생물 검정으로 소 장간막 동맥과 정맥의 섹션을 분리하고 사용하면 소장에서 Vasoactivity을 테스트

이 절차의 전반적인 목표는 소 장간막 동맥 및 정맥의 단면을 다중 그래프로 분리하여 혈관 활성에 대한 실험 화합물을 스크리닝할 수 있도록 하는 것입니다. 이것은 먼저 동물에서 장간막 조직 샘플을 수집하여 수행됩니다. 두 번째 단계에서는 샘플을 세척하고 용기를 절단합니다.

다음으로, 절편이 myo 이식편에 장착되고 평형을 이룹니다. 마지막 단계에서, 분리된 혈관은 관심 화합물에 노출됩니다. 궁극적으로 이 동맥 및 정맥 생물학적 분석은 화합물의 혈관 활성과 소 장간막 혈관 내 혈류에 미치는 영향을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

생체 내 혈류 측정과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 이 기술을 사용하면 단일 동물의 조직을 여러 화합물에 동시에 노출시킬 수 있다는 것입니다. 이 방법은 페스큐, 중독증 또는 맥각증과 같은 혈관 수축을 유발할 수 있는 매우 특정한 동물 증후군에 대한 통찰력을 제공할 수 있지만, 개발 중인 의약품 또는 천연 제품과 같이 연구자가 관심을 가질 수 있는 다른 시나리오에도 적용할 수 있습니다. 또한, 가축의 혈관 구조뿐만 아니라 실제로 다른 포유류 종의 혈관 조직에도 적용될 수 있습니다.

장간막 조직에서 혈관을 제거한 후 집게를 사용하여 조직 샘플을 절단면에 놓고 얼음처럼 차가운 틈새에 부분적으로 담그십시오. 그런 다음 5번 보석상, 집게, 소음을 사용하여 아이리스 가위로 혈관을 둘러싼 지방과 결합 조직을 조심스럽게 해부합니다. 동맥과 정맥을 분리한 후 단면의 한쪽 끝에 있는 혈관 입구를 확인하고 겸자로 혈관을 둘러싼 근막을 조심스럽게 잡습니다.

그런 다음 가위 끝을 돌출된 근막 아래로 밀어 가위로 용기와 평행하게 자릅니다. 초기 절개 후 혈관의 양쪽을 잘라 지방과 결합 조직을 더 분리하고 혈관을 청소합니다. 세척된 혈관을 Krebs Henzel 라이트 버퍼의 새 튜브에 넣고 튜브를 섭씨 4도에서 최대 24시간 동안 보관합니다.

준비가 되면 조직 슬라이서를 사용하여 원하는 수의 2mm 절편으로 관심 혈관의 일관된 단면을 얻은 다음 12.5배 배율로 각 절편을 검사하여 각 검체에 해부 및 세척 과정에서 얻은 이상, 가지, 밸브 또는 표면 손상이 없는지 확인합니다. Krebs Henzel 광 완충액에 담근 허용 가능한 슬라이스 용기 섹션을 섭씨 4도에서 최대 30분 동안 보관하십시오. 그런 다음 각 샘플의 내강을 통해 지지대를 부드럽게 삽입하고 근 이식편에 마이크로 포지셔너를 사용하여 장력을 점차적으로 증가시켜 혈관을 근 이식편에 장착합니다.

혈관이 2-3g 판독값 이상으로 늘어나지 않도록 주의하십시오. 모든 챔버가 덮이면 각 챔버의 버퍼를 진공 청소기로 청소하고 5ml의 새 버퍼로 다시 채웁니다. 모든 용기 섹션이 1.5 시간 동안 평형을 이루어 500 마이크로 리터의 1.32 몰 염화칼륨에서 0.12 몰 최종 농도에서 5.5 밀리리터 용액에 대한 0.12 몰의 안정된 휴지 장력을 달성하여 용기를 목욕시킵니다.

염화칼륨에 대한 최대 반응은 처리 데이터를 정규화하는 데 사용되므로 장력을 수동으로 조정하지 말고 장력이 기준선 값인 1g으로 돌아올 때까지 15분 간격으로 용액을 새로운 Krebs Henzel 광 버퍼로 교체하십시오. 장력이 기준선으로 돌아오면 실험 프로토콜에 따라 각 챔버에 25마이크로리터 분취액의 표준물질을 추가합니다. 마지막 표준이 추가되면 9분 타이머를 시작합니다.

배양이 끝나면 챔버에서 완충액이 포함된 처리제를 제거하고 각 챔버에 5ml의 새 완충액을 추가합니다. 그런 다음 완료 후 2.5분 타이머를 시작하고 이 2.5분 헹굼을 반복합니다. 두 번째 헹굼이 끝나면 두 번째로 챔버를 흡인합니다.

그런 다음 새 버퍼를 한 번 더 추가한 후 1분 타이머를 시작하여 두 번째 표준 에디션이 시작될 때까지 카운트다운합니다. 여기에 설명된 9분의 잠복기에서 관찰된 바와 같이, 처리의 농도가 증가함에 따라 실험 종료 시 염화칼륨 첨가가 조직의 생존력을 확인하기 때문에 필수적이라는 표준에 대한 반응이 점진적으로 증가하고 있습니다. 이 생물학적 분석은 소장에 영양분을 공급하는 혈관과 흡수된 영양소를 운반하는 혈관에서 실험 화합물의 혈관 활성을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

예를 들어, 이 실험에서는 5회 하이드록시 트립타민 치료 후 동맥 또는 정맥 수축 반응에서 관찰된 차이가 없었습니다. 반대로, 노르에피네프린 농도 증가에 대한 장간막 정맥의 수축 반응은 장간막 동맥의 수축 반응보다 컸습니다. 이 절차에 따라, 연구자가 특별히 관심을 가졌던 작용제 또는 길항제를 완충액에 포함하도록 방법을 추가로 수정할 수 있습니다.

이를 통해 연구자는 매우 특이적인 수용체의 관여와 myo 실험에서 관찰된 혈관 반응 이면의 메커니즘을 더 잘 이해할 수 있습니다. 이 동영상을 시청한 후에는 혈관을 수집, 처리 및 분리하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 내 실험을 위해.