왕새우의 Swimmeret 시스템 : 신경 코드 및 모터 패턴의 세포 외 녹음의 해부를위한 실무 가이드

이 절차의 전반적인 목표는 전기 생리학 연구에 사용하기 위해 가재에서 복부 신경삭을 절개하는 것입니다. 이것은 먼저 가재를 마취함으로써 수행됩니다. 다음으로, 가재의 복부 판을 분리하기 위해 전체 해부가 수행됩니다.

그런 다음 중추 신경계를 raic ganglia에서 abdominal ganglia로 완전히 분리하기 위해 미세 절개를 수행합니다. 6. 마지막으로, 전기생리학적 실험을 용이하게 하기 위해 모든 신경절에서 신경절 덮개를 제거합니다.

궁극적으로, 복부 신경절의 사슬은 추가 또는 세포 내 기록에 사용됩니다. 중심 패턴 생성기의 조정을 연구하거나 식별된 뉴런의 형태와 시냅스 맥락을 조사합니다. 이 방법은 고립된 신경계에서 fic FLA 소동을 기록하거나 복부 신경절 또는 특정 뉴런의 형태를 특성화할 수 있도록 신경계 기능에 대한 실습 경험을 제공하는 것과 같은 신경 과학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다.

이 방법은 가재의 수영 속도 시스템에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 또한 가재의 꼬리 뒤집기 동작을 구동하는 신경 네트워크와 같은 다른 시스템에도 적용 할 수 있습니다 : 가재로 작업, 태평양 스테이시아, Linea Guus. 텍스트 프로토콜에 따라 동물을 마취한 후 복부 쪽을 위로 잡고 강한 가위를 사용하여 흉부 근처의 기저부에서 양쪽 발톱을 자릅니다.

그런 다음 왼쪽 및 오른쪽 유로 포드를 제거합니다. 검은 사드를 깐 해부 접시에 동물의 복부 쪽을 위로 향하게 한 다음 차가운 식염수를 사용하여 발톱 구멍을 통해 관류시킵니다. 다음으로, 강한 가위를 사용하여 가재의 눈 바로 뒤쪽에 가로 절단을 하나 만들어 목을 베십시오.

그런 다음 기저 관절 근처의 모든 걷는 다리를 제거하여 마지막 흉부 분절과 함께 복부를 나머지 흉부에서 분리합니다. 가위 끝을 두 번째 보행 다리의 구멍에 삽입하고 반대쪽으로 자릅니다. 흉부를 통해 절단부를 양쪽으로 확장하고 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 내부 장기의 일부를 노출시킨 후 흉부의 앞쪽 부분을 제거합니다.

이제 내부 장기를 제거하고 차가운 식염수로 동물을 헹굽니다. 흉골 플레이트의 전체 길이를 통해 lumon과 swimmer rats 사이의 최대 측면 위치에서 절단으로 해부를 계속합니다. 반대쪽도 같은 컷을 만듭니다.

가재의 복부 쪽이 위로 향하게 하여 해부 접시에 놓습니다. 곤충 핀을 사용하여 표본을 텔슨에서 후방으로, 카라베이스의 잔해에서 앞쪽으로 고정합니다. 표본을 덮도록 접시에 가재 식염수를 채웁니다.

왼손에 거친 집게를 사용하여 걷는 다리 구멍을 잡고 표본을 당겨 엽니다. 두 개의 큰 등쪽 굴곡근 가닥을 식별합니다. 그것들을 고치고 복부 기저부와 흉골 동맥을 자릅니다.

첫 번째 복부 신경절 A 1 및 관련 신경 N 1 N 2를 노출시킵니다. 이제 두 번째 복부 분절로 이동합니다. 복부 기저에 가까운 근육 가닥의 기초를 제거합니다.

복부 신경절 A 2는 이제 관련 신경 N 1, N 2 및 N 3과 함께 볼 수 있습니다. 신경삭에서 가장 먼 위치에 신경 N 3을 절제합니다. 복부핵이 있는 다음 세 개의 복부 분절에 대해 이 단계를 반복합니다.

3에서 5. 복부 신경절에 도달하면 6. 흉골 플레이트를 6의 신경 뒤쪽으로 자릅니다.

복부 부분을 유지하고 고정하십시오. 현미경으로 식염수로 채워진 접시의 등쪽 면이 위로 향하게 합니다. 집게를 사용하여 두부 흉부 선미의 가장 앞쪽 부분을 제거합니다.

그런 다음 남아 있는 외골격 구조 사이의 근육을 자릅니다. 복부 신경삭의 앞쪽 끝을 조심스럽게 들어 올린 후 흉부 신경을 측면으로 절단합니다. 1에 초점을 맞추고 1의 신경 N, 1, N, 2를 최대 1cm 길이로 잘라 고정합니다.

다음으로, A 2로 이동하여 이 세그먼트의 N 1, N 2 및 N 3 신경을 식별합니다. 신경은 복부 신경절의 하나, 2에서 5입니다. 각 분절에서 펼쳐지는 두 개의 흉골 표피 사이에 위치하며 근육 조직으로 덮여 있습니다.

그런 다음 복부의 측면 가장자리에서 시작하여 후방 흉골 표피 접힘을 따라 한 번 자르고 텍스트 프로토콜에 따라 N을 발견한 후 정중선을 향해 진행합니다. 필요한 경우 가능한 한 원위부로 신경을 절단하십시오. 반대쪽 쪽으로 진행하여 신경절 근처의 정중선에서 신경 N을 분리하기 시작하고, 후방 흉골 표피 포위물을 따라 절단하여 외측 가장자리를 향해 진행합니다.

이제 이 신경절의 신경 N 2를 고정하기에 적합한 길이로 자릅니다. 그런 다음 복부 신경절에 대해 표시된 단계를 반복합니다. 2는 3에서 5는 가능한 한 멀리 떨어져 있습니다.

신경절의 신경을 6 잘라냅니다. 집게를 사용하여 6의 여러 신경을 잡고 신경절을 들어 올리고 흉골판에서 신경절 사슬을 분리하기 시작합니다. 신경삭을 완전히 분리한 후, 투명한 문턱 보호대가 덧대어진 페트리 접시에 신경절 사슬을 옮기고 스테인리스 스틸 와이어로 자른 작은 핀을 사용하여 식염수를 채우고 부드럽게 스트레칭 터치를 가합니다.

신경절의 사슬을 등쪽이 위로 향하게 배열된 신경삭과 일직선으로 고정합니다. 마지막 두 개의 흉신경절만 유지하고 흉신경은 옆으로 고정합니다. 신경삭에 대해 90도 각도로 사람의 신경을 고정합니다.

그런 다음 2로 진행하여 신경 N 2를 신경삭에 대해 35-45도 각도로 고정합니다. 신경 N 1이 분리되어 텍스트 프로토콜에 따라 고정되면 신경 N 신경의 전방 가지를 신경삭에 90도 각도로 고정합니다. 그런 다음 신경 N의 뒤쪽 가지를 앞쪽 N 하나의 가지와 신경 N 둘 사이에 고정합니다.

모든 복부신경절은 덮개를 씌워야 하기 때문에, 가느다란 용수철 가위를 사용하여 신경절 뒤쪽의 신경절초를 통과하여 신경 N 2와 N 3 사이의 작은 측면 절단을 만듭니다. 연결 장치 위의 칼집을 가로질러 가로로 자릅니다. 그런 다음 칼집을 제거하기 전에 신경절의 측면 경계를 따라 계속 자릅니다.

필요한 경우 가는 집게를 사용하여 덮개를 들어 올려 세포 외 기록을 수행합니다. 텍스트 프로토콜에 나열된 도구 및 시약의 설정에 따라 신경절 체인을 현미경 테이블에 놓고 아래에서 조명을 비춥니다. 기록 전극을 표적 신경에 가까운 실 가드에 삽입하고 기준 전극을 신경절에 가깝지만 측면 위치에 삽입합니다.

그런 다음 녹음 주위의 대상 신경을 구부립니다. 신경을 스트레칭하고 고정한 후 바셀린을 채운 주사기와 끝이 둥근 20게이지 바늘을 사용하여 입욕액에서 표적 신경을 분리합니다. 활동을 기록해야 하는 모든 신경에 대해 이 작업을 반복합니다.

마지막으로, 여기에 표시된 것처럼 기록을 시작하십시오.동측 PS 2에서 PS 5 운동 뉴런의 세포 외 PS 활성은 5의 PS 버스트로 시작하고 여기파가 전방 방향으로 전파됩니다. 또한, 각 세그먼트에서 한 버스트의 시작부터 다음 버스트의 시작까지 측정된 시간은 일정하게 유지되며, 리듬 주기 및 버스트의 주기로 정의된다. 지속 시간은 다른 준비마다 다를 수 있지만 세그먼트 간의 위상 지연은 리듬의 주파수와 무관한주기의 약 1/4에서 일정하게 유지됩니다.

이러한 배위 패턴은 여기에서 볼 수 있는 위상 히스토그램에서 가장 잘 볼 수 있습니다. 여기에서 날카로운 마이크로 전극을 사용하여 Ps.Motor 뉴런의 수상돌기에서 얻은 세포 내 기록은 동일한 반신경절의 모든 PS 운동 뉴런의 세포외 활동으로 기록된 개별 뉴런의 위상 진동을 보여줍니다. 세포 내에서 기록된 뉴런을 식별하기 위해 날카로운 마이크로 전극과 이온 영동을 사용하여 세포를 분할할 수 있습니다.

이 그림에서 두 개의 di로 채워진 PS 운동 뉴런의 복부 소다는 신경 N 1의 기저부 뒤쪽에 위치합니다. 일차 신경돌기는 앞쪽으로 돌출되어 외측 신경 알약 내에서 분기됩니다. 축삭은 신경 N의 뒤쪽 가지를 통해 근육 조직으로 돌출됩니다.

이 기술을 숙달하면 제대로 수행하면 45분에서 1시간 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 신경 조직을 건강하게 유지하기 위해 정기적으로 식염수를 교체해야 한다는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 이 절차에 따라 세포 내 조정 메커니즘 분석, 이온 전류 측정 또는 특정 세포의 리듬 활동에 대한 신경 조절제의 영향을 연구하는 것과 같은 추가 질문에 답하기 위해 운동 뉴런 또는 인터 뉴런의 세포 내 기록과 같은 다른 방법을 수행할 수 있습니다.