그레이 스케일 분석을 사용하여 마우스의 탈모의 정량 분석​​을위한 새로운 기술

탈모증은 화학 요법의 부작용을 포함하여 다양한 조건에서 발생할 수 있는 일반적인 형태의 탈모입니다. 우리는 유망한 새로운 탈모증 치료법에 대한 연구를 용이하게 하기 위해 표준 젤 이미저를 사용하여 회색조 분석을 수행하여 쥐의 탈모를 정량화하는 방법을 개발했습니다.

이 절차의 전반적인 목표는 광 흡수를 사용하여 모발 밀도를 정량화하는 것입니다. 이것은 먼저 젤 이미저에서 동물을 촬영함으로써 달성됩니다. 다음 단계는 사진에서 관심 영역을 정의하고 관심 영역 내의 광 흡수를 결정하는 것입니다.

그런 다음 광 흡수를 사진 표준과 비교합니다. 궁극적으로, 유사하게 처리된 동물 간의 광 흡수율을 평균화하여 모발 성장에 대한 개입의 효과를 보여줄 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 편향되지 않고 정량화할 수 있으며 재현 가능하다는 것입니다.

이는 Inova와 같은 통계적 기법과 표준을 사용하여 결과의 통계적 유의성을 결정할 수 있기 때문에 매우 중요합니다. 이 프로토콜의 경우 반사 사진을 위해 광원이 내장된 젤 이미저를 사용합니다. 이렇게 하면 우수한 빛의 균일성이 보장되는 반면, 트랜스 조명은 분석에 적합하지 않은 silhouetting을 생성합니다.

먼저 젤 이미저를 준비하고 초점과 시야를 설정합니다. 일부 인쇄된 텍스트를 사용하면 실제로 작동하므로 마우스의 초점이 약간 흐려질 수 있습니다. 작은 관심 영역에서 양자 오류를 줄이려면 관심 영역에서 우수한 광학 평균화를 목표로 촬영된 영역 전체에 걸쳐 광원의 균일성을 검증하십시오.

다음으로 동물을 준비합니다. 빠르게 시작되고 작용 시간이 짧은 마취제를 선택하고 동물이 사진 촬영을 위해 가만히 있을 수 있을 만큼만 전달하십시오. 이제 이미저에 동물을 수직으로 가능한 한 평행에 가깝게 배치합니다.

등쪽 사진을 찍을 때는 동물을 팔다리를 쭉 뻗고 엎드린 자세로 촬영합니다. 복부 사진의 경우 동물을 누운 자세로 놓습니다. 측면으로 회전하지 않는지 확인하십시오.

이미지 간에 흡수 값을 가져올 수 있지만 이는 기계가 설계된 목적이 아닙니다. 따라서 그레이 스케일 표준을 추가하면 데이터를 컴파일할 때 흡수 값을 정규화할 수 있습니다. 이제 사진 영역에 그레이 스케일 표준을 배치합니다.

그런 다음 챔버를 닫고 카메라의 챔버로 들어갈 수 있는 주변 조명을 줄입니다. F 스톱을 관심 영역이 과포화 또는 과소 노출되지 않도록 하는 노출로 설정합니다. 그런 다음 사진을 찍습니다.

이미지가 포화 상태가 되도록 F 스톱을 선택하면 그레이 스케일 값이 값으로 고정되고 B는 아무 소용이 없습니다. 그런 다음 F.Stop을 1씩 변경하여 관심 영역과 표준을 선형 노출 범위로 유지하고 촬영이 완료된 상태에서 두 번째 사진을 촬영합니다. 동물들을 보온 테이블에 놓고 회복될 때까지 모니터링하십시오.

흉골 누워있음. 그런 다음 동물을 우리로 되돌리고 궁극적으로 완전한 회복을 위해 사육장으로 되돌립니다. 젤 이미징 소프트웨어를 사용하여 빛 흡수를 정량화하려면 전체 동물의 등쪽 보기를 위해 동물 이미지의 관심 영역을 표시합니다.

직사각형 이미지, 타원형 이미지 또는 자유형 도구를 사용하여 위쪽 팔다리에서 아래쪽 다리까지의 공간을 윤곽을 그리고 가능한 한 옆으로 확장됩니다. 동물의 배를 볼 수 있도록 동물의 뒤쪽 가장자리 내에 두십시오. 두 개의 사각형을 사용합니다.

하나는 손질된 골반 부위를 덮기 위한 것이고, 다른 하나는 손질되지 않은 가슴 부위를 덮는 것입니다. 약물이 투여된 장소와 같은 더 작은 관심 영역도 필요에 따라 표시할 수 있습니다. 둘째, 그레이 스케일 흡수 표준에 관심 영역을 표시합니다.

그런 다음 사진 간의 비교를 위해 표시된 각 관심 영역에서의 흡수를 기록합니다. 흡수에 대한 노출의 로그 로그 관계를 사용하여 흡수 수준을 백그라운드 표준으로 정규화합니다. 이를 위해 흡수 로그에 대한 노출 로그의 곡선을 그립니다.

그레이 스케일 흡수 표준에서 얻은 값을 사용하여 다음과 같이 각 사진의 표준 편차를 조정합니다. 먼저 ROI를 판독하기 위한 F-스톱과 참조에 대한 F-스톱을 선택하고 판독값 F-stop에서 모든 사진에서 표준의 평균 흡수를 계산합니다. 이 평균은 참조 표준 값 또는 RSV입니다.

다음으로, 각 사진의 판독값과 참조 F-Stop 설정 간의 흡수 차이를 계산하고 표준 및 정의된 각 ROI에 대해 동일한 계산을 수행합니다. 이제 하나의 F-스톱의 데이터를 사용하여 표시된 공식을 사용하여 각 ROI에 대한 수정된 흡수를 계산합니다. 그 후, 표준 통계적 방법을 적용하여 데이터 C3 HHEJ 생착 마우스를 분석하고, 탈모증 ADA를 모델링한 데이터는 다양한 노출에서 설명된 방법을 사용하여 분석되었습니다.

겹치지 않는 ROI의 변동은 예상대로 밀접한 상관관계를 보였습니다. 유사한 비교는 3주 동안 동일한 밀접한 상관관계를 생성했습니다. 예상되는 탈모를 정량화하기 위해 생쥐를 이미지화했습니다.

이미지화된 마우스의 80%가 이 기간 동안 탈모를 보였습니다. 이에 비해 정상 C 57 블랙 식스 마우스는 같은 기간 동안 탈모를 보이지 않았습니다. 두 번째 연구에서는 화학요법으로 인한 탈모증을 기술된 기법을 사용하여 정량화했다.

생쥐는 3주 동안 시클로포스파마이드로 치료를 받았고 2개월 후에는 대조군에 비해 상당한 탈모를 보였습니다. 마스터링하면 각 이미지를 5분 이내에 분석할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 표준 젤 이미징 시스템을 사용하여 설치류의 모발 성장량을 정량화하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.