운모의 준비 고해상도 광학 현미경 이미징 지질 이중층 지원

여기에 제시된 절차는 tur 단일 분자 추적 연구와 같은 고해상도 이미징에 적합한 층으로 MICA 지지 지질을 준비하는 쉬운 방법을 보여줍니다. MICA 표면은 유리 현미경 슬라이드와 커버 슬립 사이에 접착된 단일 MICA 시트의 샌드위치를 평평하고 매우 얇은 신선한 운모 표면을 노출시키는 광학 접착제를 사용하여 분해하여 준비합니다. 1.5 밀리리터 바이알 컵으로 만든 작은 플라스틱 챔버를 장착하면 이중층 형성에 필요한 지질 소포의 부피를 30 마이크로 리터까지 낮출 수 있습니다.

첫 번째 단계로, 공급업체에서 제공하는 MICA의 다층 시트를 가져와서 가위로 더 작은 조각으로 자릅니다. Al 전단지를 신선한 칼날을 사용하여 2개 또는 3개의 더 얇은 전단지로 나눕니다. 이제 덮개를 청소하고 완전히 잠을 자십시오.

여기에는 0.17mm 덮개를 배치하는 작업이 포함됩니다. 각 덮개를 덮는 유리 훈련 항아리에 잠을 잔다. 별도의 슬롯에서 자고 섭씨 30도에서 세제에 60분 동안 초음파 처리합니다.

덮개를 씻으십시오. 미니 키 워터로 10-20번 자고 공기나 질소 흐름으로 말리십시오. 현미경 유리 슬라이드를 가져 와서 장소로 청소하십시오.

약 15마이크로리터의 저점도 광학 ahe가 이전에 현미경 폭발과 지구본에 떨어졌습니다. UV 라이트 박스에 있는 전단지를 몇 분 동안 자릅니다. 스카치 테이프를 사용하여 운모의 몇 겹을 벗겨냅니다.

처음 몇 개의 레이어는 조각화될 것이므로 해당 레이어가 스카치에 부착될 때까지 이 작업을 수행합니다. 테이프는 균일하고 완전합니다. 테이프를 덮습니다.

Micah 표면에 고점도 광학 접착제 한 방울을 떨어뜨립니다. 저기에 공기 방울이 없는지 확인하십시오. 공격적인 비말에 깨끗한 덮개 수면을 부드럽게 놓습니다.

핀셋을 사용하여 유리잔을 부드럽게 두드려 아헤를 펴 바릅니다. 다시 말하지만, 몇 분 동안 자외선으로 접착제를 경화시킵니다. 칼을 사용하여 유리로 구성된 샌드위치를 나눕니다.

MICA를 밀어 수면을 덮습니다. 대부분의 경우 매우 얇은 MICA 층만 커버 슬립에 접착된 상태로 유지됩니다. 해부 현미경을 사용하여 바늘이나 핀셋 끝으로 작은 흠집을 만들어 MICA 표면을 검사합니다.

표면이 실제로 운모인지, 여기와 같이 표면이 균일하게 긁힌 운모인지, 아니면 여기와 같이 표면이 빛나는 광학 접착제인지를 쉽게 말할 수 있습니다. 1.5밀리리터 유리병에서 컵을 꺼내 가스통을 제거하고 매니큐어를 사용하여 캡을 운모 표면에 붙입니다. 몇 분 동안 말리십시오.

이제 여기에서 표준 프로토콜을 사용하여 지질 이중층 복구 지질을 준비할 수 있습니다. 30마이크로리터의 지질 소포를 바이알 뚜껑 챔버에 넣고 완충액을 세척하기 전에 60분 동안 배양합니다. 세척 후 샘플은 이미징 준비가 됩니다.

이 경우, 맞춤형 샘플 홀더에 장착됩니다. 단일 분자는 이러한 준비된 MICA 표면에서 쉽게 관찰할 수 있습니다. 여기에서는 유리와 운모에서 지원되는 레이어별로 A-D-O-P-C를 비교합니다.

이동 유형은 이 두 표면 간에 크게 다릅니다. 오른쪽 패널에서 색상으로 추적된 단일 분자의 경로는 MICA의 확산 거동이 유리의 확산 거동과 다르다는 것을 명확하게 보여줍니다. 그러나 이미징 품질에는 큰 차이가 없습니다.

20개 스폿에 대한 절반의 최대 강도에서 직선 기능의 평균 직조는 두 기판에서 거의 동일하며, 이는 MICA 표면이 눈에 띄는 광학 수차를 일으키지 않고 빛에 의해 완전히 투과될 수 있음을 나타냅니다. 전반적으로 MSDS는 확산 거동에서 명백한 차이를 보여줍니다. 그러나 각각의 경우에 대해 서로 다른 속도로 확산되는 두 개의 입자 집단을 관찰할 수 있습니다.

빠르고 느린 두 가지 다른 확산 계수는 이중 지수 공급에서 제곱 변위의 누적 확률로 추출되었습니다. 이 DOPC 이중층의 경우 두 확산 성분 모두 운모 표면에서 더 빠르고, 운모에서 느리게 움직이는 입자는 빠른 입자보다 약 10-20배 느립니다. 그러나 유리에 느린 개체군은 여기에서 거의 움직이지 않습니다.

우리는 표면 유형이 지질 이중층의 확산 거동에 차이를 만들 수 있음을 보여주었습니다. 따라서, MICA와 같은 다른 기판에서 지지되는 이중층과 MICA에 대한 유리 이미징 이중층에 대한 연구 간의 결과를 비교할 때 주의해야 합니다.