Name: 생물 검정으로 소 장간막 동맥과 정맥의 섹션을 분리하고 사용하면 소장에서 Vasoactivity을 테스트 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: 학습하세요 소 장간막 동맥과 정맥을 분리하여 다중근육측정기에서 혈관활성 물질을 선별하는 생물검정법을. 이 기법은 혈류와 영양소 흡수에 미치는 영향을 평가하여 소화기 건강 연구에 기여합니다.

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저자는이 문서에 사용 실험 조직을 수집 할 수있는 기회를 제공하기 위해 라이언 채플린 켄터키 고기 연구소와 동물 식품 과학과의 대학의 박사 그레그 Rentfrow을 인정합니다.

살아있는 동물을 사용하지 않았기 때문에 본 연구에 사용 된 절차는 켄터키 동물 관리 및 사용위원회의 대학의 승인을 필요로하지 않았다. 여기에 사용 된 시료의 수집에 앞서, 모든 동물은 고정 볼트 기절 exsanguinated되었다. 이 켄터키 대학의 연방 정부 검사 도축장 시설에서 실시했다. 미국 농무부 식품 안전 검사국의 공식 대표는 시체의 살아있는 동물과 처리 처리 모든 활동을 관찰했다. 계측의 1 준비 <ol><li> 실험의 시작 조직 샘플의 모음 사이의 시간, 장비 설정을 최소화하고 (추가 인원이 가능한 경우 나, 이러한 작업이 동시에 발생할 수있다) 실험 조직을 수집하기 전에 버퍼를 제조 하였다. NOTE : 이것은 조직 실험을 실시 가능한 남아있는 시간의 가장 큰 양을 제공하지만, 일부뿐만따라서 그것은 일반적으로 가능한 한 일찍 시작하는 것이 바람직하다, 실험은 오랜 기간 동안 실행할 수 있습니다 (또는 하루에 여러 실험을 완료하는 욕망이있다). </li><li> 전원을 연결 컴퓨터, 데이터 수집 장비, (버퍼 (들)) 수조와 myograph 장치 (들). myograph 장치 (들)에 교정 장치를 놓고 온도를 미리 설정 따뜻하게 단위 및 교정 장비 (37.5 ° C로 사전 설정) myograph 열을 켜고 수 있습니다. <ol><li> 컴퓨터에서 이전에 만든 차트 소프트웨어 설정 파일을 열고 실행을 시작합니다 (그러나 데이터를 수집하지 않음). </li></ol></li><li> 10 분 동안 장비를 따뜻하게. <ol><li> 데이터를 수집 시작합니다. </li><li> 모든 채널을 제로. </li><li> 확인하고, 인증 된 중량에 의해 공급이 g-포스로 그 채널과 연관된 각 힘 센서로부터 공급 된 전기 신호를 표준화하기 위해, 각 채널 (multimyograph 당 4 채널)에 (필요한 경우) 캘리브레이션을 수행. </li><li> 교정 및 단위 변환을 완료 한 후에, g 등의 모든 후속 데이터를 저장한다. 각 개별 기관의 욕망에 따라 적절하게 변경; 장비 및 소프트웨어는 milliNewtons 볼트와 같은 다른 장치의 사용을 허용한다. </li></ol></li><li> 가스 라인이 막혀 않은 지 확인하고 (들) 단위를 myograph하는 가스 공급 (95 %, O2 / 5 % CO 2)를 켭니다. 지속적으로 전체 절차를 수행하는 동안 (myograph 챔버에서) 모든 버퍼를 기체. </li><li> 70 % 에탄올 모든 myograph 챔버를 작성하고 10 분 동안 담근 에탄올을 제거하고 두번째 10 분 담가에 대해 반복합니다. <ol><li> 에탄올을 제거한 후, 챔버에서 버퍼의 세번째 추가를 떠나 준비된 버퍼 (버퍼 준비를위한 제 2 절 참조) 세 린스 다음에 탈 이온수로 3 회 씻어. 참고 : 버퍼와 조직이 준비 될 때까지이 시점에서 장비는이 상태에서 유휴 상태를 유지할 수 있으며, 직원은 experimen 진행 준비가되어 있습니다t. </li></ol></li></ol> 버퍼의 2 준비 <ol><li> 11.1 mM의 D-글루코오스의 최종 농도를 달성하기위한 교통 및 조직 샘플의 처리에 사용하기위한 1 L-Henseleit 크렙스 완충액을 준비한다; 1.2 mm의 4 황산; 1.2 mM의 KH 2 PO 4; 4.7 밀리미터의 KCl; 118.1 mM의 NaCl을; 3.4 mM의 염화칼슘이; 24.9 mM의 탄산 수소 나트륨. <ol><li> 저어 접시에 탈 물을 약 900 ㎖ 중에 크렙스 염 9.6 g을 섞는다. </li><li> 원하는 버퍼의 L 당 2.1 g의 중탄산 나트륨 다음에 0.373 g 염화칼슘 탈수 섞는다. </li><li> 95 %, O2 / 5 % CO 2와 함께 20 분 동안 가스 완충액. </li><li> L. 1로 볼륨을 조절, 가스 처리 후 7.05로 산도를 조정 (최종 목표 pH가 7.4이되어야합니다 버퍼의 여과 산도를 증가) </li><li> 필터를 사용할 준비가 될 때까지 4 ° C에서 깨끗한 멸균 한 L 매체 병 및 저장 버퍼로 버퍼를 소독. </li></ol></li><li> 별도의 크렙스-H를 준비크렙스 - Henseleit이 수축 실험과 관련된 추가 화합물과 버퍼 수송을위한 2.1 단계에 설명 된대로 myograph 실험에 사용 enseleit 완충 용액. 참고 : 일반적으로이 L이 문서에서 설명하는 실험에 충분하지만,이 볼륨이 증가하거나 실험의 길이에 따라 감소 될 필요가있다, myograph 챔버, 및 (치료 추가에 대해) 수의 버퍼 교체의 수입니다. <ol><li> 가스 처리 단계 (단계 2.1.3) 이전에, 9.1 mg의 추가 버퍼 데시 프라 민 염산의 (버퍼의 L 당 준비되고있다). </li><li> 프로프라놀롤 염산의 1.0 μM 솔루션을 준비하고 크렙스 - Henseleit 완충 용액이 용액 (준비되고 버퍼의 L 당) 1 ㎖에 추가합니다. 사용의 일에이 버퍼를 확인하고 myograph 작동 온도 (myograph에서 37.5 ° C 온도를 산출 온도)에 보관하십시오. 참고 : 데시 프라 민은 생체 아민 재 흡수 메커니즘을 억제하기 위해 추가더 빠르게 발생하도록 혈관 입욕 버퍼로부터 추가 실험 정화를 허용. 프로프라놀롤의 추가는 수용체 아드레날린을 β하는 치료 화합물의 결합을 비특이적을 방지 할 수 있습니다. </li></ol></li></ol> 3 수집 및 혈관의 제조 <ol><li> 가능한 한 빨리, 시체에서 위장관를 제거합니다. 동물이 더 이상 무의식적 인 반사를 전시하면, 머리를 제거하지 숨길 다음 수직으로 시체를 올립니다. 시체에서 위장 육부 (항문 식도)의 제거가 승인 도축장 직원 (&lt;20 분의 시간에서 멋진의)에 의해 완성되어야한다. 참고 : 일반적으로 장관이 표준 운영 절차 또는 시설의 직원이 다음에 연방 정부가 위임 절차와에서 수집되는 위치 / 시설로 제한됩니다 얼마나 빨리. <ol><li> 대부분의 시설에서, 위장관의 조작을 실시식량 공급을 입력 운명 사체의 처리에서 별도의 위치에서. 위장관은 촬영과 조사를 위해 밖으로 확산 될 수있는 근처의 편리한 위치를 사용합니다. </li></ol></li><li> 위장관이 확산되면, 소장, 맹장에 소장을 연결하는 회맹 배 및 회맹 배 (그림 1A)에 인접 연장 회장 플랜지를 식별합니다. <ol><li> 메스 나 칼을 사용하여 매우 가볍게 회장 플랜지의 중심 장간막 막에 절개. 두 집게 손가락을 사용하여, 퉁명스럽게 장간막 혈관 (그림 1B)를 노출 지방과 결합 조직을 멀리 해부. </li></ol></li><li> 장 장간막에서이 플랜지 또는 팽창에서 여러 가지를 해부 (~ 길이 2cm) 회장 (그림 1C)의이 부분을 지원하는 노출 장간막 동맥과 정맥 번들. <ol><li> U 경우조직을 파악 직접 파악 또는 손상에 부정적인 조직의 성능 (14)에 영향을 줄 수 스트레칭의 일종으로 그들을 제거하는 동안의 모든 혈관을 잡아 당기지하는데주의를 기울여야하는 집게를 노래. 혈관 제거는 가장 제거 될 섹션의 각 단부에 걸쳐 절단 한 다음 이제 격리 구역에 함께 또는 병렬로 절단함으로써, 수행된다. 편의를 위해 선박 집게 한 쌍의 파악하기 위해 일부 조직을 제공하기에 따라 주변 조직의 일부를 제거합니다. </li><li> 포셉 쌍, 차가운 얼음-Henseleit 크렙스 완충액을 함유하는 튜브에 조직 샘플을 담그고 처리 실험실에서 발생할 수있을 때까지 얼음 상에 저장한다. </li></ol></li><li> 절삭면이나 배양 접시에서 조직 샘플을 놓고 부분적으로 차가운 얼음 크렙스 - Henseleit에 잠수함. <ol><li> 범위 # 5 보석상 집게, 노이스 홍채 가위를 사용하여 램프를 확대 또는 해부,주의 깊게 주변의 지방과 니플을 멀리 해부 (5.0 배의 배율 2.5은 충분하다)조직을했습니다 및 동맥과 정맥을 분리합니다. 섹션의 일단에 개구 용기를 식별하고 신중 집게로 용기를 둘러싸는 밴드를 파악. </li><li> 가위로 잘라 올려 근막 아래에 가위의 끝을 밀어 용기에 평행합니다. 초기 절개 한 후, 지방 및 결합 조직은 가위로 상기 양측을 절단하여 용기로부터 분리 될 수있다. 선박 벤치에 소요되는 시간을 최소화하면서 혈관이 가능한 깨끗한 지 확인합니다. </li><li> (샘플 수집 후 최대 24 시간 동안 저장하고 여전히 유효 수축력 데이터를 생성 상태를 유지 할 수 있습니다) 4 ° C에서 신선한 크렙스 - Henseleit 버퍼와 저장소의 튜브에 혈관을 돌려줍니다. </li><li> 면도날을 사용하여, 슬라이스 용기가 2 mm 부의 원하는 수로 myograph에 사용되는 (그것은 일관된 단면을 얻기 위해 조직 슬라이서를 사용하는 것이 도움이된다). </li><li> 해부 SCO 아래의 각 부분을 검사PE (12.5X 배율)은 각 섹션 실수 해부 청소하는 동안 수행 더 이상, 지점, 밸브, 또는 표면 손상이 없음을 확인합니다. 이상 징후, 분기, 밸브, 또는 표면 손상이있는 경우 혈관 부분을 교체합니다. </li></ol></li><li> myograph 챔버 (일반적으로 &lt;30 분)에 장착하기위한 준비가 될 때까지 C 얼음 또는 4 °에서 (크렙스 - Henseleit 버퍼에 빠져들) 점포 허용 썰어 용기 섹션. </li><li> 부드럽게 루멘을 통해 지원을 삽입하여 myograph에 선박을 탑재하고 2-3그램 읽기 위의 혈관을 스트레칭하지 않도록주의하면서 (myograph에 micropositioner 사용) 장력을 증가시킨다. </li><li> 모든 챔버가 적용되면, 모든 방에서 버퍼를 진공 청소기로 청소 및 버퍼의 5.0 ㎖로 채우고 평형 기간과 실험을 시작하기 15 분 타이머를 시작합니다. </li></ol> (4) 실험 <ol><li> 안정한 고해상도를 달성하기 위해 1.5 시간 동안 모든 용기 섹션을 평형화1.0 g의 팅 장력. <ol><li> 크렙스 - Henseleit 배양 버퍼마다 15 분 교체합니다. </li><li> 평형 동안 지속적으로 2g에 혈관 부분에 긴장을 조절하고 약 0.80 g까지 휴식을 취할 수 있습니다. 선박 (그들은 마운트를 미끄러 져 있음)을 너무 많이 긴장을 허용하지 않도록하십시오. 선박이 조정을 필요로하지 않고 1g 장력을 보유하고 안정된 기준 긴장을 달성하기 위해보십시오. </li></ol></li><li> 평형화 동안의 KCl 수용액 1.32 M 용액이 참조로서 사용되도록 준비한다. </li><li> 만족스러운 평형의 완료 후, 용기를 목욕 5.5 ml의 용액에 0.12 M 용액에 결과에 1.32 M의 KCl 용액 500 μl를 추가합니다. <ol><li> 이 외에도에서 최대 반응은 조직 생존력을 평가하기 위해 사용되며, 행 (처리 된 데이터를 정규화하는 등의 농도 응답을 사용할 수있는 수동 장력을 조정할 수 없어, 1.32 M KCl을 첨가 이어gonist). </li><li> 장력이 1.0 g의 기준 값으로 돌아올 때까지 15 분 간격으로 버퍼를 교체합니다. </li></ol></li><li> 기준선에 도달하면, 버퍼를 변경 함과 동시에 1 분 타이머를 시작한다. 시작 시간의 경이적인을 방지하기 위해 동시에 모든 챔버에 대해이 작업을 수행합니다. <ol><li> 추가 할 수있는 기준을 흔든다은 1 분 카운트 다운 동안 챔버 (1)에 대한 설명을 준비합니다. </li><li> (이 총 부피의 0.5 % 미만을 유지 치료) 실험 지시로서 각 챔버에 25 ㎕의 분취 액에 기준을 추가한다. </li><li> 최종 표준이 추가되면, 9 분 타이머를 시작한다. </li><li> 구 분 표준 인큐베이션의 끝에, 처리 챔버에서 함유 완충액을 제거하고 신선한 완충액 5.0 mL를 넣고 2.5 분 타이머를 시작. </li><li> 단계를 반복 4.4.4. </li><li> 제 2.5 분 세정의 끝에서, 진공 챔버와 신선한 완충액을 추가 SECON의 개시 카운트 다운하는 1 분 타이머를 시작D 표준 추가. </li></ol></li><li> 일의 표준 추가 모든이 사이클을 계속합니다. </li><li> 최종 표준뿐만 아니라 이후 9 분 배양 동안 500 μL의 실행 기준 용량 추가의 끝의 1.32 M KCl을 참조 화합물을 제조. </li><li> 최종 처리 첨가 후 1 분 간격에 따라,의 KCl을 추가하고 9 분 타이머를 시작합니다. 주 : KCl을 첨가 실험의 결론에 조직의 생존 능력을 확인하기위한 것입니다 무시할 응답 결과 처리를 관리하는 경우에 유용합니다. </li><li> 최종 9 분 기준 화합물 보육의 결론에, 진공 청소기를 사용하거나 모든 챔버에서 버퍼를 제거합니다. 신선한 버퍼를 추가하지 마십시오. 실험을 마친다. </li><li> , 차트 파일을 저장 혈관 부분을 제거하고 적절하게 처리하고 정리 프로토콜에 따라 (제조업체가 제공 및 실험실 특정 될 수 있습니다) myograph의 장비. </li></ol>

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이러한 생물학적 검정의 개발 초기 도전 장간막 혈관 용 반복 수집 사이트 구축했다. 회장 결과적 장간막 통해 소장에서 진행 중에 소장 변화의 기능의 일부와 유사한 패턴으로 변화 샘플 사이트 일관성은 중요하다. 장간막 동맥과 정맥의 회장 지점은 가장 쉽게 식별 해부학 적 랜드 마크를 통해이었다. 맹장의 위치 및 장간막의 왼쪽에 그 말단에 회맹 배 다음으로이 두개골 장간막 동맥 (15)의 종료 근처에 있습니다. 이상 장간막의 영역과 회맹 배의 확장 (소 동물에 고유 한) 매우 반복 수많은 동물에서 16 만들어진 샘플링 (플랜지라고). 제조 될 수있는 큰 함정 중 하나는 생물 검정이 단계에있다. 기계적 스트레칭 후속 용기 (P)에 큰 부정적인 영향을 미친다erformance (14)와 연구원은 과도하게 제거 및 후속 청소시 조작 또는 뻗어 아르 선박이 기준 화합물 사용에 응답하지 않습니다 알 수 있습니다. 이는 불행하게도 진정한 기능 수준 및 신뢰성있는 데이터의 생성을 위해...

티슈 침대 혈류량의 변화는 장기의 기능에 큰 영향을 미칠 수있다. 소장의 주요 기능은 영양소 흡수이다. 영양소 흡수 및 혈류 증가 표면 일 소화물 이동함에 따라 영양소 흡수에 도움을 위해 장내의 흡수성 표면 동맥 혈류가 필요하다. 혈류의 감소로 인해 transepithelial 그라데이션이 감소로 영양소 흡수의 감소를 일으킬 수있다. 영양소 이외에, 또한 소장의 장간막 국소 혈류에 효과를 발휘하는 2 차 대사, 약물, 독소에 노출 될 수있다. 반추 동물의 경우, 화합물은 사료에서 해방 될 수있다 (예를 들면, 아미노산, 또는 맥각 알칼로이드와 같은 독소와 같은 영양소) foregut의 발효 과정을 통해. 이 화합물은 반추위 발효 미생물의 신진 대사를 살아남을 경우, 지금은 흡수 가능또는 상호 작용 그들은 동물의 위장관을 통과있다. 생체 내 혈류를 측정하는 다른 방법을 사용할 수가있다 (예를 들어, 도플러 초음파, 혈액 유량계, 방사성 표지 된 미소 구, 및 표시 희석 기법 내주) 다양한 실험 시나리오 또는 치료의 평가를 허용한다. Mulvany 및 Halpern 3 전선을 사용하는 기술을 설명하는 문서 myograph 혈관 링 제제를 장착 발행까지 그러나, 혈관 평활근의 기계적 또는 약리학 적 특성에 관한 정보를 얻기 위해, 방법은 대형 선박을 제한된 남았다. 이 기술의 개발 이후 변형 관형 구조체의 평가 다른 다양한 애플리케이션을 허용 연관된 myograph 시스템으로 이루어질 것을 계속한다. 시스템은 또한 여기서 큰 혈관 관류 4를 장착하기위한 고정 봉을 이용하도록 한 내용기술이 요구되지 않습니다. 용기 및 동물 종류와 다른 동물 종의 데이터로부터 동일한 용기에 다른 해부학 적 기원과 구별에서 혈관의 dissimilarities 때문에 쉽게 다른 선박 또는 다른 동물 5 종류에서 동일한 용기에 걸쳐 추정 될 수 없다. 따라서, 별도의 생물 검정을 개발하고 이러한 측면이 변경 언제든지 확인해야합니다. 최근 여러 생물 검정은 복재 정맥과 오른쪽 반추위 동맥과 정맥 6,7는 가축에 사용하기 위해 이러한 기술과 수사관 개발되었다. 이러한 생물학적 검정은 맥각 알칼로이드는 소장지지 혈관에 미치는 효과를 구체적으로 조사하기 위하여 개발되었다. 그것은 공급 알칼로이드 50 ~ 60 %로 4 위 내용에 나타나는 것으로보고되었다, 그러나 5 %는 대변 팔에 복구됩니다. 스트릭 랜드 등. 9, 맥각 알칼로이드의 리뷰가 가능한 데이터 sugg를 언급EST는 소장 흡수가 ergopeptine 가장 중요한 사이트가 될 수 있음. 커트 등. 맥각 알칼로이드의 열을 검토 바이오 측면 그들이 상피 장벽을 통과하면, 맥각 알칼로이드가 쇄골 하 정맥 또는 장간막 정맥 및 포털 혈액으로 림프 시스템에 의해 하나를 운송 말했다. 로즈 등. 11은 높은 내생 감염 (높음 맥각 알칼로이드) 다이어트 소모 처리구에서 십이지장 혈류의 감소 및 결장을보고 하였다. 오른쪽 반추위 동맥과 정맥 생물 검정을 사용하여, 푸트 등. (12) 맥각 알칼로이드가 반추위 혈관에서 혈관 작용 것을 보여 주었다. 푸트 외. 13이어서 생체 내에서 증명이 감소 반추위 상피 혈류 맥각 알칼로이드 결과로 반추위 노출. 반추위의 흡수성 표면에 혈류 감소는 부수적 영양소 (휘발성 지방산) 플럭스의 감소를 일으켰다. 한때 감안할 때foregut에서 소장에게 전달 맥각 알칼로이드의 antity; 이 소장 혈관 및 영양 흡수에 비슷한 효과가 발생할 것이라고 가정했다. 이는 소 근위 회장 장간막 동맥 및 정맥 생물 검정의 개발을 필요로.

<table><tbody><tr><td>다중 근그래프</td><td>덴마크어 Myo Technologies</td><td>610M</td><td>근그래프는 이 생물학적 분석에 매우 중요하지만 사용할 수 있는 다른 플랫폼으로도 충분합니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>Powerlab 8/sp</td><td>ADIntruments</td><td>ML785</td><td></td></tr><tr><td>LabChart 7</td><td>ADInstruments</td><td>버전 7</td><td></td></tr><tr><td>힘 교정 키트</td><td>Danish Myo Technologies</td><td>100055</td><td>DMT 근그래프</td></tr><tr><td>전용 Bottle-top Filter</td><td>Nalgene</td><td>595-4520</td><td>0.22 &#956; m 기공 크기; 45mm 넥 사이즈</td></tr> <tr><td># 5 Jewler ' s 집게</td><td>Miltex</td><td>555008FT</td><td>모든 브랜드의 집게를 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>Noyes Iris Scissors</td><td>Miltex</td><td>18-1510</td><td>모든 브랜드의 가위를 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>해부 범위</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000-C</td><td>모든 브랜드의 해부 광학 현미경으로 충분합니다</td></tr><tr><td>조정 가능한 조직 Matrice</td><td>Braintree Scientific</td><td>TM C12</td><td>이것은 분석에 중요하지 않지만 길이의 단면 간 변동을 크게 줄이고 슬라이싱 과정을 크게 가속화합니다</td></tr><tr><td>Krebs-Hensleit 버퍼</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>K3753-10x1L</td><td>Krebs를 구입할 필요가 없으며 집에서 만들 수 있습니다</td></tr> 염화<tr><td>칼슘 탈수</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7902-500G</td><td></td></tr><tr><td>중탄산나트륨</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761-500G</td><td></td></tr><tr><td>데시프라민-HCl</td><td>시그마-알드리치</td><td>D3900-5G</td><td></td></tr><tr><td>프로프라놀롤-HCl</td><td>시그마-알드리치</td><td>P0884-1G</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>시그마-알드리치</td><td>P9333-500G</td><td></td></tr><tr><td>95% O2/5% CO2</td><td>Scott Gross</td><td>UN3156</td><td></td></tr></tbody></table>

생물 검정으로 소 장간막 동맥과 정맥의 섹션을 분리하고 사용하면 소장에서 vasoactivity을 테스트

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

포유류의 위장 시스템은 지속적으로 해당 시스템으로부터 혈류에 영향을 미칠 수있는 화합물 (바람직한 및 바람직하지 않은)에 노출된다. 소장에 혈액 흐름의 변화는 기관의 흡수 기능에 대한 효과가 발생할 수 있습니다. 발효와 소화 과정을 통해 사료에서 해방 독소에 특히 관심이 생산 효율성을 개선 할 수있는 영역으로 반추 동물에서 개발했습니다. 이 문서와 관련된 비디오는 소 장간막 동맥의 고립 된 단면에서 vasoactivity과 multimyograph를 사용하여 정맥 화면 화합물을 개발 한 체외 생물 검정을 설명합니다. 혈관이 마운트 myograph으로 평형화되면, 생물 분석 자체가 사용될 수있다 : 수축성 응답 또는 관심있는 화합물을 평가하기 vasoactivity 스크리닝 도구로; 약리학 적으로 특정 수용체​​ 작용제에 의해 수용체를 표적 종류의 존재를 결정의; 하나 이상의 길항제의 존재와 수용체의 역할을 결정하고; 또는 길항제를 사용하여 원하는 화합물의 잠재적 인 상호 작용을 결정합니다. 이 모든 것을 통해, 데이터는 실시간으로 수집되고, 하나의 동물로부터 수집 된 조직은 다른 실험 치료의 다수 (체외 이점)에 노출하고, 정확을 제공하는 모세관 침대의 양쪽에 혈관 구조를 의미 할 수있다 소장을 지원하는 구 심성 및 원심성 혈액 공급에 일이 될 수 있는지의 그림.

포함 된 결과를 생성하는 데 사용되는 혈관 3주 간격 내 6 홀스타인 수송아지 (425 ± 8 ㎏)에서 수집 하였다. 의 KCl 농도 증가 처리를 추가로 전형적인 장간막 혈관 수축 반응의 예는 반응의 크기는 (공여체 동물의 크기와 상관) 용기의 크기와 약간 다를 것이다.도 2에 표시 할뿐만 아니라 수있다 부적절한 취급으로 (부정적) 영향을받을 수집 및 청소하는 동안 선박의 (스트레칭). 따라서, 선박의 KCl에 노출 상당한 수축 반응을 관찰하는 것이 중요하다. 무시할 응답이이 시점에서 관찰되는 경우 해당 선박의 절차로 더 이상 진행하지 않는 것이 좋습니다. 그림 2의 9 분의 배양 기간에서 알 수있는 바와 같이, 농도 증가에 대응 님의 증분 증가가 있습니다. 이 partic 것이 바람직하지만신경근 실험 설계, 그것은 항상 발생하지 않을 수 있습니다 또는 다른 치료법으로 자행 될 수있다. 수집 된 데이터의 처리에 사용되지 않지만 용기는 어느 하나에 응답하지 않는 경우는...

소장은 자주 혈액 흐름에 부정적인 영향을주고 영양분 흡수에 영향을 미칠 수있는 독소에 노출된다. , 화합물 또는 관심의 독소를 multimyograph 및 장간막 동맥을 사용하고 정맥 분리하는 vasoactivity에 대한 검사를 할 수 있습니다.

생물 검정으로 소 장간막 동맥과 정맥의 섹션을 분리하고 사용하면 소장에서 Vasoactivity을 테스트

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

이 절차의 전반적인 목표는 소 장간막 동맥 및 정맥의 단면을 다중 그래프로 분리하여 혈관 활성에 대한 실험 화합물을 스크리닝할 수 있도록 하는 것입니다. 이것은 먼저 동물에서 장간막 조직 샘플을 수집하여 수행됩니다. 두 번째 단계에서는 샘플을 세척하고 용기를 절단합니다.다음으로, 절편이 myo 이식편에 장착되고 평형을 이룹니다. 마지막 단계에서, 분리된 혈관은 관심 화합물에 노출됩니다. 궁극적으로 이 동맥 및 정맥 생물학적 분석은 화합물의 혈관 활성과 소 장간막 혈관 내 혈류에 미치는 영향을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.생체 내 혈류 측정과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 이 기술을 사용하면 단일 동물의 조직을 여러 화합물에 동시에 노출시킬 수 있다는 것입니다. 이 방법은 페스큐, 중독증 또는 맥각증과 같은 혈관 수축을 유발할 수 있는 매우 특정한 동물 증후군에 대한 통찰력을 제공할 수 있지만, 개발 중인 의약품 또는 천연 제품과 같이 연구자가 관심을 가질 수 있는 다른 시나리오에도 적용할 수 있습니다. 또한, 가축의 혈관 구조뿐만 아니라 실제로 다른 포유류 종의 혈관 조직에도 적용될 수 있습니다.장간막 조직에서 혈관을 제거한 후 집게를 사용하여 조직 샘플을 절단면에 놓고 얼음처럼 차가운 틈새에 부분적으로 담그십시오. 그런 다음 5번 보석상, 집게, 소음을 사용하여 아이리스 가위로 혈관을 둘러싼 지방과 결합 조직을 조심스럽게 해부합니다. 동맥과 정맥을 분리한 후 단면의 한쪽 끝에 있는 혈관 입구를 확인하고 겸자로 혈관을 둘러싼 근막을 조심스럽게 잡습니다.그런 다음 가위 끝을 돌출된 근막 아래로 밀어 가위로 용기와 평행하게 자릅니다. 초기 절개 후 혈관의 양쪽을 잘라 지방과 결합 조직을 더 분리하고 혈관을 청소합니다. 세척된 혈관을 Krebs Henzel 라이트 버퍼의 새 튜브에 넣고 튜브를 섭씨 4도에서 최대 24시간 동안 보관합니다.준비가 되면 조직 슬라이서를 사용하여 원하는 수의 2mm 절편으로 관심 혈관의 일관된 단면을 얻은 다음 12.5배 배율로 각 절편을 검사하여 각 검체에 해부 및 세척 과정에서 얻은 이상, 가지, 밸브 또는 표면 손상이 없는지 확인합니다. Krebs Henzel 광 완충액에 담근 허용 가능한 슬라이스 용기 섹션을 섭씨 4도에서 최대 30분 동안 보관하십시오. 그런 다음 각 샘플의 내강을 통해 지지대를 부드럽게 삽입하고 근 이식편에 마이크로 포지셔너를 사용하여 장력을 점차적으로 증가시켜 혈관을 근 이식편에 장착합니다.혈관이 2-3g 판독값 이상으로 늘어나지 않도록 주의하십시오. 모든 챔버가 덮이면 각 챔버의 버퍼를 진공 청소기로 청소하고 5ml의 새 버퍼로 다시 채웁니다. 모든 용기 섹션이 1.5 시간 동안 평형을 이루어 500 마이크로 리터의 1.32 몰 염화칼륨에서 0.12 몰 최종 농도에서 5.5 밀리리터 용액에 대한 0.12 몰의 안정된 휴지 장력을 달성하여 용기를 목욕시킵니다.염화칼륨에 대한 최대 반응은 처리 데이터를 정규화하는 데 사용되므로 장력을 수동으로 조정하지 말고 장력이 기준선 값인 1g으로 돌아올 때까지 15분 간격으로 용액을 새로운 Krebs Henzel 광 버퍼로 교체하십시오. 장력이 기준선으로 돌아오면 실험 프로토콜에 따라 각 챔버에 25마이크로리터 분취액의 표준물질을 추가합니다. 마지막 표준이 추가되면 9분 타이머를 시작합니다.배양이 끝나면 챔버에서 완충액이 포함된 처리제를 제거하고 각 챔버에 5ml의 새 완충액을 추가합니다. 그런 다음 완료 후 2.5분 타이머를 시작하고 이 2.5분 헹굼을 반복합니다. 두 번째 헹굼이 끝나면 두 번째로 챔버를 흡인합니다.그런 다음 새 버퍼를 한 번 더 추가한 후 1분 타이머를 시작하여 두 번째 표준 에디션이 시작될 때까지 카운트다운합니다. 여기에 설명된 9분의 잠복기에서 관찰된 바와 같이, 처리의 농도가 증가함에 따라 실험 종료 시 염화칼륨 첨가가 조직의 생존력을 확인하기 때문에 필수적이라는 표준에 대한 반응이 점진적으로 증가하고 있습니다. 이 생물학적 분석은 소장에 영양분을 공급하는 혈관과 흡수된 영양소를 운반하는 혈관에서 실험 화합물의 혈관 활성을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.예를 들어, 이 실험에서는 5회 하이드록시 트립타민 치료 후 동맥 또는 정맥 수축 반응에서 관찰된 차이가 없었습니다. 반대로, 노르에피네프린 농도 증가에 대한 장간막 정맥의 수축 반응은 장간막 동맥의 수축 반응보다 컸습니다. 이 절차에 따라, 연구자가 특별히 관심을 가졌던 작용제 또는 길항제를 완충액에 포함하도록 방법을 추가로 수정할 수 있습니다.이를 통해 연구자는 매우 특이적인 수용체의 관여와 myo 실험에서 관찰된 혈관 반응 이면의 메커니즘을 더 잘 이해할 수 있습니다. 이 동영상을 시청한 후에는 혈관을 수집, 처리 및 분리하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 내 실험을 위해.

isolating-using-sections-bovine-mesenteric-artery-vein-as-bioassay-to

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

physiologic angiogenesis 그 부족 일반 성인 vascularized 포유류의 조직은 학습하는 데 사용됩니다 수술 개입에 노출되지 않았습니다 (I) 개시 및 시험 요원의 intraperitoneal 관리 다음 angiogenesis의 개발, 그리고 체계적인 관리 아래와 angiogenesis의 (2) 수정 테스트 에이전트를 선택했습니다.

쥐 장간막의 Angiogenesis 분석

절연 mesenteric의 동맥에 힘 측정을위한 자동 myography 방법이 설명되어 있습니다. 그것은 phenylephrine 및 세포외 칼슘에 대한 답변을 결정하기 위해 510A Mulvany - Halpern 자동 듀얼 와이어 Myograph을 사용합니다. 300 μm의, 독립적으로 - 방법은 60 직경의 작은 선박에 agonists에 사시 응답 일관성있는 결정 수 있습니다.

자동 와이어 Myography를 사용 Mesenteric 동맥 수축과 휴식 연구

예 생체내</em혈관 반응성 조사를위한> 절연 골격 Microvessel 준비

압축시키는 것 / 확장시키는 반응 (압력 myography를 사용하여)의 측정 병렬 절연 동맥 근세포 (패치가 el​​ectrophysiological 기술 클램프 사용)에서 Kv7 (KCNQ) 칼륨 채널 활동의 측정은 혈관 평활근의 생리학에 Kv7 채널의 역할에 대한 중요한 정보를 공개 할 수 있습니다 약리학.

패치 클램프 전기 생리학 및 압력 Myography를 사용하여 간선 평활근 Kv7 칼륨 채널 기능을 탐색

우리는 원시 그대로의 미세 혈관 내피 세포의 칼슘 신호를 시각화하고 조작하기위한 준비를 제시한다. 내피 튜브 갓 골격 근육 주위의 세포 내와 사이에 생체 형태와 동적 신호의 유지 공급 마우스 저항 동맥에서입니다. 내피 튜브는 다른 조직 및 기관의 미세 혈관으로부터 제조 될 수있다.

마우스 저항 동맥의 미세 혈관 내피 튜브의 분리

압력 myography는 가압 할 때 지속적인 수축을 개발하는 작은 동맥의 vasoactivity을 평가하는 데 사용됩니다. 이 원고는 쥐, vasoactivity 혈관 직경에 관내 압력의 영향에서 작은 장간막 동맥의 고립 된 세그먼트에서 평가하기위한 세부 프로토콜을 제공합니다.

압력 Myography를 사용하여 저항 장간막 동맥에서 근육 조직 대응 및 Vasoactivity 평가

modified Landis 기법은 미세관류 기법을 사용하여 통제 및 테스트 조건에서 정상 및 유전자 변형 쥐의 장간막에서 개별 미세혈관의 수압 전도도를 쌍으로 측정할 수 있습니다. 생리학적 조건에서 미세혈관 투과성과 경혈관 교환을 조절하는 메커니즘을 평가하는 편리한 방법을 제공합니다.

Microperfusion 기술은 쥐 장간막에서 미세 혈관 투과성의 규정을 조사하기 위해

이 프로토콜은 장 장벽 기능의 생체 외 모델로 절제된 장 조직 제제 또는 "장 주머니"의 사용을 설명합니다. 이 모델은 소화기 질환의 동물 모델에서 특정 장 부위에서 상피 장벽과 점액 겔 층 모두의 무결성을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

예 생체 내 창자 주머 니나는 위장 질환 모델에서 점막 투과성을 평가하는

이 원고는 쥐 대뇌 저항 동맥 혈관 기능을 평가 하기 위한 비디오 현미경 검사 법 프로토콜을 체 외에 설명 합니다. 원고는 또한 레이저 도플러 Flowmetry를 사용 하 여 붙일 레이블된 lectin과 조직 관류와 microvessel 밀도 평가 하기 위한 기법을 설명 합니다.

쥐의 고립 된 저항 동맥의 비디오 현미경을 이용 하 여 혈관 제어 메커니즘의 평가

선법 myograph 혈관 부드러운 근육 기능과 화면 새로운 약물을 조사 하는 데 사용 됩니다. 우리 보고 마우스 mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정 및 혈관 평활 근의 새로운 relaxants 심사에 대 한 자세한 프로토콜.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

이 프로토콜은 마우스에서 분리 된 장 간 막 동맥의 경 벽 등각 장력을 평가 하는 와이어 묘 조 그래피의 사용을 설명 하며, 내 피 세포 및 혈관 주위 지방 조직에서 방출 되는 요인에의 한 변조를 특별히 고려 합니다.

혈관 주위 지방 조직에 의해 변조에 초점을 맞춘 분리 된 장 간 동맥을 사용 하 여 혈관 톤 응답성의 평가

학습하세요 소 장간막 동맥과 정맥을 분리하여 다중근육측정기에서 혈관활성 물질을 선별하는 생물검정법을. 이 기법은 혈류와 영양소 흡수에 미치는 영향을 평가하여 소화기 건강 연구에 기여합니다.

생물 검정으로 소 장간막 동맥과 정맥의 섹션을 분리하고 사용하면 소장에서 Vasoactivity을 테스트

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