당연히 여성 쥐 사이클링에 에어컨 공포의 멸종 유학을위한 프로토콜

이 절차의 전반적인 목표는 Esra 주기의 호르몬 상태가 낮거나 높은 상태에서 암컷의 공포 소멸 행동에 대한 생식선 호르몬의 효과와 에스트라디올이 외인성으로 투여될 때 에스트라디올의 역할을 조사하는 것입니다. 이것은 먼저 성인 암컷 쥐의 esra 주기를 모니터링하고 실험 전에 그들이 어떤 단계에 있는지 확인함으로써 수행됩니다. 다음으로, 발정기에 있는 동물들은 거주와 공포 조절을 위해 할당된 방에 배치됩니다.

다음날 동물이 발정기에 이르면 암컷에게 에스트라디올 또는 비히클을 주사하고 공포 소멸 훈련을 받습니다. 마지막으로, 셋째 날에는 동물들을 같은 방에 다시 넣어 전날 멸종 세션의 기억을 테스트합니다. 궁극적으로, EST strase 식별을 위한 질 면봉 채취를 통해 연구자는 생식선 호르몬의 자연적인 변동을 조작하여 공포 소멸 기억에 미치는 영향을 연구할 수 있습니다.

이 프로토콜은 남성과 여성의 공포 소멸 과정이 다른가와 같은 성차 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 그리고 만약 그렇다면, 이러한 차이를 충족시키는 호르몬 및 신경생물학적 메커니즘은 무엇입니까? 이 프로토콜의 가장 큰 장점은 방법을 공유함으로써 공포 멸종에 처한 여성에 대한 연구를 촉진하는 데 도움이 될 수 있다는 것입니다.

이러한 방법을 처음 접하는 연구자들은 절차가 시간이 많이 걸리고 적절한 기술에 크게 의존할 수 있기 때문에 eser 주기를 안정적으로 모니터링하는 데 어려움을 겪는 경우가 많습니다. 이러한 연구의 의미는 두려움 및 불안 관련 장애에 대한 성별에 따른 치료 옵션에 기여할 수 있습니다. 여성이 남성보다 이러한 정신 병리를 발병할 가능성이 두 배 더 높다는 점을 감안할 때 이는 중요할 수 있습니다.

Lisa man, 실험실의 박사후 연구원이자 은밀한 간호원. 실험실의 연구 조교가 발정 주기를 모니터링하기 위해 샘플을 수집하는 절차를 보여줄 것입니다. 0.9% 식염수를 준비한 후 면봉 어플리케이터를 액체에 담그고 종이 타월로 여분의 용액 끝을 닦아내고 쥐의 꼬리를 위로 잡고 고통을 일으키지 않도록 주의합니다.

면 끝을 너무 깊지 않은 질관에 부드럽게 삽입하고 벽 주위로 굴려 느슨한 질 세포를 빠르게 포착합니다. 너무 많은 액체를 옮기지 않는 동안 팁을 제거하고 어플리케이터 팁을 미리 라벨링된 현미경 슬라이드에 부드럽게 굴려 샘플이 슬라이드로 이동하도록 합니다. 최소 두 번의 완전한 주기 동안 샘플을 수집하고 하나의 슬라이드에서 며칠 연속으로 전송하여 일일 EST 추가 사항을 더 잘 추적하고 식별할 수 있습니다.

상변화 슬라이드가 건조되면 고정액에 10회 담근 다음 염색 용액에 10회 담그십시오. 그리고 마지막으로, counterstain 해결책으로 5 시간. 물로 부드럽게 헹굽니다.

컨디셔닝 실험을 시작하기 전에 현미경으로 보기 전에 슬라이드를 공기 중에서 완전히 건조시키고, 암컷이 환경에 적응할 수 있도록 3일 동안 하루에 20-30분 동안 집 조명을 켠 상태에서 컨디셔닝 챔버에 미리 노출시켰습니다. 그들이 미리 노출된 상자를 연구를 위한 챔버로 할당합니다. 행동과 EST 스트레스 주기에 영향을 줄 수 있으므로 냄새를 제거하기 위해 세션과 동물 사이에 상자를 철저히 청소하십시오.

동물이 EST 추가 주기의 발정 단계에 있는 것이 확인되면 습관화 조절 단계를 시작합니다. 자극 중에 동물이 모빌을 소비하는 시간을 측정하여 첫 번째 톤 상태 자극 전에 동결의 pret tone baseline 측정을 수행합니다. 시간 간격이 없으면 두 번째로 부동으로 소비된 것을 시도 기간으로 나누어 동결 점수 백분율을 계산합니다.

ME 발정기 동안 멸종 훈련을 실시하기 위해, 면봉으로 결정된 ESTRO 마지막 날에 쥐를 조건화합니다. 동물을 컨디셔닝 챔버에 넣고 습관화에 대한 CS 단독 시험을 수행합니다. 30초 동안 CS 톤을 유도합니다.

다음 시도 전에 평균 3분을 기다린 후, 컨디셔닝 전에 CS 단독 시도를 4회 더 반복하여 총 5번의 시도를 합니다. 발 충격 그리드 바닥을 전기 자극 발전기에 연결합니다. 0.5에서 0.6 밀리암페어의 자극 수준을 무조건 자극 또는 미국식으로 사용하고 4 킬로헤르츠 80 데시벨 톤을 습관화 세션 직후의 CS로 사용합니다.

32번째 CS 톤을 제시하여 공포 조건화에 대한 쌍을 이루는 CS US 시험을 시작한 다음 약 3분의 재판 간 간격으로 0.5초 US 쇼크를 시작합니다. 컨디셔닝 세션이 끝날 때 쌍을 이루는 시도를 6번 더 반복합니다. 동물을 다음 날 2일차까지 집 우리와 동물 시설로 되돌려 보냅니다.

프로토콜의 첫날을 거친 모든 동물에 대해 면봉을 채취하고 ME 발정기를 확인한 후, 각 동물이 호르몬을 피하로 투여하기 위해 킬로그램당 15마이크로그램을 투여받을 수 있도록 참기름 또는 0.9% 식염수에 충분한 에스트라디올을 준비합니다. 목으로 견갑골 사이의 느슨한 피부를 부드럽게 꼬집어 들어 올리고 피부 주름에 의해 형성된 삼각형에 주사기를 삽입합니다. 동물이 주사를 맞고 30분 후에 컨디셔닝 룸에 넣고 20 CS만 수행하여 소멸 훈련을 시작합니다.

각 시험은 32번째 4킬로헤르츠, 80데시벨 톤으로 구성되며 24시간 후 시험 사이에 약 3분이 소요됩니다. 셋째 날, 1일차와 2일차에 세션을 완료한 동물을 지정된 컨디셔닝 챔버에 넣은 후 면봉으로 닦습니다. 소환 세션이 완료되면 약 3분 동안 시험 사이에 약 3분 동안 3개의 C 단독 시험을 수행하여 멸종 소환 세션을 시작하고, 동물을 집 우리로 되돌려 보내고 이 공포 소멸 프로토콜의 텍스트 프로토콜에 따라 데이터를 분석합니다.

동물들은 멸종리환 기간 동안 행동실험 마지막 날에 낮은 두려움을 보였다. 여기에서 입증된 바와 같이, 수컷과 암컷 쥐는 조건화된 공포 표현에서 큰 차이를 보이지 않았다. 각 단계에서 동물을 높은 에스트로겐 ES 단계와 낮은 단계 그룹으로 별도로 분석할 때 성별 차이가 분명해집니다.

이 그래프는 EST 추가 주기의 낮은 에스트로겐 mees 단계에서 멸종 훈련을 받은 암컷 쥐인 공포 소멸 기억에 대한 estro 단계의 효과를 보여줍니다. 셋째 날의 멸종에 대한 기억과 PROE로 훈련된 기억을 기억하지 마십시오. 그러나 멸종 학습 전에 암컷에게 킬로그램당 15마이크로그램의 에스트라디올을 피하 주사하면 멸종 기억의 통합이 강화되는 것으로 보이며, 이는 멸종 회상 기간 동안 낮은 동결에서 알 수 있듯이 향상된 것으로 보입니다.

따라서 이러한 데이터는 생식선 호르몬이 공포 소멸 회상을 조절할 수 있으며, 조건화된 공포 소멸 행동의 성별 차이를 매개할 수 있음을 나타냅니다. 캐뉼레이션 수술 및 면역조직화학과 같은 추가 절차를 여기에 설명된 방법과 함께 수행하여 에스트라디올이 뇌에서 공포, 소멸, 기억 통합을 조절하기 위해 작용하는 위치와 같은 질문에 답할 수 있으며, 에스트라디올은 이러한 영역 내에서 뉴런 활동을 어떻게 변화시키는지와 같은 질문에 답할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 자연 재활용 암컷 쥐를 연구하는 방법과 명확한 ex 확장에서 에스트라디올의 영향을 명확하게 이해해야 합니다.