Name: 마우스의 얼굴 신경 Axotomy : 부상으로 운동 신경 응답을 연구하는 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 11 s
Description: 학습하세요 마우스 안면신경 절단술을 통해 말초신경 손상에 대한 운동신경 반응을 연구하는 방법을. 이 기술은 신경 재생 및 치료 전략 개발에 활용됩니다.

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이 작업은 NIH RO1 NS 40433 (K.J.J.)의 지원을 받았습니다.

실행 모든 절차는 의학 기관 동물 관리 및 사용위원회의 인디애나 대학의 승인을 건강 지침의 국립 연구소 따릅니다. 1. 수술 기법 <ol><li> 멸균 장갑, 악기, 그리고 NIH 가이드 라인 (25)에 따라 멸균 수술 필드를 사용하여이 절차를 수행하는 동안 무균 기술을 유지한다. 를 오토 클레이브에 의해 수술을 시작하기 전에 도구를 소독 (전체 목록은 특정 시약 / 장비의 표 참조). 작업 중에 도구를 소독 유리 구슬 살균기를 사용합니다. </li></ol> 2. 마취 및 준비 <ol><li> 수의학 이소 플루 란 기화기 시스템을 이용하여 0.9 L / 분의 산소 및 2.5 %의 이소 플루 란 혼합물로 마취 상자에 마우스를 마취. 마우스가 상자에서 제거하기 전에 몸의 위치 변화에 응답하지 않습니다 있는지 확인하십시오. </li><li> 양해 각서 (MOU)에 안과 연고를 적용그 자체의 눈이 마르지을 보호 할 수 있습니다. </li><li> 코 콘에있는 상자에서 가스 흐름을 전환합니다. 콘 내부의 코와 입으로 수술 패드와 흡수 벤치 종이로 덮여 가열 패드의 왼쪽에 정면으로 마우스를 놓습니다. 지속적으로 마우스의 호흡 리듬과 속도를 모니터링하고 필요에 따라 이소 플루 란 레벨을 조정 - 마취의 적절한 수준을 유지하기 위해 (2.5 사이의 3 % 이소 플루 란), 총 진정 작용을 확인하기 위해 발가락 핀치 반사를 사용합니다. </li></ol> 3. 수술 적 접근 <ol><li> 맞추고 수술 필드 입체경을 초점을 맞 춥니 다. 노즈콘을 조정하고이 시야의 가장자리에 위치하도록 아래로하는 테이프. </li><li> 마우스의 왼쪽에 누워, 절개 될 것이다 귀 뒤 영역을 노출 노즈콘을 우측 귀의 가장자리를 테이프. 후방 귀의 정맥 귀 가로로 이동하는 확인하십시오. 참고 t의 정확한 위치그 동물 귀의 테이핑 신속 안면 신경을 찾기 위해 매우 중요하다. </li><li> 에 70 % 에탄올 귀 뒤에 모피 적시고 면도기 또는 메스 블레이드를 사용하여 수술 부위를 면도. 사전 습윤 모피하는이 해부학 적 위치에 쉽게 면도 있습니다. </li><li> 70 % 에탄올 다음과 같은 베타 딘 수술 스크럽 (7.5 % 포비돈 요오드)와 같은 요오드 용액,로 피부를 청소합니다. 철저하게 지역을 소독이 청소를 두 번 더 반복합니다. </li><li> , 절개를 귀 돌기에 지역의 후방에 꼬리 쪽 귀에서 후방 귀의 정맥을 추적해서 결정해야합니다. 돌기에 3mm 후방 - 봄 가위를 사용하여 4mm의 절개 (2)를 확인합니다. </li><li> 무딘 절개를 이용하여 피하 지방 및 근막을 절개하다. 혈관 또는 근육 조직이 쉽게 손상 될 수 있기 때문에 가위로 직접 절단하지 마십시오. </li><li> 출혈이 발생하는 경우, 멸균 면봉으로 수술 부위에 압력을 적용적어도 30 초. 유체 상당한 손실이 발생하면, 최대 25 또는 제 27 G 바늘을 사용하여 멸균 0.9 % 식염수 용액 0.5 ml를 복강 내 주사를 마우스. </li><li> 안면 신경의 위치를​​, 몇 가지 주요 랜드 마크, 척추 부신경, 외이도를 사용하여 (아래에 설명) digastric 근육을 전방. 안면 신경의 가지가 가시화 될 때까지 이러한 랜드 마크 주위를 해부하다. 이 공개 될 때 신경은 크게 백색 고체 구조로 표시됩니다 및 근막 층이 기본 구조를 준수합니다. <ol><li> 피하 지방과 근막이 해부 된 이후, 승모근의 근육에 분포하는 두개골의 꼬리 부분에서 이동 척추 액세서리 신경을 찾을 수 있습니다. 안면 신경은 척추 부신경에 깊은이다. </li><li> 진주 흰색 보이는 안면 신경에 주동이 볼 수있는 연골 귀 운하를 찾을 수 있습니다. </li><li> 의 상단과 C에 놓여 전방 digastric 근육의 근육 배꼽 찾기안면 신경에 audal. </li></ol></li><li> 안면 신경의 가지 주요 가시화되면 stylomastoid 난원에서 기원을 찾을 등쪽 그들을 추적. 개방형 수술 부위를 보유하고있는 신경의 경로를 따라 봄 가위 팁을 발전 연 다음, 새로 고급 영역을 유지하기 위해 등쪽 집게를 이동 뾰족한 뒤몽 포셉 # 45분의 5를 사용. </li><li> 이 시점에서 광대뼈, 구강과 안면 신경의 트렁크, 변연 하악 가지를 시각화. 주 : 시간 ​​분기 난원에 가까운 발견 될 것이다. 상부 및 하부에 한계 하악 신경 가지에 가까운 턱, 따라서 그 신경 지점이 수준에서 표시되지 않습니다. <ol><li> 신경 절개를 수행하는 경우, 미세 팁 포셉으로 부드럽게 신경을 안정시키고 스프링 가위로 신경을 잘라. 뇌간의 신경을 avulsing 방지하기 위해 집게와 신경에 너무 많은 견인을 적용하지 마십시오. 푸시멀리 서로, 또는 절단 및 말초 신경의 일부를 제거에서 젊고 아름다운 여자가 재 연결이 발생하지 않도록합니다. </li><li> 호감 부상을 수행하는 경우, 모든 축삭을 절단 첫 번째 호감 사이트에 수직 인 제 2 각도로이 호감을 반복 일정한 압력을 사용하여 30 초 동안 신경을 압축 뒤몽 #에게 45분의 5 집게를 사용합니다. 그렇지 않으면 부상 동물 사이에 일관성이 없습니다, 30 초 호감 동안 압력의 변수 금액을 적용하지 마십시오. </li></ol></li></ol> 4. 결산 및 복구 <ol><li> 기본 구조를 통해 지방과 근육 위치를 조정합니다. </li><li> 절개의 가장자리를 대략적인 7.5 mm 상처 클립을 사용하여 상처를 닫는다. 봉합 또는 접착제는 또한 상처 폐쇄에 대한 허용됩니다. 수술후 진통제는이 시점에 제공 될 수있다. </li><li> 마우스의 귀에서 테이프를 제거합니다. 이소 플루 란 흐름을 끄고 마우스가 1 분 30 초 동안 순수한 산소를 흡입 할 수 있습니다. PL마취에서 회복 할 수없는 침구 빈 케이지에서 마우스 에이스. </li><li> 마우스가 복구 될 때, 안면 마비의 확증 흔적이 동작을 검사합니다. 수염이 마비 다시 뺨을 향해 각도됩니다, 코가 이탈되고, 눈은 공기의 퍼프에 대한 응답으로 깜박하지 않습니다. </li><li> 주택의 동물 공동 수술 후 그들은 여성의 경우. 그들은 더 공격적 강제 감염에 이르게 자신의 cagemate의 상처 클립을 제거하는 경향이 있기 때문에 공동으로 남성 쥐를 수용하지 마십시오. 필요한 경우,이 시점에서 수술후 진통제를 제공한다. </li><li> 어떤 감염 또는 기타 합병증은 수술 후 발생하지 않도록 수술 후 며칠 동안 하루에 한 번 마우스를 모니터링합니다. 그들은 자신에 타락하지 않은 경우 수술 10 일 - 상처 클립 (7)를 제거합니다. </li><li> 눈 깜빡임이 재 할 때까지, 매일 각막 합병증을 방지하기 위해 영향을받는 눈에 눈 연고를 윤활 적용적용 또는 안락사까지. </li></ol>

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이 프로토콜의 중요한 단계는 수술이 시작되기 전에 마우스를 적절하게 배치하는 것입니다. 마우스가 옆으로 평평하게 누워 있지 않거나, 귀가 올바른 각도로 테이프로 붙어 있지 않거나, 절개가 잘못된 위치에 있으면 안면 신경을 찾는 것이 훨씬 더 어려워집니다. 이 기술을 숙달하면 마우스당 수술이 몇 분 밖에 걸리지 않습니다. 
봉합사, 접착제 또는 상처 클립을 사용하여 상처를 봉합할 수 있습니다. 상처 클립은 절개 크기가 작고 적용할 수 있는 속도 때문에 선호됩니다. 우리는 상처 클립을 사용하고 쥐를 함께 수용하면 수컷이 함께 수용된 수컷이 종종 케이지메이트의 상처 클립을 제거하여 수술 부위에 감염을 일으키기 때문에 암컷 마우스가 수컷 마우스보다 더 잘 지내는 것으로 확인했습니다.
부상을 유발하기 위해 신경을 따라 위치를 변경하는 등 부상을 수정할 수 있습니다. 예를 들어, 상처는 안면 신경의 가지 중 하나를 따라 투여될 수 있다(<s...

많은 말초 신경 손상 모델은 존재하지만, 운동 신경원의 연구를 위해 눈에 띄는 사람은 얼굴 신경 axotomy 모델입니다. 또한 뇌신경 VII로 알려진 안면 신경은 뇌교에서 유래와 얼굴 표정 1,2의 근육을 innervates. 이 수술 프로토콜에서 안면 신경은 stylomastoid 난원에서의 출구에 노출 자르거나 분쇄 중 하나입니다. 신경 손상의 중증도 순차 축삭 다발 감싸는 결합 조직층 인 축삭 endoneurium, 신경 외피 및 epineurium의 intactness에 기초하여 부상 차별화 랜드 (3) 분류, 다음 분류 될 수있다. 압박 손상 (axonotmesis)에서 축삭이 절단되지만, 신경 외피와 epineurium가 유지됩니다. 그대로 신경초가 축삭은 4,5를 자라게하는 내 도관 역할을하기 때문에 안면 신경 호감에서 완전한 기능 회복은 약 11 일 만에 발생합니다. 에다른 한편으로는, 절단 손상 (neurotmesis)에서 축삭 3 결합 조직층이 절단되고, 전체 말초 신경 근육 신경 분포를 복원 자라게한다. epineurium의 외과 재 연결이 자주 신경 절개 부상과 인간의 환자에서 수행하지만 복구 결과는 드물게 최적입니다. 또한이 연구는 신경 목표로 자라게 못하고 어떤 치료법이 개선 회생 프로세스를 가속화하기 위해 이용 될 수있는 이유 이해할 필요가있다. 안면 신경 axotomy 모델을 사용하여 신경 손상을 공부에 많은 이점이있다. 먼저, 안면 신경 axotomy 절차는 빠르고 간단하며 높은 재현성이고; 및 안면 근육의 마비 얻어진 중요한 기능에 영향을주지 않고 잘 동물에 의해 허용된다. 이것은 운동 신경원 토륨 비교적 균질 집단에 상주하기 때문에 단순화된다 운동 신경 세포체 공부 뇌 신경 손상 모델이므로뇌교에서 전자 얼굴 모터 핵. 일곱 subnuclei 근육의 특정 그룹을 지배하는 것이 각각의 특정 있기 때문에 인구는 얼굴 모터 핵 내에서 subnuclear 패턴에 따라 차이가 않기 때문에 axotomy에 대응 subnuclear 차이가 결과 파 -2,6,7- 영향을 미칠 수 있습니다. 안면 신경 손상 모델의 주요 이점은 신경 신경 분포가 매우 대칭 및 안면 모터 핵 8 사이의 크로스 토크가 없기 때문에 unaxotomized 사이드 페어링 내부 제어로서 역할을 할 수 있다는 것이다. 이 수술 방법을 사용하는 또 다른 장점은 직접 CNS 외상 또는 혈액 뇌 장벽 (9)의 파괴의 부족이다. 과도한 출혈 및 감염 등의 합병증이 절차와 드물다. 다양한 분석은 신경 손상에 대한 생리적 반응을 평가하기 위해 수행 될 수있다. 눈 깜빡임과 수염 활동의 회복은 행동으로 사용할 수 있습니다기능 회복에 10, 11의 측정. vibrissae 활동의 비디오 녹화는 현재 안면 신경의 신경 분포 (12, 13)의 복구를 검출하기위한 가장 강력한 방법이다. 안락사 후, 뇌간 조직 학적 분석은 안면 모터 핵 내에 운동 신경 세포체에 수행 될 수있다. 얼굴 모터 핵 부상 2,6에 대한 응답의 차동 검사를 허용, 일곱 subnuclei, 특정 얼굴 근육에 각각의 특정으로 세분된다. 안면 운동 신경원은 세포 생존을 정량 계산 될 수 있고, 또는 바이오 마커는 면역 조직 화학 및 특정 세포 집단 (14)을 식별하는 데 사용될 수있다. 얼굴 모터 핵 정확하게 신경 손상 (15, 16)에 대한 세포 반응의 분자 분석을 위해 레이저 캡처를 사용하여 microdissected 할 수 있습니다. 안면 신경 axotomy의 영향은 운동 피질 (17, 18)에서 분석 될 수있다. 또한, 신경 Wallerian 변성을 연구하기 위해 해부 할 수있다 19축삭 재생 (20), 및 근육 신경 근육 접합부 (21)을 연구하기 위해 제거 할 수 있습니다. 안면 신경 근육 axotomy도 21 및 면역계 응답 (23), 중추 및 말초 첨부 신경교 세포 (22)를 연구 대상으로 사용될 수있다. 많은 안면 신경 axotomy 모델 (24)을 연구하여 이루어진 하였지만 신경 손상 환자에 대한 중요한 문제이고, 현재의 치료법은 최적의 결과를 생성하는 데 실패하기 때문에, 말초 신경 손상의 추가 연구가 요구된다. 이 모델은 신경 손상에 대한 생리적 반응을 검사하고 신경 재생 치료의 효과를 분석하기위한 강력한 도구입니다.

<table><tbody><tr><td>실체 현미경</td><td>Leica</td><td>M60</td><td></td></tr><tr><td>라벨링 테이프</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-952</td><td></td></tr><tr><td>Vannas-T&uuml; Bingen 스프링 가위 - 스트레이트/샤프/8.5 cm/5 mm 커팅 엣지</td><td>Fine Science Tools</td><td>15003-08</td><td>사용 전 살균</td></tr><tr><td>Dumont #5/45 펜치 - 표준 팁/각도 45도;/Dumoxel/11 cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td>사용 전 살균</td></tr><tr><td>Michel 봉합 클립 - 7.5 mm x 1.75 mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>12040-01</td><td>프로토콜에서 "wound clip"으로 설명됨, 사용 전 살균</td></tr><tr><td>Hagenbarth 크로스 액션 상처 클립 어플라이어 5"</td><td>George Tiemann & Co</td><td>160-910</td><td>상처 클립을 적용하는 데 사용되며, 사용 전에 살균하십시오</td></tr><tr><td>Michel 봉합 클립 애플리케이터 & 리무버 - 7.5mm 클립용</td><td>Fine Science Tools</td><td>12029-12</td><td>상처 클립을 제거하는 데 사용</td></tr><tr><td>0.9% 염화나트륨 주사, USP</td><td>Hospira</td><td>0409-4888-10</td><td></td></tr><tr><td>베타딘, 16 oz, 디스펜서 포함</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027132</td><td></td></tr><tr><td>70% 에탄올</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>유리 구슬 살균기</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

마우스의 얼굴 신경 axotomy : 부상으로 운동 신경 응답을 연구하는 모델

Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury

이 수술 프로토콜의 목표는 stylomastoid 난원에서의 출구에서 얼굴 근육을 innervates 안면 신경을, 노출 및 중 하나를 절단 또는 말초 신경 손상을 유도하기 위해 그것을 분쇄하는 것입니다. 이 수술의 장점은 이와 다른 신경 손상 모델에 비하여 비교적 가벼운 수술 결과 결과, 단순성, 재현성 및 후속 안면 마비에서 중요한 기능이나 이동성에 효과가 부족하다. 뇌 신경 손상 모델을 사용하는 주요 장점은이 운동 신경원 운동 신경 세포체 연구를 단순화 뇌교에서 안면 모터 핵 비교적 균질 한 집단에 존재한다는 것이다. 때문에 안면 신경의 신경 분포의 대칭성과 안면 모터 핵 사이의 크로스 토크의 부족, 동작 unaxotomized 사이드 페어링 내부 제어로서 일방적으로 수행 될 수있다. 분석의 다양한 엉덩이에 수술을 수행 할 수 있습니다이 문서의 범위를 벗어 그 세부 사항의 생리적 반응이야. 예를 들어, 근육 기능의 회복을위한 행동 reinnervation 마커로서 기능하거나, 운동 신경원은 세포 생존을 측정하기 위해 정량화 될 수있다. 또한, 운동 신경원 정확하게 분자 분석을위한 레이저 미세 절제를 사용하여 캡처 할 수 있습니다. 안면 신경 axotomy 침습 및 내약성이기 때문에, 유전자 변형 마우스의 다양한 상에 이용 될 수있다. 또한,이 모델은 수술 말초 신경 손상의 치료 효과를 분석하는데 사용될 수있다. 안면 신경 손상뿐만 아니라 운동 신경원을 조사하는 수단을 제공하지만, 중추 및 말초 미세 교세포, 면역계 및 목표 근육의 응답도. 안면 신경 손상 모델은 신경 손상과 재생을 연구하기위한 강력한 도구 역할을 널리 말초 신경 손상 모델이다.

안면 신경 axotomy이 수행 된 후, 운동 신경 손상 손실의 결과로 발생한다. 손상 후 운동 신경 생존은 모두 운동 신경 생존 데이터를 요약 성별, 수술시 동물의 연령, 운동 신경 카운트가 완료되는 평가시기 및 모란 그래버 검토 (24)과 진노와 야마다 리뷰 (22) 등 많은 변수에 따라 달라집니다. 일반적으로 운동 신경원의 약 86 %는 사후 axotomy 14,15,26 이십팔일에서 살아 남기. 운동 신경 손실의 속도론은 Serpe 등의 알에 설명되어 있습니다. 2000 년 그림 1은 여러 유전자 ​​변형 생쥐에서 운동 신경 생존의 변화를 보여줍니다. 유의 한 차이는 유전 적 변화는베이스 라인 계산에 영향을주지 않는 것을 나타내는, 제어 측의 안면 운동 신경 카운트에서 관찰되지 않습니다. 상당한 세포 손실은 마우스 모델에서 관찰된다 (도 1a, D 84 % ± 2.0) ...

마우스의 안면 신경을 절개하거나 으깬 축삭 절개술을 수행하는 방법을 자세히 설명하는 수술 프로토콜을 제시합니다. 안면 신경 축삭 절개술은 신경 손상에 대한 생리적 반응을 연구하고 치료 기술을 테스트하는 데 사용할 수 있습니다.

마우스의 얼굴 신경 Axotomy : 부상으로 운동 신경 응답을 연구하는 모델

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and ...

이 절차의 전반적인 목표는 말초 신경 손상을 연구하기 위해 안면 신경을 노출시키는 것입니다. 안면 신경은 뇌줄기의 교뇌에서 시작되어 경유돌공을 통해 두개골을 빠져나오며, 이후 신경은 주요 분지들로 나뉩니다.노출이 완료되면, 경유돌공(stylo mastoid foramen)에서 나오는 신경을 자가 절단합니다. 안면 신경의 위치를 찾는 데 두 가지 주요 지표가 도움이 됩니다. 첫 번째는 얇은 막으로 연결된 진주빛 흰색 연골판으로 구성된 외이도입니다.다른 하나는 신경과 그것이 경유돌기乳突孔(stylo mastoid foramen)을 통해 나오는 지점 위에 위치하는 이복근의 전복입니다. 안면신경이 손상된 후, 연구자는 운동 신경세포 사멸이나 유전자 발현과 같은 여러 요인을 연구할 수 있습니다. 안면신경 손상 모델은 가장 잘 규명된 말초신경 손상 모델 중 하나입니다.이 기술의 장점은 간편함, 높은 재현성, 그리고 이후 발생하는 안면 마비가 생체 기능에 영향을 미치지 않는다는 점입니다. 또한, 신경계의 매우 대칭적인 특성 덕분에 손상되지 않은 쪽을 실험의 쌍을 이룬 내부 대조군으로 사용할 수 있습니다. 이 절차 전반에 걸쳐 무균 조작법을 유지하기 위해, 모든 도구를 오토클레이브로 멸균하고 조작 단계 사이사이에 도구를 멸균할 수 있도록 유리 비드 멸균기를 준비하십시오.가열 패드 위에 흡수 패드를 놓고, 현미경을 설치한 후 코 콘이 시야의 가장자리에 맞춰지도록 테이프로 고정하여 수술대를 준비합니다. 마우스를 마취시킨 후, 발가락 꼬집기를 포함한 조작에 대해 마우스가 신체적 반응을 보이지 않는지 확인합니다. 그런 다음 가스 흐름을 마취 챔버에서 코 콘으로 전환하고 off thalamic 연고를 도포합니다.가열 패드가 깔린 수술용 패드 위에 마우스의 왼쪽 면이 닿도록 배치합니다. 동물의 호흡을 지속적으로 관찰하고, 마취 상태를 유지하기 위해 필요에 따라 ISO fluorine 유량을 조절합니다. 다음으로 수술 부위를 노출시키기 위해 오른쪽 귀를 코 콘(nose cone)에 테이프로 고정합니다.귀 뒤쪽으로 지나가는 후이정맥(posterior auricular vein)을 확인해야 합니다. 다음으로, 털을 70% ethanol로 적신 후 해당 부위를 제모합니다. 털을 제거한 후, 요오드와 70% ethanol을 교대로 세 번 문질러 닦아내어 해당 부위를 철저히 소독합니다.수술을 진행합니다. 입 부분이 옆으로 오도록 배치하고 귀 정맥이 수평으로 지나가게 하여 위치를 잡으십시오. 이렇게 하면 안면 신경을 훨씬 더 쉽게 찾을 수 있습니다.첫 번째 절개 부위를 결정하기 위해, 귀에서부터 이개 돌기(ear protuberance) 후방 영역까지 후이정맥(posterior auricular vein)의 경로를 따라 확인합니다. 그 다음, 교육 목적으로 이개 돌기에서 후방으로 2~3 mm 떨어진 지점에 스프링 가위를 사용하여 4 mm 길이의 절개를 가합니다. 이 절개창은 하부 해부 구조를 노출시키기 위해 더 확장될 것입니다.이제 피하 지방과 근막을 둔성 박리하십시오. 가위로 인해 혈관과 근육이 쉽게 손상될 수 있습니다. 출혈이 발생할 경우.멸균 면봉으로 최소 30초 동안 압박합니다. 상당량의 체액 손실이 발생한 경우, 25 또는 27 gauge 바늘을 사용하여 생리식염수를 복강 내에 최대 0.5 mL까지 주입합니다. 이제 주요 지표를 사용하여 안면 신경의 위치를 찾습니다.부신경(spinal accessory nerve)은 안면신경(facial nerve)보다 표층에 위치하며, 두개골의 후두부를 통해 이동하는 것을 확인할 수 있습니다. 승모근(trapezius muscle)에 신경을 분포시키려면 연골성 외이도를 찾으십시오. 외이도는 진주빛 흰색이며 안면신경의 주둥이 쪽에 위치합니다.안면신경은 외이도의 외측 부분을 감싸고 있습니다. 이어서 안면신경의 위쪽이자 외측에 위치한 전복측이복근의 근복을 확인하십시오. 이 구조물 아래를 박리하여 안면신경을 노출시킵니다.이는 하부 근막 층에 부착된 견고한 흰색 구조물입니다. 안면신경의 주요 분지들을 확인하십시오. 이 분지들을 등쪽으로 따라가며 경유돌기공에서 기시하는 지점을 찾으십시오.미세 핀셋으로 부위를 벌려 고정한 상태에서 스프링 가위의 끝을 사용하여 안면신경 경로를 따라 박리합니다. 핀셋으로 유양돌기의 뼈 부분을 확인할 수 있습니다. 이제 안면신경 주간을 찾아 신경을 압착합니다.미세 핀셋을 사용하여 일정한 압력으로 30초 동안 압착합니다. 이렇게 하면 모든 축삭이 절단됩니다. 그런 다음 수직 방향으로 30초 동안 다시 압착합니다.실험 간에 압력을 일정하게 유지하십시오. 관련 해부학적 지표를 확인했으므로, 이제 더 정교한 수술 기법을 시연하겠습니다. 더 작은 절개창을 사용하여, 귀에서부터 귀 돌기 후방 영역까지 후이정맥을 조심스럽게 추적하고, 돌기에서 후방으로 2~3 mm 떨어진 지점에 4 mm 절개를 가합니다.이제 세 가지 지표인 부신경, 외이도, 이복근 전복을 이용하여 피하 지방과 근막을 과감하게 절개하십시오. 안면신경을 노출시킵니다. 안면신경의 주줄기에 도달하기 위해 안면신경을 따라 경유돌기공 방향으로 추적한 뒤, 미세 핀셋으로 신경을 조심스럽게 고정하고 가위로 절단하여 신경을 차단하십시오.신경에 너무 많은 견인력을 가하지 마십시오. 그렇지 않으면 뇌줄기에서 뽑혀 나올 수 있습니다. 그런 다음 신경 단면을 서로 떨어뜨리거나 신경의 일부 분절을 제거하여 재연결이 일어나지 않도록 합니다. 마지막으로 신경을 주의 깊게 검사하여 완전히 절단되었는지 확인하십시오.적출 후, 모든 지방과 근육을 원래의 대략적인 위치로 되돌려 놓습니다. 그런 다음 7.5 밀리미터 상처 클립 봉합사 또는 시아노아크릴레이트 접착제를 사용하여 상처를 폐쇄합니다. 필요 시 이때 진통제를 투여하고, 마취를 중단한 후 쥐를 깔짚이 없는 빈 케이지로 옮깁니다.동물이 회복되는 동안 안면 마비 징후가 있는지 확인하는데, 이때 수염이 마비됩니다. 수염이 뺨 쪽으로 뒤로 젖혀져 있다면 코가 휘어 보이고, 공기 분사에 반응하여 눈을 깜빡이지 않게 됩니다. 이제 동물이 암컷이라면 다른 암컷과 함께 사육하십시오.하지만 수컷 생쥐의 눈 깜빡임 기능이 회복될 때까지는 단독 사육하며, 각막 합병증을 예방하기 위해 매일 안구 연고를 도포하십시오. 그동안 수술 부위가 치유될 때까지 생쥐에게 감염 징후나 기타 합병증이 나타나는지 관찰하십시오. 8주령에 안면 신경 절단을 시행한 야생형 동물의 경우, 생쥐의 연령과 유전적 배경에 따라 적출 후 운동 뉴런 소실 정도에 상당한 차이가 있습니다.축삭 절단 후 28일 시점에 운동 신경세포의 약 86%가 생존하였습니다. 근위축성 측삭 경화증의 SOD1 마우스 모델과 면역 결핍 Rag2 knockout 마우스 레이저 캡처 모델에서는 세포 손실이 유의하게 더 많이 관찰되었습니다.안면 운동핵에서 물질을 분리하기 위해 미세절단법을 사용하였습니다. 안면 운동핵 전체를 채취할 수 있으며, 또는 하핵들을 각각 개별적으로 수집할 수도 있습니다.이 기술은 정밀도가 매우 높습니다. 운동 신경세포를 개별적으로 포착할 수 있으며, 남은 신경 펠렛 또한 이후 분석을 위해 수집할 수 있습니다. 점선으로 표시된 복내측핵과 실선으로 표시된 복외측핵의 하핵 샘플 내 유전자 발현을 조사하기 위해 정량적 PCR을 사용하였으며, 신경 재생 반응과 관련된 4가지 유전자의 발현을 측정하였습니다.이들의 하위 핵들 사이에서 일부 차이점이 발견되었습니다. Gap 43 발현은 하위 핵들 간에 가장 큰 차이를 보였습니다. 이 기술을 숙달하면 수술을 단 몇 분 만에 완료할 수 있습니다.동물을 올바르게 배치하고, 정확한 위치에 절개하며, 해부학적 지표를 사용하여 안면신경의 위치를 찾는 것이 중요합니다. 머리와 목 부위에서는 방향을 잃기 쉬우므로, 만약 위치를 찾기 어렵다면 연골성 외이도를 찾아 후방으로 추적하여 안면신경을 찾으십시오.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

용서해주 신경 부상 동물 모델은 나머지 sural 신경은 그대로두고, tibial 및 일반 peroneal 신경 가지를 lesioning하여 좌골 신경의 부분 denervation 다음과 주변 neuropathic 고통의 마우스 모델로 여기에 설명되어 있습니다. 기계 allodynia 인한 행동 수정은 폰 프라이 필라멘트에 의해 계량입니다.

마우스에서 유도된 기계 Allodynia의 겪었던 신경 상해 (스니) 모델

이 비디오는 마취 준비부터 안면 신경 손상 유도까지 단계를 자세히 설명하는 쥐 모델의 수술 프로토콜을 보여줍니다. 이 프로토콜은 의학 연구에서 신경 재생 및 수술 기법을 연구하는 데 유용합니다.

쥐 모델에서 안면 신경 손상 유도

출처: Olmstead, D. N., et al., Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury. J. Vis. 특급 (2015). 이 비디오는 마우스의 안면 신경 파쇄 절차를 보여주며, 주요 랜드마크를 둔기로 해부하면 스타일로마스토이드 구멍에서 안면 신경 줄기가 노출됩니다. 그런 다음 겸자를 사용하여 신경 줄기를 압박하여 축삭 손상을 유도하고 신경 신호 전달을 방해합니다.

Performing Crush Axotomy on the Facial Nerve in a Mouse 모델

출처: Dalkin, W., et al. 비골 신경 손상 방법: 신경근 접합부를 복구하는 요인을 식별하고 테스트하기 위한 신뢰할 수 있는 분석법입니다. J. Vis. 경험. (2016년)이 비디오는 신경근 접합부(NMJ) 재생을 연구하기 위해 마우스에서 비골 신경 손상을 유도하는 수술 절차를 보여줍니다. 이 절차에는 비골 신경을 노출시키고, 통제된 압력을 가하여 손상을 유도하고, 축삭 재생을 지원하기 위해 신경외막이 손상되지 않도록 하는 것이 포함됩니다. 시간이 지남에 따라 대식세포는 축삭 파편을 제거하여 신경 복구와 NMJ의 재건을 촉진합니다.

신경근 접합부 재생을 연구하기 위해 마우스에서 비골 신경 손상 유도

경골 신경 절개 모델은 골격 근육 위축, 잘 용납 검증 및 재현성 모델입니다. 모델 수술 프로토콜은 C57Black6 마우스에 설명 설명된다.

경골 신경 절개 - 마우스의 탈 신경에 의한 골격근의 위축에 대한 표준 모델

이 프로토콜은 부상의 다양한 유도 패턴의 설명을 포함하여 쥐 모델에서 안면 신경 수술에 대한 재현 가능한 접근 방식을 설명합니다.

축축한 억제 및 재생을 연구하는 쥐 모델의 안면 신경 수술

이 프로토콜의 목표는 구강 안면 근육 섬유증 모델을 확립하는 것입니다. 생쥐 교근과 경골 전방 근육 간의 조직학을 비교한 결과, 동결 손상 후 교근 섬유화가 확인되었습니다. 이 모델은 구강 안면 근육 섬유증의 기저에 있는 메커니즘에 대한 추가 연구를 용이하게 할 것입니다.

구강 안면 근육 섬유증 모델을 확립하기 위해 마우스 교근의 동결 손상

여기에서는 두개골 거근 장뇨근(LAL)의 생체 내 전기천공법(in vivo electroporation)과 탈질법(denervation)을 결합한 프로토콜을 제시합니다. 이 절차를 통해 신경근 시냅스의 재생에서 근육 유래 단백질의 잠재적 역할을 연구할 수 있습니다.

In Vivo Electroporation과 Cranial Levator Auris Longus Skeletal Muscle의 단기 신경 재생이 결합되었습니다.

환풍기 유도 폐 손상에 대한 murine 모델은 급성 폐 손상을 연구하는 중요한...

마우스의 급성 폐 상해를 유발하는 압력 제어 환기

호흡 장애는 경추 척수 손상 후 사망의 주요 원인이다. 부분 자궁 경부 손상에 의해 유도 된 호흡의, 재생 가능한 정량화하고, 신뢰할 수있는 전임상 동물 모델을 갖는 것은 이후 호흡 및 비 호흡 신경 가소성을 이해하는 데 도움이 및 추정 복구 전략을 테스트 할 수 있습니다.

후 병변 호흡 신경 가소성을 연구하기 위해 자궁 경부 척수 손상의 생쥐 모델

학습하세요 마우스 안면신경 절단술을 통해 말초신경 손상에 대한 운동신경 반응을 연구하는 방법을. 이 기술은 신경 재생 및 치료 전략 개발에 활용됩니다.

마우스의 얼굴 신경 Axotomy : 부상으로 운동 신경 응답을 연구하는 모델

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