Quantitative Immunofluorescence Assay to Measure the Variation in Protein Levels at Centrosomes

Shubhra Majumder; Harold A. Fisk

doi:10.3791/52030

JoVE Journal
Biology

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Quantitative Immunofluorescence Assay to Measure the Variation in Protein Levels at Centrosomes

정량 면역 형광 분석은 중심체에서 단백질 수준의 변화를 측정하기 위해

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09:39 min

December 20, 2014

DOI: 10.3791/52030-v

Shubhra Majumder¹, Harold A. Fisk¹

¹Department of Molecular Genetics,The Ohio State University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

여기에서는 단백질의 형광 강도를 적절한 내부 표준물질의 농도로 정규화하여 중심체에서 단백질의 수준 변화를 측정하기 위해 새로운 정량적 형광 분석법이 개발되었습니다.

이 절차의 전반적인 목표는 다양한 조건에서 Centrosomes에서 단백질 수준의 상대적 변화를 정량화하는 것입니다. 예를 들어, 프로테아좀이 억제된 후 세포주기의 특정 지점에서 커버 슬립에서 자라는 세포를 프로테아좀 억제제 MG one 15 또는 대조 용매 DMSO로 먼저 처리함으로써 달성됩니다. 그런 다음 즉시 BRDU를 두 세포에 추가하고 세포 배양 인큐베이터에서 4시간 동안 배양합니다.

두 번째 단계는 커버 슬립을 24웰 플레이트로 옮겨 셀을 고정하는 것입니다. 다음으로, 세포를 BRDU 및 관심 단백질에 대한 항체로 염색한 다음 해당 2차 항체로 염색합니다. 마지막 단계는 형광 현미경 및 디지털 이미징 소프트웨어를 사용하여 BRDU 양성 세포의 이미지를 획득하여 각 샘플의 세포에 동일한 노출 시간과 Z축 길이를 적용하는 것입니다.

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