Name: 티슈 엔지니어링 혈관 이식 및 이후의 이식을위한 수술 기법 생체 모니터링 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: 배우세요 양의 경동맥에 조직공학혈관을 이식하고 실시간 혈류 및 혈압을 모니터링하는 수술 기법. 이 프로토콜은 혈관이식물의 생체 내 재형성을 연구하는 표준화된 방법을 제공합니다.

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이 작품은 국립 심장 및 폐 연구소 (R01 HL086582)와 뉴욕 줄기 세포 과학 기금 (NYSTEM, 계약 # 보조금에 의해 지원되었다 &#160; STA와 존 나이 퀴 스트 완료 한 조브 비디오에 사용 된 DDS 그림을 C024316); 버팔로 뉴욕 주립 대학에서 의학 일러스트 레이터.

참고 :이 프로토콜은 버팔로 뉴욕 주립 대학에서 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 1. 수술 전 준비 <ol><li> 다음 연구를위한 (40-60kg의 무게와 약 1~3년 된 도싯 크로스, 여성,) 양을 사용합니다. 수술 3 일 전 시작, 입으로 사이클로스포린 A (200 ㎎ / 일), 아스피린 (975 ㎎ / 일) 및 쿠마딘 (20 ~ 30 ㎎ / 일)를 관리하고 모든 연구 기간 동안 계속합니다. </li><li> 확인 양이 수술 전 12 시간 (일반 공급 = 1.8 kg 건초 및 0.4 kg 곡물)를 금식하고있다. </li><li> 스팀 121 ° C에서 오토 클레이브 30 분 15 PSI를 사용하여 모든 수술 용품을 소독. </li><li> 수술 전에 파라 포름 알데히드 데시 케이 터 48 시간에서 다음과 같은 항목을 배치 : 4mm 도플러 흐름 프로브, 1mm 초음파 결정, 내주 동맥 카테터, 확장 튜브, 42 &quot;타이곤 튜브를. 참고 : 필요한 관련 의료 기기 테이블수술과 살균은 표 1에 나열되어 있습니다.이 단계에서 타이곤 튜브에 장비의 사전 배치는 수술하는 동안 시간을 절약하는 데 도움이됩니다. <ol><li> 왼쪽 해당하는 경우, 권리로 프로브, 카테터 및 결정의 각 끝에 레이블. </li></ol></li></ol> 2. 수술 <ol><li> 디아제팜 (0.5 ㎎ / ㎏) 및 케타민 (4 ㎎ / kg)로 마취를 유도 양 정맥 내 (IV). 또한, Telazol (4 ㎎ / ㎏) IV를 사용합니다. <ol><li> 8.5-10.0 mm 내경 수갑을 차고 기관 튜브 7 orotracheal 삽관을 수행합니다. </li><li> 호흡량 인공 호흡기 (7 ~ 10 ㎖ / kg) 또는 압력 조절 인공 호흡기로 호흡 낭 회로를 통해 흡입 마취를 관리 (15-20cm H 2 O). 깊은 수술 마취 단계에 매체에 도달하기 위해 적절한 양 (3 % 처음 -4 %)에서 이소 플루 란 또는 세보를 관리하는 정밀 기화기를 사용합니다. 최소 폐포 농도양이 1.4 % 나 각각 8 1.9 %이다. </li><li> 자극, 눈꺼풀 반사, 눈 위치, 및 심장 박동에 모터 반응을 관찰하여 마취 깊이를 평가합니다. 혈중 산소 포화도 (95 % -100 %) 맥박 산소 측정기를 사용하여 모니터, CO 2 호 기말 이산화탄소 분압을 사용하여 호기 가스 중의 농도 (45 ~ 55 mmHg로)와 자동 조절 온난화 블랭킷을 사용하는 절차 (38.5-39.5 ° C) 동안 체온을 유지한다. </li></ol></li><li> 양의 전체 목 울 면도, 한 두개의 정맥을 통해, 표준 가위에 # 40 블레이드를 사용하여. 70 % 이소 프로필 알코올 7.5 % 베타 딘 스​​크럽 포화 거즈를 사용하여 수술을 두 사이트의 피부를 준비합니다. 피부 오일의 제거를 용이하게하기 위해 알코올 거즈로 시작합니다. 베타 딘 거즈과 알코올 사이의 대체는 세 번 거즈. </li><li> 온난화 담요 위에 지느러미 드러 누움에 조작 테이블에 양을 놓습니다. 위 내용물의 수동적 퇴학 수 있도록 중간 크기의 orogastric 튜브를 전달합니다. 확장위치를 유지하기 위해 양의 목 및 지원 쿠션을 사용합니다. <ol><li> 7.5 %의 베타 딘 적신 거즈를 사용하여 최종 무균 스크럽을 수행하고 수술 전에 5 분 동안 앉아 할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 두개의 정맥에 배치 angiocath를 통해 10 ㎖ / ㎏ / 시간 IV 유체 (락 테이트 링거액 또는 0.9 % 생리 식염수)을 관리합니다. 페니실린 G 프로 카인 6,600 U / kg 근육 주사 (IM), 겐타 마이신 1.6 ㎎ / kg IM 및 프레 놀핀 0.005-0.01 mg을 IV 또는 IM : 수술 항생제와 진통제를 관리. </li><li> 전기 소작을 사용하여 복부 정중선 목에 걸쳐 길이 ~ 12cm의 절개를합니다. 무딘 절개 기술을 사용하여 결합 조직을 제거하여 좌측 및 우측 경동맥 (~ 6cm)을 격리. 묶어 출혈을 최소화하기 위해 경동맥에서 분기 미세 혈관을 소작. </li><li> 모든 배선 및 배관 (흐름 프로브, 초음파 크리스탈 와이어를 굴을 파기을 지원하기 위해 (비 멸균) 외과 간호사를 활용하여 불임을 유지피부 및 피하 층 카테터 튜브). 배 외측 목에 수술 수험 공부를 절개를 통해 종료 무딘 투관침을 사용합니다. <ol><li> 무균 드레이프에서 도달 범위 및 목의 측면 드레이프에서 가시화 될 수 있도록 양의 머리를 켜십시오. </li><li> 복부 정중선 목 절개 및 목의 측면 사이의 피하 공간을 통해 터널에 8cm 곡선 지혈을 사용합니다. 열고 퉁명스럽게 넓은 ~ 튜브 1.5 cm를 공간을 해부 지혈을 닫습니다. 지혈의 끝은 오른쪽 또는 왼쪽 귀에 약 10cm 꼬리 머리와 어깨 사이 중간에 있어야합니다. 팁 표피 쪽을 가리되도록 지혈을 돌립니다. </li><li> 무균 드레이프에서 도달 범위 및 멸균 # 11 블레이드와 지혈의 팁을 통해, 피부를 통해 1.5 cm 절개를합니다. 피부를 통해 명확한 종료를 확인하는 지혈의 팁을 시각화. </li><li> 함유 타이곤 튜브 합격피하 터널을 통해 LL 배선 및 배관. 멸균 드레이프 위의 전선 및 튜브를 잡습니다. </li><li> 이 양의 목을 나갈 때 이식 배선을 노출, 목에 외부 타이곤 튜브를 제거 드레이프 아래에 도달. 피하 공간에서 느슨한 부분을 최소화하기 위해 각각의 라인을 잡아 당깁니다. 제대로 동맥에 기기를 연결하기에 충분한 거리를 둡니다. </li></ol></li><li> 모두 경동맥에 4mm 도플러 흐름 프로브를 놓고 초기 읽기 (그림 1) 달성. 30 분 동맥을 체결하기 전에 헤파린 IV의 100 U / kg을 관리합니다. </li><li> 수술이 끝날 때까지 100 U / kg / 시간에 헤파린 투여를 계속합니다. 비 분쇄 혈관 클램프를 사용하여 경동맥 클램프 부 (길이가 약 4cm)을 절제. 반대측 경동맥 유량은 뇌 혈류를 유지하기 위해 50 % -100 %를 증가 할 것이다. 참고 : 제거하여 네이티브 선박의 반동에 의해 길이 방향의 신축성을 제한 할 수보다 짧은 세그먼트를 대체 및 / 또는 혈관에 네이티브 동맥 문합 연신 전체 절차가 완료 될 때까지의 간격을 짧게하는 클램프된다. 이 개별 지주 봉합에 긴장과 이식 이식을 제한하는 데 도움이됩니다. </li><li> 7-0 프롤린 ethalloy 더블 무장 모노 필라멘트 봉합사 간단한 중단 바늘을 사용하여 장소에 TEV를 봉합. 필요한 경우, 문합 봉합을 방해 할 혈관 수축을 방지하기 위하여 이러한 베린 (15 ㎎ / ㎖) 또는 국소 네이티브 혈관계에 니 카르 디핀 (1.25 ㎎ / ㎖)로서 혈관 평활근 이완제를 적용. 참고 : 약 1mm 간격으로 봉합을 배치 시작합니다. 이것은 크게 케이스에서 경우에 따라 다를 수 있습니다. 구성과 TEV 두께는 봉합 사이의 유효 거리에 영향을 미칠 것입니다. 또는 TEV 감소 네이티브 조직의 두께, 그것은 봉합 가깝게 배치 할 필요가있다. <ol><li> 먼저 앵커 두 개의 반대의를 배치하여 네이티브 동맥에 TEV의 네 점모두 근위부에 titches 및 말단부 (그림 2 디). 지혈제를 사용하여 가르쳐 각각의 앵커를 잡습니다. 주 : 근위 및 원위 설명은 종이 전반 혈류의 방향에 참조된다. </li><li> 문합을 시작 근위 및 원위 양쪽 끝의 피상적 인 측면에 5-6 개 봉합을 추가합니다. (그림 2 -Pr). 동시에 혈관이 180도 회전 클램프. </li><li> 고정 봉합에 긴장을 다시 설정합니다. TEV의 회전 측에 (5-6) 근위 봉합 및 말단부를 추가 중단에 추가합니다. </li></ol></li><li> TEV 제자리에 단단히 봉합되면 다시 원래의 위치로 회전하고 제, 혈관은 한 번에 하나의 클램프 원위 클램프를 제거한다. 문합 부위에 약간의 출혈이 일반적이다. 이 자연스럽게 클램프 출시 후 몇 분 안에 해결 reclamping 또는 추가 봉합의 위치를​​ 요구할 수있다. 도플러 흐름 프로브를 놓습니다 (그림 3트리아) 위로 TEV 유입 혈류와 모니터 유량 네이티브 동맥에 근위. 주 : 좌측 및 우측 경동맥의 유속은 약 15 분 후, 평형화 예상된다. TEV 꾸준히 방울 주입으로 경동맥에 유량, 가능한 경우는 TEV 응고이다. 흐름에 대한 다른 가능한 이상이 TEV에 네이티브 동맥의 근위부 또는 원위부의 수축에 기인 할 수있다. 이 경우, 추가로 혈관 평활근 이완제의 사용은 도포 될 수 있고, 용기는 네이티브 그래프트 위에 사이트 조직의 폐쇄 다음 30-60 분 후에 기저 톤에 복귀한다. <ol><li> 원하는 경우, 반대측 경동맥을 절제하고 「가짜」대조군으로 밀어 넣어 고정 봉합사. 이는 임상 적으로 더 관련 단독 우측 경동맥을 남기고 만 유동 프로브 초음파 결정하고, 카테터를 장착보다 길다. 가짜 제어가 원하는 경우 2.11 단계로 진행하기 전에이 작업을 수행합니다. </li></ol></li><li> 7-0 프롤린을 사용 TEV의 대향하는 측면에 1mm 초음파 결정 (도 3 -CR1 CR2)를 봉합. 초음파 크리스탈 머리를 통해 봉합 스레드 만 TEV의 표면층에 스티치. </li><li> 테플론 짠 플래 킷 (도 -3- 칼슘 및도 4a)와 변성 18 G 카테터를 사용하여 동맥 카테 테르를 꽂다. 기본 동맥 조직에 TEV에 카테터 말단를 놓습니다. <ol><li> 출혈을 제어하기 위해 5/0, 후부와 동맥 벽 옆을 터 놓은 부분을 봉합. 식염수로 플러시 된 카테터에 마이크로 보어 튜브를 부착 시클로 헥사 논을 사용합니다. 확장 라인으로 튜브를 사용합니다. </li><li> 튜브의 표면화 끝 (그림 4B)를 밀봉 Surflo 주입 플러그와 20 G 루어 스텁 어댑터를 사용합니다. 카테터의 개방성을 유지하기 위해, 2-3 일마다 행의 프라이밍 체적을 구하고 식염수 10 ㎖로 세척하고 나트륨 헤파린 주입 후, 5000 U / ㎖. </li></ol></li><li> 유량 및 초음파 프로브 결정뿐만 아니라 유동 프로브와 카테터 사이의 거리 사이의 거리를 기록한다. 이 가능하게 맥파 속도는 소프트웨어와 함께 계산 될 수있다. 이러한 계산이 필요하지 않은 경우, 카테터를 이식하지 않는다. </li><li> 기능 모든 이식 하드웨어를 확인하기 위해 필요한 경우 수술 독서를 얻습니다 (3 절 참조). </li><li> 2/0 실크 테이퍼 바늘 (그림 3)를 사용하여 근처의 근육에 주입 라인과 와이어를 고정합니다. <ol><li> 프로브 꼬리 와이어 두개쪽으로 확장하고 측면 근육을 향해 &quot;U 턴&quot;을 만들기로, 용기에 혈관 흐름 프로브 와이어 평행하게 배치합니다. 선이나 흐름 프로브가 선박에 어떤 부담을 할 수없는, 그래서 두 위치에서 테이퍼 바늘에 2-0 실크를 사용하여, 인접한 근육에 와이어를 고정합니다. 봉합이 안정적해야하지만 이상 조여 muscula를 교살하다하지 않습니다진짜야 (그림 3). </li><li> 흐름 프로브 (그림 3) 보안을위한 이전 단계와 유사 여유의 ~ 1.5 cm를 허용, 측면 근육에 결정 전선 및 동맥 카테터 라인을 봉합. </li><li> 그룹의 모든 전선 및 라인 함께 바로 이전 단계와 유사 피하 터널을 통해 종료하기 전에 근육에 앵커. </li></ol></li><li> 매트리스는 피부에 스티치 실행, 간판 및 피하에 실행 봉합 패턴을 사용하여 레이어 2-0 Vicryl의 봉합 수술 부위를 닫습니다 (계기판, 비 절단 바늘, 피부, 바늘 절단). 2/0 Vicryl 및 절단 바늘을 사용하여 밖으로 노출 전선 및 라인 주변의 등쪽 목에 1.5 cm 절개를 닫습니다. </li><li> 확실하게 양 (- 복구 후 그림 5)의 피부에 봉합 주머니에 넣습니다 흐름 프로브 와이어, 카테터 선, 초음파 크리스탈 와이어 (X 10cm 10cm). </li><li> 점차적으로 양 오프 마취를 유아자가 호흡이 재개 될 때 호흡량 인공 호흡기는 양을 튜브를 빼내. 필요한 경우 두개의 정맥과 붕대에 삽입 된 angiocath를 제거합니다. </li><li> 절개, Telfa 패드, 스트레칭 롤 거즈, 그리고 elasticon에 트리플 항생제 연고를 사용하여 목에 붕대를 감아 줘. </li><li> 수술 후 통증 관리 : 복구 중 2.2 ㎎ / kg IM 번 flunixin 메 글루 민을, 다음 1.1 ㎎ / kg IM 한 번 두 번 이일, 부 프레 노르 핀 0.005-0.01 mg을 IV 또는 IM에 대한 일 하루 동안 하루. </li></ol> 생체 모니터링 3. <ol><li> 적절한 구속을 보장하기 위해 이동 카트에 양을 놓습니다. 이 양이 하드웨어를 손상시키지 않고 조용하고 의식을 유지 할 수 있습니다. 계측 기록을 획득하기 전에 30 분 동안 장바구니에 2 ~ 3 번 양을 적응해야 할 수도 있습니다. </li><li> 주머니에서 모든 전선 및 라인을 제거하고 감시 장치에 연결합니다. 유량계에 흐름 프로브를 연결 1mm 초음파 결정 TRB에 연결압력 변환기에 - USB 상자 및 카테터 라인. 이 설정의 플로우 차트 (도 6)가 제공된다. </li><li> 흐름 프로브 및 데이터 수집 이전에 압력 변환기를 교정하십시오. 참고 : 인해 소프트웨어 버전 및 사용되는 장비의 차이, 교정 및 설정 사이의 잠재적 인 변동성 경우에서 경우에 따라 다를 것입니다. </li><li> 제조사의 프로토콜에 따라, Sonometrics 크리스탈 측정 미세 조정 오실로스코프를 이용한다. </li><li> 컴퓨터 소프트웨어를 이용하여 기록 데이터 (도 7). 붉은 색 하단의 흔적 위장 / 기본에 해당하는 동안 화이트 컬러 그림 7 상단에서 흔적, 이식 TEV에 해당합니다. TEV와 가짜 유속 (㎖ / 분), 동맥압 (mmHg 이상) 및 직경 (mm) 모두 살 기록된다. </li><li> 방해하지 적어도 1 분 녹음. 더 자세한 분석을 위해이 데이터를 내 보냅니다. 녹음, DISCONN 후요법 모든 전선 및 다시 양의 목에 봉합 주머니에 넣습니다. </li></ol>

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</ol>

보고할 공개가 없습니다.

이 보고서의 목적은 양의 경동맥 관심 임플란트 TEVs으로 신뢰성 있고 재현 가능한 절차를 제공하는 것이다. 이 모델에서 사용 된 동물의 네이티브 경동맥은 0.5-0.75 mm 두께 및 바깥 지​​름이 4.5-5 mm이었다. 여기에 설명 된 수술 기법은 3 개월 기간, 의도 된 종점까지 효과가 입증 두께의 0.25-1 mm, 외부 직경 4-5mm 큰 성공의 길이가 4cm를 측정하는 다양한 형상의 TEVs을 주입에 대한 성공했다. 이 수술 기법의 사용은 수집하기 쉽고 일관성 데이터의 취득을 가능하게했다. 또한, 생체 리모델링 실시간 파라미터를 측정 할 수있는 능력이 설명되었다. 가변 직경뿐만 아니라 불일치 착상 TEV의 설계의 원하는 범위에 따라이 모델에서 성공적으로 사용될 수 있고, 주입 시간은 1 또는 참 넘어서 확장 될 수있다R. 이 프로토콜의 최적화에 큰 발전 중 하나는 단속 봉합 기술을 이용하여 종단 ...

TEVs의 개발을위한 주요 초점은자가 선박을 이용할 수없는 경우에자가 이식 교체에 대한 대체를 제공하기 위해 기증자 시력 이환율을 제한하고있다. 예를 들어 연간 관상 동맥 우회 수술의 수 USA 350,000을 초과하고, 적합한 이식 이상적인 소스는 관상 동맥과 정맥 절편 한 하행 동맥 좌측 내유동, 좌전 남아있다. 혈관 질환으로 고생 많은 개인이자가 이식 교체에 적합 동맥과 정맥이 없을 수 있기 때문에, TEVs의 개발은 이렇게 수십 년 1-6에 대한 연구의 강렬한 분야가되었다. 소설 TEVs의 엔지니어링 및 최적화 자체는 강렬한 토론의 주제되지 않았습니다 TEVs을 이식하기 위해 사용 수술 기법에 대한보고, 많은 발전을받은 상태. 오히려, 동물 모델에 TEVs의 주입에 관한 프로토콜은 크게 남아 있습니다연구자 조회입니다. 다음 원고 단단 문합술 접근법을 이용하여 TEVs를 이식하는 방법을 보여준다. 이 절차는 종 방향의 장력과 생체 모니터링 장비의 추가 최적화 봉합 기술을 안정화 문합 봉합 특정 패턴을 사용하여 최적화되었다. 이 방법은 이전에 사용 된 많은 변화들과 대조된다. 또한,이 절차는 동맥 혈압, TEV 직경 / 준수 등의 매개 변수를 획득하고 적출까지 수술까지 한 후 TEV를 통해 유량을하는 방법에 대해 설명합니다. 이 리모델링 과정에있는 동안이 데이터 수집 TEV의 불가결 분석을 제공한다.

<table><tbody><tr><td>압력 변환기</td><td>Becton Dickinson</td><td>P23XL-1</td><td>수량 : 1+ (각 동맥 당 1 개) . 물이 채워진 다이어프램 돔과 함께 사용됩니다.</td></tr><tr><td>증폭기 및 변환기 상자</td><td>Gould</td><td>5900 신호 컨디셔너 케이지</td><td>수량: 1. 두 개의 변환기와 증폭기가 케이지에 포함되어야 합니다. 이 특정 장치는 중단될 수 있지만 BNC/아날로그 출력이 있는 다른 상용 압력 변환기는 Sonometrics 장비와 통신합니다.</td></tr><tr><td>TS420 혈관 주위 유량계 모듈이 있는 T403 콘솔(x2),</td> <td>천음속 시스템</td><td>T403 모듈 및 TS420(x2)</td><td>수량: 1. 각 경동맥을 통한 흐름을 측정하는 유량 프로브는 각 TS420 장치에 연결됩니다.</td></tr><tr><td>디지털 초음파 측정 유닛</td><td>Sonometrics</td><td>TR-USB</td><td>수량: 1</td></tr><tr><td>플로우 프로브 정밀 S-시리즈 4&nbsp; mm</td><td>천음속 시스템 Inc.</td><td>MC4PSS-LS-WC100-CM4B-GA</td><td>수량: 2</td></tr><tr><td>1&nbsp; mm Sonometrics Crystals</td><td>Sonometrics 시스템</td><td>1R-38S-20-NC-SH</td><td>수량: 2-4개 (각 동맥당 2개)</td></tr><tr><td>이식용 카테터</td><td>BD (Becton Dickinson)</td><td>&nbsp; 381447</td><td>수량 : 1+ (각 동맥 당 1 개) . 카테터를 절단하여 마이크로 보어 튜브에 고정하고 탐침을 삽입에 사용합니다.</td></tr><tr><td>Tygon Microbore Tubing</td><td>Norton Performance Plastics</td><td>(AAQ04127) Formulation S-54-HL</td><td>확장 세트</td></tr><tr><td>Luer Stub Adapter</td><td>BD (Becton Dickinson)</td><td>427564 (20 게이지)</td><td>수량: 1+ (각 동맥 카테터당 1개)</td></tr><tr><td>Surflo Injection Plug</td><td>Terumo</td><td>SR-IP2</td><td>수량: 1+ (각 동맥 카테터당 1개)</td></tr><tr><td>Meadox</td><td>PTFE (Teflon) 펠트</td><td>19306</td><td>크기로 자릅니다. 연구에 사용된 PTFE 펠트는 중단되었습니다. 그러나, " 외과 용 메쉬" 동등한 제품을 제공합니다.</td></tr></tbody></table>

티슈 엔지니어링 혈관 이식 및 이후의 이식을위한 수술 기법<em&gt; 생체</em&gt; 모니터링

Surgical Technique for the Implantation of Tissue Engineered Vascular Grafts and Subsequent In Vivo Monitoring

혈관 조직 엔지니어링 (TEVs)의 발전 능력에 의해 전진 큰 동물 모델로 일상적 효과적으로 임플란트 TEVs (직경 4-5 mm)의 것이다. TEV 및 기본 경동맥의 TEV 및 실시간 디지털 평가의 상호 위치 배치를위한 단계로 단계 프로토콜은 여기에 설명되어 있습니다. 생체 모니터링이 가능하게된다 흐름 프로브, 카테터 및 초음파 결정의 주입 (수로 수술시의 주입 TEVs 네이티브 경동맥) 직경의 동적 변화를 기록. 일단 연구자는 맥파 속도, 증가 지표, 맥압 컴플라이언스와 같은 파라미터를 산출 동맥 혈류 패턴, 침습적 혈압 및 동맥 직경을 계산할 수 주입. 데이터 수집 실험 기간에 걸쳐 분석을 위해 하나의 컴퓨터 프로그램을 이용하여 달성된다. 이러한 귀중한 데이터가 TEV 매트릭스 리모델링에 대한 통찰력을 제공하고, 그 resemblan기본 / 가짜 제어 및 생체 내에서 전체 TEV 성능 CE.

30 개 이상의 양 (언론에) TEVs의 주입이 보고서에 설명 된 수술 기법을 9 겪었다. 프로토콜 최적화 후 가장 최근의 양의 작업을 요약 한 표는 표 2에 나타내었다. 생명이 합병증을 위협하지와 TEV 주입 후 복구 된 모든 양. 일부 동물에서, 섬유증은 내주 동맥 카테터의 끝 가까이에 네이티브 동맥에서 관찰되었다. 추가 된 계기의 존재와 염증의 유의 한 증가는 관찰되지 않았다. 드물게 (1 카테터 18), TEV 카테터를 통해 혈류에 방해를 유발하지 않았다. 이것은 방해 한 달 후 발생했습니다. 카테터에서 경미한 합병증은 흡인 혈액을 동맥 신호와 무능력의 완충을 포함한다. TEV 개​​발 연구를 추구하는 가장 일반적으로보고 된 데이터는 일반적으로 개존율, 유량 및 준수합니다. 이 프로토콜은 POSS임을 보여실험 기간에 걸쳐 이러한 가치있는 데이터를 얻기 위해 지나치지. 이 보고서는 유량, 직경 동맥압의 취득에 초점을 맞추고 있지만; 컴플라이언스 증가 지표와 맥파 속도는 계...

동물의 희생까지 생체 내에서 엔드 - 투 - 엔드 문합 및 실시간 디지털 평가를 사용하여 양의 경동맥에 조직 설계된 선박 (TEVs)의 상호 위치 배치를위한 단계별 프로토콜입니다.

The development of Tissue Engineered Vessels (TEVs) is advanced by the ability to routinely and effectively implant TEVs (4-5 mm in diameter) into a large ...

이 절차의 전반적인 목표는 경동맥에 혈관 이식 및 새로운 기구를 외과적으로 이식하기 위한 재현 가능한 프로토콜을 제공하는 것입니다. 이것은 먼저 양의 천연 경동맥 부분을 절제함으로써 이루어집니다. 두 번째 단계는 여기에서 조직 공학 혈관 또는 TEV라고 하는 혈관 이식편을 단순 단속 스티치를 사용하여 봉합하고 문합을 확립하는 것입니다.다음으로, 유동 프로브 카테터입니다. 그래서 미터법 결정이 경동맥과 혈관 이식편에 고정됩니다. 궁극적으로 이식 후 이 절차를 통해 직경 변화, 혈류 및 동맥압을 실험 기간 동안 생체 내에서 기록할 수 있습니다.이러한 측정에서 동적 컴플라이언스, 맥파 속도 및 기타 혈역학적 매개변수를 모니터링하여 in vivo 리모델링을 따를 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 표준 관행이 될 수 있는 최적화되고 상세한 혈관 이식 이식 프로토콜을 제공하여 수술 변동성을 최소화하고 생체 내 리모델링을 연구할 수 있는 수단을 제공한다는 것입니다. 일반적으로 이 방법을 처음 접하는 개인은 최적화된 이식 절차의 세부 사항과 생체 내 혈관 이식, 적응 및 리모델링 모니터링의 중요성에 익숙하지 않을 수 있기 때문에 어려움을 겪을 수 있습니다.이 방법은 최적의 혈관 조직 공학 조건 및 혈관 이식 리모델링 및 질병과 같은 혈관 이식 개발 및 생물학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 의미는 임상 적용을 위한 혈관 이식편의 발달을 더 잘 연구할 수 있는 절차를 제공하기 때문에 혈관 치환 요법으로 확장됩니다. 이 방법을 통해 전체 장기 조직 공학 및 혈관 리모델링 및 고혈압 또는 전체 장기 이식과 같은 질병 연구에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다.우리는 조직 공학 혈관 이식편의 개발을 위한 최적의 조건을 평가하기 위해 생체 외 동정맥 션트 모델을 사용했을 때 처음으로 이 아이디어를 떠올렸습니다. 이 방법의 시각적 시연은 봉합사 및 기구의 배치가 개통 및 성공적인 데이터 수집에 중요하기 때문에 필수적입니다. 이 절차를 시작하려면 양에게 마취를 유도하고 수술을 준비합니다.텍스트 프로토콜에 설명된 대로 전기 소작을 사용하여 복부 정중선 목을 세로로 약 12cm 절개합니다. 그런 다음 결합 조직을 제거하여 왼쪽과 오른쪽 경동맥을 분리합니다. 무딘 해부 기술을 사용하여 멸균 커튼 아래로 손을 뻗어 양의 머리를 돌려 커튼 아래에서 목 옆을 시각화 할 수 있도록합니다.8cm 곡선 지혈제를 사용하여 복부 정중선 목 절개 부위와 목 옆 사이의 피하 공간을 통해 터널을 뚫습니다. 지혈을 열고 닫아 튜브를 위한 공간을 약 1.5cm 너비로 뭉툭하게 절개합니다. 멸균 드레이프 아래로 손을 뻗어 멸균 번호 11 블레이드로 지혈 끝 위의 피부를 통해 1.5cm를 절개합니다.모든 배선과 튜브가 들어 있는 타이곤 튜브를 피하 터널을 통과시킵니다. 멸균 드레이프 위의 와이어와 튜브를 잡습니다. 그런 다음 드레이프 아래로 손을 뻗어 목에서 바깥쪽 티곤 튜브를 제거하면 양의 목을 떠날 때 이식된 배선이 노출됩니다.피하 공간의 느슨함을 최소화하기 위해 개별 라인을 당겨 빼냅니다. 기구를 동맥에 적절하게 부착할 수 있도록 충분한 거리를 두십시오. 도플러 유동 프로브를 배치하고 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 헤파린을 투여한 후 비분쇄 혈관 클램프를 사용하여 경동맥을 고정하고 약 4cm 길이의 부분을 절제합니다.7.0 프롤린 F 합금으로 간단한 단속 스티치를 사용하여 조직 공학 혈관 또는 TEV를 제자리에 봉합합니다. 이중 무장 모노필라멘트 봉합사. 먼저 TEV의 4개 지점을 근위부와 원위 끝에 두 개의 반대쪽 바늘을 배치하여 원래 동맥에 고정합니다.그런 다음 근위부와 원위부 양쪽의 표재성 쪽에 5-6개의 봉합사를 더 추가합니다. 동시에 문합을 시작하려면 혈관 클램프를 180도 회전하고 고정 봉합사에 장력을 다시 설정한 다음 TEV의 회전된 쪽의 근위 및 원위 끝에 5-6개의 추가 단속 봉합사를 추가합니다. TEV가 제자리에 단단히 봉합되면 원래 위치로 다시 회전시키고 혈관 클램프를 한 번에 하나씩 제거합니다.amp먼저 말단 클램프를 제거합니다.다음으로, 1mm 초음파 결정을 TEV의 반대쪽에 봉합합니다. 7.0을 사용하여 프롤린은 테프론으로 짜여진 플라크가 있는 수정된 18 게이지 카테터를 사용하여 동맥 카테터를 삽입합니다. 출혈을 조절하기 위해 5.0으로 동맥 벽에 플라크를 봉합합니다.사이클론을 사용하여 식염수로 플러시된 카테터에 마이크로 보어 튜브를 부착합니다. 다음으로, 2.0 실크와 테이퍼 바늘을 사용하여 이식된 라인과 와이어를 주변 근육 조직에 고정합니다. 이를 위해 혈관 흐름 프로브 와이어를 프로브 코들과 와이어 확장 크랜이 있는 혈관과 평행하게 배치한 다음 측면 근육 조직을 향해 U턴합니다.와이어 또는 유량 프로브가 혈관에 부담을 줄 수 없도록 두 위치에서 테이퍼 바늘에 2.0 실크를 사용하여 와이어를 인접한 근육 조직에 고정합니다. 그런 다음 수정 와이어와 동맥 카테터 라인을 측면 근육 조직에 봉합하여 흐름 프로브를 고정하기 위한 이전 단계와 유사하게 약 1.5cm의 느슨함을 허용하고 모든 와이어와 라인을 함께 그룹화한 다음 피하 터널을 통해 나가기 직전에 근육 조직에 고정합니다. 이전 S와 유사하게 근막과 피하부에 러닝 봉합사 패턴을 사용하여 2.0 Vicryl 봉합사로 수술 부위를 봉합하고 피부에는 러닝 매트리스 스티치를 사용합니다.2.0 Vicryl과 절단 바늘을 사용하여 바깥쪽 와이어와 선 주위의 등쪽 목에서 1.5cm 절개 부위를 닫습니다. 마지막으로, 유량 프로브 와이어, 카테터 라인 및 초음파 결정 와이어를 양의 피부에 단단히 봉합된 파우치에 넣습니다. 양 수술 후 관리에 대한 텍스트 프로토콜 보기 적절한 구속을 보장하기 위해 양을 이동식 카트에 눕힙니다.이를 통해 양은 하드웨어를 손상시키지 않고 침착하고 의식을 유지할 수 있습니다. 파우치에서 모든 전선과 라인을 제거하고 모니터링 장치에 연결합니다. 흐름을 연결합니다.프로브는 유량계로, 1mm 초음파 결정은 A-T-R-B-U-S-B 상자로, 카테터 라인은 압력 변환기로. 유량 프로브와 압력 변환기를 교정합니다. 데이터 수집 전.오실로스코프를 사용하여 SOE 크리스털 측정을 미세 조정할 수 있습니다. 제조업체의 프로토콜에 따라 여기에 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 데이터를 기록하십시오. 흰색의 위쪽 절반은 이식된 TEV에 해당하고 빨간색의 아래쪽 절반은 TEV와 가짜 모두에 대한 가짜 또는 기본 동맥에 해당합니다.직경 유속과 동맥 혈압이 기록됩니다. 녹음 후 방해 없이 최소 1분 동안 라이브로 합니다. 보다 자세한 분석을 위해 이 데이터를 내보냅니다.그런 다음 모든 전선을 분리하고 양의 목에 봉합된 주머니에 다시 넣으십시오. 표시. 다음은 TEV의 직경 유속 및 동맥 혈압의 생체 내 실시간 기록이며, 이는 실험 기간 동안 기록될 수 있습니다. 혈관 이식편의 이식 최적화.이 수술 기법을 사용하면 연구자들은 이식 실패의 원인으로 수술 오류를 배제할 수 있습니다: 일단 숙달되면, 이 기법은 2시간 반에서 3시간 이내에 완료할 수 있습니다. 1개의 TEV를 이식하는 경우 또는 6시간 30분 동안 이식하는 경우. TEV 자가 가짜 및 기구도 이식해야 하는 경우 이 절차를 시도하는 동안 적절한 수준의 항응고를 유지하는 것을 기억하는 것이 중요합니다.문합 봉합사 배치에 최적화된 정밀도로 혈관 확장제를 사용하십시오. 이 절차를 따릅니다. 세포 이동 및 세포 분화와 같은 추가 질문에 답하기 위해 면역 염색과 같은 다른 방법을 수행할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 양의 경동맥에 조직 공학 혈관을 이식하는 방법과 동맥 혈류, 혈압 및 혈관 이식편, 직경의 변화를 생체 내에서 모니터링하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.실험 환경에서 사용하기 위해 양 및 기타 대형 동물과 함께 작업하려면 종별 예방 조치를 따라야 한다는 것을 잊지 마십시오. 자신의 연구를 위해 이 큰 동물과 함께 일할 계획이라면 이 동물을 안전하고 윤리적인 방식으로 다룰 수 있도록 적절한 훈련을 받았는지 확인하십시오. 영상을 시청해 주셔서 감사합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

우리 그룹은 심장 혈관 시스템의 생리 타악기의 스트레스가 implantable 작은 직경 혈관 이식을 다시 생성하기 위해 일일 생물 반응기 문화 시스템을 개발했습니다.

타악기 생물 반응기를 사용하여 생물 공학 기반 혈관의 이식

혈액 - 문의 autologous 세포 및 시험 biocompatibility과 biomaterials 것은 시딩의 티타늄에 대한 방법을 설명합니다. 이 방법은 돼지의 venae cavae에 주입 수술의 분 이내에 씨앗 내피 전구 세포와 티타늄 튜브를 사용합니다. 이 기술은 다른 많은 implantable 생명 의학 장치에 적용할 수 있습니다.

Autologous 내피 전구 세포 - 심는 기술 및 대형 동물 모델에서 순환기 장치에 대한 Biocompatibility 테스트

세포 및 분자 neotissue 형성에 대한 우리의 지식을 개선하기 위해, TEVG의 쥐 모델은 최근에 개발되었다. 이식은 C57BL / 6 마​​우스의 신동맥 대정맥 개재 이식으로 이식되었다. 이 모델은 우리의 임상 연구에서 달성 된 것과 유사한 결과를 얻을 수 있지만, 훨씬 단축 된 시간 과정을 통해.

마우스 모델에서 하대 정맥 끼어 이식의 주입

여기, 우리는 두 번 시드를 부분적으로 유도 만능 줄기 세포로 쥐에 이식을위한 기능적인 조직 설계 혈관 이식을 생성하는 프로토콜을 제시 (PiPSC은) - 탈세 포화 선박 발판 생물 반응기에서 유래 내피 세포 - 평활근 세포 및 PiPSC 산출했다.

마우스 모델에서 조직 공학 혈관의 생성 및 손톱 확장

현재까지 두꺼운 조직 결손은 일반적으로 자가 조직 플랩 또는 엔지니어링 조직을 적용하여 재구성됩니다. 이 프로토콜에서는 자가 피판을 대체하기 위해 자가 척추경을 지닌 혈관 조직 피판을 엔지니어링하는 새로운 방법을 제시합니다.

엔지니어링 혈관을 근육 플랩

이것은 조직 공학 챔버 내부의 미세 수술 동정맥 루프 또는 관류 척추경 구성을 사용하여 생체 내 혈관 조직을 구성하기 위한 지침입니다. 생성된 혈관 조직은 장기 재생 및 조직 결함 교체, 약물 검사 및 질병 모델링에 사용할 수 있습니다.

에 내장 혈관 신생에 의하여 조직 공학<em&gt; 생체</em&gt; 조직 공학 상공 회의소

우리는 고립과 잘 특성화 된 환경에서 생체 내에서 혈관을 분석하기위한 모델로서 동정맥 (AV) 루프의 생성을위한 미세 수술 방법을 설명합니다. 이 모델은뿐만 아니라 혈관 신생의 조사에 유용 할뿐만 아니라 최적의 엔지니어링 축 방향으로 혈관 및 이식 가능한 조직에 적합합니다.

소형 동물 모델에서의 동정맥 (AV) 루프는 혈관 신생과 혈관을 조성한 조직 공학을 공부하기

확장 가능한 설계 혈관 임상 적용 가능성을 향상시킬 것입니다. 쉽게 상당한 3D 인쇄 가이드 사용, 혈관 평활근의 고리가 생성되었고, 혈관 이식을 형성, 튜브형 형태로 쌓여있다. 이식 단순히 3D 인쇄 된 안내서의 크기를 변화시킴으로써 인간 동맥 치수의 범위를 만족하는 크기로 할 수있다.

3D 인쇄 가이드 및 반지 스태킹 방법을 사용하여 엔지니어링 혈관 이식의 크기 조정

여기, 우리는 PCL 두꺼운 섬유와 큰 모 공, 혈관 이식 조작 및 복 부 대동맥 교체의 쥐 모델에서 vivo에서 성능을 평가 하기 위해 프로토콜을 설명 하는 수정 된 전기 방법을 제시.

쥐 모델에 최적화 된 구조를 가진 Electrospun 혈관 이식 술의 이식

여기에서는 커프 기법을 사용하여 조직 공학 혈관 이식편을 마우스 경동맥에 이식하기 위한 프로토콜을 제시하여 혈관 조직 재생 메커니즘을 조사하는 데 적합한 동물 모델을 제공합니다.

커프 기법을 통한 마우스 경동맥에 조직 공학 혈관 이식편 이식

이 연구는 대퇴 동맥의 소구경 이식편을 평가하기 위한 돼지 모델을 제시합니다. 이 모델은 인간의 혈관 역학을 모방하고 이식편 개통성, 혈류역학 및 혈관 리모델링을 종합적으로 평가합니다. 혈관 이식편을 검사하고 도플러 초음파 및 혈관 조영술로 모니터링할 수 있는 유용한 플랫폼을 제공합니다.

소구경 혈관 이식편을 테스트하기 위한 돼지 모델에 대퇴 혈관 이식편 이식

배우세요 양의 경동맥에 조직공학혈관을 이식하고 실시간 혈류 및 혈압을 모니터링하는 수술 기법. 이 프로토콜은 혈관이식물의 생체 내 재형성을 연구하는 표준화된 방법을 제공합니다.

티슈 엔지니어링 혈관 이식 및 이후의 이식을위한 수술 기법

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