Name: 활성 포르토 대정맥 션트를 사용하여 돼지 간 조달 및 동소 이식 이식의 기술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 27 s
Description: 학습하세요 활성 포르토 대정맥 션트를 이용한 돼지 간 동종 이식 기법으로 안정적인 혈역학을 유지하는 방법을. 이 기술은 장 울혈과 비장 울혈을 방지하여 이식 수술의 성공률을 높입니다.

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이 연구는 로슈 장기 이식 연구 재단(ROTRF)과 아스텔라스의 연구 보조금으로 지원되었습니다. Markus Selzner는 ASTS Career Development Award의 지원을 받았습니다. Matthias Knaak은 Astellas Research Scholarship의 지원을 받았습니다. 우베 뭄멘호프(Uwe Mummenhoff)와 버밍엄 가족의 아낌없는 성원에 감사드립니다.

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실험 돼지 OLTx은 임상 시나리오의 집중 치료 자원이없는 연구 설정에 대한 도전적인 절차입니다. 가능한 합병증은 혈역학 적 불안정, 출혈, 장기 허혈, 저체온증, 대사뿐만 아니라 호흡기, 부전을 포함한다. 어떤 연구 군의 경우, 수술 기법 5뿐만 아니라 돼지 마취 14,15 충분한 절차 훈련 대표 재현 가능한 결과를 달성하기 위해 필수적이다. 많은 기술적 미묘 특히 혈관 재구성 단계 5에 관한 문헌에 기재되어있다. 위에서 설명한 OLTx 프로토콜은 인간의 OLTx을 닮은 맥 - 대체 모델에 대한 필요한 정보를 제공합니다. 제공된 결과는 모두 HBD 및 DCD 모델에서 신뢰할 수있는 동물의 생존과 이식 복구를 보여줍니다. 프로토콜은 그래프트 expe의 재관류에 사용 단기 생존 시나리오에서 적용될 수있다riments, 예를 들면,뿐만 아니라 내성 연구 장기 생존 모델. 돼지 OLTx 하나의 큰 장애물은 정맥과 문맥 크로스 클램핑의 상대적으로 가난한 허용합니다. anhepatic 단계에서 내장의 정체도 장기 재관류 7 후 돌이킬 수없는 충격의 점에 큰 장 허혈 및 혈역학 적 불안정을 초래할 수 정맥 고혈압과 모세 혈관에 손상을 일으킴. 대정맥 완전히 간 실질에 매립되어 있기 때문에, 카바 보존 피기 백 절차는 가능하지 않다. 정맥 재건 단계에서 대정맥의 총 폐색은 돼지의 혈역학 적 안정성을 손상. 몇몇 보고서 돼지 OLTx 미만 25 분 (16, 17)의 총 정맥과 간문맥 폐색 동안 달성 될 수 있음을 보여준다하더라도, 혈관 재구성 시간 포르토 카바 - 경정맥 바이 패스 기술은 더욱 안전하고 실용적인 옵션 7- 인 9,18. 일에전자 저자의 경험은, 수동적 인 포르토 - 경정맥 바이 패스는 anhepatic 단계에서 안정 돼지 혈역학을 유지하는 최적 없습니다. infrahepatic 정맥과 문맥 모두의 활성 압축 해제를 포함한 바이 패스 모델은, 예기치 못한 합병증도 확장 클램핑 시간 suprahepatic 대정맥과 포털 문합 진정 재건 단계에 있습니다. 포털 우회 카테터가 제거 될 때 초기 리포트 7과는 달리, 비장 절제술은 필수 아니다. 모두 비장 동맥과 정맥은 비장의 길이가 충분히 관류 근위 반을 떠나 함께 중간에 대해 닫혀있다. 때문에 바이 패스 분리에 출혈이나 공기 색전증 등의 합병증은 바이 패스 신중하게 배치하고 적절하게 고정하도록함으로써 피할 수 있습니다. 장기 생존 OLTx 실험에서, 담관 문합으로 인해 높은 합병증 (19)에 약점으로 간주됩니다. 담즙의 조직은 매우 깨지기 및 북동입니다EDS 특별한주의가 때 처리되고. 많은 다른 문합 5,19 기법을 설명 하였다. 엔드 - 투 - 엔드 문합 기술적 쉽고 최소한 19 합병증과 관련된다. peribiliary 결합 조직의 큰 부분을 포함하여 비 절삭 바늘로 연속 봉합이 중단 된 봉합 우수한 것으로 보인다. 단속 봉합 스티치 단일 매듭이 때 담관 불필요한 장력하에 배치된다. 이 조직의 눈물과 연속 담즙 누출의 원인이 될 수 있습니다. 봉합사 - 흡수성 또는 비 흡수성은 - 돼지가 종료 될 때까지 그 수명이 제한을 주어, 일반적으로 중요하지 않다. 몇 개월 이상 장기 생존 모델의 경우, 흡수성 봉합사 - 인간 OLTx에 등이 -이 바람직하다. 특정 치료는 수술 후 추적 관찰에주의해야합니다. 충분한 영양과 유체 공급, 신뢰할 수있는 통증 완화 프로토콜, 그리고 적절한 면역 억제정권은 필수입니다. 장기간 실험을 위해, 면역 억제제는 특히 중요 나타난다. 다른 포유류에 비해 돼지는 OLTx (20, 21) 이후 놀라 울 정도로 낮은 면역 거부 반응 속도를 보여줍니다. 라운드 셀 침투는 이식 후 두 번째 주 동안 최대이며, 심지어 면역 억제하지 않고 자발적으로 감소. 거부는 거의 돼지 OLTx 22 후 사망의 원인입니다. 그러나, 면역 억제 프로토콜이 여기에 언급 관리 스테로이드 IV 및 칼시 뉴린 억제제 포를 포함하여, 이식 거부는 OLTx 후 약 4 일째부터 트랜스 아미나의 온화한 증가에 의해 표시되며 명백한 포털 필드 라운드 세포의 침윤에 의해 확인. 칼시 뉴린 억제제들 중 PO 23,24 또는 25,26 IV 될 수있다; 두 방법 모두 단점이있다. 심지어 구두 응용 프로그램 보조기구, 위장관에 도달하는 실제 금액은 애매 남아있다. 한편, 연속적인 정맥 주입에활성 동물 돼지 펜 어렵다. 따라서, IV 응용 프로그램은 잠재적 인 독성 효과와 함께 높은 약물 농도 피크 결과 러스로 수행해야합니다. 그럼에도 불구하고, 어플리케이션의 두 방법은 장기간의 생존을 허용하도록 나타난다. 임상 환경과 유사하게, 수술 후 스트레스 궤양 예방하는 것이 좋습니다. 소화성 궤양 수술후 출혈 빈번한 문제이며 손상된 간 기능 (27)에 관련 될 수있다. 모두 OLTx 그룹의 위장관 출혈의 몇 가지 경우 후, 저자는 판토 프라 졸과 정기적 인 예방을 시작했고, 그 이후로 어떤 위장관 출혈을 경험하지 않았다. 임상 수술실의 조건에 비해 수술 중 무균 조건, 및 그에 따른 예방 적 항생제의 엄격한 유지 보수, 감염성 합병증의 위험을 감소시킨다. 결론적으로,이 문서에 Provides 연구 환경에서 돼지 OLTx 프로그램을 설정하기위한 실질적인 정보를 제공합니다. 충분한 헌신, 관행 및 팀워크 위해서는, 학습 기간을 감소시키는 신뢰성있는 결과를 생성하기 위해, 비용 및 연구 동물의 수를 줄이기 위해 중요하다.

동소 이식 간 이식 (OLTx)는 말기 간 질환 또는 고급 간암 환자 만 치료 방법이다. 지난 25 년 동안, 대기리스트에 후보들의 수는 점차 증가하고 지금까지 가능한 이식편의 수를 초과하고있다. 대부분의 이식 지역에서는 간 이식 대기자 명단에 환자의 20-30%는 장기 이식을받지 않고 사망 또는 인해 질병의 진행에 상장 폐지된다. 전략 따라서, 가능한 이식편의 수, 절실히 요구되는, 도너 풀을 증가시키고있다. 확장 기준 기관 할당, 장기 이식 보존 및 면역 관용의 유도는 여전히 주요 임상 과제 1-3을 나타냅니다. 따라서, 실험 OLTx 연구는 임상 OLTx 연습을 최적화하기 위해 중요한 것입니다. 돼지 OLTx는 L을 포함하여 여러 가지 방법으로 인간의 OLTx 유사한 잘 확립 된 실험 모델이버 크기, 해부학, 생리학 4-6. 따라서, 이러한 수술 기법, 생리학, 면역학, 보존, 및 허혈 재관류 손상으로 연구 분야에서 표준 실험 방법이되었다. 이식 조달,받는 사람 간절하고, 특히, 혈관 재건의 수많은 기술 문헌 5에 기재되어있다. 적절한 기술의 선택은 연구자의 선호 및 기술 능력에 따라 달라집니다. 인간 시나리오와 대조적으로, anhepatic 단계에서 내장의 정체 돼지 OLTx에서 중요한 문제를 나타낸다. 후속 창자 허혈 및 울혈 혈관 손상, 즉, 실험 7-9의 성공을 돼지 생존을 위태롭게 심한 혈역학 적 불안정성을 야기하고있다. 따라서, 충분한 장 압축 해제는 특히 덜 기술적으로 세련된 실험 설정에서, 필수입니다. 우리anhepatic 단계의 기간 동안 활성 포르토 - 대정맥 - 경정맥 션트를 보내고하는 것은 장내 혼잡을 피하기 위해 신뢰할 수있는 옵션입니다. 시스템은 초기 재관류 실험뿐 아니라 장기 생존율 시나리오에 사용될 수있다. 다음 프로토콜은 간 절제술 및 엔드 - 투 - 엔드 혈관 재건 기술 및 수술 후 관리를 포함하여 기증자 간 조달,받는 사람 연산 포함 돼지 안정적이고 재현성 간 이식 모델에 대한 모든 정보가 포함되어 있습니다.

<table><tbody><tr><td>아트로핀 황산염 15 mg/30ml</td><td>서까래 8 제품</td><td>238481</td><td></td></tr><tr><td>부프레노르핀 0.3 mg/ml</td><td>RB 제약 LDT</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>세파졸린 1 g</td><td>제약 파트너 캐나다 Inc.</td><td></td><td></td>2237138</tr><tr><td>사이클로스포린 구강 용액 5,000 mg/50 ml</td><td>Novartis Pharmaceuticals Canada Inc.</td><td></td><td></td>2150697</tr><tr><td>펜타닐 구연산염 0.25 mg/5 ml</td><td>산도즈 캐나다 주식회사</td><td></td><td></td>2240434</tr><tr><td>헤파린 10,000 iU/10 ml</td><td>Leo Pharma A/S</td><td>453811</td><td></td></tr><tr><td>이소플루란 99.9%, 250 ml</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td><td></td><td></td>2231929</tr><tr><td>케타민 하이드로 클로라이드&nbsp; 5000 mg / 50 ml</td><td>Bimeda-MTC Animal Health Inc.</td><td></td><td></td>612316</tr><tr><td>젖산 링거' s + 5% 포도당, 0.5 L</td><td>Baxter Corporation</td><td>61131</td><td></td></tr><tr><td>락테트 링거' s, 1 L</td><td>Baxter Corporation</td><td>61085</td><td></td></tr><tr><td>메트로니다졸 500 mg/100 ml</td><td>Baxter Corporation</td><td>870420</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam 50 mg/10 ml</td><td>캐나다 Inc.의 제약 파트너</td><td></td><td></td>2242905</tr><tr><td>판토프라졸 40mg</td><td>산도즈 캐나다 Inc.</td><td></td><td></td>2306727</tr><tr><td>염화칼륨 40 mEq/20 ml</td><td>호스피라 헬스케어 코퍼레이션</td><td>37869</td><td></td></tr><tr><td>프로포폴 1,000 mg/100 ml</td><td>Pharmascience Inc.</td><td></td><td></td>2244379</tr><tr><td>프로타민 설페이트 50 mg/5 ml</td><td>캐나다 Inc.의 제약 파트너</td><td></td><td></td>2139537</tr><tr><td>식염수 0.9%, 1L</td><td>Baxter Corporation</td><td>60208</td><td></td></tr><tr><td>중탄산나트륨 50mEq/50ml</td><td>Hospira Healthcare Corporation</td><td>261998</td><td></td></tr><tr><td>Solu-Medrol 500mg</td><td>Pfizer Canada Inc.</td><td></td><td></td>2367963</tr><tr><td>트라넥삼산 1,000 mg/10 ml</td><td>화이자 캐나다 Inc.</td><td></td><td></td>2064413</tr><tr><td>위스콘신 대학교 솔루션, SPS-1</td><td>장기 회복 시스템</td><td>SPS-1</td><td></td></tr><tr><td>자일로카인 기관내 10 mg/50 ml</td><td>아스트라제네카</td><td>2003767</td><td></td></tr><tr><td>Appose ULC 35 W 스킨 스테이플러</td><td>Covidien Canada</td><td>803712</td><td></td></tr><tr><td>Maxon, 1</td><td>Covidien Canada</td><td>606173</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk, 0</td><td>Covidien Canada</td><td>S606</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk, 2-0</td><td>Covidien Canada</td><td>S405</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk, 3-0</td><td>Covidien Canada</td><td>S404</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II, 4-0</td><td>Covidien Canada</td><td>VP581X</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II, 5-0</td><td>Covidien Canada</td><td>VP725X</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II, 6-0</td><td>Covidien Canada</td><td>VP733X</td><td></td></tr><tr><td>카테터 i.v, 18 G</td><td>BD 캐나다</td><td>381147</td><td></td></tr><tr><td>쿡 TPN 카테터, 9.5 Fr</td><td>쿡 메디컬 컴퍼니</td><td>C-TPNS-9.5-90</td><td></td></tr><tr><td>PSI 키트, 칼집 카테터용 키트, 8.5 Fr</td><td>Arrow International</td><td>ASK-09803-UHN</td><td></td></tr><tr><td>주입 펌프 라인</td><td>스미스 메디컬 ASD Inc.</td><td>21-0442-25</td><td></td></tr><tr><td>간 관리 세트(플러시 라인)</td><td>CardioMed Supplies Inc</td><td>17175</td><td></td></tr><tr><td>Mallinckrodt, 기관 튜브, 6.5mm</td><td>Covidien Canada</td><td>86449</td><td></td></tr><tr><td>Med-Rx 흡입 연결 튜브</td><td>Benlan Inc.</td><td>70-8120</td><td></td></tr><tr><td>장기 가방</td><td>CardioMed Supplies Inc</td><td>2990</td><td></td></tr><tr><td>흡입 팁</td><td>Tyco Healthcare Group LP</td><td>8888501023</td><td></td></tr><tr><td>Valleylab, Cautery Pencil</td><td>Covidien Canada</td><td>E2515H</td><td></td></tr><tr><td>Valleylab, 환자 복귀 전극</td><td>Covidien Canada</td><td>E7507</td><td></td></tr><tr><td>바이패스 커넥터 3/8" x 1/4"</td><td>Raumedic AG</td><td>955083-001</td><td></td></tr><tr><td>바이패스 커넥터 3/8" x 3/8" Luer Lock</td><td>Raumedic AG</td><td>955163-001</td><td></td></tr><tr><td>바이패스 커넥터 Y 3/8" x 3/8" x 1/4"</td><td>Raumedic AG</td><td>961360-002</td><td></td></tr><tr><td>바이패스 튜빙 1/4" x 1/16"</td><td>Raumedic AG</td><td>039505-010</td><td></td></tr><tr><td>바이패스 튜빙 3/8" x 3/32"</td><td>Raumedic AG</td><td>039535-005</td><td></td></tr><tr><td>Rotaflow 원심 펌프</td><td>Maquet-Dynamed</td><td>HC 2821</td><td></td></tr><tr><td>스테인레스 스틸 호스 클램프 링, 5mm</td><td>Oetiker</td><td>16700007</td><td></td></tr><tr><td>복부 리트랙터</td><td>Medite GmbH</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>De Bakey &ndash; 벡, Infrahepatic Cava 클램프</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB519R</td><td></td></tr><tr><td>Deithrich, 외상성 클램프 (포털 정맥)</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB525R</td><td></td></tr><tr><td>그레고리 불독 클램프, 곡선형</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB382R</td><td></td></tr><tr><td>그레고리 불독 클램프, 스트레이트</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB381R</td><td></td></tr><tr><td>포츠 &ndash; 드 마텔, 가위</td><td>Aesculap Inc.</td><td>BC648R</td><td></td></tr><tr><td>Satinsky, 간 카바 클램프</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB605R</td><td></td></tr><tr><td>대칭 튜빙 클램프</td><td>코드만 악기</td><td>198010</td><td></td></tr><tr><td>마취 기계, Optimax</td><td>Moduflex 마취 장비</td><td>SN5180</td><td></td></tr><tr><td>우회 유량계, HT 110</td><td>천음속 시스템 Inc.</td><td></td><td></td>HT110B11106</tr><tr><td>유량계 프로브, H6XL</td><td>Transonic Systems Inc.</td><td>H6Xl689</td><td></td></tr><tr><td>열 요법 펌프, T / 펌프</td><td>Gaymar Industries Inc</td><td>TP500-G89D19</td><td></td></tr><tr><td>주입 펌프 3,000</td><td>SIMS Graseby LTD.</td><td></td><td></td>SN300050447</tr><tr><td>이소플루란 증기 19.1</td><td>Draeger Medical Canada Inc.</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>모니터, Datex AS 3</td><td>Instrumentarium Corp./ Hitachi</td><td>D-VHC14-23-02</td><td></td></tr><tr><td>Rotaflow 원심 구동 장치</td><td>Maquet-Dynamed</td><td>952301</td><td></td></tr><tr><td>Rotaflow 콘솔</td><td>Maquet-Dynamed</td><td>706035</td><td></td></tr><tr><td>온도 요법 패드</td><td>Gaymar Industries Inc</td><td>TP26E</td><td></td></tr><tr><td>Valleylab Force Tx</td><td>Valleylab Inc.</td><td></td><td></td>216151480</tr><tr><td>인공호흡기, AV 800</td><td>DRE 의료 기기</td><td>40800AVV</td><td></td></tr><tr><td>따뜻한 터치, 환자 온난화 시스템</td><td>Nellcor/Covidien Canada</td><td>5015300A</td><td></td></tr></tbody></table>

활성 포르토 대정맥 션트를 사용하여 돼지 간 조달 및 동소 이식 이식의 기술

Technique of Porcine Liver Procurement and Orthotopic Transplantation using an Active Porto-Caval Shunt

간 이식의 성공은 극적인 장기 부족을 초래했습니다. 매년 간 이식 대기자 명단에 있는 상당수의 환자가 장기 이식을 받지 못하고 사망하거나 질병 진행으로 인해 명단에서 제외됩니다. 성공적인 이식 후에도 거부 반응 및 면역 억제의 부작용은 이식편 생존 및 환자 이환율에 대한 주요 우려 사항으로 남아 있습니다. 
실험 동물 연구는 간 이식의 성공에 필수적이었으며 여전히 임상 이식 실습의 발전에서 중추적인 역할을 하고 있습니다. 특히, 돼지 정소성 간 이식 모델(OLTx)은 인간의 크기, 해부학 및 생리학에 매우 유사하기 때문에 임상 중심의 연구에 최적입니다. 
돼지 OLTx의 무간기 동안 장 울혈의 감압은 신뢰할 수 있는 동물 생존을 보장하는 데 중요합니다. active porto-caval-jugular shunt를 사용하면 탁월한 장 감압을 달성할 수 있습니다. 이 시스템은 단기 및 장기 생존 실험에 사용할 수 있습니다. 다음 프로토콜에는 수술 후 동물 관리를 포함하여 돼지의 안정적이고 재현 가능한 간 이식 모델에 대한 모든 기술 정보가 포함되어 있습니다.

첫 번째 이식 연구, 심장 박동 기증자 모델에서 (HBD, N = 5) 현장에서 따뜻한 국소 빈혈의 45 분에 노출 된 DCD 모델 (N = 10)과 비교 하였다. 두 군에서, 이식편은 구매 후 10 시간 동안 얼음 상에 유지 하였다. HBD 그룹에서받는 사람 돼지의 100 %가 이식 후 5 일에 추적이 끝날 때까지 살아 남았다. DCD 그룹에서받는 돼지의 50 %가 감소 수술 후 간 기능의 결과로서, 응고 문제 또는 대사 부전에 기인 5 일간 생존. 모든 혈액 샘플 중심 정맥 카테터로부터 수거 하였다. 원심 분리 후, 혈청 샘플을 수득하고, 간세포 손상 (아스파 테이트 아미노 트란스 퍼 라제, AST), 담도 함수 (총 빌리루빈 및 알칼리 포스파타제), 및 간 기능 (INR)에 대해 분석 하였다. 5 - 각 마커의 시간 과정은 그림 2에 표시됩니다. 그림 포르토 - 대정맥 - 경정맥 션트 1. 계획. 바이 패스 락 테이트 링거액으로 가득합니다. 그 후 대정맥 부는 튜브 클램프 클램프, 경정맥 및 비장 부를 미리 설정된 카테터에 연결되어 바이 패스가 개방되고, 원심 펌프는 포털 정맥 클램핑 후에 시작된다. 간 절제술 후, 바이 패스의 대정맥 일부가 삽입되고 신장 정맥, infrahepatic 대정맥 밑둥에 두개골 확보했다. 호스 클램프는 포털 신장 이외에 대정맥 감압 있도록 해제된다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/52055/52055fig2.jpg"> 2. 아스 파르 테이트 아미노 전이 효소 (AST)도 (HBD N = 5, DCD를 N = 10). AST는 간세포 손상의 민감한 마커입니다. 피크 후미ER은 24 시간 이하 간 재관류 손상을 시사 DCD 군보다 HBD 낮다; 작은 표준 편차는 HBD 그룹의보다 균일 결과를 나타낸다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/52055/52055fig3.jpg"> 그림 3. 총 빌리루빈 (HBD N = 5, DCD N = 10). 총 빌리루빈은 담즙의 통관 및 담관의 무결성의 마커로, HBD 그룹의 10 μmol / L 이하의 값으로 안정적이고 균일 한 경향을 보여줍니다. DCD 그룹 빌리루빈 곡선은 실험군의 일부만에 담도 부상을 시사 시간에 걸쳐 점진적으로 증가시키고, 높은 표준 편차를 나타낸다. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/52055/52055fig4.jpg"> 그림 4. 알칼리 포스 파타 아제 (HBD N = 5, DCD N = 10). 알칼리 포스 파타 아제 나담도 손상의 지표를에요. HBD 그룹의 숫자가 적은 담도 부상을 의미 DCD 그룹의 그것보다 낮다. <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/52055/52055fig5.jpg"> 도 5 INR (HBD N = 5, DCD N = 10). INR 높은 값은 응고 인자의 방출을 감소 인해 간세포 감소 기능을 나타낸다. 모두 HBD 및 DCD 그룹, INR 값은 간 기능의 회복을 제안, 오일 이식 후 정상 값으로 돌아갑니다. HBD 그룹의 값은 낮은 나타납니다.

실험 동물 연구는 임상 이식 실습의 발전에 중추적인 역할을 합니다. 돼지 정소성 간 이식 모델(OLTx)은 인간의 상태와 매우 유사하며 임상 지향적인 연구에 자주 사용됩니다. 다음 프로토콜에는 활성 porto-caval-jugular 션트를 사용하는 신뢰할 수 있는 돼지 OLTx 모델에 대한 모든 정보가 포함되어 있습니다.

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. Each year, a considerable number of patients on the liver transplantation ...

이 절차의 전반적인 목표는 돼지에서 동종 간 이식을 안정적으로 수행하여 수술 당 및 수술 후 안정적인 동물 혈류역학을 보장하는 것입니다. 이는 착상 단계에서 장 울혈을 피하기 위해 대정맥, CVA 및 문맥을 교차 클램핑하기 전에 먼저 활성 문맥 기저귀 션트를 구현하여 수행됩니다. 다음으로, cava replacement 기술에 의한 orthotopic 간 이식이 수행되며, 이는 supra hepatic cable 문합을 시작합니다.그런 다음 문맥은 문합되고 간은 재관류됩니다. 마지막으로, 문맥 경정맥 션트를 제거하고 하부 간대정맥, 간동맥 및 총담관의 나머지 문합을 완료합니다. 결국 돼지는 마취를 끊고 수술 후 면밀히 모니터링했습니다.총 혈관 폐색 또는 수동 inance와 같은 기존 방법에 비해이 기술의 주요 장점은 이 특정 기술에서 동화 단계 중 비장 울혈이 완전히 방지된다는 것입니다. 이와 같이 주요 장 허혈 및 혈역학적 불안정성을 유발할 수 있는 정맥 고혈압 및 모세혈관 손상을 예방합니다.텍스트 프로토콜에 따라 기증자 돼지의 간을 절제하고 수혜 돼지를 마취한 후, 수혈 돼지를 누운 자세로 온열 패드 위의 수술대에 올려 놓습니다. 삽관 후에는 뚜껑 형상을 사용하여 돼지의 꼬리나 귀에 맥박 산소 측정기로 삽관이 올바르게 수행되었는지 확인합니다.심박수와 산소 포화도를 모니터링합니다. Seldinger 기법을 수행하여 나중에 활성 포털 케이블 경정맥 우회에 사용될 왼쪽 외부 경정맥에 칼집 유도제를 삽입합니다. 멸균 상태에서 전체 비경구 영양 카테터를 오른쪽 외부 경정맥에 삽입한 후 오른쪽 경동맥을 절개하고 침습적 동맥압 모니터링을 위해 폴리프로필렌 카테터를 삽입합니다.그런 다음 두 개의 제로 실크 넥타이를 사용하여 동맥을 둘러싸서 응급 결찰을 허용합니다. 다음으로, 정중선 개복술을 만들고 복부 견인기를 삽입하여 오른쪽 상부 사분면에 충분히 접근할 수 있도록 합니다. 그런 다음 중간 단계에서 간 가까이에서 간 십이지장 인대를 넥타이 사이로 나눕니다.간 동맥과 담관의 가지를 식별, 분할 및 표시합니다. 다음으로, 위십이지장 동맥의 분열에 도달할 때까지 역행 방향으로 간 동맥을 절개합니다. 그런 다음 전기소작을 사용하여 오른쪽의 후복막에서 대정맥 CVA를 동원하여 비장의 헬륨을 비장의 길이를 따라 약 절반 정도의 비장의 헬륨을 노출시켜 부착 조직으로부터 문맥을 분리합니다.비장 동맥과 정맥에서 부착된 복막층을 조심스럽게 제거합니다. 그런 다음 4 2 0 실크 넥타이를 사용하여 비장 동맥과 정맥을 모두 둘러쌉니다. 카테터 끝에 두 개의 추가 구멍이 있는 8.5 프렌치 시스 유도제를 두 개의 제로 타이 중 하나로 문맥을 원위적으로 가리키는 비장 정맥에 삽입합니다.카테터를 삽입부의 원위부로 고정하고 또 다른 두 개의 제로 타이를 사용하여 삽입 부위에 가까운 정맥을 닫습니다. 다음으로, 원심 펌프 헤드, 경정맥 튜브 및 포털 분기와 기공 분기 모두에서 유입되는 바이패스로 구성된 바이패스에 식염수를 채웁니다. 튜브 cl을 놓습니다.amp 기병 튜브의 근위 끝에 있습니다.그런 다음 포털과 바이패스의 경정맥 개구부를 양쪽 피복 주입기 카테터에 연결하고 금속 호스 cl을 사용합니다.amp 링을 사용하여 연결을 밀봉합니다. 1000mg의 텍사산과 10, 000IU의 헤파린을 정맥 주사한 후 3분 후에 원심 펌프 헤드를 펌프 위치에 놓습니다. 양쪽 칼집 도입부 카테터의 클램프를 열고 문맥을 교차 클램프합니다.다음으로, 분당 약 1, 500 라운드로 원심 펌프를 시작하십시오. 그런 다음 deba 백 클램프 크로스 클램프를 사용하여 하부 간 대정맥 CVA를 신장 정맥에 두개골로 연결합니다. 간 조직에 강한 압력을 가하여 남은 혈액의 일부를 짜냅니다.그런 다음 statsky 클램프를 사용하여 횡격막 테두리를 포함한 간대정맥을 교차 클램프로 고정하면서 간을 조금씩 수축시킵니다. 이제 간 조직의 경계에서 대정맥 상부 정맥을 직접 절단하고, 간 헬륨 근처의 문맥을 하부 간 CVA 클램프에서 두개골 약 4cm 크기로 자릅니다. 이 구멍에 대정맥의 전벽에 구멍을 뚫습니다.바이패스 케이블 개구부의 커넥터를 하나의 제로 실크 넥타이로 앞쪽을 향하도록 루어 잠금 장치가 있는 위치에 놓습니다. infra hepatic cva에 커넥터를 고정합니다. 그런 다음 바이패스의 케이블 분기의 튜빙 클램프를 엽니다.마지막으로 인프라 간 CVA 클램프를 열어 기존 포털 경정맥 바이패스 외에 케이블 경정맥 바이패스를 허용합니다. 펌프의 속도를 분당 약 2, 500발로 증가시킨 후 경정맥 측의 우회 유출이 분당 900에서 1,000밀리리터 사이인지 확인합니다. 4개의 제로 모노필라멘트 폴리프로필렌 봉합사 사용.sup 간 CVA 조리개 스티치에서 수혜자 쪽의 3 개의 횡격막 정맥 oste osteos를 모두 닫습니다. 이중 무장 4 개의 제로 모노 필라멘트 폴리 프로필렌 봉합사 내부, 외부 수혜자 측의 SUP 간 CVA의 양쪽 모서리. 기증자 장기를 복강에 삽입한 후 기증자 S 간대정맥 CVA를 수혜자 쪽에 맞게 잘라냅니다.수혜자 측면 모서리 스티치의 내부 바늘을 사용하여 초 간 기증자 cva의 각 측면에 내부 외부 모서리 스티치를 만듭니다. 수혜자와 기증자 오스트리아가 근사화되면 왼쪽 봉합사의 양쪽 끝을 묶습니다. 그런 다음 넥타이 옆에 수신자 카바 뒷벽의 바깥쪽 내부 스티치를 만들고 뒷벽을 뛰어 넘습니다.이상적으로는 왼쪽 모서리에서 전면 벽을 가로지르는 나머지 봉합사로 카바 벽을 피하는 것입니다. 그런 다음 후면 및 전면 벽에 사용되는 두 봉합사를 함께 묶습니다. 기증자 문맥을 적절한 길이로 자른 후, 6개의 제로 모노필라멘트 폴리프로필렌 봉합사를 사용하여 전면 벽을 완성하기 직전에 시연된 바와 같이 종단 간 문맥 문합을 수행하고, 다른 플러시 라인을 사용하여 하부 간 하바의 내강을 삽관하고 1리터의 실온 식염수로 삽관합니다.Infra Hepatic hava 포털 정맥을 통해 UW 솔루션을 플러시합니다. 다음으로 문합을 완료하고 약 0.5cm의 성장 인자를 남기고 봉합사를 묶습니다. 그런 다음 기증자 인프라 간 cva에 또 다른 deba 백 클램프를 놓습니다.S 간 CVA cl을 엽니다.amp 출혈을 확인합니다. 그런 다음 포털 클램프를 열어 간을 다시 관류하고, 하부 간대정맥의 수취인 쪽을 다시 클램프하고, 바이패스의 케이블 부분에 튜브 클램프를 놓습니다. 원심 펌프를 정지한 후 케이블 커넥터의 타이를 잘라 제거하십시오.경정맥 카테터를 통해 우회로에 남아 있는 혈액을 돼지에게 되돌려 줍니다. 이제 클램프, 경정맥 카테터를 닫고 바이패스를 분리합니다. 그런 다음 헤파린을 길항시키기 위해 100mg의 프로타민 설페이트를 투여한 후 5개의 제로 모노필라멘트 봉합사를 사용하여 인프라 간 cva의 종단 간 문합을 수행합니다.다시 말하지만, 두 클램프를 모두 해제하여 하부 간 하부 CVA를 재관류했습니다. 기증자의 체강 줄기 주위의 대동맥 패치를 트리밍한 후, 위십이지장 동맥의 접합부에 근접한 총간동맥에 불독 클램프를 끼웁니다. 간 동맥이 헤파린으로 씻겨 나오면 6개의 제로 모노필라멘트 폴리프로필렌 봉합사를 사용하여 마취시킵니다.동맥 골은 달리는 낙하산 기술로 끝에서 끝까지 진행한 다음 먼저 원위부를 열고 근위 불독 클램프를 2 6 0 모노필라멘트 봉합사로 재관류합니다. 달리기 기술을 사용하여 담관을 끝에서 끝까지 마취시킵니다. 지혈을 확인한 후 비장 정맥에서 칼집 도입 카테터를 제거합니다.나머지 두 개의 넥타이를 사용하여 크기가 1인 모노필라멘트 흡수성 봉합사로 근위부와 원위부 끝을 닫습니다. 복벽을 닫으십시오. 마지막으로 스킨 스테이플러를 사용하거나 두 개의 제로 봉합사를 사용하여 피부를 닫습니다.수술 후 관리에 대한 텍스트 프로토콜을 참조하십시오. 첫 번째 이식 연구에서, 심장 박동 기증자 또는 HBD로부터 간을 이식받은 수혜 돼지의 100%가 이식 후 5일 추적 관찰이 끝날 때까지 생존했습니다. 그러나 순환기 폐사 또는 DCD 후 기증자로부터 간을 이식받은 돼지의 50%만이 간세포 손상으로 인한 혈액 샘플에 대한 5일간의 추적 분석에 참여했습니다.담즙 및 간 기능은 두 그룹 모두에서 ST 수치가 24시간 후에 최고조에 달하는 것으로 나타났습니다. 이는 HCD 그룹에 비해 DCD 그룹에서 훨씬 높았으며 5일 후에는 거의 정상 값으로 돌아왔습니다. 유사하게, 이 그래프에서 볼 수 있듯이, 알칼리성 포스파타아제 값은 여기에서 입증된 바와 같이 HBD 그룹과 비교할 때 DCD 그룹에서 36시간 후 현저하게 증가했습니다.총 빌리루빈은 HPD 그룹에서 안정적이었지만, DCD 그룹에서 5일째까지 점진적으로 증가했으며 실험 그룹의 일부에서만 담즙 손상을 시사하는 높은 표준 편차를 보였습니다. 이 그림에서 간 기능의 지표인 INR은 24시간에 최고치를 기록하고 거의 정상 값으로 회복된 A ST 값과 유사한 경향을 보였습니다. 5일 후: 이 동영상을 시청한 후, 정소성 돼지 간 이식 시 활성 정맥 우회술을 사용하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.이러한 방식으로 전체 절차 동안 안정적이고 안정적인 상태를 보장합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

우리는 시궁창에서 orthotopic 간 이식을위한 클래식 두 커프스 기술의 쉬운 설정 개정을 제시.

쥐에게 Orthotopic 간 이식

쥐의 Orthotopic 간 이식은 생명 의학 연구에 필수적인 실험 모델입니다. 여기 50 % 부분 이식을 사용하여 간장 동맥 재건과 orthotopic 쥐의 간 이식에 대한 수술 절차를 제시한다.

간 간선 재건과 부분 Orthotopic 간 이식의 쥐 모델에 대한 외과 절차

보조 간 이식은 실패 간 재생 될 때까지, 급성 간부전에 임시 지원을 제공합니다. 포털 정맥 arterialization (PVA)와 이소성 보조 간 이식 (HALT)는 충분한 간 기능을 렌더링합니다. 우리는 이식의 형태와 기능에 대한 포털 정맥 arterialization의 영향을 조사하기 위해, 쥐에서 유사한 기술을 개발했다.

이소성 보조 쥐 간 이식 급성 간 장애에 포털 정맥 Arterialization를 유량 조절

Suprahepatic 베 나 정 맥 (SHVC)의 재건 쥐 orthotopic 간 이식에 어려운 단계에 남아 있다. 이 문서에서 우리는 소설 자석 문 합 기술을 사용 하 여 쥐에서 SHVC 재건에 대 한 단계별 프로토콜을 보여줍니다.

Orthotopic의 쥐 모델 간 이식 Suprahepatic 베 나 정 맥 재건에 대 한 새로운 자석 문 합 기술을 사용 하 여

이 프로토콜은 돼지 hepatocyte 격리와 ex vivo 유전자 배달 모델 autologous 세포 이식 통해 대사 질환의 치료를 설명 하는 위한 것입니다. 이 특정 모델은 성공적인 치료를 선호 하는 독특한 장점, 있지만 응용 프로그램은 추가 질병 징후를 해결 하기 위해 관련 기초 이다.

돼지에서 자가 이식 Hepatocytes 전 비보 의 lentiviral 벡터 중재 된 유전자 치료

이 프로토콜에서는 생착 중 정맥 - 정맥 바이 패스를 사용하지 않고 20 시간 동안 기증자 장기를 정적 냉장 보관 한 후 돼지 동종 간 이식 모델을 설명합니다. 이 접근법은 무간기를 최소화하고 정교한 부피 및 혈압 강하제 관리와 함께 단순화 된 수술 기술을 사용합니다.

확장 기준 기증자 모델로서의 정맥 우회술이 없는 돼지 간 이식

여기에 설명된 간 정상열 기계 관류(NMP)의 돼지 모델은 보존 전략, 생존력 평가 도구 및 장기 복구를 위한 플랫폼으로서 NMP를 연구하는 데 성공적으로 사용될 수 있습니다. 이는 높은 번역 가치를 지니고 있지만 기술적으로 까다롭고 노동 집약적입니다.

Porcine Normothermic 격리 간 관류

이 프로토콜에서는 마우스에서 성공적인 orthotopic 간 이식(OLT) 모델의 구현에 대해 논의합니다. 또한 마우스에서 성공적인 OLT 후 동종이식 개통을 추가로 분석하기 위한 보조제, 특히 microcomputationd tomography(microCT) 스캔을 활용하는 보조제에 대해서도 논의합니다.

Microcomputed Tomography 혈관 조영술을 활용한 마우스의 성공적인 Orthotopic 간 이식

이 프로토콜은 기증자 간의 보존을 위해 다양한 온도 제어 기계 관류(MP)를 활용한 돼지 모델을 구축한 후 기교 간 이식(OLTx)을 수행하는 방법론을 설명합니다. 순환사(DCD) 간 후 기증자 기증을 이용한 OLTx의 성공률을 높이고 안정적인 모델을 확립하는 것을 목표로 합니다.

관류 및 정형외과 간 이식에 의한 순환 사망(DCD) 간 후 돼지 기증 보존

이 프로토콜은 마우스 orthotopic 간 이식에서 커프 기술을 사용하여 혈관 재건을 위한 기술 정보를 제공합니다.

Mouse Orthotopic Liver Transplantation에서 Cuff Technique을 사용한 혈관 재건

학습하세요 활성 포르토 대정맥 션트를 이용한 돼지 간 동종 이식 기법으로 안정적인 혈역학을 유지하는 방법을. 이 기술은 장 울혈과 비장 울혈을 방지하여 이식 수술의 성공률을 높입니다.

활성 포르토 대정맥 션트를 사용하여 돼지 간 조달 및 동소 이식 이식의 기술

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