 생존에 큰 위협이다 미숙아는 특히 취약하다. 자주 세균성 패혈증과 관련된 신생아 세균성 수막염 (NBM)은 삶의 처음 몇 주 동안 사망률과 이환율의 중요한 원천이 될 때까지 계속 문제가 전선 항균 약물 1, 2에 대한 저항의 지속적인 진화에 의해 악화된다. NBM의 경우는 높은, 의료, 사회적, 경제적 부담 (3)을 전달하는 응급 상황입니다; 결과적으로, 감염의 부담을 줄이기 위해 새로운 치료제 및, 특히, 새로운 예방 전략 절실히 요구되고있다. NBM의 일부 기능은 특이 : 선진국에서, 대장균 B 군 연쇄 구균은 거의 항상 보호 다당류 CA의 존재와 관련된 대부분의 케이스와 NBM을 유도하기 위해 이들 균주의 용량에 대한 책임면역 인식을 피하기 위해 병원균을 가능하게 psule 4를 처리합니다. neuroinvasive E.의 - (85 ~ 80 %)이 매우 높은 비율 대장균은 K1 캡슐 5, 6, 신경 가소성 (7)의 조절을 호스트 할 구조적으로 동일 α-2,8 결합 polysialic 산 폴리머를 표현한다. 새로운 치료제 및 NBM에 대한 예방법 및 관련 균혈증과 패혈증의 평가는 명확하게 특정 강한 연령 의존성 및 감염의 자연 경로에, 인간의 신생아 질병의 주요 기능을 모방 감염의 강력한 동물 모델에서 도움이 될 . 그람 양성과 그람 음성 세균 수막염에 대한 모델의 넓은 범위는 8,9 가능하며이 상당히 이러한 감염의 발병 기전, 병태 생리 및 치료 옵션에 대한 우리의 지식을 확장합니다. 따라서, 래트, 마우스, 토끼, 원숭이 실험 감염은 모두 n이 수막염을 연구하는데 사용되어왔다eonate 및 성인. 그러나, 이러한 모델의 대부분은 식민지의 사이트에서 보급의 자연적인 과정을 우회하여 인공 기전을 만들어 감염의 개시에 대한 박테리아의 직접 수조 내 또는 피하 주사를 사용합니다. 어떤 경우에는 접종이 방법은 병리에 상당한 변화를 주도; 예를 들면, E. 피하 투여 대장균 K1 균주 신생아 및 성인 10 모두 균혈증 및 중추 신경계 (CNS)의 침입을 제조, 자연 감염과 관련된 나이 의존성을 폐기. E.에 경향 대장균 NBM은 유아에 어머니로부터 원인균의 수직 감염에 의해 좌우 또는 곧 탄생 11 이후. E. 모계 유래 대장균 K1 박테리아는 출생시 멸균하지만 빠른 속도로 복잡한 미생물 (14)를 취득 신생아 위장관 11-13, 식민지. 식민지 신생아, E. 대장균K1 박테리아가 혈액 - 뇌 또는 혈액 - 뇌척수액 장벽 9,15 걸쳐 CNS 들어가기 전에 전신 순환으로 장 내강에서 전좌하는 능력을 가지고있다. 실험 감염의 강력한 모델의 디자인은 계정에 이러한 세부 사항을 고려해야한다. 마우스가 널리 세균성 수막염 (8)의 일부 형태의 연구를 위해 사용되었지만, 그들은 신생아 감염의 연구에 부적합하다 : 그들은 전신 감염에 의해 압도하고 인간의 유아 16의 강력한 인구 부양 특성을 표시하지 않습니다. 또한, α-디펜, E.에 의해 전신 침입에 대한 보호를 제공하는 위장관의 키 펩티드 대장균 K1 (17)는, 매우 인간과 쥐에서 Paneth 세포와 호중구에 있지만 마우스 (18)로 표현된다. 다른에서 찾을 수 없습니다 중복, 중복 및 마우스 디펜 신에 이질성과 관련 cryptidin 유전자의 놀라운 정도가있다19 imals. 신생아 쥐 처음 Moxon에 의해 사용 및 동료 (20)를 비강 내 접종 다음 헤모필루스 인플루엔자 수막염의 발병을 조사하기 위해, 인간이 신생아 병원균의 식민지의 자연 사이트를 복제, 이후 연령에 따라 E.에 대한 적응했다 대장균 K1 균혈증 및 수막염. Bortolussi 등. 세균 접종 21 고용 복강 내 주사 감염을 시작하지만 키 Glode의 연구와는 GI 식민지 후 감염의 자연 경로를 병렬 (22) 사용되는 경구 위 먹이를 동료. 위 튜브 점막 표면에 손상을 줄 수 있으므로, 절차는 신생아 (23)에 접종의 공급을 포함하는 정제되었다. 여기에, 위장관 집락과 설명 취약 쥐 새끼의 감염을 추적하기위한 절차에 대한 방법; 또한, 모델의 치료 및 예방 응용 프로그램이 논의된다.

<table><tbody><tr><td>무균 Wistar 쥐 (신생아 12마리, 수유모 1마리)</td><td><a href="http://www.harlan.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Harlan, UK</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>E. coli K1 A192PP</td><td><a href="http://www.ucl.ac.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Taylor lab</a></td><td></td><td>Mushtaq &lt;em&gt;et al.&lt;/em&gt; 2004</td></tr><tr><td>박테리오파지 K1E</td><td><a href="http://www.ucl.ac.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Taylor lab</a></td><td></td><td>Mushtaq &lt;em&gt;et al.&lt;/em&gt; 2004</td></tr><tr><td>글리세롤</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma, UK</a></td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>Mueller-Hinton 한천 배지</td><td><a href="http://www.oxoid.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Oxoid, UK</a></td><td>CM0037</td><td></td></tr><tr><td>Mueller-Hinton 액체 배지</td><td><a href="http://www.oxoid.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Oxoid, UK</a></td><td>CM0405</td><td></td></tr><tr><td>MacConkey 한천 배지</td><td><a href="http://www.oxoid.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Oxoid, UK</a></td><td>CM0007</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수 (PBS)</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma, UK</a></td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>에탄올 100%</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma, UK</a></td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>헤파린 나트륨염</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma, UK</a></td><td>84020</td><td>20 - 50 units/ml로 조제</td></tr><tr><td>RNAlater 용액</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma, UK</a></td><td>R0901</td><td>조직 mg당 10 &amp;mu;l</td></tr><tr><td>아세트산</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma, UK</a></td><td>320099</td><td></td></tr><tr><td>클로로포름</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma, UK</a></td><td>C2432</td><td></td></tr><tr><td>메탄올</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma, UK</a></td><td>322415</td><td></td></tr><tr><td>면봉</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Fisher Scientific, UK</a></td><td>11542483</td><td></td></tr><tr><td>Alcotip 면봉</td><td><a href="http://www.scientificlabs.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Scientific Laboratory Supplies, UK</a></td><td>SWA1000</td><td></td></tr><tr><td>페트리 접시</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sigma, UK</a></td><td>P5856</td><td></td></tr><tr><td>30 ml 유니버설 튜브</td><td><a href="http://www.alphalabs.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> AlphaLaboratories, UK</a></td><td>CW3890</td><td></td></tr><tr><td>0.5 ml 마이크로 원심분리 튜브</td><td><a href="http://www.starlab.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> StarLab, UK</a></td><td>I1405-1500</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml 마이크로 원심분리 튜브</td><td><a href="http://www.starlab.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> StarLab, UK</a></td><td>I1415-1000</td><td></td></tr><tr><td>0.1 &amp;mu;l 보정 루프</td><td><a href="http://www.starlab.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> StarLab, UK</a></td><td>E1412-0112</td><td></td></tr><tr><td>L자형 도말봉</td><td><a href="http://www.starlab.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> StarLab, UK</a></td><td>E1412-1005</td><td></td></tr><tr><td>큐벳</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Fisher Scientific, UK</a></td><td>10594175</td><td></td></tr><tr><td>미세 끝단 직선 핀셋</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Fisher Scientific, UK</a></td><td>12780036</td><td></td></tr><tr><td>뭉툭한 끝단 직선 핀셋</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Fisher Scientific, UK</a></td><td>12391369</td><td></td></tr><tr><td>초미세 끝단 곡선 시계 제작용 핀셋</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Fisher Scientific, UK</a></td><td>12740926</td><td></td></tr><tr><td>초미세 끝단 직선 가위</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Fisher Scientific, UK</a></td><td>12972055</td><td></td></tr><tr><td>실험실 가위</td><td><a href="http://www.vwr.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> VWR, UK</a></td><td>USBE4251</td><td></td></tr><tr><td>25 G 주사바늘</td><td><a href="http://www.greinerbioone.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Greiner Bio-One Ltd</a></td><td>N2525</td><td></td></tr><tr><td>LAMBDA 25 UV/Vis 분광광도계</td><td><a href="http://www.perkinelmer.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> PerkinElmer, UK</a></td><td>L60000BB</td><td></td></tr><tr><td>Unitemp 배양기</td><td>B&amp;amp;T, UK</td><td>OP958</td><td></td></tr><tr><td>Multitron 진탕 배양기</td><td><a href="http://www.infors-ht.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> INFORS HT, UK</a></td><td>AJ118</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-Turrax T-10 균질기</td><td><a href="http://www.ika.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> IKA Werke</a></td><td>0003737000</td><td></td></tr></tbody></table>

neuropathogenic의 비 침습 모델 대장균 신생아 쥐에 감염

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

채용 감염 모델은 자연 감염의 주요 기능을 복제하는 경우 동물 숙주 박테리아 병원체 간의 상호 작용의 조사 만 의미가있다. 이 프로토콜은 인해 신생아 쥐에서 neuropathogenic 대장균 K1에 전신 감염의 설립 및 평가 절차에 대해 설명합니다. 위장관의 식민 감염의 창자 림프 혈액 - 뇌 코스를 따라 병원균의 확산을 유도하고, 모델은 강력한 인구 부양을 표시합니다. E.의 변형 대장균 Ø18 : 신생아 쥐에 대한 강화 된 독성와 K1는 식민지의 매우 높은 속도, 혈액 구획 및 맥락막 얼기를 통해 전송 다음 수막의 침공에 전위를 생성합니다. 인간 숙주에서와 같이, 중추 신경계의 침투 현지 염증과 변함 치명적인 결과를 수반한다. 모델은기구의 연구 입증 유틸리티이다병인, 치료 개입의 평가 및 세균 독성의 평가.

E. 여기에 설명 된 대장균 K1 전신 감염 모델은 인간의 자연 감염의 대부분의 기능을 복제합니다. 박테리아, GI 관 정착 뇌 (24)의 연관된 염증 기관 특이 질병을 확립하기 전에 장간막 림프절 통해 혈액 구획으로 이동시키다, 섭취. 중요한 것은, 모형은 나이 강한 의존성을 표시; 도 3에 도시 된 바와 같이, 두 일령 (P2) 래트 새끼 침습성 질병에 매우 취약하지만, 칠일 동안 동물 감염 점차적 내화되어 있지만 요로 집락 17 GI하지. 혈액 구획에 GI 식민지의 사이트에서 통과 한 후, 박테리아는 맥락막 총 25 주로 중추 신경계에 들어가기 전에 형광 현미경 (그림 4)에서 혈액 샘플을 시각화 할 수 있습니다. 일부 동물과 같은 다른 주요 장기의 광범위한 침해가폐, 비장, 신장 25. 조직에서 세균 수는 각각 새끼 25 만 사이에 실질적으로 다를 수 있습니다 바이오 버든은 현재 또는 기관 침공과 관련하여 재현성 높은 수준의가없는 하나의 점수를 때. 단일 테스트 코호트로서 12 새끼 깔짚, G * 전원 Software를 사용하여 전력 계산이 샘플 크기가 여섯 코호트 동물 및 모든 경우&gt; 99 %의 확률을 이용하여 생존에 기초하여 영향을 찾는 98.6 %의 확률로 동일시 판단 열두 고려된다. 모델은 특별히 신생아 세균 감염의 치료를위한 맞춤형 신규 제제의 평가에 적합하다 선택적 박테리아 표면 24-26에서 K1 캡슐을 제거 EndoE depolymerase 캡슐의 치료 가능성을 평가하는 절차에 사용되어왔다. 그것은 또한 호스트 박테리아 상호 작용을 확실에 그 영향을 조사하기 위해 사용될 수있다E.의 hogenesis 대장균 neuropathogens; 이 맥락에서 그것은 E.의 연구에 이용되고있다 대장균 A192PP 정착 및 보급. 그것은 것이 증명되었다 E. 대장균 A192PP 세포는 많은 수의 P2, P5 및 P9 새끼의 위장관에 계속; 이들 세 그룹에 집락의 시간적 양태 (도 5)와 매우 유사 하였다 복제 및 소화관 내 인구 밀도를 유지하는 박테리아의 능력을 반영한다. 임상 분리 A192의 독성은 동물의 사용을 거의 또는 전혀 중복을 보장하기 위해 신생아 쥐의 시리얼 통과에 의해 강화되었다. E. 콜라이 A192은, 100 %의 효율로 P2 신생아 래트 집락 동물의 35 %에서 균혈증을 유발하고 25 % 27에 치명적인 효과를 생성했다. 계대 파생 A192PP는 위장관을 식민지화 균혈증을 생산하고 모든 P2 새끼에서 치사가 발생합니다. 따라서, 모델의 디 독성을 조사하기 위해 사용될 수있다fferent K1은 식민지의 사이트에서 중추 신경계 및 다른 기관의 시스템에 침입하는 능력에 대한 균주. 이러한 맥락에서, Pluschke와 동료 23 95 E.의 용량을 결정하는 신생아 감염 쥐 모델을 사용하고 대장균 K1은 장내 정착 후 균혈증의 원인이 인간의 기원 균주; 그들은 E.의 클론 본질을 뒷받침하는, 식민지와 침략 능력 모두의 효율성에 다양한 변화를 관찰 대장균 K1은 neuropathogens. <img alt="그림 1" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig1highres.jpg" width="600"> 그림 조직 수집 1. 재료 : (A) 무게 규모, (B) 필요한 미디어를 포함 미리 무게 튜브, (C) 작업 테이블, 눈금자 및 동물을 고정하는 바늘, (D) 70 % (V / V) 에탄올 및 PBS는, 조직 수집 장비를 살균 <s trong>(F) 얼음의 블레이드의 큰 쌍을 포함하여 조직 수집 키트 (G) 70 % (V / V) 에탄올 작업 테이블과 주변은. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52018/52018fig1highres.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> </s><img alt="그림 2" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig2highres.jpg" width="600"> 그림 2. 위장관의 분리 및 장간막 림프 시스템. (A) 그립 미세 해부 집게로 장간막 림프 시스템의 중심 질량. (B) 그립 소장의 근위부와 반대 방향으로 잡아 당깁니다. (C) 위장관 및 장간막 림프 시스템을 완전히 separat 것전자. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52018/52018fig2highres.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig3highres.jpg" width="500"> E. 경구 투여 한 다음 구일 (P9)에 이일 (P2)에서 세 신생아 쥐 새끼의 그림 3. 생존 대장균 A192PP는 전신 감염의 강력한 인구 부양을 설명. 각 그룹은 24 신생아를 나타냅니다. <img alt="그림 4" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig4highres.jpg" width="600"> E. 그림 4. 형광 이미지 P2 강아지에서 혈액 도말 검사에서 대장균 A192PP 세포가 박테리아의 경구 투여를 다음 감염된. 박테리아 표면에서 리포 다당류 O 항원 성이었다토끼 항 Ø18 폴리 클로 날 항체와 Alexa546 결합 염소 안티 - 토끼 두 번째 항체 ained. K1 캡슐은 EndoE-GFP 시약 가시화 하였다. 사실상 혈액 샘플에서 검출 된 모든 세균 보호 K1 캡슐을 표시. 이미지가 박사 안드레아 Zelmer에 의해 포착되었다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52018/52018fig4highres.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 5" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig5highres.jpg" width="500"> 그림 5. E. 세균 접종. DNA의 대장균 A192PP 장 식민지 다음과 같은 관리는 전체 소장하고 E.에서 추출 하였다 polysialyltransferase (네우스) 유전자를 표적 정량적 폴리머 라제 연쇄 반응 (qPCR에)에 의해 결정 대장균 K1 콜로니 형성 단위 / g (CFU / g)은 다른 조직 (17)을 기술 된 바와 같이 <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> 기능 </td><td> 건강한 </td><td> 건강에 해로운 </td></tr><tr><td> 피부의 색 </td><td> 핑크 </td><td> 노란색 / 창백한 </td></tr><tr><td> 민첩성 (바로 잡고 반사) </td><td> 강아지는 즉시 뒤로 배치에 반대 </td><td> 뒤로 배치 (&gt; 3 초) 역에서 어려움 또는 달성 할 수 </td></tr><tr><td> 복부에 약간 힘 </td><td> 아무 소리도 나지 않는 경우 </td><td> 교반의 소리 </td></tr><tr><td> 위 / 우유 라인 </td><td> 볼과 흰색 </td><td> 표시하지 않음 </td></tr><tr><td> 온도 </td><td> 따뜻한 </td><td> 상대적으로 추운 * </td></tr><tr><td> 무게 </td><td> 하루에 1.5 g의 이득 </td><td> 어떤 체중 증가하거나 체중 감소 </td></tr><tr><td> 케이지에 배치 동작 </td><td> 어머니를 향해 이동하고 F를 시작합니다eeding </td><td> 어머니를 향해 이동하고 어려움 먹이를 표시 할 수 없습니다 </td></tr></tbody></table> 표 1. 7 점의 점수 체계 : 나열된 처음 세 개의 점수는 일반적으로 관찰되는 초기 징후이다. * 전신 감염 경험 상승 체온 (&gt; 2 ° C)와 신생아. 그러나, 동물의 민첩성의 부족으로 체온을 유지하기 위해 자신의 어머니에 도달하기 위해, 건강에 해로운 동물은 쓰레기에서 분리되고 맨손에 차가운 느낄 수 있습니다.

여기에, 절차는 대장균 K1의 문화와 신생아 쥐에 전신 감염의 설립을 설명합니다. 이것은 비 침습성 절차 맥락총에서 위장관 식민 전신 순환에 병원균의 전위, 및 중추 신경계의 침입을 허용한다.

Neuropathogenic의 비 침습 모델 대장균 신생아 쥐에 감염

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

이 절차의 목표는 대장균, K one 신생아 패혈증 및 수막염의 분자 발병 기전을 조사하기 위한 강력한 생체 내 모델을 제공하는 것입니다. 이것은 먼저 E coli K one을 신생아 쥐에게 경구 투여함으로써 달성됩니다. 두 번째 단계에서는 항문 주위 면봉으로 집락화를 확인합니다.다음으로, 원하는 시점에 관심 조직과 기관을 채취한 다음 마지막 단계에서 샘플을 적절한 조건에서 처리 및 보존합니다. 궁극적으로 군집화의 정도는 생존 계수 및 QPCR과 같은 다양한 기술을 사용하여 시각화하고 정량화할 수 있습니다. 흉골 내 및 피하 주사와 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 감염된 사람의 자연 질병 진행 경로를 복제한다는 것입니다.마지막으로 내 연구실의 박사 과정 학생이 뚱뚱한 마게인이 될 것임을 시연하면서 각 동물에 대한 박테리아를 투여하는 실험이 끝날 때까지 최적의 조건에서 수유하는 어미와 함께 식민지 당 12 개의 신생아의 모든 쥐 깔짚을 유지하고 한 손으로 목덜미를 수직으로 부드럽게 들어 올리고, 입을 벌리도록합니다. 그런 다음 멸균 피펫 팁을 입에 천천히 삽입하고 20마이크로리터의 접종물을 분배합니다. 30초 이상 동안 먹이를 먹은 직후 동물을 어미에게 돌려주고 표에 설명된 7점 채점 시스템을 사용하여 매일 4-5회 각 동물의 질병 중증도를 평가합니다.동물의 점수가 7점 만점에 3점 이하인 경우, 고통을 최소화하기 위해 즉시 해당 동물을 불러야 합니다. 먹이를 먹은 후 처음 24시간부터 시작하여 24시간마다 동물의 군집화를 확인하기 위해 동물이 죽었는지 기록합니다. 방금 시연한 대로 각 동물의 목덜미를 차례로 집어 든 다음 신생아의 항문 주위 부위를 PBS 적신 멸균 면봉으로 부드럽게 교체합니다.동물을 어미에게 돌려주고 면봉을 얼음 위에 300마이크로리터의 멸균 PBS에 넣습니다. 그런 다음 PBS를 사용하여 연속 희석으로 K one과 같은 eco에 의한 집락화를 확인한 다음 McConkey 한천에 도금합니다. 그런 다음 K 1과 같은 실행 가능한 에코의 수를 결정하기 위해 멸균 미생물 루프를 사용하여 McConkey 플레이트 중 하나에서 개별 콜로니를 채취한 다음 콜로니를 200마이크로리터의 멸균 PBS로 옮깁니다.볼텍싱(vortexing)을 통해 단일 세포 현탁액을 생성한 다음 새로운 멸균 미생물 루프를 사용하여 세포를 물라 힌튼 한천 플레이트에 일직선으로 계대배양합니다. 플레이트를 30초 동안 건조시킨 후 10마이크로리터의 박테리아 파지 K one E를 라인 중앙에 피펫팅하고 섭씨 37도에서 밤새 플레이트를 배양합니다. 다음 날, 위장관을 수집하기 위해 플레이트에서 박테리아 파지 매개 용해를 검사합니다.접종한 동물을 안락사시킨 후 복부를 청소한 다음 하복부를 따라 흉골까지 자르고 절개 부위를 흉골을 가로질러 흉골에서 하복부까지 오른쪽으로 뻗습니다. 다음으로, 홍채 곡선 해부 겸자를 사용하여 피부 플랩을 부드럽게 아래로 당겨 노출시킨 다음 복막 절단을 수직으로 부드럽게 들어 올려 내부 장기를 노출시키고 기본 장기를 손상시키지 않도록 주의합니다. 이제 양쪽의 위를 부드럽게 횡단하여 프리 웨이드 비주에 넣고 직장에서 결장을 절제한 다음 해부 집게를 사용하여 전체 장 덩어리를 조심스럽게 빼내고 조직을 멸균 페트리 접시에 넣습니다.조직을 30ml의 PBS로 덮은 다음 장간막 림프계의 중심 덩어리를 확인합니다. 미세한 해부 겸자로 덩어리를 꼬집은 다음 소장의 가장 근위부를 식별하고 미세한 해부 겸자로 꼬집습니다. 장간막 림프계의 중심 덩어리와 원위 소장을 두 조직이 완전히 분리될 때까지 반대 방향으로 천천히 당깁니다.소장이 늘어나지 않도록 주의합니다. 장간막 림프계를 300-500마이크로리터의 멸균 PBS로 얼음 위의 미리 계량된 튜브에 넣습니다. 그런 다음 맹장에서 위장관을 절제하여 소장과 결장을 분리합니다.그런 다음 얼음 위의 다른 고속도로 튜브에 있는 300-500마이크로리터의 멸균 PBS로 결장을 옮긴 다음 중간 지점에서 소장을 정렬합니다. 마지막으로, 대표적인 원위 소장 샘플 조직의 맹장 앞 조직의 마지막 2cm를 근위 소장의 중간 지점에서 5-7cm 위로 수집합니다. 중간 소장의 중간 지점 아래 3-5cm의 샘플과 조직.각 튜브에 샘플을 주입합니다. 조직 채취 후, 얻은 모든 튜브의 무게를 측정하여 샘플을 추가하기 전과 후의 튜브의 무게를 비교하여 조직 무게를 계산합니다. 다음으로, 조직을 균질화하고, 각 표본 사이 균질화기를 세척하고, 그 후에 즉시 얼음에 세균성 짐판을 산출하기 위하여 표본을 저장하십시오.균질화 된 샘플을 메이컨 플레이트에 연속 희석하여 하룻밤 동안 섭씨 37도에서 배양하고 K 1 특정 박테리아 파지에 대한 개별 콜로니의 감수성을 테스트하여 Eli K 1 부하를 결정합니다. 이전에 입증 된 바와 같이, 여기에 설명 된 Coli K one 전신 감염 모델은 인간의 자연 감염의 많은 특징을 복제합니다. 중요한 것은 이 모델이 그래프에 표시된 것처럼 강한 연령 종속성을 표시한다는 것입니다. 생후 2일 된 새끼 쥐는 침입성 질병에 매우 취약하지만, 7일이 지나면 감염에 점점 더 불응하게 되지만, 인간에서 관찰되는 것처럼 위장관 집락화는 일어나지 않습니다.박테리아는 또한 중추 신경계에 들어가기 전에 형광 현미경 검사에 의해 혈액 샘플에서 시각화 될 수 있으며, 대장균의 경구 투여 후 출생 후 2 일 강아지의 혈액 도말에서 A 1 92 PP 세포, 1 92 PP 세포는 출생 후 2 일, 5 일, 9 일의 위장관에 많은 수로 남아 있으며,이 세 그룹의 집락화의 시간적 측면은 매우 유사하며 박테리아가 장 내에서 인구 밀도를 복제하고 유지하는 능력을 반영합니다. 따라서 이 모델은 집락 현장에서 중추 신경계 및 기타 장기 시스템을 침입할 수 있는 능력과 관련하여 다른 K one 균주의 독성을 조사하는 데 사용할 수 있습니다. 이 절차에 따라 마이크로 CT IV를 사용하여 생물 발광 박테리아의 이미징을 포함한 다른 방법을 수행하여 질병이 실시간으로 어떻게 진행되는지와 같은 추가 질문에 답할 수 있습니다.

non-invasive-model-neuropathogenic-escherichia-coli-infection

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

hypoxic - 허혈성 뇌 손상에 대한 출생 후의 쥐 모델은 인간의 신생아 hypoxic 허혈성 뇌증 (히에)의 잘 설립 모델입니다. 이 문서에서는, 우리는 포스트 나탈 쥐 새끼의 히에의 모델을 설명합니다.

Perinatal 국소 빈혈의 Hypoxic 허혈성 뇌증 모델

출처: Seman, B. G. 외 그람 음성 세균성 패혈증의 신생아 영상 모델. J. Vis. 경험 (2020)이 영상은 캡슐화된 생물발광 박테리아를 이용한 신생아 마우스 모델을 시연하여 전신 감염을 연구합니다. 신생아 새끼들은 고용량 또는 저용량 박테리아 현탁액을 주사한 후 산후 관리를 위해 어미에게 돌려보냅니다. 캡슐화된 박테리아는 조기 면역 검출을 피하고 전신적으로 퍼지며, 발광 영상을 통해 시간이 지남에 따라 시각화됩니다. 이 모델은 신생아 쥐에서 감염 진행을 비침습적으로 추적할 수 있게 합니다.

캡슐화된 생물발광 박테리아를 이용한 신생아 쥐 감염 모델링

Encephalopathy of prematurity는 조산으로 인한 손상과 관련된 중추 신경계 이상을 포함합니다. 이 보고서는 융모막염을 모방한 자궁 내 일시적인 전신 저산소증-허혈 및 양수 내 지질다당류 투여(LPS)에 대한 임상적으로 관련된 쥐 모델, 그리고 감염 자극 및 태반 관류 부족이 CNS 발달에 미치는 관련 영향을 설명합니다.

미숙아의 모델링 뇌증은 흰쥐의 내부 - 양수 리포 폴리 사카 라이드와 태아 저산소증 - 허혈을 사용하여

이 원고는 대장균에 의한 신장 내 감염을 신장 골반으로 직접 사용하는 신우신염의 쥐 수술 모델을 설명합니다. 실험 절차는 신우신염의 발병 기전과 관련 염증 및 섬유증을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

경동맥 내 주사 대장균 신우 신염의 쥐 모델에서

이 보고서는 성공적으로 유도 실험 자가 면역 신경 염 (EAN) myelin 단백질을 사용 하 여 0 (P0)180-199 펩타이드 Freund의 완전 한 보조 및 백 일 해 독 소와 함께 하는 간단한 방법을 설명 합니다. 우리는 정확 하 게 기능적인 적자와이 상품에서 발생 하는 neuropathology의 정도 평가 정교한 패러다임 제시.

기능과 Neuropathological 평가 대 한 C57BL/6 쥐에 실험 자가 면역 신경 염을 유발 하는 간단한 방법

우리는 살아있는 유기체의 합병증 없이 모계 염증에 태아 노출을 시뮬레이션하기 위하여 chorioamnionitis의 모형을 개발했습니다 자손의 창자 발달에 FEMI의 효력을 검토합니다. 이것은 chorioamnionitis 다음 장 상해의 발달을 위한 기계론적인 원인의 연구를 허용합니다.

신생아 장 발달에 급성 chorioamnionitis의 효력을 연구하기 위하여 모성 염증에 태아 노출의 Murine 모형

생체 발광 대장균 O1:K1:H7을 가진 신생아 마우스의 감염은 중요한 폐 염증 및 폐 병리를 가진 패혈증 감염을 초래합니다. 여기서는 전신 세균성 부담, 염증 성 프로파일링 및 폐 조직 병리학의 열거와 병행하여 세로 내 인트라비셔널 이미징을 사용하여 신생아 패혈증을 모델링하고 추가로 연구하는 절차를 설명합니다.

그람 음성 세균 패혈증의 신생아 화상 진찰 모형

괴사 장염 (NEC)은 미숙아, 특히 매우 낮은 출생 체중 유아에서 자주 발생하는 가장 심각한 위장 (GI) 질병이며 사망률이 높고 불분명한 병인. NEC의 원인은 염증성 면역 규제 시스템 이상과 관련이 있을 수 있습니다. NEC 동물 모델은 NEC 질병 면역 연구를 위한 필수 도구입니다. NEC 동물 모델은 일반적으로 C57BL/6J 신생아 마우스를 사용; BALB/c 신생아 마우스는 거의 사용되지 않습니다. 관련 연구는 마우스가 감염될 때, Th2 세포 분화는 C57BL/6J 마우스에 비해 BALB/c 마우스에서 우세하다는 것을 보여주었습니다. 연구 결과는 NEC의 발생 그리고 발달이 T 도우미 타입 2 (Th2) 세포의 증가와 연관되고 일반적으로 감염을 동반한다는 것을 건의했습니다. 따라서, 본 연구는 신생아 BALB/c 마우스를 사용하여 NEC를 가진 아이들에서 관찰된 것과 유사한 임상 적 특성 및 장 병병리학적 변화를 가진 NEC 모델을 유도하였다. 추가 연구는 이 동물...

괴사 장염의 신생아 BALB/c 마우스 모델

조산(37주 분만)은 최적이 아닌 예방 및 치료 옵션이 있는 긴급한 글로벌 건강 문제&lt; 있습니다. 우리는 상행 질 세균 감염으로 인한 조산의 마우스 모델을 제시하고 그 결과 신생아 이환율과 사망률을 분석하는 방법을 간략하게 설명합니다.

마우스의 상승하는 질 감염, 조산 및 신생아 이환율 모델링

이 프로토콜은 괴사성 소장결장염(NEC)의 신생아 마우스 모델 및 신생아 쥐 소장에서 고유판 면역 세포의 후속 분리를 설명합니다.

면역 세포 프로파일링을 위한 괴사성 소장결장염 및 Lamina Propria 분리의 신생아 마우스 모델

배우세요 신생아 쥐에서 대장균 K1 비침습 감염 모델을 구축하는 방법을. 경구 투여와 직장 면봉 채취를 통해 세균 정착과 전이를 연구하고, 조직 균량을 정량화하여 신생아 패혈증의 병원성 메커니즘을 규명합니다.

Neuropathogenic의 비 침습 모델 대장균 신생아 쥐에 감염

더 많은 동영상 탐색