Name: 슬라이스 뜨거운 것이 : 생리적 온도에서 급성 성인 뇌 슬라이스 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 46 s
Description: 학습하세요 생리적 온도에서 급성 성인 뇌 슬라이스를 제조하는 방법을. 복잡한 수정 없이 표준 생리학적 용액을 사용하여 고품질 슬라이스를 얻고 전기생리학 실험에 활용할 수 있습니다.

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우리는 이 방법을 검증하는 데 Shiwei Huang 박사(호주 국립 대학교)가 크게 기여한 것에 감사드립니다. 또한, 골지세포에 대해 도움이 되는 의견을 제시해 주신 Kasia Pietrajtis 씨와 피질 실험 데이터에 대해 말씀해 주신 Vitaly Lerner 씨에게 감사드립니다. 이 작업은 PITN-GA-2009-238686(CEREBNET), FP7-ICT(REALNET), ELSC 및 ISF의 지원을 받았습니다.

이 프로토콜에 설명 된 모든 실험 절차는 히브리 대학의 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 1. 슬라이스에 대한 솔루션 및 도구 준비 <ol><li> 표 1에 기재된 이온을 함유하는 표준 생리 용액 (SPS)의 1 L를 준비한다. <ol><li> 탈 이온수 (0.055 μS / cm의 전도도) 1,000 ml로 채워진 저장소 유리 병에 미리 10 배의 최종 농도에서의 염을 함유하는 스톡 용액을 준비한다. 소금 (염화나트륨, KCl을, KH 2 PO 4, 황산)을 추가하고 완전히 용해 될 때까지 저어. 4 ℃에서 원액을 저장합니다. </li><li> 실험 당일 최종 SPS 용액을 확인. 자기 교반 막대를 이용하여 글루코스 (3.6 g)과의 NaHCO3 (2.18 g)을 용해, 정제수 700 ml의 스톡 용액 100 ㎖를 첨가하고, 그 다음 1 L. 정제수 위로 추가 </li><li> soluti를 평형에서 ~ 20 분 동안 95 % O 2 / 5 % CO 2 가스 처리를하여. 이 후, 1 M CaCl2를 용액 2 ㎖를 추가합니다. </li></ol></li><li> 다음과 같은 도구 (그림 1)를 조립합니다. <ol><li> 두개골을 여는 큰 가위 잘린 다른 도구, 작은 수술 가위를 준비, 뇌를 노출 뇌의 원하는 부분을 해부를 위해 블레이드와 메스 두개골을 리프팅을위한 좋은 팁 집게는 슬라이스를 조작하기위한 작은 주걱한다 해부하는 뇌의 부분. </li><li> 또한, 뇌에서 초과 액체를 제거하기 위해 필터 종이의 작은 조각을 준비, 뇌에 대 한 두 개의 작은 페트리 접시에 뇌를 붙이는 포함 따뜻하게 정제 물과 SPS, 및 시아 노 아크릴 레이트 접착제에 대해 두 개의 유리 500 ml의 비커에 해부한다 분할 단계. </li><li> 분할 및 복구 차에 슬라이스 화장실에서 조각을 이동하는 입이 큰 유리 파스퇴르 피펫 동안 조각을 처리하기위한 작은 브러시를 준비합니다mber. 따뜻한 슬라이스 화장실에서 박테리아의 성장을 방지 할 수있는 도구를 소독. 또한, 깨끗한 실험실 장갑을 사용합니다. </li></ol></li><li> 깁과 에드워즈 (15)에 의해 기술 등의 침수 슬라이스 복구 챔버를 준비합니다. 지속적으로 95 %, O2 / 5 % CO 2로의 SPS를 가스와 36 ° C로 유지한다. 가스 처리에 슬라이스가 손상 될 수 욕조에 갇혀 작은 기포가 발생하지 않는 것을 확인하십시오. </li><li> 따뜻한 ~ 자석 교반기 또는 수조에 히터 접시에 36 ° C의 SPS 300 ml의. 히터 플레이트가 사용되는 경우, 이온 침전 될 수 과열로부터 용액을 방지하기 위해주의를 기울여야. 경우는, 대신에 이전의 냉각 따뜻한 신선한 SPS 발생합니다. </li><li> 전기 주전자를 사용하여 끓여 정제수 ~ 500 ml의를 가져오고, 비커, 슬라이싱 온도보다 약간 따뜻한 물을 얻기 위해 차가운​​ 물로 300 mL로 결합한다. 이 잘린 동안 정제 물을 데워 사용하고 remai를 사용나중에 분할 목욕의 생리적 온도를 유지하기위한 삶은 물 닝. </li><li> 복강 내에 펜토 바르 비탈 0.1 ㎖ (60 ㎎ / ㎖)을 주입하여 마우스를 마취시키다. 몇 분 후 동물이 감각의 부족을 확인하기 위해 강력한 발가락 또는 꼬리 핀치에 응답하지 않습니다 있는지 확인하십시오. </li></ol> 2. 뇌를 해부 <ol><li> 두개골의 뒷면 근처 큰 가위로 목을 절단하여 마우스를 빠르게 목을 벨, 그리고 머리가 초과 혈액을 씻어 따뜻하게 정제수로 비커에 빠질 수 있습니다. </li><li> 아마도 작은 가위로 목을 더 제거, 목의 근육과 피부 아래 두개골에서 난원 매그넘 노출. </li><li> 명확 두개골의 개구를 안내하기 위해 두개골 봉합을 볼 수 있도록 두개골 위에 피부를 당겨. </li><li> 난원 매그넘을 통해 작은 가위의 하단 끝을 삽입하고 즉시 기수를 돌려 열린 두개골을 잘라측면. 부드럽게 눈과 frontoparietal 봉합 뒤에 위치로 정수리 뼈까지의 측면 가장자리를 따라 잘라; 그 다음, (도 2a에 녹색 점선 참조) 두개골의 중심을 향해 회전과 두개골의 다른쪽에 정중선을 가로 질러. </li><li> 좋은 팁 집게를 사용하여 (그림 2A 노란색 점선 화살표 참조) 뇌를 노출 비스듬히 frontoparietal 모서리에서 두개골을 들어 올려 비스듬히 당겨합니다. 두개골 들어 올릴 때 뇌가 장소에 머물 수 있도록 두개골, 머리의 뼈 또는 피부에 부착되지 않았는지 확인합니다. 뇌가 두개골로 움직이는 경우, 두개골과 뇌 사이의 결합 조직을 제거하는 작은 가위를 사용한다. </li><li> 뇌가 노출되면, 뇌가 건조하는 것을 허용하지 않는다. 두개골과 따뜻하게 가득 페트리 접시의 뇌를 유지하면서 따라서, 다음 단계를 수행, SPS를 가스실. </li><li> 전자에 사용되는 뇌의 일부를 분리메스와 주걱을 이용하여 뇌의 나머지 xperiment. 소뇌를 사용하는 경우, (그림 2B-D에 붉은 라인을 따라) 중뇌와 뇌교를 통해 하나의 컷에 의해 전뇌에서 분리하고 신선한 포함하는 작은 페트리 접시로 이동, SPS를 가스실. </li><li> 수평면에서 소뇌를 슬라이스 할 때 무대를 절단에 뇌를 붙이는 직선과 넓은 기반을 형성하는 뇌간을 제거합니다. 전뇌에서 절단 된면이 아래로 향하도록 간단히 필터 종이의 젖은 부분에 소뇌를 배치합니다. <ol><li> (그림 2B에서 파란색 선으로 표시됨)의 기본을 형성하는 메스와 뇌간을 차단하고, SPS에 소뇌를 반환합니다. 절단의 다른면이 필요할 때, 그에 따라 소뇌 블록 (그림 2C &amp; D에 파란색 선)을 트림. </li></ol></li></ol> 3. 뇌 조각화 <ol><li> 가 D가되는 것을 확인하는 의해 절단 단계 준비공예, 무대의 중앙에 superglue의 작은 방울을 적용하기 전에. </li><li> 올바른 쪽이 위로 주걱을 사용하여 SPS에서 뇌 블록을 들어 올리고 필터 종이의 작은 조각을 사용하여 뇌에서 초과 액체를 제거합니다. 그런 다음, 하나의 움직임, 무대에서 접착제의 드롭에 주걱의 두뇌를 밀어 넣습니다. </li><li> 건조으로부터 뇌 조직의 측면에 닫 실행 한 접착제를 방지하기 위해, 파스퇴르 피펫 SPS의 몇 방울을 적용하고 슬라이싱 챔버에서 절단 단을 배치. 관심 영역 (예 : 소뇌 피질) 블레이드를 향하도록 뇌 블록을 맞추고, 따라서 분리되기 전에, 기계적 압력의 최소량을 실시한다. </li><li> 끊임없이 절단 실에서 SPS 가스 처리뿐만 아니라 34-37 ° C에서의 온도를 유지하면서 제조업체의 지시에 따라 각 조각을 잘라. 통근자를 충전함으로써,이 범위에서 절단 실의 온도 유지가온 정제수 온도가 너무 낮게 떨어질 때마다 물 교체와 슬라이서의 알 챔버. 참고 : 분할 매개 변수를 실험적으로 검토되고있는 조직과 신경 세포의 각 유형을 찾을 수 있어야합니다. 세라믹 블레이드와 소뇌 골지 세포와 캠든 SMZ 700 슬라이서의 경우 0.75 mm의 진동 진폭 65 Hz에서 0.05 mm / sec의 속도의 발전을 사용; 소뇌 핵 신경 세포 높은 진폭과 주파수 (1mm, 90 Hz에서, 각각)와 느린 진행 속도 (0.01-0.02 mm / 초)을 권장합니다. 골지과 소뇌 핵 신경 세포 모두를 들어, 슬라이스 두께 300 μm의를해야한다. </li><li> 슬라이싱 동안, 조각 자체에 접어 허용하지 않습니다. 부드럽게 바람직뿐만 아니라 실험에 관심이있는 지역에서 조각을 터치, 부드러운 브러시로를 지원함으로써이 문제를 방지합니다. vibratome 블레이드를 만지지 브러시를 방지하기 위해주의; 특히 세라믹 블레이드 경우에도 광 접촉블레이드가 손상 될 수 있습니다. </li><li> 입이 큰, 화재 광택 유리 파스퇴르 피펫을 사용하여 챔버를 유지 / 복구에 분할 실에서 각 조각을 이동합니다. </li><li> 슬라이스 실험을 시작하기 전에 최소한 1 시간 동안 챔버 휴식하자. 이 손상되거나 죽어가는 조직과 세포의 분해를 허용함으로써 청소기 슬라이스 표면에 발생합니다. 처음 시간 동안 34-36 ° C의 범위의 챔버 내에 SPS의 온도 유지; 슬라이스는 슬라이스가 손상되거나이 떠 할 수 기포에 감동되지 않도록. </li></ol> 4. 실험 <ol><li> 1 시간 후, 복구 챔버 온도를 실온 (17 ~ 25 ° C에서)까지 냉각 할 수 있습니다. NOTE :이 슬라이스는 박테리아의 성장뿐만 아니라 세포 대사를 느리게하여 사용할 수있는 기간을 연장시킬 수있다. 이 기간은 뇌 영역 및 세포의 종류에 따라 달라집니다. 예를 들어, 골지체 특정 유형의 세포 조각이 건강한 것으로 판명 될 수있다8 시간 다른 유형 반면 절단 후 만 6 시간 지속. </li><li> 1 시간이 슬라이스에서 전달 된 후, 다양한 전기 생리학 실험에 대한 슬라이스를 사용합니다. </li></ol>

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</ol>

저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

우리는 생리 대신 빙냉 온도 마우스로부터 급성 뇌 조각을 제조하는 방법을 보여준다. 또한, 추운 상태로 제조와 비교시 따뜻한 조건에서 얻어진 조각의 품질이 우수하다는 11 도시 슬라이서 블레이드 최소한 수직 진동을 가지고 제공되었다. 생리적 온도에서 슬라이스는 단일 셀의 수차뿐만 아니라 네트워크 동작에 명시 할 수있다 대사 과정 17 ~ 19의 변화에 관련된 것과 낮은 온도에 의한 생리 학적 유물을 방지 할 수 있습니다. 또한, 슬라이싱 절차가 분명히 불필요한 지연없이 완료되어야하더라도, 용액이 너무 뜨거워 질 전에 절단을 완료하기 위해 빙냉 조건 슬라이싱 때 그대로 (슬라이싱과 서둘러하고 방지 할 필요가 없다 조직의 오래 지속 동결에 의한 손상). 따라서, 느린 절삭 속도는 우리가 될 수 있습니다ED. 이것은 매우 섬세한 구조를 자르는 경우에 도움이 될 수 있습니다. 마지막으로, 두 용액의 뇌의 냉각 단계를 생략하는 것은 상당히 절차뿐...

제시된 방법의 목적은, 특히 성인 또는 이전 동물을 사용하는 경우, 시험 관내 전기 생리 학적 실험을 위해 고품질 급성 뇌 조각을 얻을 수있다. 두 우아한 문장 Skrede과 Westgaard 1에 의해 설명 된 바와 같이 급성 뇌 분할 방법은, 현대 신경 과학 연구의 기초 중 하나가되었습니다 전 세계적으로 수많은 변형에 사용된다. 슬라이스 품질 슬라이스 당 뉴런 생활의 수에 반영되는 시간의 기간 동안 세포는 조직의 무결성뿐만 아니라 자신의 전기 생리 학적 및 형태 학적 특성을 유지한다. 또한, 안정된 기록 용 최대 기간은 조각의 품질에 의존한다. 따라서, 수십 따라, 원래 슬라이싱 방법은 상기 절단 조성물의 복잡한 변형에 의해 종종 2-10을 절단 후 슬라이스 복구를 강화하기 위해 개별 연구 그룹에 의해 개발 된 오뿐만 아니라 냉각 생리 솔루션과 동물의 내 심장 미리 관류 (예 : 아스 코르 빈산, 티오 우레아 또는 H 2 O 2를 추가하는 등) R 복구 솔루션. 최근 11를 표시 한 바와 같이, 슬라이스 동안 생리적 온도는 신경 세포의 건강에 냉각보다 더 도움이 될 것 같다; 성인 (2~8개월) 설치류와 함께 작업 할 때 개선이 가장 눈에 띄는입니다. 극적인 온도 변화를 방지 인해 이러한 가소성 (13)와 이온 채널 반응 속도 13, 14 등의 세포에서 온도에 따라 프로세스에 아티팩트를 방지 할 수 있습니다. 이러한 변화는 막 전압 및 세포 내 칼슘 신호, 스파이크 임계 값에 영향을 미치는, 모양 스파이크 수 있습니다. 여기서 제시된 &quot;핫&quot;급성 슬라이스 제조 방법은, 임의의 뇌 영역에서 고품질의 급성 뇌 조각을 획득 소뇌 피질 및 해마, 뇌간 16 핵을 포함하는 일반적인 절차 &lt;/ SUP&gt;뿐만 아니라 후각 망울로, 모두 쥐와 생쥐. 특히, 생리적 온도 슬라이싱 절차는 절단 날이 거의 완벽하게 수평 진동 및 구조적 결함이없는 것을 필요로한다. 정밀 이전 슬라이서 모델 달성하지 않을 수 있습니다; 저온 대사 수차의 비용해도, 기계적 손상 조직 저항력 만들 것 같은 경우에, 우리는 동결 - 냉각 조건 슬라이스 준비를 수행 권장.

<table><tbody><tr><td>펜토바르비탈</td><td>CTS</td><td>170066</td>농도<td>: 생리식염수 60mg/ml.</td></tr><tr><td>큰 가위&nbsp;</td><td>FST</td><td>14001-16</td> 충분히 <td>날카로운 모서리를 가진 큰 가위나 단두대는 참수에 사용할 수 있습니다&nbsp;</td></tr><tr><td>홍채 가위&nbsp;</td><td>프레스티지 메디컬</td><td>48,148</td><td>가위날이 1.5&#8211보다 길지 않다면 어떤 세밀한 팁 가위도 사용할 수 있습니다; 2cm</td></tr><tr><td>파인 팁 집게&nbsp;</td><td>FST</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>메스&nbsp;</td><td>FST</td><td>91003-12</td><td></td></tr><tr><td>메스 블레이드 #11</td><td>FST</td><td>10011-00</td><td></td></tr><tr><td>작은 주걱&nbsp;</td><td>어부&nbsp;</td><td>2350</td><td></td></tr><tr><td>여과지</td><td></td><td></td><td>모든 실험실 브랜드를 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>페트리 접시</td><td>Duroplan</td><td>Z231509-1</td><td></td></tr><tr><td>유리 비커&nbsp;</td><td>SCHOT</td><td>10022846</td><td></td></tr><tr><td>파스퇴르 피펫&nbsp;</td><td>메이플 리프 브랜드</td><td>14672-029</td><td></td></tr><tr><td>슈퍼 글루&nbsp;</td><td>LOCTITE</td><td>4091361/1</td><td></td></tr><tr><td>슬라이서</td><td>Campden</td><td>7000-smz</td><td></td></tr><tr><td>세라믹 슬라이싱 블레이드</td><td>Campden</td><td>7550-1-C</td><td></td></tr><tr><td>자기 히터/교반기</td><td></td><td></td><td>절차를 위한 SPS 가열용</td></tr><tr><td>전기 주전자</td><td></td><td></td><td>온도 제어를 위한 물 가열용</td></tr><tr><td>슬라이스 회수실 + 가열 장치</td><td>Warner 악기</td><td>&nbsp; BSC-HT +&nbsp; BSC-BUW</td><td>자체 제작 모델도 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>온도계</td><td></td><td></td>: <td>해부 및 슬라이싱 중 SPS 온도 모니터링용</td></tr></tbody></table>

슬라이스 뜨거운 것이 : 생리적 온도에서 급성 성인 뇌 슬라이스

Slice It Hot: Acute Adult Brain Slicing in Physiological Temperature

여기에서 우리는 급성 뇌 조각의 준비를위한 프로토콜을 제시한다. 이 절차는 크게 결과의 품질을 결정하는 전기 생리 패치 클램프 실험을위한 중요한 요소이다. 이 절차를 절단하는 동안 냉각 단계를 생략하는 성숙한 동물에서 매우 유수의 뇌 구조를 다루는 특히, 건강한 슬라이스와 세포를 얻는 데 도움이되도록 표시되었습니다. 승온 만에 추측 할 수 신경 건강을 지원함으로써 정확한 메커니즘은, 그것이 그 추론하기 위하여 스탠드에도 가능한 한 슬라이싱이 수행되는 온도는 온도 관련 아티팩트를 방지하는 생리 학적 조건에 근접한다. 이 방법의 또 다른 중요한 장점은 절차의 단순성 때문에 짧은 준비 시간이다. 증명 방법에서는 성인 마우스는 사용되지만 동일한 과정 어린 마우스뿐만 아니라 래트에 적용 할 수있다. 또한, 다음 패치 카스티A 실험 수평 소뇌 슬라이스 수행되지만 동일한 절차가 다른 평면뿐만 아니라 뇌의 다른 후방 영역에서 사용될 수있다.

기술 된 방법으로 제조 슬라이스 다양한 전기 생리 및 optogenetic 실험에 사용될 수있다. 도 3a 및도 3c에서, 우리는 각각의 차동 간섭 (DIC) 하에서 광학 보아 수평 소뇌 슬라이스 관상 대뇌 피질 슬라이스의 대표적인 예를 나타낸다. 소뇌 슬라이스에서, 소뇌 뉴런 여러 종류의 용이, 그들의 위치 및 셀 체형에 의해 인식 될 수있는 전기 생리 녹화 대상으로 허용한다. 그림 (b)와 3D에서, 예 표시됩니다 자발적으로 활동 소뇌 골지 세포와 대뇌 피질의 피라미드 세포에서 현재 클램프 모드에서 전체 셀 패치 클램프 녹음에서 추적합니다. 핫 슬라이스 뇌로부터 얻어지는 전기 생리 및 optogenetic 레코딩의 품질의 다른 예는 황과 Uusisaari 11 레플러 등. (16)에서 찾을 수있다. <table border="0" cellpadding='"0"cellspacing'><tr height=...

이 논문에서는 절단에 대한 특별한 수정(예: 자당 첨가) 없이 절단 준비 전에 동물의 심내 관류 없이 기존의 생리학적 용액을 사용하여 생리학적 온도에서 급성 뇌 절편을 준비하는 방법을 보여줍니다.

Here we present a protocol for preparation of acute brain slices. This procedure is a critical element for electrophysiological patch-clamp experiments ...

이 절차의 전반적인 목표는 고품질의 급성 뇌 절편을 생산하는 것입니다. 이것은 먼저 동물에서 뇌를 추출함으로써 이루어진다. 두 번째 단계는 관심 있는 뇌 영역을 절개하여 슬라이싱 용액으로 촉촉하게 유지하면서 슬라이싱 단계에 부착하는 것입니다.다음으로, 뇌는 생리적 온도 슬라이싱 용액에 잠깁니다. 마지막 단계는 뇌의 바이옴 슬라이싱입니다. 궁극적으로 슬라이스는 다양한 체외 전기생리학 실험에 사용할 수 있습니다.얼음처럼 차가운 슬라이싱과 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 이것이 더 간단하고 우수한 결과를 생성한다는 것입니다. 일반적으로 이 방법을 처음 사용하는 사람은 모든 단계가 불필요한 지연 없이 원활하고 신속하게 수행되어야 하기 때문에 어려움을 겪을 것입니다. 우리는 성인 동물로부터 고품질의 소뇌 핵 조각을 얻어야 했을 때 이 방법에 대한 아이디어를 처음 떠올렸습니다.이 방법은 이 절차를 시작하기 전에 우리 실험실의 학생인 Le Anri에 의해 시연될 것입니다. 도구, 도구 및 솔루션이 미리 준비되었는지 확인하십시오. 표 1은 SPS 작업 용액을 준비한 후 뇌가 절단될 표준 물리적 용액 또는 SPS의 구성을 보여줍니다.서면 프로토콜에 따라 용액을 95%의 산소와 5%의 이산화탄소로 20분 동안 평형을 이루고, SPS 평형은 슬라이싱에 필요한 도구를 구성합니다. 이 그림은 브레인 슬라이싱에 사용되는 도구의 배열을 보여주며, 서면 프로토콜에 포함된 각 항목을 식별하기 위해 키를 설정할 때 시각적 참조로 사용할 수 있습니다. SPS 작업 용액의 평형이 완료된 후 SPS에 1 몰 염화칼슘 2 밀리리터를 첨가 한 다음 용액 약 300 밀리리터를 비커에 디캔팅합니다.SPS가 들어 있는 비커를 히터 플레이트나 수조에 올려 섭씨 36도까지 가열합니다. 히터를 사용하는 경우 자기 교반 막대를 포함하고 용액이 과열되지 않도록 하면 철 침전이 발생하여 용액을 사용할 수 없게 되므로 용액이 과열되지 않도록 하십시오. 다음으로, 전기 주전자에 약 500ml의 정수수를 끓여서 300ml의 시원한 정제수가 들어있는 비이커에 넣으면 마우스를 마취하고 목을 베인 후 섭씨 36도보다 약간 따뜻한 물을 얻을 수 있습니다.제도적으로 승인된 프로토콜에 따르면, 머리는 따뜻한 물이 담긴 비커에서 과도한 혈액을 헹굽니다. 그런 다음 작은 가위를 사용하여 두개골의 구멍과 매그넘을 노출시키고 피부를 뒤로 당겨 두개골을 노출시키고 두개골 봉합사

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

여기에서 우리는 성상 교세포 G 단백질 결합 수용체의 가소성 연구를위한 신경 세포의 항상성 가소성을 유도하기 위해 사용되는 프로토콜의 적응을 설명합니다. 최근 성상 세포 그룹 청소년 생쥐 내가 mGluRs의 변화를 검사하는 데 사용되는 방법은 현장에서 생체 성인 마우스의 조직에서, 다양한 성상 세포의 GPCR의 확장을 측정하고, 성상 세포 수용체의 감도의 더 나은 인식을 얻기 위해 적용 할 수있는 신경 활동의 변화에​​.

신경 발사 환율의 조작에 의해 성상 세포 수용체의 가소성을 유도

이 프로토콜에서는 최적화 된 N의 구현을 보여 줍니다.-메 틸-D-glucamine (NMDG) 보호 복구 방법의 뇌 조각 준비. 단일 미디어 공식 안정적으로 다양 한 실험적인 응용 프로그램에 대 한 어떤 나이의 동물에서 건강 한 뇌 조각 얻을 하는 데 사용 됩니다.

최적화 된 N를 사용 하 여 급성 뇌 조각의 준비-메 틸-D-glucamine 보호 복구 방법

이 프로토콜은 전체 셀 패치 클램프 녹음을 수행하기위한 기본 절차 단계를 설명합니다. 이 기술은 신경 세포의 전기적 동작의 연구를 허용하고, 뇌 조각에서 수행하는 경우, 여전히 상대적으로 잘 보존 된 뇌 회로에 통합되어 신경 세포에서 다양한 신경 기능의 평가를 할 수 있습니다.

뇌 조각에서 전체 셀 패치 클램프 녹음

Subcellular patch-clamp recordings는 수상돌기의 기능적 특성을 조사할 수 있는 가능성을 제공합니다. 그러나 이러한 미세한 구조는 직경이 작기 때문에 쉽게 접근할 수 없습니다. 여기에 설명된 프로토콜은 in vitro에서 도파민 뉴런의 수상돌기로부터 안정적이고 신뢰할 수 있는 기록 수집을 용이하게 하는 것을 목표로 합니다.

흑색질 도파민 뉴런의 Somatodendritic 도메인에서 세포 내 패치 클램프 녹음

Microglia, 두뇌의 거주 면역 세포 그들의 환경의 수정에 형태학 변화 신속 하 게 응답. 이 프로토콜 2 광자 현미경을 사용 하 여 쥐의 급성 뇌 조각에서 세로토닌 또는 ATP microglial 프로세스의 매력을 공부 하는 방법을 설명 합니다.

Microglial 프로세스 매력 ATP 또는 급성 뇌 조각에 세로토닌의 2 광자 영상

전압에 민감한 염료를 사용하여 뇌 조각을 재현하고 안정적으로 광학 기록 하는 방법을 소개합니다. 이 기사에서는 기존의 해마 슬라이스 준비를 사용하여 전압에 민감한 염료 염색 및 광 신호 기록에 대해 설명합니다.

전압에 민감한 염료를 사용하여 뇌 슬라이스의 광자 광자 광기록

성인 인간의 뇌에서 자유롭게 떠있는 슬라이스 문화를 준비하는 프로토콜이 제시된다. 상기 프로토콜은 멤브레인 인서트를 이용한 널리 사용되는 슬라이스 배양 방법의 변형이다. 그것은 간단 하 고, 비용 효율적인, 그리고 단기 측정 을 실행 하기 위한 권장 연령 관련 된 뇌 질환 뒤에 신경 변성의 메커니즘을 해명 하는 것을 목표로.

성인 인간의 뇌에서 단기 자유 부동 슬라이스 문화

이것은 조직에 저산소 손상을 줄이기 위해 얼음 차가운 NMDG-aCSF와 함께 경내 관류 및 슬라이스 절단을 활용하는 성인 및 노화 마우스 해마의 급성 슬라이스 준비를위한 프로토콜입니다. 결과 슬라이스는 여러 시간 동안 건강하게 유지되며 장기 패치 클램프 및 필드 레코딩에 적합합니다.

성인과 노화 마우스에서 해마 조각에서 저산소증 최소화

이 프로토콜은 자발적인 날카로운 파도 잔물결 활동을 나타내는 마우스에서 수평 해마 내톨리날 피질 (HEC) 슬라이스의 준비를 설명합니다. 슬라이스는 단순화 된 인터페이스 보유 챔버에서 배양되고 기록은 조직의 산소화와 네트워크 수준의 활동의 자발적출현을 촉진하기 위해 빠르게 흐르는 인공 뇌척수액과 침수 된 조건에서 수행됩니다.

급성 마우스 뇌 슬라이스 자발적인 해 마 네트워크 활동을 조사

우리는 마우스의 등간 중간 해마에서 급성 슬라이스를 준비하는 프로토콜을 제시한다. 우리는 기록의 품질과 기록 된 뉴런의 형태학적 특징의 보존 측면에서 관상 슬라이스와이 트랜스 버사제 준비를 비교합니다.

성인 마우스의 덴테이트 자이루스에서 전신 기록 및 신경 재건을위한 등산 해마에서 급성 슬라이스의 준비

학습하세요 생리적 온도에서 급성 성인 뇌 슬라이스를 제조하는 방법을. 복잡한 수정 없이 표준 생리학적 용액을 사용하여 고품질 슬라이스를 얻고 전기생리학 실험에 활용할 수 있습니다.

슬라이스 뜨거운 것이 : 생리적 온도에서 급성 성인 뇌 슬라이스

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