Name: 동시 전기 생리 녹화 및 설치류의 뇌에서 억제 에이전트의 마이크로 주사 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: 학습하세요 설치류 뇌에서 동시 전기 생리 녹화 및 억제 에이전트 마이크로 주사 방법을. 유리 피펫과 은선을 이용한 이 기술은 신경 활동 실시간 모니터링과 약물 전달을 가능하게 하여 신경과학 연구의 정확성을 높입니다.

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CIHR(MOP231122) 및 NSERC(RGPIN-2014-06503)의 보조금으로 지원됩니다. 실험을 준비하고 실험실 작업을 감독하는 데 도움을 주신 Geneviève Cyr에게 감사드립니다. MAL은 캐나다 자연 과학 및 공학 연구 위원회(NSERC)로부터 장학금을 받았습니다.

참고 : 모든 절차는 동물의 보호와 몬트리올 대학교의 윤리 검토위원회의 캐나다 협의회의 지침에 따라 수행되었다. 녹화 주입 피펫 1. 총회 <ol><li> 피펫 풀러를 사용하여 약 7cm 긴 유리 모세관 (1mm 외경)을 당깁니다. </li><li> 모세관의 끝을 휴식과 가벼운 현미경 조리개를 확인합니다. 내부 직경이 40 μm의 30 μm의 사이에 있는지 확인합니다. </li><li> 유리 피펫의 비 테이퍼 끝에서 돌출 약 1cm와 유리 모세관에 7cm 길이 실버 와이어를 삽입합니다. </li><li> 유리 모세관에 직교 초과 필라멘트를 구부리고. </li><li> 30 G 피하 주사 바늘의 축에 유연한 플라스틱 접착제의 방울을 적용합니다. </li><li> 그림 1에서 제시 한 설계도에 따라 유리 피펫에 30 G 피하 주사 바늘을 ​​삽입 </stro&gt; NG. </li><li> 유리 피펫 및 피하 주사 바늘 사이의 접합에서 적절한 밀봉을 보장하기 위해 접착제의 두 번째 코팅을 추가합니다. </li><li> 끝이 접착제의 적절한 경화를 보장하기 위해 약 12​​ 시간 동안 위로 향과 건조 피펫을 남겨주세요. 최종 결과는 그림 2에 표시됩니다. </li></ol> 참고 :이 절차는 급성 실험과 피펫 팁의 살균에 수행 할 필요가 없습니다. 2. 동물 준비 <ol><li> 마취 상자에 쥐를 놓습니다. </li><li> 5 내지 10 분 동안 4 % 이소 플루 란을 이용하여 마취를 유도한다. </li><li> 37 ° C의 체온을 유지하기 위해 가열 패드 및 직장 프로브 정위 테이블에 동물을 놓는다. 2 % 이소 플루 란 마취를 유지하기 위해 코 원뿔을 사용한다. 귀 바, 치아 홀더를 사용하여 쥐의 머리를 고정합니다. </li><li> 아트로핀은 동공 팽창에 도움이 떨어진다 1 %를 포함 안과 연고 또는 눈 방울을 적용합니다. 건조 함을 방지하기 위해, 드롭 윤활 적용약 30 분마다이야. </li><li> 머리를 면도 10 % 포비돈 - 요오드로 청소. </li><li> 국소 마취를 들면, 피부를 리프팅하고 바늘의 선단부를 삽입하여 위치 2-3에서 두피 아래에 2 % 리도카인 0.5 ml를 주입. </li><li> 발가락 핀치를 수행하고 운동의 부족을 관찰하여 마취의 적절한 수준을 확인합니다. 또한, 정상 값 (300-400 비트 / 분) 이내인지 확인 심박수를 모니터링. </li><li> 관상 및 시상 봉합을 모두 노출 # 10 메스 블레이드와 중간을 따라 직선으로 두피를 절개. </li><li> 수술 주걱으로 두개골을 덮고있는 조직을 옆으로 밀어 람다와 브레 그마 점을 알 수있다. </li><li> 브레 그마 및 람다 위치가 동일 평면에 있도록 수평을 두개골. </li><li> 참조 포인트를 설정하기 위해, 바로 위의 브레 그마로 설정하도록 장착 된 유리 튜브로 정위 장치를 사용한다. 이것은 &quot;제로&quot;에 대한 안테 - 후방 및 의대 될 것입니다IAL-측면 측정을 조정합니다. </li><li> , 정위 필요한 좌표로 마운트 이동하여 관심 영역을 설정 정위 좌표를 기록하고 개두술이 수행 될 위치를 표시하는 대상 영역 주위에 사각형을 그립니다. </li><li> 천천히 뼈 물질을 제거하기 위해 압력없이 천천히 표시된 사각형 따라 멸균 드릴 수술 드릴을 사용합니다. 이 피질에 병변이 열을 발생 원인이되므로, 같은 지역에 너무 오래 드릴하지 않도록주의하십시오. </li><li> 개두술을 구분 뼈가 충분히 얇은 될 때,주의 깊게 피질을 노출 핀셋 두개골 부분을 제거합니다. </li><li> 자주 조직 탈수를 방지하기 위해 인공 뇌척수액에 노출 된 피질을 관개. 주 : injectrode의 끝이 침투 할만큼 튼튼한 같이 경막 제거가 쥐에 필요하지 않습니다. </li></ol> 3. 채우고 주입 시스템의 설치 <ol><li> 작성미네랄 오일과 흡인에 의해 5 ~ 10 μL를 마이크로 실린. </li><li> 0.5 % 시카고 스카이 블루 (CSB) 및 300 μM의 γ - 아미노 부티르산 (GABA) 또는 0.5 % CSB 9 2 % 리도카인 용액의 용액으로 고정 유리 피펫으로 피하 주사 바늘을 ​​입력합니다. 식염수 모든 솔루션을 희석. <ol><li> 풍부한 물질의 경우에, 주사기를 사용하여 정기적으로 채우고 기포의 형성을 피하기 위해 평소 예방 기법을 사용한다. </li><li> 더 비싼 물질의 경우, injectrode 채우기 위해 미네랄 오일을 사용하고 화학 제는 다음 흡인에 의해 도입 될 수있다. 미네랄 오일과 물 사이의 밀도 차이가 비교적 높고,이 물질은 수용액의 주입을위한 좋은 후보이다. 주 : 염료 모두 액체 사이의 거리를 확인하기 위해 추가 될 수있다. </li></ol></li><li> 주입 피펫을 채우려면, 흡인에 의한 용액 1 ML의 주사기를 기입 한 후 천천히 솔루션을 주입주입 피펫으로. </li><li> 깨끗한이 지역을 보라고 더욱 주사기와 천천히 용액을 주입하여 누출을 관찰하여 그림 1에 표시된 지역에서 누출 세심한주의를 기울이십시오. </li><li> 1 ML의 주사기를 제거합니다. 이렇게되면, 진공 주입 피펫의 용액을 제거하지 않도록 플런저에 가벼운 압력을 유지해야합니다. </li><li> 흡인에 의해 미네랄 오일과 마이크로 실린를 채우고 가득 주입 피펫에 단단히 부착, 조심스럽게 거즈와 조립 injectrode에서 초과 솔루션을 닦아. </li><li> 끝이 유리 피펫의 끝에서 형성 작은 ​​방울을 볼 수있을만큼 아주 작은 볼륨을 주입에 의해 차단되지 않았는지 확인합니다. </li><li> 마이크로 시스템의 injectrode를 탑재하고 잘 고정되어 있는지 확인합니다. </li><li> 조심스럽게 목표 좌표 injectrode 팁을 놓고 피질의 표면에 팁을 낮 춥니 다. </li><li> 천천히 injectr을 낮출적절한 해부 좌표를 사용하여 상기 타겟 구조 정위 장치 (이 경우에는 우수한 둔덕)를 사용 ODE. </li><li> 조직의 탈수를 방지하기 위해 따뜻한 한천에 노출 된 피질을 커버. </li></ol> 4. 사출 및 가역 불 활성화 <ol><li> 주입을 시작하는 40 NL / 분 키를 누릅니다 실행에 400 NL (800)에 주입하는 미세 주입 펌프를 설정합니다. 그 스파이크 속도가 주입 동안 감소를 보여줍니다 있습니다. 참고 : 실험 설정에서 신경 활동은 GABA 전달의 종료 후 시간 이내에 복구. 상관 조정 기계 장치는 분사를 실시하기 위해 마이크로 인젝션 주사기에 압력을 적용하는데 사용될 수있다. </li><li> 전기 생리 데이터를 수집 한 후, 지역의 동물 윤리 커뮤니티 승인 한 방법을 사용하여 안락사. </li></ol>

<ol><li>Martin, J. H., Ghez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+inactivation+in+the+analysis+of+the+central+control+of+movement%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Pharmacological inactivation in the analysis of the central control of movement.</a> Journal Of Neuroscience Methods. 86 (2), 145-159 (1999).</li>
<li>Ponce, C. R., Hunter, J. N., Pack, C. C., Lomber, S. G., Born, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contributions+of+indirect+pathways+to+visual+response+properties+in+macaque+middle+temporal+area+MT%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+Of+Neuroscience+The+Official+Journal+Of+The+Society+For+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Contributions of indirect pathways to visual response properties in macaque middle temporal area MT.</a> The Journal Of Neuroscience The Official Journal Of The Society For Neuroscience. 31 (10), 3894-3903 (2011).</li>
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<li>Diao, Y., Wang, Y., Xiao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Representation+of+the+binocular+visual+field+in+the+superior+colliculus+of+the+albino+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Representation of the binocular visual field in the superior colliculus of the albino rat.</a> Experimental Brain Research. 52 (1), 67-72 (1983).</li>
</ol>

우리는 공개할 것이 없습니다.

현재 제안 된 프로토콜은 가역적 불활 방법에서 발생하는 문제점을 해결하기 위해 설계되었다. 특히,이 프로젝트는 특히 깊은 뇌 구조에서, 신경 활동을 조절 물질의 화학 microinjections에 사용되는 방법을 구체화하기위한. 이러한 유형의 설정 신흥 기술 과제는 모두 프로브는 주사 부위에서 정확한 기록을 유도하기 위해 생체 내에서 같은 제한된 공간에서 colocalized하기 위해서는 필요하다. 이 문제는 동일한 사이트에서 모두 주입하고, 기록 할 수있는 예컨대 여기에 제시된 것과 같은 장치를 사용하여 극복 될 수있다. 다른 방법은 가스 압력 펄스에 기초하여 장치의 사용을 포함한다. 이러한 툴은 수년 동안 사용되어 왔지만, 압축성 중간체의 사용은 사출 속도 및 양, 가역성을 보장하도록 제어하는​​ 것이 중요하다 개의 파라미터에 대한 제어를 감소시킨다. 이러한 이온 삼투압 주입 같은 다른 방법들하여 점검도 가능하지만, 액체의 확산은 불 활성화 동력학의 전위 범위를 감소 루스 주사 대 다르다. 이러한 방법은 마...

피질 영역과 서브 피질 핵의 불 활성화는 다양한 뇌 구조 2-4 사이의 기능적 관계의 연구에서 중요하다. 최근 문학 뇌 구조 2,5의 역할을 연구하는 기능 상실 화학 물질 또는 극저온 기술을 채용하고있다. 주변 조직에 -6,7- 담보 손상을 최소화하면서 약리학 microinjections에 관련하여, 약물의 작은 볼륨 조절 된 속도로 뇌 영역으로 투여 될 수있다. 이 기술은 신경 세포 활성도에 대한 다른 약물 표적의 효과를 연구하기 위해 특정한 효능 제, 역 효능 제 또는 길항제를 전달하는데 사용될 수있다. 이러한 효과는 또한 다른 연구자 피질과 피질 하 구조 사이의 관계를 연구 할 수 있도록 먼 위치에서 신경 반응의 변화를 측정함으로써 조사 될 수있다. 여기서는 보 수있는 장치의 조립, injectrode을 보여전기 생리 신호를 기록 및 목표 위치에서의 약물 전달을 소량 번째. 우리 래트에서 우수한 둔덕, GABA, 신경 세포 활성도의 일반적인 억제제를 주입하여이 시스템의 능력을 입증한다. 이 지역은 우리가 injectrode 현지화를 확인하기 위해 시각적으로 유발 멀티 유닛 활동을 사용할 수 시각적 자극에 민감하다. 불 활성화의 가역성은 GABA 분사 종료 후 정상적인 신경 활성의 회복에 의해 평가 하였다. 주사 부위에서 멀티 유닛 활동을 모니터링 할 수있는 능력은 바람직한 약물 동태 학적 반응을 달성하는데 필요한 사출 속도와 볼륨의 미세 조정을 허용한다. 최소 유효 부피가 주입되기 때문에, 따라서,이 기술의 장점은, microperfusion으로 인한 조직 손상을 제한하는 전위이다. 제안 된 프로토콜은 일회용 하드웨어 necessar를 생성하기위한 비용 효율적인 방법을 제공한다약물 전달과 지역의 연결 활동 기록이 요구되는 수행 실험 Y.

<table><tbody><tr><td>분사 펌프 (UltraMicroPump III)</td><td>WPI</td><td>#UMP3</td><td></td></tr><tr><td>분사 콘솔 (Micro4 컨트롤러)</td><td>WPI</td><td>#SYS-MICRO4</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton 실린지</td><td>Hamliton</td><td>(80301) 701LT 10 &micro; L SYR</td><td>5와 10 사이 주사기 &mu; 나는 유연한</td></tr><tr><td>플라스틱 접착제</td>를 사용했습니다. <td>Lepage</td><td>393915</td><td>젤 형태는 30&nbsp의 샤프트에 적용하기가 더 쉽습니다. G 피하 주사 바늘은 건조시 방수 씰을 형성합니다.</td></tr><tr><td>유리 피펫</td><td>WPI</td><td>#TW100F-4</td><td>얇은 벽, 1&nbsp; mm 외경, 0.75&nbsp; 필라멘트 피펫이 있는 mm ID는</td></tr><tr><td>720 Needle Pipette Puller</td><td>Kopf</td><td>720</td><td></td></tr><tr><td>Silver wire</td><td>A-M Systems, Inc.를 사용했습니다.</td><td>782500</td><td>베어 0.010"</td></tr></tbody></table>

동시 전기 생리 녹화 및 설치류의 뇌에서 억제 에이전트의 마이크로 주사

Simultaneous Electrophysiological Recording and Micro-injections of Inhibitory Agents in the Rodent Brain

여기서 우리는 상업적으로 접근하고 저렴한 부품을 이용하여 단일 사용 &quot;injectrode&quot;의 건설 방법을 설명한다. 프로빙 시스템은 영향받은 뉴런 집단에서 전기 생리 신호를 기록하는 동안 약물의 주입을 허용하는 개발되었다. 이 방법은 상용 솔루션을 간단하고 경제적 인 대안을 제공합니다. 유리 피펫은 피하 주사 바늘과 실버 필라멘트와 결합하여 수정되었습니다. injectrode은 약물 전달을위한 상업 마이크로 실린 펌프에 연결되어 있습니다. 이것은 약물 전달의 사이트에서 유래 다세대 세포 외 신호를 통해 실시간 약력학 피드백을 제공하는 기술을 초래한다. 개념의 증거로서, 우리는 병용 injectrode을 통해 약물의 배달, 쥐에서 빛의 섬광에 의해 유발 우수한 둔덕에서 신경 세포의 활동을 기록했다. injectrode 기록 용량 INJ의 기능적 특성을 허용약물 전달의 현지화를 정확하게 제어 선호 ection 사이트. injectrode에로드 된 화학 물질의 선택은 해부학 실험 마커를 추적 포함, 광대로이 방법의 응용 프로그램은 또한, 지금까지 여기에 입증되는 것 이상으로 확장합니다.

injectrode의 구조는 와이어의 절곡 부와 유리 피펫 (D)로 공급되고, 개구로부터 밖으로 돌출되어있다도 1은 와이어 (C)에 도시되어있다. 30 G 바늘 (B)는 부착 접착제와 유리 피펫의 개통에 밀봉된다. 피펫은 주입 물질로 충전 된 후, 유리 마이크로 주사기 (A)가 바늘에 부착된다. 이것은 마이크로 주사기 바늘 (E) 및 여기서 은선은 유리 피펫 (F)로부터 돌출와 연결 양호한 시일이 존재하는 것이 중요하다. 2 injectrode가 조립 완료 후의 모습의 사진을 보여준다. 멀티 유닛 시각 유발 활성은도 3에 도시 된 바와 같이 반대편 눈에 300 밀리 초 플래시 다음 우수한 둔덕 얻었다. GABA의 주입시 억제 플래시 자극에 응답하여 활성을 급상승. 시각적분사가 정지 한 후 유발 멀티 유닛 활동은 일반적으로 60 분에 45 사이에 돌아왔다. ...

여기에서는 약물의 미세 주입에 의한 뇌 심부 구조 억제와 동시 전기 생리학적 기록을 통한 실시간 모니터링이라는 두 가지 기능을 가진 유리 피펫을 제작합니다.

Here we describe a method for the construction of a single-use &#8220;injectrode&#8221; using commercially accessible and affordable parts. A probing ...

본 절차의 전반적인 목표는 다단위 신경세포 활동을 모니터링하는 동시에 쥐의 상구(superior colliculus)에 신경전달물질을 미세 주입할 수 있는 저비용의 주입 도로를 구축하는 것입니다. 이는 먼저 유리 모세관과 수직 마이크로 피펫 풀러(vertical micro pipette puller)를 사용하여 유리 피펫을 제작함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 은선을 모세관에 삽입하여, 테이퍼 처리가 되지 않은 끝단 밖으로 은선 일부가 돌출되도록 하는 것입니다.다음으로 유리 피펫과 피하 주사침 사이에 기밀한 밀봉을 형성하기 위해 접착제를 사용합니다. 마지막 단계는 마이크로 인젝터에 고정되고 미네랄 오일이 채워진 마이크로 시린지에 연결된 피펫에 시카고 스카이 블루 색상의 GABA 용액을 채우는 것입니다. 결과적으로, 구하기 쉽고 저렴한 부품으로 제작된 이 주입 장치를 통해 약물을 주입하기 전, 중, 후에 비활성화된 영역의 뉴런 활동을 기록하면서 뇌 심부 구조를 비활성화할 수 있습니다.이 기술은 가스 기반 압력 펄스 및 광주입 시스템과 같은 기존의 다른 방법들에 비해 몇 가지 장점이 있습니다. 우선, 약물 전달에 대해 기능 기반 제어가 가능한 비용 효율적인 방법으로, 과잉 주입으로 인해 발생하는 조직 손상을 제한할 수 있습니다. 또한 이 시스템이 제공하는 또 다른 장점은 통합 기록 능력이 있어, 신경 비활성화의 시간적 요소에 대한 효율적인 제어가 가능하다는 점입니다.기록용 주입 피펫을 준비하려면, 먼저 Cop vertical 모델 7-20 또는 유사 장치를 사용하여 외경 1 mm, 길이 7 cm의 모세관을 뽑아냅니다. 가열기는 18로, 솔레노이드는 1로 설정하십시오. 다음으로, 장갑을 착용한 상태에서 팁을 수동으로 부러뜨려 개구부를 만들고, 현미경 하에서 내경이 30 µm에서 40 µm 사이인지 확인하십시오.뷰파인더의 자를 사용하여 이를 측정하십시오. 그러면 0.3에서 0.6 mega ohms의 상대적으로 낮은 임피던스가 생성됩니다. 그런 다음 테이퍼지지 않은 끝단에서 약 7cm 길이의 은선을 피펫에 삽입하고, 1~2cm 정도가 피펫 밖으로 나오게 둡니다.이 여분의 와이어를 모세관과 직각이 되도록 굽힙니다. 다음으로, 30 gauge 하이포더믹 바늘을 준비하여 바늘 축에 유연한 플라스틱 접착제를 도포합니다. 그런 다음, 바늘을 피펫 안에 천천히 삽입합니다.가능한 한 최대한 밀착시키십시오. 피펫과 바늘의 접합부에 접착제를 더 추가하여 밀봉합니다. 피펫 팁을 위로 향하게 한 상태에서 조립체가 약 12시간 동안 건조되도록 둡니다.쥐를 마취하여 정위 고정 틀에 고정한 후, 안연고를 도포하고 머리 부분을 깨끗이 면도합니다. 국소 마취제를 투여하고 수술 가능한 수준의 마취 상태임을 확인한 뒤, 10번 메스 날을 사용하여 정중선을 따라 두피를 절개합니다. 이를 통해 관상 봉합선과 시상 봉합선이 노출됩니다.그런 다음 외과용 스패튤라를 사용하여 Lambda와 bgma 해부학적 기준점을 확인합니다. 이 기준점들이 동일한 수평면상에 놓이도록 머리의 위치를 조정합니다. 그 후 유리관과 같이 가늘고 단단한 포인터를 bgma에 맞추어 영점을 조절합니다.다음으로, bgma의 좌표를 사용하여 튜브의 위치를 관심 영역으로 조정합니다. 네임펜을 사용하여 두개골 절개술을 위한 표적 영역 주변에 사각형을 그립니다. 이제 외과적으로 멸균된 드릴을 사용하여 표시선을 따라 천천히 뼈를 제거합니다.최대한 낮은 압력을 가하며 드릴을 계속 움직여, 뼈가 얇아졌을 때 마찰로 인해 발생하는 두부 유도 조직 손상을 방지하십시오. 핀셋을 사용하여 사각형 구획을 조심스럽게 제거합니다. 주입물이 향후 이를 관통하므로 Dora MA는 제거할 필요가 없습니다. 노출된 피질은 뇌척수액으로 계속 세척하십시오.먼저 5~10 µL 시린지에 미네랄 오일을 채워 주입물을 준비합니다. 다음으로, 생리식염수에 염료를 섞어 대상 약물을 준비합니다. 여기서는 0.5% Chicago sky blue를 300 µM GABA와 혼합합니다.먼저 1 mL 주사기에 준비된 용액을 채운 다음, 이 주사기를 사용하여 인젝션 피펫을 채웁니다. 주사기를 제거할 때 플런저를 가볍게 누른 상태로 유지하여 진공으로 인해 인젝션 로드에서 용액이 빠져나오지 않도록 합니다. 누출 가능성이 있는 지점에서 액체가 새어 나오는지 확인하십시오.여분의 액체를 닦아내고 누출 여부를 다시 확인하십시오. 이제 미네랄 오일이 담긴 마이크로 시린지를 주입 로드에 연결하십시오. 그런 다음 여분의 용액을 닦아내십시오.거즈를 사용합니다. 주입 팁을 확인하십시오. 소량의 용액 방울이 흘러나와야 하며, 그렇지 않을 경우 팁이 막힌 것입니다. 이후 인젝터를 마이크로 펌프 시스템에 단단히 장착하십시오.그다음 주입 경로의 위치를 목표 좌표로 이동시키고, 시각 유발 전위(visual evoked potentials) 기록을 통해 확인할 수 있는 상구(superior colliculus)까지 전극을 내립니다. 전극을 내리는 동안, 막힘을 방지하기 위해 낮은 속도로 주입하여 소량의 양압을 가합니다. 목표 구조에 도달하면 주입을 중단합니다.주입기를 삽입한 후, 건조를 방지하기 위해 노출된 피질을 따뜻한 한천(agar)으로 덮습니다. 전극을 최종적으로 배치한 후, 전극 주변 조직이 안정화될 때까지 30분 동안 기다립니다. 그 다음, 상교구(superior colliculus)에서 신경 활동의 활성화가 나타날 때까지 분당 40 nanoliters의 속도로 400 내지 800 nanoliters의 용액을 주입하며, 억제성 용액을 주입하는 동안 전극에서 스파이크(spike)의 감소가 관찰되어야 합니다.상구(superior colliculus)에서 시각 유발 전위를 측정하였습니다. GABA를 주입한 후 반대측 눈에 300 millisecond 동안 플래시를 조사한 결과, 플래시 자극에 대한 스파이킹 활성이 45분에서 60분 동안 억제되었습니다. 이 절차를 수행하는 동안, 로딩 중 누출 여부를 확인하고 약물 용액이 주입 팁을 통해 원활하게 흐르는지 검증하는 것이 중요합니다.

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Neuroscience

신경과학

우리는 신경 활동과 혈액 산소 수준의 종속 (굵게) MRI 신호 사이의 관계의 조사를 위해 플랫폼을 제공하고 동시에 기능성 자기 공명 이미징 및 쥐 두뇌에 electrophysiological 기록하는 방법을 개발했습니다.

쥐 두뇌에 동시 fMRI와 전기 생리학

절차는 뇌파, electromyogram, 그리고 뇌성 젖산 농도를 모니터링하는 동안 optogenetically 뇌성 대뇌 피질의 피라미드 뉴런의 활동을 조작하기위한 설명되어 있습니다. 사람들이 자연 수면 / 웨이크주기를 받아야 동안 실험 녹음 케이블 테 더링 마우스에 수행됩니다. Optogenetic 장비는 우리의 실험실에서 조립, 녹화 장비는 상업적으로 사용할 수 있습니다.

동시 Electroencephalography, 설치류 대뇌 피질의 젖산 농도와 Neuronal 활동 Optogenetic 조작의 실시간 측정

이 프로토콜은 마취된 쥐의 표적 뇌 부위에 약물을 정확하게 전달하기 위한 주입체의 조립 및 사용을 개략적으로 설명한 다음 기록된 전기 신호를 통해 신경 세포 활동을 모니터링합니다.

쥐의 뇌에서 전기생리학적 기록을 통한 약물 미세주입

이 비디오는 여러 부위의 뇌 활동에 대한 전기 생리학적 기록을 위해 마취된 쥐를 준비하는 자세한 절차를 보여줍니다. 두개골에 접근하기 위해 두피를 절개하고, 정확한 위치에 구멍을 뚫어 전극을 설치하고 고정합니다. 그런 다음 텅스텐 마이크로 와이어 전극을 대상 위치에 삽입하여 데이터를 기록합니다.

쥐의 여러 부위에서 뇌 활동에 대한 생체 내 전기생리학적 기록

이 비디오는 통합 마이크로 드라이브 어레이를 사용하여 쥐의 여러 뇌 영역에서 동시 전기 생리학적 기록을 보여줍니다. 기록 전극은 후각구에, 참조 전극은 전두엽 피질에, 마이크로 드라이브 어레이 전극은 해마에 배치됩니다. 쥐는 자유롭게 먹이를 찾을 수 있으며, 이식된 모든 전극의 동시 기록은 어레이를 사용하여 기록됩니다.

여러 뇌 영역의 전기생리학적 기록을 위한 마이크로 드라이브 어레이 방법

이 비디오는 마취된 쥐에서 공동 국소 뇌파검사(EEG)와 국소 자기장 전위(LFP)를 동시에 기록하는 절차를 보여줍니다. 이 과정에는 쥐를 준비하고 수염 패드에 자극 전극을 부착하는 것이 포함됩니다. 표면 EEG 측정을 위해 EEG 거미 전극을 쥐의 두개골에 놓습니다. 동시에 다채널 미세전극은 두개골의 버 구멍을 통해 특정 뇌 영역에 삽입되어 국소화된 뇌 영역의 신경 활동을 기록합니다.

마취된 쥐의 동시 뇌파 및 국소 자기장 전위 기록(Concurrent Electroencephalographic and Local Field Potential Recordings in an Anesthetized Rat

출처: Lai, J., et al. 설치류 뇌에서 억제제의 동시 전기생리학적 기록 및 미세 주사. J. Vis. 경험. (2015년)이 비디오는 쥐 상골에서 동시 신경 기록 및 억제를 위한 미세 주입 기반 기술을 보여줍니다. 이 절차에는 정위 표적화, 두개골 드릴링, 신경 활동을 기록하면서 억제성 신경 전달 물질을 전달하는 주사대 삽입이 포함됩니다. 빛 자극은 활동 전위를 유발하는 반면 약물 미세 주사는 신경 흥분성을 억제합니다. 신경 전달 물질 수치가 감소함에 따라 신경 활동이 기준선으로 돌아가 억제와 회복에 대한 연구가 가능해집니다.

쥐에서 신경 활동의 억제 및 전기생리학을 사용한 검출

깨어 있는 쥐의 기록 부위 부근에서 세포 외 신경 활동을 동시에 기록하고 여러 신경 활성 물질을 방출하는 전극 구성 방법을 제시합니다. 이 기술을 사용하면 관심 있는 뉴런에 대한 추정 국소 시냅스 입력값을 자세히 분석할 수 있습니다.

깨어 마우스의 신경 활성 물질의 Microiontophoretic 응용 프로그램과 결합하여 신경 활동의 세포 외 기록

이 프로토콜의 공동 화 된 electroencephalography (뇌 파)와 멀티-층 류 지역 필드는 마 취 쥐에 잠재적인 동시 녹음에 대 한 간단한 방법을 설명합니다. EEG 신호의 무시할 수 왜곡을 생산 하는 microelectrode의 삽입에 대 한 두개골에 드릴 버 구멍 표시 됩니다.

공동 화 된 Electroencephalography 및 설치류에서 로컬 필드 가능성의 동시 녹음

우리는 microelectrode 배열을 사용 하는 설치류 뇌 조각에 4 aminopyridine 이용한 epileptiform 활동의 기록 및 전기 변조를 수행 하는 방법을 보여 줍니다. 사용자 지정 녹음 실 조직 생존 연장된 실험 세션에 걸쳐 유지합니다. 전극 매핑 라이브 고 자극 쌍의 선택 사용자 지정 그래픽 사용자 인터페이스에 의해 수행 됩니다.

녹음 및 Microelectrode 배열에 결합 하는 설치류 뇌 조각에 Epileptiform 활동의 변조

당사는 전기 생리학을 위해 설계된 마이크로인로드 시스템을 제시하고 선택적 약물 주입과 함께 실험 프로브(즉, 나노센서, 마이크로전극)의 보조 전달을 지원합니다. 널리 이용 가능한 미세유체 성분은 프로브를 함유하는 캐뉼라에 결합된다. 마이크로 인젝트 로드 건설을위한 단계별 프로토콜이 포함되어 있으며, 마카크 피질에서 muscimol 주입 중 결과가 있습니다.

결합 된 약물 주입 및 전기 생리학을위한 마이크로 인젝트 로드 시스템

학습하세요 설치류 뇌에서 동시 전기 생리 녹화 및 억제 에이전트 마이크로 주사 방법을. 유리 피펫과 은선을 이용한 이 기술은 신경 활동 실시간 모니터링과 약물 전달을 가능하게 하여 신경과학 연구의 정확성을 높입니다.

동시 전기 생리 녹화 및 설치류의 뇌에서 억제 에이전트의 마이크로 주사

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