Name: 생체 내에서와 곤충 병원성 선충의 체외 양육 (Steinernematidae 및 Heterorhabditidae) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 56 s
Description: 학습하세요 곤충 병원성 선충의 생체 내 및 체외 양육 기법을 Galleria mellonella 숙주와 리버-키드니 또는 지방 아가 배지를 활용하여. 이 방법은 생물학적 방제 연구와 대규모 생산을 위한 기초를 제공합니다.

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저자는 주식 랩의 과거 회원을 감사드립니다 : 명나라 민 리, 캐서린 Plichta, 빅토리아 미란다 - 톰슨과 샘 규 김이 프로토콜의 많은 개선에 대한 그들의 공헌. 이 작품은 SP 주식에 대한 국립 과학 재단 보조금 IOS-0840932 및 IOS-0724978에 의해 부분적으로 투자되었다

자신의 Symboitic 박테리아와 곤충 병원성 선충의 1 생체 양육 <ol><li> 100 × 15mm 플라스틱 페트리 접시 전환과 접시의 뚜껑에 종이 필터 (90mm)의 두 디스크를 넣습니다. </li><li> 균등 여과지에 (1,000-2,000 IJ / ㎖의 농도에서) IJ (감염성 유하) 현탁액 1 ㎖를 분산. 참고 : IJS 표면 살균 할 필요가 없습니다. </li><li> 접시에 큰 waxmoth의 갤러리아 mellonella의 10 마지막 령 유충을 추가합니다. 목표는 약 100-200 IJS / 유충을 제공하는 것이다. </li><li> 페트리 접시 (그림 1)의 바닥과 뚜껑을 덮고 페트리 접시 레이블을 지정합니다. 다음의 내용을 언급 : 선충 종 명 (알려진 경우); 코드 / 지정을 분리; 날짜 감염 트랩이 설치되었다. </li><li> 느슨하게 밀봉 된 비닐 백에 접시를 놓고 (수분을 보존하기 위해) 및 하나 실온 또는 20 ~ 25 ° C 사이의 배양기에서 어둠에 보관. 매일 요리를 확인 참고 :이 토양에 자연 감염 상태를 모방으로 어둠이 선충의 감염을 용이하게한다. </li><li> 3~5일 후, ​​수정 된 화이트 트랩 7 선충 감염의 징후와 함께 시체를 제거합니다. 참고 : 시체가 부패하는 냄새가있는 경우,이 배양에 성공하지 않은 및 / 또는 오염이 있다는 것을 표시 할 수있다. 선충과 곤충의 새로운 배치와 새로운 감염 챔버를 설정합니다. </li></ol> 자신의 공생 박테리아와 곤충 병원성 선충의 2 체외 양육 <ol><li> 간 - 신장 한천 방법 9,19 <ol><li> 작은 조각 (2cm 세 이하)로 간과 신장을 잘라 및 염화나트륨, 한천과 함께 믹서에 넣고 물 300 ㎖의 고기가 액체 펄프, 두꺼운 붙여 넣기 또는 퓨레가 될 때까지 혼합. 그런 다음, 1 L 삼각 플라스크에 혼합물을 전송합니다. </li><li> 블렌더 용기에 물을 최종 200 mL를 넣고에 남은 용지를 가만히 따르다삼각 플라스크. 121 ℃에서 15 분간 고압 증기 멸균한다. 수 고압 증기 멸균 후 한천 쏟아져 전에 터치 식입니다. 참고 :이 매체는 고기 덩어리를 가지고 경향이 있기 때문에 매체의 피펫은 사용하지 않는 것이 좋습니다. </li><li> 손 교반 또는 사이의 삼각 플라스크 소용돌이가 더 균일 한 미디어 쏟아지는 동안 5 (또는 6) cm 페트리 접시에 한천 ~ 20 ㎖에 붓고. 필요할 때까지 한천은 4 ° C에서 고화 및 저장 요리를 할 수 있도록 허용 참고 : 고기는 페트리 접시에 부어있는 큰 덩어리를 깨고 불꽃 살균 금속 주걱을 사용합니다. </li></ol></li><li> 지질 한천 방법 9,19 <ol><li> 영양 배지, 한천 및 효모 추출물을 함께 혼합하여 지질 한천 배지를 준비하고 2 L 삼각 플라스크에 섞어 붓는다. 121 ° C에서 15 분 동안 H 2 O 및 MgCl2를 • 6H 2 O와 오토 클레이브를 증류 추가. </li><li> 옥수수 기름, 옥수수 시럽 믹스의 무균 혼합을 추가하고 균일하게 기름 방울을 분산하는 것이 저어 또는 격렬하게 소용돌이합니다. <br/&gt; 참고 : UV 가교제에 필요한 볼륨을 배치하여 옥수수 기름과 시럽을 소독. 오일은 액체에 용해하지만 작은 물방울에 있는지 확인하지 않습니다. </li><li> 5 (또는 6) cm 페트리 접시에 ~ 20 ㎖의 한천을 붓고 필요할 때까지 한천은 4 ° C에서 고화 및 저장 요리를 할 수 있습니다. </li><li> 킬은 지질 한천 플레이트에 공생하는 박테리아를 원하는 및 24 ~ 48 시간 동안 28 ° C에서 번호판을 품어. 참고 : 하룻밤 (12-16 시간) LB의 하위 문화의 100 ~ 200 μl를 확산. </li><li> 일 후, 약 0.4 ml의 표면 살균 선충 현탁액 (계란 또는 감염성 청소년)의 추가와 어둠 속에서 또는 22 ± 3 ° C의 배양기에서 실온에서 번호판을 품어. 참고 :이 선충의 성장에 불리한 지나치게 습윤 환경을 만들 수 선충 현탁액의 이상 0.4 ML을 추가하지 마십시오. </li><li> 매일 문화를 모니터링합니다. 문화는 약 십이일 (그림 2)에 IJS의 새로운 세대를 생성해야한다.</li><li> 선충이 수정 된 화이트 트랩 접시 (그림 3A)의 측면을 크롤링 볼 때 한천로 아래 접시를 전송 IJS (그림 3B)를 수확 (로스코 외. 12 참조). 매체의 오염을 감소시키기 위해 층류 후드 하에서이 단계를 수행한다. </li><li> 등장에 수정 된 화이트 트랩에서 IJS를 수집하고 모든 매체 파편을 제거하기 위해 IJ 현탁액을 헹군다. 저장소 (차가운 온도 인큐베이터 또는 차가운 방에) 10 ° C에서 멸균 증류수 IJ 또는 필요한 경우 즉시 사용합니다. 참고 :이 연구의 목적에 따라 하나 공생 - 식민지 또는 aposymbiotic 선충으로 판을 시드. </li></ol></li></ol> 3 시험관 Aposymbiotic의 양육 (공생 무료) 곤충 병원성 선충 <ol><li> 10 ~ 20에게 G.를 감염 원하는 선충 종의 IJS와 mellonella 유충 (섹션 1 참조). 3 ~ 4 일 후 (이 때 IJS은 성숙한다1 세대 성인) 시체를 수집합니다. 참고 : 성숙과 종에 따라 다릅니다 계란의 적절한 수를 얻기 위해 필요한 여성의 수와 시간. 더 G.를 감염 mellonella 필요한 경우 애벌레 빠르면가 오른쪽 발달 단계에 있는지 여부를 평가하기 위해 48 시간 게시물 감염 등의 해부를 시작합니다. </li><li> 생리 식염수 (M9 버퍼 18)와 페트리 접시에 각각 개별적으로 시체를 놓습니다. 좋은 팁 집게로 머리를 잡아 당겨 시신을 해부하다. </li><li> (바람직하게는 L 자형) 미세 바늘로 여성 (내부 계란) 적어도 20은 임신을 수집하고 M9 버퍼 (그림 4A) 10 ㎖를 포함하는 시계 유리에 배치합니다. </li><li> 하기 성분을 고려하여 axenizing 용액을 준비 : 증류수 6.75 ㎖, 1.25 ㎖의 5 N NaOH를, 및 2.25 ml의 시판 표백제 용액을 3 % 차아 염소산로 희석. 참고 : 수산화 나트륨은 솔루션 장갑, 고글 기본 및 보호 적절한 다른입니다옷을 착용해야합니다. 참고 : 표백제 빛으로 감소함에 따라, 신선한 axenizing 솔루션마다를 준비합니다. axenizing 솔루션의 여러 배치를 준비하고 여러 시계 안경 계란의 표면 살균 및 수확을 수행합니다. </li><li> M9 버퍼가 완충 용액으로 시계 유리를 작성하고 피펫 버퍼를 빨아과 여성에게 적어도 세 번 씻어. 여성이 시계 유리에 남아 있는지 확인합니다. 이 단계를 두 번 더 반복합니다. </li><li> 즉시 axenizing 솔루션을 추가하고, 여성은 10 ~ 15 분 이상 더 이상이 솔루션에 남아 할 수 있습니다. (axenizing 솔루션에 저항) 계란은 그대로 유지하면서 붕괴하기 시작 선충 조직을 관찰한다. </li><li> 수동 니들 또는 메스 (도 4B, C)로 절단함으로써, 처리 속도를 높이기 위해 여성의 신체를 방해. , 1.5 ML의 microcentrifuge 튜브로 피펫 팅 분해되지 않은 조직을 추가 피함으로써 알을 제거합니다. 참고 : m로 사용모든 마이크로 원심 튜브는 필요에 알을 수집하고 난의 생존력이 axenizing 용액에 노출 장기간에 걸쳐 감소하는 바와 같이, 빨리 작동한다. </li><li> &quot;고속 설정&quot;을 사용하여 15 초 동안 소용돌이 튜브는 또한 계란에 부착 된 선충 조직을 제거합니다. 소용돌이를 사용할 수없는 경우 또는 최대 피펫 용액을 여러 번 다운. </li><li> 약 18,000g 2 분 동안 원심 분리하여 펠렛 계란입니다. 계란이 충분히 펠렛을하지 않으면 속도를 높입니다. axenizing 솔루션을 제거하고 1 분 동안 900 XG에 멸균 증류수와 원심 분리기를 한 번 더 microcentrifuge 관을 작성하여 두 번 헹군다. </li><li> 마지막 세척 후, 멸균 증류수 300 ~ 500 ㎕의 계란을 재현 탁하고 멸균 3cm 페트리 접시 또는 멸균 시계 유리에 배치합니다. 계란은 이제 표면 살균 것을 기억하십시오, 그래서 계란의 청결을 유지하기 위해 멸균 피펫 및 / 또는 pippetter 팁과 물을 사용합니다. </li><li>그들은 (그림 4D) 그대로 확인 해부 현미경 (30-50X 배율)에서 계란을 검사 및 간 - 신장 한천 5cm 플레이트로 전송 (2.1 절 참조) 참고 :이 한천이 과도하게 젖은 것 같은 접시에 계란 서스펜션의 400 개 이상의 μl를 추가하지 마십시오. </li><li> 해당 정보를 라벨 판과 28 ° C에서 어둠 속에서 수직으로 저장합니다. 계란의 부화하는 것은 분명 밤새도록해야한다. 참고 : 물이 접시의 뚜껑에 응축 할 수 있지만 1 ~ 2 일 후 증발됩니다. 이 때, 한천의 수분을 유지하고 그것의 건조를 방지하기 위해 비닐 봉지에 접시를 놓습니다. </li><li> 주기적으로 요리를 관찰하고 곰팡이 나 세균 오염의 흔적이 어떤 요리를 폐기합니다. IJS가 페트리 접시의 벽을 볼 이주되면, 뚜껑을 제거하여 흰색 변경됨 트랩 (12)과 하부 한천 접시 옮긴다. 로 변형 된 접시를 전송할 때 멸균 조건을 고려D 화이트 트랩 노출 매체의 오염을 방지한다. </li><li> 필요에 따라 화이트 트랩 및 수확 IJ 모니터링을 계속합니다. 참고 : Aposymbiotic 선충 많은 일, 심지어 주 동안 화이트 트랩의 물에 이주 할 것입니다. </li></ol>

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적합한 호스트를 사용하여 EPN의 생체 양육의 성공을위한 핵심 요소이다. 일반적으로, 모두 steinernematids 및 heterorhabditids는 재현 할 수 성공적으로 더 큰 왁스 나방, 갤러리아 mellonella (나비목 : Pyralidae)의 유충에 자신의 라이프 사이클을 완료합니다. 그러나, 다른 가족 및 / 또는 명령에서 다른 종의 곤충이 고려 될 수있다. 현재 설명 선충 종의 몇몇은 특정 곤충 호스트에 대해 특이성을 갖는 것으로 알려져있다. 예를 들어, S. kushidai 및 S. scarabaei는 나비목 유충에 매우 독성이 없으며, 같은 실험실에서 성공적인 양육을위한 풍뎅이 딱정벌레 유충 (풍뎅이과)로 coleopteran 유충이 필요합니다. 또 다른 종, S. scapterisci는 같은 귀뚜라미 또는 땅강아지 등 orthopteran 곤충을 좋아한다. 적합한 호스트...

곤충 병원성 선충 (EPN) Steinernema와 Heterorhabditis 종. (Steinernematidae, Heterorhabditidae)과 세균의 공생, Xenorhabdus 및 Photorhabdus 종 (장내 세균)이 육상 동물 - 미생물의 공생 관계 2-4,6,10,19. Xenorhabdus 및 Photorhabdus 종의 응급 모델로 간주됩니다. 또한 감염 청소년 (IJ) 또는 제 3 단계 청소년 8,10,13 감염성로 알려져있는 선충의 유일한 자유 생활 단계의 장내 공생로 숨겨있다. 박테리아 - 선충 쌍 곤충의 광범위한 병원성이고 성공적 생물학적 해충 제어 및 통합 관리 프로그램 6,8 전세계에서 구현되었다. 여기에서 우리는 생체 내에서 자주 실험실 조건에서 EPN의 양육을 위해 행사 될 체외 기술에의 선택을 보여줍니다. 나는N 생체 방법은 선충의 양육에 대한 곤충 호스트를 찬찬히. 일반적으로, 다양한 곤충 주문 (즉 나비목, 딱정벌레 목, 파리목, 등.)의 미성숙 단계에 적합한 호스트로 간주됩니다. 방법은 일반적으로 실험실에서 선충 문화의 유지 보수를 위해 간주됩니다 생체 내. 선충의 대량 생산을 고려할 때이 방법은 적합하지 않을 수 있습니다. 곤충 호스트의 많은 양이 더 많은 시간과 곤충 사육에 관련된 추가 비용을 요구하고이 목적을 위해 요구 될 수있다. 곤충 병원성 선충은 여러 매체에 체외에서 배양 할 수있다. 연구의 목표에 따라 시험 관내 방법에하는 것은 미디어의 공생 박테리아의 통합을 고려하거나. 이 프레젠테이션에서는 EPN의 전파 널리 사용되는 두 가지 방법을 설명합니다. 미디어 성분 공생 박테리아 용 영양소 원을 제공차 선충에 대한 스테롤 소스. 체외 방법은 곤충 호스트없이 장점에게 EPN의 양육을 제공합니다. 적합한 곤충 호스트가 이용할 수없는 경우에 원래 개발 된 체외 미디어의 많은 EPN의 승산을 위해 사용되었다. 그러나 지난 몇 년 동안, 시험관 양육 방법이 널리 EPN과 공생 세균 (17, 19) 사이의 의존형 관계를 이해하는 것을 목표로 연구에 이용되고있다. 이 프레젠테이션에 자세히 기술은 증권 연구소, 애리조나 (투싼, AZ, USA)의 대학에서 다양한 저자에 의해 기술 및 정제에게 해당합니다. 이러한 기술은 해충 관리 목적을 위해 이들 유기체의 대량 생산에 사용되는 기술의 본체로부터 구별한다.

<table><tbody><tr><td colspan="4">In vivo 감염</td></tr><tr><td>100 x 15 페트리 접시</td><td>VWR</td><td>25384-088</td><td></td></tr><tr><td>여과지, 9cm 등급 1 셀룰로오스</td><td>Whatman/VWR</td><td>28450-081</td><td>등급 1 여과지 권장</td></tr><tr><td>곤충 호스트</td><td>Timberline</td><td>http://www.timberlinefisheries.com/ProductDetails.asp?ProductCode=WAXLG</td><td>Galleria mellonella는 권장</td></tr><tr><td colspan="4">간-신장 한천 (500 ml용)</td></tr><tr><td>60 x 15 mm 페트리 접시</td>용 <td>VWR</td><td>25384-092</td><td></td></tr><tr><td>소 간, 50 g</td><td>현지에서 구입; 정육점 또는 슈퍼마켓</td><td></td><td>남은 부분은 미래의 사용을 위해 냉동 및 해동할 수 있습니다</td></tr><tr><td>. 소의 신장, 50 g</td><td>현지에서 구입; 정육점 또는 슈퍼마켓</td><td></td><td>남은 부분은 향후 사용을</td></tr> <tr><td>위해 냉동 및 해동될 수 있습니다.염화나트륨 2.5g (0.5 % 최종 농도)</td> <td>Acros / VWR</td><td>200002-434</td><td>모든 연구 등급 NaCl을 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>한천, 7.5g (1.5 % 한천, 최종 농도)</td><td>HiMedia / VWR</td><td>95026-642</td><td>모든 매체 등급 한천을 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>500 ml 증류 H2O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan = "4"> 지질 한천 (1 L 용)</td></tr> <tr><td>100 x 15 페트리 접시</td><td>VWR</td><td>25384-088</td><td></td></tr><tr><td>영양 육수, 8g</td><td>BD/VWR</td><td>90002-660</td><td></td></tr><tr><td>효모 추출물, 5g</td><td>EMD/</td><td>VWR EM1.03753.0500</td><td></td></tr><tr><td>염화마그네슘 육수화물 10ml(0.2g/ml)</td><td>EMD/VWR</td><td>EM-MX0045-1</td><td></td></tr><tr><td>옥수수 기름, 4ml</td><td>모든 브랜드</td><td>현지 조달; 슈퍼마켓</td><td>모든 브랜드의 옥수수 기름을 사용할</td></tr> <tr><td>수 있습니다.옥수수 시럽, 96ml 89ml 가열된 H2O에 7ml 옥수수 시럽을 결합하고 균질성을 위해 소용</td>돌이칩니다. <td></td><td>현지</td><td></td>조달</tr> 슈퍼마켓 <tr><td>한천, 15g</td><td>HiMedia/VWR</td><td>95026-642</td><td>모든 매체 등급 한천 사용 가능</td></tr><tr><td>증류된 H2O, 890ml</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

생체 내에서와 곤충 병원성 선충의 체외 양육 (steinernematidae 및 heterorhabditidae)

In vivo and In vitro Rearing of Entomopathogenic Nematodes (Steinernematidae and Heterorhabditidae)

Photorhabdus가 heterorhabditids의 공생 동안 곤충 병원성 선충 (EPN) (Steinernematidae 및 Heterorhabditidae)은 장내 세균. Xenorhabdus 박테리아가 steinernematids 선충과 관련된 가족의 그람 음성 감마-Proteobacteria와 의존형 협력 관계를 가지고있다. 함께 선충 및 박테리아는 친밀하고 구체적인 협력 곤충 종의 넓은 범위를 죽이는 강력한 살충 복합체를 형성한다. 여기서, 우리는 생체 내에서 일반적 실험실 조건에서이 선충의 양육에 사용되는 체외 기법을 보여줍니다. 또한,이 기술은 EPN 문화의 성공적인 설립을위한 주요 단계를 대표하고 또한 연구에 대한 이러한 생물을 활용, 다른 생물 검정을위한 기초를 형성한다. aposymbiotic (공생 무료) 선충의 생산은 종종 공생의 연구에 대한 심층와 다각적 인 접근 방법에 대한 중요합니다. 이프로토콜은 항생 물질의 첨가를 필요로하지 않고, 표준 실험실 장비와 짧은 시간에 달성 될 수있다. 저장 영역에서의 생존율이 사용 종에 따라 다를 수 있지만,이 방법으로 제조 선충은 비교적 견고. 이 프레젠테이션에 자세히 기술은 P. 주식의 연구소, 애리조나 대학 (투싼, AZ, USA)에 의해 다양한 저자에 의해 기술과 세련된 사람들에 해당합니다. 이러한 기술은 해충 관리 목적을 위해 이들 유기체의 대량 생산에 사용되는 기술의 본체로부터 구별한다.

생체 양육 방법은 선충의 성장과 재생을위한 호스트로 살아있는 곤충을 사용합니다. 감염 챔버 곤충 IJS를 노출시키는 효율적인 방법이다. 이는 다른 하나의 곤충 호스트로부터 세균 공생을 벡터 선충의 생활주기에서 유일한 단계이다. 1 감염 챔버뿐만 아니라이 챔버를 구축하는 데 필요한 재료 설정 보여준다. 체외 사육 방법이 허용 EPN 곤충 호스트없이 성장뿐만 아니라 aposymbiotic (공생 무료) 선충의 양육을 위해 구현된다.이 그림은 서로 다른 선충 단계와 지질 한천 플레이트를 보여줍니다. 지질 아가 플레이트는 생물학적 종 개념에 기초 선충 ID를 검증하는 데 필요한 교차 혼성화 실험에서 고려 될 수있다. 간 신장 한천 방법은 원래 Poinar &amp; 토마스 (1966) (14)에 의해 설명되었다. 이 방법은 선충이 성숙 reproduc 할 수 있습니다곤충 호스트없이 전자와 공생...

이 프레젠테이션의 목표는 생체 내에서와 곤충 병원성 선충의 양육을위한 체외 기술에 증명하는 것입니다. 체외 방법이 풍부한 한천 미디어를 활용하는 반면, 생체 내 방법, 곤충 호스트와이 선충의 양육을 고려하십시오.

생체 내에서와 곤충 병원성 선충의 체외 양육 (Steinernematidae 및 Heterorhabditidae)

Entomopathogenic nematodes (EPN) (Steinernematidae and Heterorhabditidae) have a mutualistic partnership with Gram-negative Gamma-Proteobacteria in the ...

이 절차의 전반적인 목표는 장 병원성 선충의 사육을 위한 생체 내 및 체외 기술을 시연하는 것입니다. in vivo 방법은 먼저 greater wax moth garia melanoma의 instar 유충을 감염성 청소년 또는 IJ 현탁액으로 배양하여 수행됩니다. 다음으로, 선충에 감염된 시체를 수거할 수 있도록 변형된 흰색 덫으로 옮깁니다.체외 배양 방법은 먼저 간, 신장 또는 지질 한천 플레이트를 복구하여 수행하고 원하는 공생 박테리아를 줄무늬를 제거합니다. 그런 다음 IJ 현탁액이 플레이트에 추가되고 선충이 발달하도록 합니다. 마지막으로, 한천 접시는 선충의 수확을 위해 변형된 흰색 트랩으로 옮겨집니다.궁극적으로 이러한 기술은 EPN 배양을 성공적으로 확립하고 이러한 유기체를 연구에 활용하는 다른 생물학적 분석의 기초를 형성합니다. 이 프레젠테이션에 표시된 inbivo 및 in vitro 방법은 병원성 선충에 대한 연구뿐만 아니라 ProCard 및 eary 상호 작용을 이해하는 것을 목표로 하는 다양한 실험에도 사용할 수 있습니다. 절차를 시연하는 것은 제 연구실의 대학원생인 John McMullen이 맡을 것입니다.Entero 병원성 선충의 생체 내 사육을 시작하려면 100 x 15mm 플라스틱 페트리 접시를 뒤집고 접시 뚜껑에 두 개의 여과지를 놓고 1ml의 감염성 청소년 또는 IJ 현탁액을 고르게 분배합니다. 여과지에 더 큰 왁스 나방 garia melanoma의 별 유충에 마지막으로 10 개를 추가하여 약 100-200 IJs pal lava를 만듭니다. 페트리 접시 바닥으로 뚜껑을 덮고 라벨을 붙입니다.그런 다음 접시를 비닐 봉지에 넣고 느슨하게 밀봉한 다음 섭씨 20도에서 25도 사이의 어둠 속에서 배양합니다. 3-5일 후, 선충 감염 징후가 있는 사체를 변형된 흰색 트랩으로 제거하여 선충과 박테리아를 체외 사육하기 위한 간 신장 방법을 수행합니다. 간과 신장을 작은 조각으로 자르고 염화나트륨 한천과 함께 믹서기에 넣고 고기가 액체 과육, 두꺼운 페이스트 또는 퓌레가 될 때까지 물 300ml를 섞습니다.혼합물을 Meyer 플라스크에 옮기고 물 200ml를 사용하여 블렌더 용기를 헹굽니다. 매체를 플라스크로 디캔팅합니다. 혼합물을 섭씨 121도에서 15분 동안 오토클레이브합니다.약 20ml의 한천을 5-6cm의 페트리 접시에 붓고 한천이 굳어지도록 한 후 필요할 때까지 섭씨 4도에서 접시를 보관하

in-vivo-vitro-rearing-entomopathogenic-nematodes-steinernematidae

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

형광 현미경을 사용하여 Nematodes에 박테리아를 머릿속으로

곤충 병원성 선충은 곤충의 다양한 기생 토양에 서식하는 회충 있습니다. 각각의 토양 샘플 및 감염된 곤충 사체에서 선충의 복구를 위해 곤충 유혹하고 수정 된 화이트 트랩, 우리는 두 가지 기술을 사용하여 토양 선충의 분리에 사용되는 샘플링 방법을 보여줍니다.

토양 샘플링과 곤충 병원성 선충의 분리 (Steine​​rnematidae, Heterorhabditidae)

야생 Caenorhabditis 선충은 많은 미생물과 연관됩니다, 종종 창 자 루멘에서 또는 창 자를 감염. 이 프로토콜은 도어 큐티클의 저항을 활용하여 내장을 식민지화하는 헤아릴 수없는 미생물을 풍부하게하는 방법을 자세히 설명합니다.

장내 미생물군유전체 박테리아를 위해 농축하는 야생 케노르하비티스 선충제의 선택적 세척

Entomopathogenic 선충류는 박테리아와 공생하며 함께 선천적 인 면역 체계를 손상시켜 곤충을 성공적으로 감염시킵니다. 선충류 감염의 유전 적 기초에 대한 연구를 촉진하기 위해 엔토모 병원성 선충류를 유지하고 유 전적으로 조작하는 방법이 설명됩니다.

Entomopathogenic Nematodes 배양 및 유전자 조작

이 논문은 곤충병원성(EPN: 곤충기생) 선충이자 신흥 유전 모델인 Steinernema hermaphroditum 에서 CRISPR-Cas9 매개 게놈 공학을 시연합니다. 기술이 설명한 기술은 돌연변이를 생성하는 데 유용하며, 상리공생 및 기생 공생과 관련된 선충 생물학의 유전자 기능을 밝히는 데 도움을 줍니다.

곤충병원성 선충 Steinernema hermaphroditum 의 CRISPR-Cas9 기반 돌연변이 유발과 돌연변이 계통의 유지

우리는 농부들이 생물 살충제로서 곤충병원성 선충을 대량 번식하는 두 가지 방법을 제시합니다. 첫 번째 방법은 선충 배양 기질로 폴리아크릴아마이드 젤을 사용하고, 두 번째 방법은 폴리머 코팅된 면모를 배양 기질로 사용합니다. 두 방법 모두 곤충 시체 내에서 선충을 생 체 내에서 전파하는 데 의존합니다.

곤충병원성 선충의 재배자 기반 생체 내 전파

재관류의 decellularization는 기관의 세포외 기질 구성과 마이크로 아키텍처를 유지 전체 간 공사장 공중 발판을 생산하는 새로운 기술입니다. 여기에, hepatocytes과 재관류의 decellularization 이후 repopulation를 사용하여 전체 오르간 공사장 공중 발판을 준비하는 방법이 설명되어 있습니다. 기능 및 transplantable 간 이식이 기술을 사용하여 생성할 수 있습니다.

전체 간은의 Decellularization 및 Recellularization

골드에 긴 사슬 alkane thiols의 형성에서 자기 조립 monolayers은 (샘스) 단백질 패턴 및 셀 감금의 형성을위한 잘 정의된 기판을 제공합니다. 와 backfilling 다음 polydimethylsiloxane (PDMS) 스탬프를 사용하여 hexadecanethiol의 Microcontact 인쇄 글리콜 - 종료 alkane thiol 모노머는 스탬프 hexadecanethiol 지역에 단백질과 세포 adsorb 패턴을 생산하고 있습니다.

단백질과 세포 교도소에 대한 2 차원 문양의 기판 만들기

사용자 정의, 실시간 공촛점 스캐닝 이미징 시스템의 전체 구조는 설명합니다. 쉽게 동영상 속도 현미경 및 microendoscopy 사용할 수있는이 시스템은, 비용의 일부로 표준 상용 공촛점 시스템을 사용하여 액세스할 수 없습니다 이미징 형상 및 응용 프로그램의 배열을 허용합니다.

비디오 - 속도 검색 공촛점 현미경과 Microendoscopy

그대로 고립 Langendorff에 transmembrane 잠재력 (VM)과 일시적인 세포 내 칼슘 (CAT)의 광학 매핑하는 동안이 종이 자세히 해부 절차를, 수단 설치, 그리고 실험 조건 마우스 마음을 perfused.

마우스 중심에 액션 후보와 칼슘 과도의 광학 매핑

학습하세요 곤충 병원성 선충의 생체 내 및 체외 양육 기법을 Galleria mellonella 숙주와 리버-키드니 또는 지방 아가 배지를 활용하여. 이 방법은 생물학적 방제 연구와 대규모 생산을 위한 기초를 제공합니다.

생체 내에서와 곤충 병원성 선충의 체외 양육 (Steinernematidae 및 Heterorhabditidae)

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