Name: 광 화학적으로 유도 된 후방 허혈성 시신경 병증의 쥐 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 54 s
Description: 배우세요 광화학적으로 유도된 후방 허혈성 시신경 병증의 쥐 모델을 통해 망막 신경절 세포의 변화를 평가하는 방법을. 이 모델은 질병 기전 연구와 신경보호 치료법 개발에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

우리는 비디오 편집을위한 가축 용 Eleut 에르난데스, 현미경 전문 지식에 대한 게이브 Gaidosh 및 Khue 트란과에서 Zhenyang 자오에 빚된다. 국립 안과 연구소에 의해 투자 된이 연구는 UM에 UCSD와 EY014801에 JLG 및 P30 보조금 EY022589에 R01-EY022129을 부여; 미국 심장 협회 (American Heart Association), 제임스와 에스더 킹 재단, 복단 대학 대학원 (제 2010033)의 박사 과정 학생 교환 프로그램 기금, 연구에서 무제한 부여 실명, 주식 회사를 방지하는

모든 동물의 절차는 캘리포니아 샌디에고와 마이애미 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 대학의 대학에 의해 승인 안과 및 Visual 연구에서 동물의 사용에 대한 ARVO 방침에 따라 수행되었다. 모든 시약 및 수술에 사용되는 장비는 멸균 수 있습니다. 1. 마취 및 수술에 대한 쥐를 준비 <ol><li> 절차 이전에, 래트를 체중에 따라 케타민 하였다 (60 mg / kg)과 자일 라진 (8 ㎎ / ㎏)을 복강 내 주사하여 마취시켰다. 마취의 적절한 깊이 발가락 핀치 자극에 대한 부정적인 반응에 의해 결정되어야한다. </li><li> 마취 후, 질식을 방지하고 수술 중 각막의 건조를 방지하기 위해 두 눈에 연고를 윤활 적용 할 앞으로의 혀를 잡아 당깁니다. </li><li> 헤어 커터를 사용하여 수술 부위를 면도 면적을 10 % 프로 비돈 요오드 세제 용액과 70 % 에탄올로 3 회 와이프. </li><li> 드레이프 T멸균 분야 내에서 그는 동물. 무균 장갑 및 수술 도구는 생존 수술시 사용됩니다. 동물 사이에 뜨거운 비드 살균기를 사용하여 상품의 팁을 다시하는 것은 소독. </li></ol> 2. 수술 적 접근 <ol><li> PION 유도 <ol><li> 대퇴 정맥 카테터 <ol><li> 준비하고 수술 부위를 청소하십시오. 헤어 커터를 사용하여 오른쪽 허벅 다리를 면도하고, 10 % 프로 비돈 요오드 세제를 70 % 에탄올로 영역을 세 번 각 와이프. </li><li> 튜브를 준비합니다. 70 % 에탄올로 소독 폴리에틸렌 튜브의 길이 40cm (PE 10)를 자른다. (20 mg / kg (체중)의 투여 량을 산출 1 μL / mg)을 식염수로 튜브를 세척하고 2 % erythrosin의 B 염료의 미리 측정 된 용액을 함유하는 1 ml의 시린지에 연결. 600 μL / min의 속도로 설정 풋 스위치 제어 주입 펌프에 주사기를 탑재합니다. </li><li> 15 호 칼날을 사용하여, 수평 방향에 작은 절개를오른쪽 허벅지베이스. 잘라 내기 및 내부 멤브레인을 전파하고 멸균 면봉으로 영역을 청소합니다. </li><li> 대퇴 정맥의 가지가 보일 때까지 집게와 근육을 분리합니다. 칼집은 동맥, 정맥 및 신경을 둘러싸고 있습니다. Vannas 스프링 가위로 삼각형 모양의 쐐기의 기본 근처 (2-4mm는 일반적으로 적합) 핀치와 집게 (미세 팁 뒤몽 집게)로 상승이 칼집을 당겨, 작은 절개를 잘라. 필요에 따라 절단을 확장합니다. </li><li> 정맥의 방향에 무딘 미세 수술 후크 평행 정맥과 동맥을 분리합니다. 섬세한 막과 정맥 분지가 손상되지 않도록주의하십시오. 그런 다음, 부드럽게 정맥을 들어 올려 기본 결합 조직에서 분리. </li><li> 바늘 나일론 봉합사를 확보하고 대퇴 정맥 옆에 놓습니다. 마이크로 훅을 이용하여 수술, 혈관을 상승 및 원위 영역 아래에 미세한 팁 집게를 통과한다. 봉합사의 한쪽 끝을 잡고 아래 당겨정맥. 단단히 말초 혈관을 결찰. 근위 정맥에서 비슷한 방법으로 두 번째 봉합을 전달하고 느슨한 매듭을합니다. </li><li> Vannas 스프링 가위로 원위부 결찰 근처의 정맥에 작은 상처를 확인합니다. 미세 팁 집게로 필요에 따라 구멍을 확장합니다. 일부 피가 컷을 통해 누수 될 수 있습니다. 감기, 멸균 BSS 및 멸균 면봉으로 외과 영역을 청소합니다. </li><li> 컷 가장자리 정맥 벽 채 바늘 홀더를 사용하여 제조 된 생리 식염수로 플러시 튜브 용기를 카테 테르를 꽂다. 정맥 및 튜브 주위 근위 매듭을 조입니다. 그리고, 원위 봉합사로 묶어서 배관 앵커. </li><li> 1 ml를 적절 &lt;식염수를 주입하는 풋 스위치를 눌러 카테터의 품질을 확인합니다. 튜브가 방해받지 않고 누출이 없는지 확인합니다. 일시적으로 카테터와 조직을 보호하기 위해 봉합과 절개를 닫습니다. </li></ol></li><li> 시신경의 노출 <ol><li> 위해 준비 할즉, 10 % 프로 비돈 요오드 세제 용액, 70 % 에탄올로 왼쪽 눈 위를 3 회 프리 면도 영역 닦아 수술 부위. </li><li> 제 15 호 블레이드와 눈 뒤에 피부 2-3mm 따라 절개를합니다. 핀치와 톱니 모양의 집게와 결합 조직을 들어 올린 Vannas 스프링 가위로 작은 절개를합니다. 이 작은 절개는 일반적으로 길이가 약 5mm이지만, 훈련 외과 의사에 대한 큰 노출을 제공하기 위해 더 이상 할 수 있습니다. 혈관을 방해하지 않도록주의하면서 퉁명스럽게 궤도 뼈의 우수한 림을 따라 결합 조직을 해부 계속합니다. 면봉으로 외과 영역을 청소합니다. </li><li> 직근이 보일 때까지 결막을 통해 아래로 해부하다. 핀치와 근육을 통해 해부; 근육은 궤도 내 깊은 곳에서 해방됩니다. 이제, 주변 조직의 시각화가 용이 눈 후퇴 및 승강을 돕기 위해 사용될 수있다. </li><li> 레측면과 아래쪽 피부와 결합 조직의 플랩을 기관 및 봉합 및 지혈과 장소에서 개최. 이 시신경 주위의 지방을 함유 칼집을 공개하기 위해 앞으로 바깥쪽으로 눈을 회전합니다. </li><li> 신중 날카로운 한 쌍의 겸자를 삽입 시스 주변 결합 조직을 분리하는 시신경에 평행하게 확장. 포셉의 날카로운 팁 시신경을 만지지 마십시오. </li><li> 시신경 주변 시스의 5mm 길이는 지금 볼 수 있어야합니다. 외피의 표면에 미세 혈관 망은 시신경을 둘러싸. 이러한 레이저 조사시 대상이 될 것입니다. </li></ol></li><li> Erythrosin B 및 레이저 조사의 정맥 내 주사 <ol><li> 녹색 레이저 빛으로부터 자신을 보호 할 수있는 레이저 조사 장치를 운영하면서 항상 오렌지 색 보안경을 착용 할 것. 레이저를 켜고 셔터를 열고 피크와 평균 포웨를 조정레이저의 중계국은 필요한. 셔터를 닫습니다. </li><li> 레이저 조사 장치에 래트를 위치. 빔 적절한 배치를 보장하기 위해, 약한 조준 빔 공간적 닫힌 셔터 블레이드 천공 100 ㎛ 직경의 구멍을 통해 레이저를 필터링함으로써 생성된다. 잘 팁 포셉 한 쌍의 시신경을 다시 노출, 3 mm이고, 시신경 유두 뒤에 4mm 사이의 안와 내 시신경에 조준 빔을 배치합니다. </li><li> 주입 펌프의 작동을 통해 2 % erythrosin (B)의 용액을 주입한다. 외과 시신경의 표면을 습하게하는 BSS의 작은 방울을 추가하는 동안 몇 초 동안 순환된다. </li><li> 조준 빔의 위치를​​ 확인하고 조사를 시작하기 위해 풋 스위치를 누르십시오. 현미경의 광로에 첨가 오렌지색 안전 필터는 즉시 1 초 지연 후 셔터의 개방 하였다 트리거 될 것이다. </li><li> 9 시신경 조사135mW의 피크 전력과 15 %의 듀티 사이클을 갖는 250 Hz에서 회전 빔 초퍼에 의해 생성 18mW의 평균 전력을 0 초 (이것은 열 효과를 최소화). 안전 필터를 통해 밝은 오렌지색으로 시각화 한 황색 형광을, 시신경의 우수한 표면으로부터 출사 된 빔은 대칭 신경을 조사하도록 충분한다. </li><li> 조사 후, 오렌지 색의 안전 필터가 자동으로 열립니다. 미세 출혈은 몇몇 경우에 관찰 될 수있다. </li><li> 여분의 안구 근육의 견인을 완화하고 중립 위치로 눈을 돌려줍니다. 중단 봉합과 절개를 닫습니다. 그런 다음 카테터를 철회 누출을 방지를 위해 단단히 대퇴 정맥을 묶어; 중단 된 봉합사로 닫습니다. 모두 절개에 항생제 연고를 적용합니다. 망막 중심 정맥과 동맥의 혈관 무결성을 검증하는 안저을 확인합니다. </li></ol></li></ol></li><li> 역행 라벨링. 망막 신경절 세포 (망막 신경절 세포) 주 : RGC 생존, fluorogold (FG)와 역행 라벨을 평가하기 위해 PION 전에 일주를 완료해야합니다. 방법은 주피터 프로토콜 819 (13)에 상세하게 설명한다. <ol><li> 간단히 : 케타민 (60 ㎎ / ㎏)과 자일 라진 (8 ㎎ / ㎏)과 동물을 마취하고 머리를 면도. </li><li> 수술 절개 부위를 스크럽과 머리에서 정중선 절개는 두개골을 노출 할 수 있습니다. </li><li> 두개골을 통해 양자 홀 (O의 2 × 2 ㎜) 모두 시상 및 횡 봉합 0.5 mm의 드릴입니다. </li><li> 조심스럽게 진공 펌프를 사용하여 우수한 둔덕 (SC)의 등 표면 위에 놓여 대뇌 콘텐츠 대기음. 그리고, SC의 표면에 4 % FG 적신 gelfoam을 작은 조각을 배치. </li><li> 표준 수술 후 관리를 사용하여 동물에 대한 봉합과 절개를 닫고 관심. </li></ol></li><li> 수술 후 치료 및 안락사 <ol><li> 동물이 복구 될 때까지 수술 후 순환 가열 물 패드의 상단에 별도의 깨끗한 새장에 동물을 배치합니다. </li><li> 수술 후 진통제 (부 프레 노르 핀 염산은 0.01 ㎎ / ㎏)의 불편을 최소화하기 위해 세 개의 연속 일 동안 하루에 두 번 투여해야한다. </li><li> 쥐 별도로 보관하고 그들이 흉골 드러 누움을 유지하고 충분한 의식을 회복 할 수있을 때까지 관찰해야한다. </li><li> 복구 및 건강의 징후는 수술 후, 또는 봉합사 제거 및 최신 발생 중 수술 부위의 적절한 치유 될 때까지 적어도 5 일 동안 매일 모니터링됩니다. </li><li> 조사의 관심에 따라 수술 후 과학적 적절한 시점에서 4 % PFA와 관류 동물을 안락사. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Wang, Y., Brown, D. P. Jr, Duan, Y., Kong, W., Watson, B. D., Goldberg, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+rodent+model+of+posterior+ischemic+optic+neuropathy.%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">A novel rodent model of posterior ischemic optic neuropathy.</a> JAMA Ophthalmology. 131, 194-204 (2013).</li>
<li>Rucker, J. C., Biousse, V., Newman, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+optic+neuropathies%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurol%22%5BJournal%5D)">Ischemic optic neuropathies.</a> Curr Opin Neurol. 17, 27-35 (2004).</li>
<li>Hayreh, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Posterior+ischaemic+optic+neuropathy%3A+clinical+features%2C+pathogenesis%2C+and+management.%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Posterior ischaemic optic neuropathy: clinical features, pathogenesis, and management.</a> Eye (Lond). 18, 1188-1206 (2004).</li>
<li>Hayreh, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inter-Individual+Variation+in+Blood-Supply+of+the+Optic-Nerve+Head.%5BTitle%5D)+AND+%22Doc+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Inter-Individual Variation in Blood-Supply of the Optic-Nerve Head.</a> Doc Ophthalmol. 59, 217-246 (1985).</li>
<li>Jacobson, D. M., Vierkant, R. A., Belongia, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonarteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy+-+A+case-control+study+of+potential+risk+factors.%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol-Chic%22%5BJournal%5D)">Nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy - A case-control study of potential risk factors.</a> Arch Ophthalmol-Chic. 115, 1403-1407 (1997).</li>
<li>Kosmorsky, G., Straga, J., Knight, C., Dagirmanjian, A., Davis, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+transcranial+Doppler+in+nonarteritic+ischemic+optic+neuropathy.%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The role of transcranial Doppler in nonarteritic ischemic optic neuropathy.</a> Am J Ophthalmol. 126, 288-290 (1998).</li>
<li>Hayreh, S. S., Zimmerman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-arteritic+anterior+ischemic+optic+neuropathy%3A+role+of+systemic+corticosteroid+therapy.%5BTitle%5D)+AND+%22Graefe%27s+archive+for+clinical+and+experimental+ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Non-arteritic anterior ischemic optic neuropathy: role of systemic corticosteroid therapy.</a> Graefe's archive for clinical and experimental ophthalmology. 246, 1029-1046 (2008).</li>
<li>Prado, R., Dietrich, W. D., Watson, B. D., Ginsberg, M. D., Green, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemically+Induced+Graded+Spinal-Cord+Infarction+-+Behavioral%2C+Electrophysiological%2C+and+Morphological+Correlates.%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Photochemically Induced Graded Spinal-Cord Infarction - Behavioral, Electrophysiological, and Morphological Correlates.</a> J Neurosurg. 67, 745-753 (1987).</li>
<li>Dietrich, W. D., Busto, R., Watson, B. D., Scheinberg, P., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemically+induced+cerebral+infarction.+II.+Edema+and+blood-brain+barrier+disruption.%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Photochemically induced cerebral infarction. II. Edema and blood-brain barrier disruption.</a> Acta Neuropathologica. 72, 326-334 (1987).</li>
<li>Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+reproducible+brain+infarction+by+photochemically+initiated+thrombosis.%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis.</a> Annals of Neurology. 17, 497-504 (1985).</li>
<li>Watson, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+photochemically+induced+brain+ischemia+and+stroke.%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebrovascular+Disease+-+Pathophysiology%2C+Diagnosis+and+Treatment%22%5BJournal%5D)">Animal models of photochemically induced brain ischemia and stroke.</a> Cerebrovascular Disease - Pathophysiology, Diagnosis and Treatment. , 52-73 (1998).</li>
<li>Watson, B. D., Prado, R., Dietrich, W. D., Ginsberg, M. D., Green, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photochemically+induced+spinal+cord+injury+in+the+rat.%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Photochemically induced spinal cord injury in the rat.</a> Brain Research. 367, 296-300 (1986).</li>
<li>Chiu, K., Lau, W. M., Yeung, S. C., Chang, R. C., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrograde+labeling+of+retinal+ganglion+cells+by+application+of+fluoro-gold+on+the+surface+of+superior+colliculus.%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Retrograde labeling of retinal ganglion cells by application of fluoro-gold on the surface of superior colliculus.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2008).</li>
</ol>

저자는 공개할 것이 없습니다.

여기에서는 쥐 모델에서 PION을 유도하는 방법에 대해 자세히 설명합니다. 프로토콜의 가장 중요한 부분은 시신경의 노출 및 조사로, 날카로운 미세한 끝 겸자나 스트레칭으로 인한 손상을 피하면서 가능한 한 오랫동안 신경을 노출시키는 것입니다. 쥐의 경우 안동맥은 시신경 유두에서 ≤1mm 떨어진 곳에서 시신경으로 들어갑니다. 따라서 시신경 유두에서 3-4mm 떨어진 시신경을 조사하면 내부 망막에 공급하는 동맥이 아닌 신경에 영양을 공급하는 모세혈관의 허혈만 초래해야 합니다. 안저경 검사는 중심 망막 동맥과 정맥의 혈관 무결성을 보장하기 위해 필요합니다. 연습을 통해 전체 수술 절차는 30분 안에 완료될 수 있습니다. 그리고 레이저 조사를 위해 설정된 매개변수를 통해 이 모델은 세포 사멸의 시간 경과를 재현 가능하게 합니다. 
피크 강도와 조사 기간은 허혈성 손상 중증도의 두 가지 결정 요인이므로 이러한 매개변수를 수정하여 다양한 연구 목적에 맞게 손상 정도를 조정할 수 있습니다. <...

50 세 이상 환자에서 허혈성 시신경 병증 (ION)은 급성 시신경 병증 (2)의 가장 일반적인 유형입니다. 전방 (아이온) 또는 후방 (PION) 3 : 조건은 특정 영향을받는 혈액 공급과 임상 양상의 원인에 따라 하나 두 하위 유형으로 표시 할 수 있습니다. 아이온의 병인과 과정은 광범위 4-7 연구되었지만, PION은 가난으로 인해 낮은 유병률, 변수 프리젠 테이션, 잘못 정의 된 진단 기준 및 동물 모델의 부족으로 이해 남아있다. 또한, 더 효과적으로 치료하거나 예방하거나 AION PION에서 시력 손실을 역방향으로 입증되지 않았다. 따라서 PION의 재현성 및 신뢰성있는 동물 모델 생체 내에서 질병 과정을 연구하고 신경 축삭 재생을위한 새로운 치료법을 테스트 큰 값이다. 광 화학적 vasog 결과 미세 혈관에 허혈 손상을 유도enic 부종과 혈전증 효과적으로 지역 조직 허혈 8-12을 만듭니다. 혈관 순환 내로 주입 한 후, 감광성 염료 erythrosin B는 목표 혈관 레이저 조사에 의해 활성화시 반응성 중항 산소 분자를 생성한다. 일 중항 산소를 직접 혈소판 부착 / 응집을 촉진하고 혈전 형성을 폐쇄로 이어지는, 혈관 내피 세포를 peroxidizes. 허혈성 손상이 주변 지역으로 확산 및 추가 인해 vasogenic 부종에 미세 혈관의 압축에 의해 악화된다. 이 프로토콜의 전반적인 목표는 광 화학적 PION에 의한 피해를 미러링 구후 시신경의 허혈을 유도하는 것입니다. 우리의 지식에,이 후방 시신경 1 허혈 손상의 첫 번째 모델이다. 물리적 외상을 피하면서이 모델은 허혈을 생산로서, 후방 허혈성 시신경 병증의 생리적 과정은 더 나은 모방하고 연구한다. 또한,이 모델은 광학 신경 병증 및 기타 중추 신경계 허혈성 질환에 대한 후보 치료제의 스크리닝을위한 새로운 플랫폼을 제공합니다. 여기서, 쥐 모델에서 PION 대퇴부 정맥 카테터, 시신경 노출 Erythrosin B의 정맥 내 주입과 레이저 조사에 대한 상세한 프로토콜 설명한다.

<table><tbody><tr><td>532nm Nd:YAG 레이저&nbsp;</td><td>Laserglow</td><td>LRS-532-KM-200-3</td><td></td></tr><tr><td>빔 쵸퍼</td><td>맞춤형</td><td></td><td></td></tr><tr><td>기계식 셔터 및 해당 셔터 구동 타이머</td><td>Vincent Associates</td><td>SD-10</td><td></td></tr><tr><td>25cm 초점 거리 구면 렌즈</td><td>CVI/Melles-Griot</td><td>01 LPX 293</td><td>plano-convexBK7 유리 렌즈, HEBBARTM 반사 방지 코팅</td></tr><tr><td>Erythrosin B&nbsp;</td><td>MP Biomedicals</td><td>190449</td><td></td></tr><tr><td>Fluorogold</td><td>Fluorochrome,LLC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gelfoam</td><td>Cardinal Health</td><td>CAH1203421</td><td></td></tr><tr><td>폴리에틸렌 튜빙 (PE10)</td><td>BD Intramedic</td><td>427400</td><td></td></tr><tr><td>No. 10 블레이드</td><td>Miltex</td><td>4-110</td><td></td></tr><tr><td>미세 집게</td><td>F.S.T.</td><td>91150-20</td><td>Dumont #5 녹슬지 않는 비자성</td></tr><tr><td>집게(이빨 포함</td><td>) F.S.T.</td><td>11153-10</td><td>독일 스테인리스</td></tr><tr><td>겸자</td><td>F.S.T.</td><td>18025-10년&nbsp;</td><td>독일 스테인리스</td></tr><tr><td>Vannas 스프링 가위</td><td>F.S.T.</td><td>2-220&nbsp;</td><td>JJECK 스테인리스</td></tr><tr><td>Polyglactin 봉합사</td><td>Ethicon</td><td>J488G</td><td>7-0 봉합사</td></tr><tr><td>지혈</td><td>F.S.T.</td><td>12075-12&nbsp;</td><td>독일 스테인리스</td></tr></tbody></table>

광 화학적으로 유도 된 후방 허혈성 시신경 병증의 쥐 모델

Rat Model of Photochemically-Induced Posterior Ischemic Optic Neuropathy

후방 허혈성 시신경 병증 (PION)는 임상에서 시력 파괴적인 질병이다. 그러나, 그 발병 기전과 자연의 역사는 제대로 이해 남아있다. 최근에는 PION의 신뢰성, 재현성이 동물 모델을 개발하고,이 모델 (1)에 약간의 신경 영양 인자의 치료 효과를 시험했다. 이 비디오의 목적은 후방 허혈성 시신경 병증의 우리의 광 화학적으로 유도 된 모델을 설명하고, 망막 신경절 세포의 역행 라벨과 그 효과를 평가하는 것입니다. 후방 시신경, 광 증감 색소, erythrosin (B)의 노출 수술에 이어, 정맥 내 주사하고, 레이저 빔은 시신경 표면 상에 집중된다. 혈소판 혈전증 및 부종 압축에 의해 매개 미세 혈관 폐색을 묻는 조사 손상, 혈관 내피 세포, 동안 erythrosin B와 레이저의 광 화학적 상호 작용. 그 결과 허혈성 손상은 점진적하지만 pronounc를 산출원격 부상 유도 및 임상 적 결과 - 축삭 입력의 손실로 인해, 망막 신경절 세포 dieback 에드. 따라서,이 모델은 PION의 병태 생리 학적 과정을 연구하기위한 새로운 플랫폼을 제공하고, 또한 광학 신경 병증 및 기타 CNS 허혈성 질환에 대한 치료 방법을 테스트하기 위해 최적화 될 수있다.

이 기술에 의해 유도 된 결과 허혈성 손상은 허혈성 축삭 손상 후 망막 신경절 세포의 점진적인 발음하지만 사망 산출한다. 이것은 인간의 질환에서 관찰 된 것과 유사한 임상 적 결과이다. FG 역행 라벨은 PION 후 RGC 생존을 정량화하는 데 사용됩니다. 동일한 방법이 성공적인 모델 생성을 검증뿐만 아니라 다른 치료법의 효과를 평가하기 위해 사용된다. (1)는 제어부로부터의 망막 평면 마운트에 FG 양성 세포의 대표적인 공 초점 화상 (도 1a)을 도시한다, 가성 처리 (레이저 전용 / 더 erythrosin의 B, 그림 1B), 그리고 2 주 (그림 1C) 동물 후 PION 처리하지 않습니다. 대조 동물에 비해 적은 FG 양성 세포가 이주 PION 유도 후 동물에 존재한다. 제어 및 가성 처리 (레이저 만 / 아니오 erythrosin의 B)의 망막 신경절 세포의 수 동물 사이에 유의 한 차이가 관찰되지...

이 프로토콜의 목적은 화학적 랫트 후부 시신경에 허혈 손상을 유도하는 것이다. 이 모델은 후방 허혈성 시신경 병증의 병태 생리에 대한 연구 및이를위한 치료 적 접근 방법과 다른 광섬유에 중요한 신경 병증,뿐만 아니라 다른 CNS 허혈성 질환이다.

Posterior Ischemic optic neuropathy (PION) is a sight-devastating disease in clinical practice. However, its pathogenesis and natural history ...

이 비디오의 목적은 광화학적으로 유도된 후방 허혈성 시신경병증 모델을 시연하고, 50세 이상의 환자에서 망막 신경절 세포의 역행성 손상과 함께 그 영향을 평가하는 것입니다. 허혈성 시신경병증은 급성 시신경병증 중 가장 흔한 유형입니다. 이 질환은 영향을 받는 특정 혈액 공급원과 임상 증상에 따라 전방 허혈성 시신경병증 또는 후방 허혈성 시신경병증의 두 가지 하위 유형으로 나타날 수 있습니다.전방 허혈성 시신경병증의 병태생리는 광범위하게 연구되었으나, 후방 허혈성 시신경병증은 낮은 유병률, 다양한 임상 양상 및 불분명한 진단 기준으로 인해 여전히 제대로 이해되지 않고 있습니다. 더욱이, 전방 또는 후방 허혈성 시신경병증으로 인한 시력 상실을 효과적으로 예방하거나 되돌릴 수 있다고 입증된 치료법은 없습니다. 따라서 후방 허혈성 시신경병증의 재현 가능하고 신뢰할 수 있는 동물 모델은 생체 내에서 질병 과정을 연구하고 신경 보호 및 축삭 재생을 위한 새로운 치료법을 테스트하는 데 큰 가치가 있습니다. 혈관성 부종과 혈전증을 유발하는 미세혈관의 광화학적 유도 허혈성 손상은 국소 조직 허혈을 효과적으로 생성합니다.허혈성 손상은 혈관성 부종의 동반으로 인한 미세혈관 압착에 의해 인접 영역으로 확산되고 더욱 악화됩니다. 본 연구에서는 후방 허혈성 시신경병증으로 인한 손상을 재현하기 위해 Bbar 시신경의 지시를 통해 이러한 형태의 허혈을 선택적으로 유도했습니다. 여기에서 Wang과 Dale Brown이 해당 절차의 단계별 시연을 제공합니다.저희가 알기로는, 물리적 외상을 피하면서 허혈 상태를 유도할 수 있는 후시신경 허혈성 손상 모델이 지금까지 개발되었습니다. 이를 통해 후시신경 허혈성 신경병증의 생리학적 과정을 더 잘 모방할 수 있습니다. 이 영상에서는 후시신경의 외과적 노출 이후, 후시신경 허혈성 신경병증 재현 모델의 전체 과정을 시연하겠습니다.광과민성 염료를 정맥 주사하고 레이저 빔을 시신경 표면에 집중시킵니다. 조사 동안 eryri B와 레이저 사이의 광화학적 상호작용은 혈관 내피세포를 손상시켜 혈소판 혈전증 및 혈관 압박으로 매개되는 미세혈관 폐쇄를 유발합니다. 그 결과 발생하는 허혈성 손상은 축삭 입력의 소실로 인해 점진적이지만 뚜렷한 망막 신경절 세포의 퇴행을 초래하며, 이는 원격 손상 유도 및 임상적으로 유의미한 결과입니다.532 nanometers 파장과 최대 300 milliwatts 출력으로 작동하는 YA 레이저입니다. 다음은 250 hertz로 작동하는 빔 초퍼로, 평균 전력을 피크 전력의 7.5%로 낮추는 데 사용됩니다. 평상시에는 닫혀 있는 ENC 빔 셔터가 있으며, 셔터를 닫았을 때 약한 조준 빔을 생성할 수 있도록 100 micron 직경의 작은 구멍이 뚫려 있습니다.다음은 25 centimeter 초점 거리의 평볼록 렌즈이며, 마지막으로 빔을 시신경 방향 아래로 유도하는 빨간색 직각 프리즘이 배치됩니다. 광원에서 발생한 레이저 빔은 초퍼를 통과하며 평균 출력이 피크치의 7.5%로 감소합니다. 이후 셔터가 빔을 차단하며, 셔터가 닫혔을 때는 100 micron 직경의 구멍을 통해 빔을 공간적으로 필터링하여 매우 약한 조준 빔을 생성합니다.이 약한 빔은 렌즈에 의해 집속되어 직각 프리즘을 통해 노출된 후방 시신경으로 아래쪽으로 유도됩니다. 수술용 현미경의 광로에 안전 필터를 전환한 후, 1초의 지연 시간을 두고 빔 셔터를 열어 조사를 시작합니다. 이 시점에서 최대 출력의 찹 빔(chop beam)이 집속되어 노출된 시신경을 향해 아래로 조사됩니다.빔과 혈류에 용해된 ethin bee 사이의 상호작용이 일어나면, 532 nanometer 녹색 레이저 광이 순환하는 ery 및 B 염료에 의해 효율적으로 흡수되어 형광을 발하며, 삼중항 상태의 염료 분자와 충돌하는 분자 산소는 들뜸 에너지를 전달받아 반응성이 매우 높은 일중항 상태 산소가 됩니다. 이후 이 CT 산소는 혈관 내피를 직접 과산화시켜 장벽에 점상 손상을 일으키며, 이는 특히 혈소판을 유인하고 혈장 성분이 실질로 누출되는 것을 촉진합니다. 따라서 이러한 손상 과정은 혈전증에 의한 혈관 폐쇄뿐만 아니라 미세혈관 압박으로 인한 혈관성 부종을 유발하며, 후자는 병변이 레이저 광의 침투 깊이 너머로 확장되는 원인이 됩니다.기술이 올바르게 수행되었다면, 혈소판 트롬빈에 섬유가 포함되지 않아야 합니다. 따라서 이 방법은 효율성이 훨씬 낮은 열 의존적 족부 응고 과정과 구별됩니다. 높은 피크 전력으로 작동하면 빔을 통해 평균 전력을 7.5%로 낮추는 동시에 불투명한 시신경으로의 유효 침투 깊이를 향상시킬 수 있습니다.초핑(Chopping)은 열적 과정이 아닌 화학적 과정이 마취된 쥐의 조직 손상을 유도하도록 보장하는 데 도움이 됩니다. 케타민 디아제팜 칵테일을 복강 내 주사하여 마취시킨 후, 질식을 방지하기 위해 혀를 조심스럽게 앞으로 내밀고, 수술 부위를 제모하며, 수술 중 각막 건조를 방지하기 위해 양쪽 눈에 복제 증강제를 도포합니다. 수술 중 동물이 통증을 느끼지 않도록 마취 단계를 확인하십시오.대퇴정맥 카테터 삽입부터 시작합니다. 수술 절차에 앞서, 미리 정량된 2% eryri B 용액이 들어 있는 1 mL 주사기에 멸균 처리 후 식염수로 세척한 튜브를 연결합니다. 체중 kg당 20 mg의 용량으로, 주사기를 분당 600 µL의 속도로 설정된 인퓨전 펌프에 장착합니다.10% povidone iodine로 수술 부위를 닦아낸 후 70% ethanol로 다시 닦아 소독합니다. 15번 메스를 사용하여 오른쪽 허벅지 하단에 절개창을 냅니다. 가위로 막을 절개하고 벌린 다음, 대퇴정맥의 분지가 보일 때까지 포셉으로 근육을 분리합니다.필요에 따라 가위와 핀셋을 사용하여 혈관을 주변 조직으로부터 분리하며 아래쪽으로 계속해서 절개합니다. 정맥의 시각화를 용이하게 하기 위해 차가운 멸균 BSS로 수술 부위를 세척합니다. 정맥, 동맥 및 신경을 둘러싸고 있는 초를 하부 조직으로부터 조심스럽게 분리합니다.그 다음, 혈관 양측을 따라 둔성 박리(blunt dissection)를 통해 정맥을 분리합니다. 미세 팁 포셉(fine tip forceps)을 혈관 아래에 조심스럽게 넣어 혈관을 들어 올린 후, 두 개의 니들리스트 나일론 봉합사를 정맥 아래로 통과시켜 잡아당깁니다. 원위부 정맥은 단단히 결찰하고, 근위부 정맥 주변으로는 느슨하게 매듭을 짓습니다.원위부 결찰 부위 근처의 정맥을 부분적으로 절개하고 필요에 따라 확장합니다. 포셉으로 절개된 정맥 벽을 잡고 식염수 세척 튜브를 혈관 내로 조심스럽게 삽입합니다. 그런 다음 튜브 주변의 느슨한 근위부 매듭을 조입니다. 튜브를 원위부 봉합사에 묶어 제자리에 고정합니다.카테터 삽입 상태의 품질을 확인하고 폐쇄나 누출이 없는지 확인한 후, 카테터 삽입 부위와 조직을 보호하기 위해 봉합사로 절개 부위를 일시적으로 폐쇄합니다. 10% 포비돈 요오드 세정액과 70% ethanol로 수술 부위를 준비합니다. 15번 블레이드로 눈 뒤쪽의 피부를 따라 절개한 다음, 베니스 스프링 가위를 사용하여 결합 조직을 절개합니다.안와골의 상단 가장지를 따라 결합 조직을 계속 절개합니다. 이때 주변 혈관이 손상되지 않도록 주의하십시오. 상직근이 보일 때까지 안와 조직을 절개합니다.시신경이 그 아래에 위치합니다. 피부 플랩과 결합 조직을 가쪽과 아래쪽으로 젖힙니다. 그러면 안구가 앞쪽과 바깥쪽으로 회전하게 됩니다.날카로운 포셉 한 쌍을 조심스럽게 삽입한 후, 신경을 노출시키기 위해 신경과 평행하게 벌려줍니다. 레이저 조사 과정에서 신경에 영양을 공급하는 미세혈관 네트워크를 표적으로 삼습니다. 레이저 조사 장치를 작동하는 동안에는 레이저 광선으로부터 자신을 보호하기 위해 항상 주황색 보호 안경을 착용하십시오.레이저 전원을 켜고 수 분 동안 피크 출력과 평균 출력을 조정하십시오. 모든 조사 절차를 시작하기 전, 동물을 장치 위에 조심스럽게 올리고 조준 빔이 시신경 노출 부위 근처를 비추도록 위치시킵니다.그런 다음 미세 팁 핀셋을 사용하여 시신경의 길이를 조심스럽게 다시 노출시킵니다. 조준 빔이 시신경 유두 뒤쪽 3~4mm 지점의 시신경에 닿도록 위치를 미세하게 조정합니다. 주입 펌프를 작동시켜 2% rosin B 용액을 주입하고, 이 과정에서 소량의 BSS를 떨어뜨려 시신경 표면을 적시면서 몇 초 동안 순환하도록 합니다.조준 빔의 위치를 확인한 후, 풋 스위치로 제어되는 안전 필터를 작동시키고 이어서 레이저 조사를 시작하여 90초 동안 조사합니다. 필터를 통해 오렌지색으로 보이는 황색 형광이 신경의 상단 표면에서 관찰되어야 하며, 형광이 시신경 전체에 걸쳐 균일하게 나타나도록 해야 합니다. 쥐의 위치를 약간 조정하면, 조사가 끝난 후 안전 필터가 자동으로 열립니다.일부 사례에서는 미세 출혈이 관찰될 수 있으며, 이 경우 외안근의 견인을 완화하고 안구를 중립 위치로 되돌린 후 단속 봉합으로 절개 부위를 봉합합니다. 대퇴정맥 카테터 삽입부를 고정하고 있는 봉합사를 절단하고 튜브를 조심스럽게 제거합니다. 누출을 방지하기 위해 대퇴정맥 근위부를 단단히 묶고 단속 봉합으로 절개 부위를 봉합합니다.양측 절개 부위에 항생제 연고를 바르고, 안저를 확인하여 중심 망막 정맥과 동맥의 혈관 무결성을 점검합니다. 동물을 회복을 위해 깨끗하고 가열된 케이지로 옮기고, 수술 후 진통제를 투여하며 동물을 관리합니다. 이때 기관의 동물 관리 지침을 준수하십시오.수술 후 동물을 수시로 관찰하여 절개 부위가 깨끗하고 감염이 없는지 확인하고, 통증 여부를 평가하여 적절한 진통제를 투여하며, 정상적인 섭식 및 기타 행동을 모니터링하십시오. 후방 허혈성 시신경 병증 유도 후, 대조군 동물과 비교하여 레트로-리핀(retro-lipin)을 사용한 망막 평면 표본의 공초점 영상을 통해 망막 신경절 세포의 생존율을 정량화할 수 있습니다. PION 유도 2주 후의 동물에서는 신경절 세포의 수가 유의하게 적게 나타납니다.sham 대조군 동물의 망막 신경절 세포 수 사이에는 유의미한 차이가 관찰되지 않았습니다. 이는 망막 신경절 세포의 손실이 레이저 단독의 열에너지가 아니라 B와 레이저 조사의 조합에 의해 유도됨을 나타냅니다. 이 실험 절차에서 가장 중요한 부분은 시신경의 노출 및 조사입니다.상어 파인 팁 포셉에 의한 신경 손상이나 안동맥의 신전을 방지하기 위해 세심한 박리가 필요합니다. 시신경 유두로부터 약 1mm 떨어진 지점에서 시신경에 진입하십시오. 시신경 유두에서 3~4mm 떨어진 곳에 레이저를 조사하는 것이 중요한데, 이는 허혈 범위를 동맥이나 내망막으로 이어지는 분지 혈관이 아닌 신경에 혈액을 공급하는 모세혈관으로 제한하기 위함입니다. 설정된 레이저 조사 파라미터에 따라 시술을 마친 후, 내시경 검사를 통해 중심 망막 동맥과 정맥의 혈관 무결성을 반드시 확인해야 합니다.이 모델은 정점 강도와 조사 시간이 허혈성 손상의 두 가지 결정 요인이므로 재현 가능한 세포 사멸 시간 경과를 나타냅니다. 추가적인 최적화를 통해 이러한 매개변수의 심각도를 수정함으로써, 다양한 연구 목적에 맞게 망막 신경절 세포 손상의 정도를 조절할 수 있습니다. 이 모델은 후부 허혈성 시신경병증의 발병 기전 및 분자적 변화 연구를 위한 새로운 플랫폼을 제공하며, 이 질환 및 기타 중추신경계 허혈성 질환의 치료 약물을 스크리닝하는 데 사용될 수 있습니다.

rat-model-photochemically-induced-posterior-ischemic-optic

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

Photothrombosis 매우 재현성 방식으로 관심 분야의 작은 잘 구분 경색을 유도하기위한 빠르고, 최소 침습 기술입니다. 그것은 형질 전환 생쥐에서 뇌의 가소성을 기본 세포 및 분자 반응 연구를 위해 특히 적당하다.

Photothrombotic 국소 빈혈 : 마우스 스트로크 연구를위한 최소 침습 및 재현성 광화학 대뇌 피질의 병변 모델

광혈전증은 척수에 국소 허혈을 유발하는 최소 침습적이고 재현성이 높은 시술이며 생쥐의 척수 손상 모델 역할을 합니다.

쥐의 척수 손상의 모델로 초점 국소 빈혈을 Photothrombosis는 유도

이 문서에서는 마우스에서 안압 상승으로 망막 허혈 - 재관류 손상을 유도하는 절차를 설명합니다. 안압 상승으로 망막 허혈 - 재관류 손상은 망막 신경 혈관 기기의 인간 질병에 대한 잠재적 인 세포 메커니즘과 치료를 조사하는 연구를 가능하게 망막에 손상 산소와 영양 공급에 의해 특징 인간의 병리를 모델링하는 역할을한다.

안압 상승을 통해 망막 허혈 - 재관류 손상의 마우스 모델

다음 보고서는 적절한 염료, 콘택트렌즈 및 레이저 매개변수를 사용하여 비동맥 전방 허혈성 시신경병증(rNAION)의 설치류 모델을 복제하는 방법을 설명합니다. 또한 in vivo에서 rNAION 병변을 평가하기 위한 적절한 단계를 밝힙니다.

Nonarteritic 전방 허혈성 시신경 병증의 설치류 모델 (rNAION)

망막 신경 절 세포 (RGCs)의 2 차 변성 녹 내장에서 일반적으로 발생합니다. 이 연구 부분 시 신경 transection 위한 혁신적인 수술 접근 방법을 설명합니다. 이 공간 절약 요원 접근의 사용 모델의 응용 범위를 확장 하며 보조 부상 메커니즘의 탐사 RGCs에 새로운...

쥐에 있는 부분 시 신경 Transection: 망막 신경 절 세포의 2 차 변성을 평가 하기 위해 새로운 수술 방식으로 설립 모델

산소 유발 망막병증(OIR)은 미숙아 및 증식 성 당뇨병 망막증의 망막병증과 같은 허혈성 망막 질환을 모델링하고 신생아 질환에 대한 항 혈관 신생 약물을 평가하는 개념 증명 연구의 모델로 사용될 수 있다. OIR는 정량화 될 수있는 망막에서 견고하고 재현 가능한 신생 혈관화를 유도합니다.

설치류에 있는 허혈성 망막 질병을 위한 산소 유도한 망막병증 모형

여기서, 우리는 간단한 봉합사 및 클램프를 사용하여 일시적인 양측 공통 경동맥 폐색에 의한 망막 허혈의 마우스 모델을 설명합니다. 이 모델은 심혈관 비정상으로 인한 망막 허혈의 병리학적 메커니즘을 이해하는 데 유용할 수 있습니다.

과도 양측 공통 경동맥 폐색에 의해 유도된 허혈성 망막 손상의 뮤린 모델

이 프로토콜은 망막 플랫 마운트 마우스의 제조 및 면역형광 염색 및 분석을 위한 상세한 방법을 기술한다. 마우스 새끼를위한 fluorescein 안저 혈관 조영술 (FFA)의 사용 및 이미지 처리도 자세히 설명되어 있습니다.

산소 유발 망막병증 마우스 모델에서 망막 혈관의 동적 성장 모니터링

여기에서는 장미 벵골을 사용한 망막 정맥 폐색에 최적화된 프로토콜과 유전자 변형 균주에서 재현성을 극대화하기 위한 권장 사항과 함께 레이저 유도 망막 영상 현미경 시스템에 대해 설명합니다.

가변성을 제한하기 위한 망막 정맥 폐색 마우스 모델의 최적화

이 프로토콜은 전방삽관 삽입 및 안압 상승을 통해 망막 허혈을 유도한 다음 안압 정상화를 통해 재관류를 시작하여 마우스 눈의 망막 허혈-재관류 손상을 모델링합니다.

Induction of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury in a Mouse Eye Model

이 프로토콜은 바이러스 전달, 광혈전 이식, 광혈전 유도, 성상교세포 및 신경세포 활동의 동시 기록, 성상교세포의 광유전학적 자극을 포함하는 통합 방법을 제공합니다. 이 통합 방법은 허혈성 뇌졸중의 급성기부터 만성기까지의 성상교세포-뉴런 관계를 동시 조사하는 것을 목표로 합니다.

광혈전성 뇌졸중 모델링과 행동하는 쥐의 신경 및 성상세포 활동의 생체 내 옵트로드 기록을 위한 통합 방법

배우세요 광화학적으로 유도된 후방 허혈성 시신경 병증의 쥐 모델을 통해 망막 신경절 세포의 변화를 평가하는 방법을. 이 모델은 질병 기전 연구와 신경보호 치료법 개발에 활용됩니다.

광 화학적으로 유도 된 후방 허혈성 시신경 병증의 쥐 모델

더 많은 동영상 탐색