Name: 보통 태아 알코올 노출과 성인 쥐의 사회적 행동의 정량화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 1 s
Description: 배우세요 쥐의 태아기 알코올 노출 방법과 성인기 사회적 행동 정량화 기법을. 이 프로토콜은 발달 신경과학 및 행동 연구에 필수적인 동물 모델 실험 절차를 상세히 설명합니다.

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여기 첨부 된 동영상에서 설명하는 모든 절차는 보건 과학 센터의 기관 동물 케어 및 사용위원회 및 뉴 멕시코 대학의 메인 캠퍼스에 의해 승인되었습니다. 1. 태아 에탄올 노출 <ol><li> 필요한 모든 재료와 화학 물질을 얻 사카린 나트륨 염 수화물, 190 증거 에탄올 (부피 기준 95 % 알코올), 파란색 유리 마시는 튜브, 하나의 구멍, 1 &quot;굽힘 튜브 - 볼 포인트, 종이 통치자 WWW에서 인쇄 천연 고무 흰색 # 4 스토퍼 .vendian.org / mncharity / dir3 / paper_rulers /. </li><li> 공급 업체 나 다른 소스에서 입증 된 성인 증식 쥐를 얻습니다. 이 프로토콜에 제시된 방법과 대표적인 데이터에 대한 긴 에반스 브리더를 사용합니다. 여성은 125-150g 그들이 사육시 약 9~10주 나이가되도록 도착시 연령 6 ~ 7 주 (1.5 단계) 무게. 모든 미래의 댐은 처음 어머니 있는지 확인합니다. 남성 12 있는지 확인도착 연령의 주 및 번식 프로토콜의 시작 오래 15주. </li><li> 하우스 역 12 시간 조명 / 어두운 일정에 22 ° C에서 개별적으로 플라스틱 케이지의 동물 (09 시간으로 21:00에 점등). 모든 음주 세션 중에 포함, 연구를 통해 음식과 수돗물 임의로에 대한 액세스 권한을 제공합니다. 1.4 단계로 진행하기 전에 시설에 순응 적어도 일주를 허용합니다. </li><li> 각 여성 쥐의 기준 체중을 얻습니다. </li><li> 2 주간 암컷 쥐에서 임신 전 음주 수준을 평가합니다. 단계에 따라 1.5.1-1.5.6 위해. <ol><li> 일에 1과 2는 수돗물에 0.066 %의 사카린 용액 (없음 에탄올)를 포함하는 음주 튜브를 입력합니다. 소비를 작성하기 전에 마시는 튜브 mm의 정밀도로 종이 통치자를 부착 정량화합니다. 이 에탄올 소비를 정량화하는 튜브의 무게와 관련된 측정에 오류를 감소시키기 때문에이 방법을 사용합니다. 눈금자 20mm 마크에 튜브를 입력합니다. 4 시간 drinki 시작NG 세션 (1.5.1-1.5.6 1.7 단계) 활동 및 음주 수준이 가장 높다 어두운 단계 (10시 시간)의 발병 후 1 시간. </li><li> 각 회식의 단부에서 소비 된 사카린 용액의 부피를 정량화. 측정을 용이하게하기 위해, 미리 눈금자 mm 당 용액의 양을 결정하고 볼륨 mm로 변환한다. 여기에 추천 튜브를 들어 각 mm는 0.366 ml의에 해당합니다. </li><li> 일 3, 4 일 2.5 % 에탄올 (v / v)의 수돗물에서 0.066 % 사카린 용액으로 튜브를 입력합니다. 각 세션의 단부에서 소비 하였다 (체중 kg 당 중량)의 에탄올 용액의 양을 정량화. </li><li> 하루에 5 이후 5 % 에탄올 (v / v)의 수돗물에서 0.066 % 사카린 용액으로 튜브를 입력합니다. 각 세션의 단부에서 소비 하였다 (체중 kg 당 중량)의 에탄올 용액의 양을 정량화. </li><li> 임신 전 마시는 단계가 완료되면 쥐의 무게를 평균 에탄올 consum을 계산ption 전체 그룹에 대한 표준 편차. 소비가 1보다 큰 표준 편차 임신 중에 자발적 음주의 변동성을 줄이기 위해 연구에서 의미 위 또는 그룹 아래에 의미있는 쥐를 제거합니다. </li><li> 임신 전 음주 수준이 두 그룹에 대해 최대한 가깝게 일치하도록 사카린 제어 또는 PAE 조건 중 하나에 남아있는 쥐를 할당합니다. </li></ol></li><li> 1~14일 쌍 내에서 입증 된 남성 개종 각각 여성 쥐. 여성 쥐 사육 단계에서 에탄올을 소비하지 않습니다. , 질 플러그의 존재에 의해 임신을 확인 여성 쥐의 무게, 개별적으로 그녀의 집. 이 연구에서 여성을 제거 후 최대 5 일에 대한 남성 개종 암컷 쥐를 떠나, 임신 일 1. 선택적으로 정의된다. 참고 : 임신 중 에탄올 소비가 질 플러그의 존재를 임신 1 일 검사 10:00 시간에 시작하기 때문에 수행해야이때 이전. </li><li> 임신 기간 동안 하루 4 시간 (1,000 1,400 시간) 에탄올 또는 사카린 솔루션을 제공합니다. <ol><li> 임신 1 일에 시작하는 0 % 또는 5 % 에탄올 및 그룹 할당에 따라 수돗물에서 0.066 % 사카린 솔루션 중 하나와 여성 쥐를 제공합니다. 사카린 대조군에 제공 0 % 에탄올 용액 부피의 에탄올 래트에 의해 소비 5 % 에탄올 용액의 평균 체적에 매칭되는지 확인. 각 세션의 단부에서 소비 된 또는 사카린 (체중 kg 당 중량)의 에탄올 용액의 양을 정량화. </li><li> 산모의 체중 증가를 평가하기 위해 매주 쥐 댐의 무게를. </li><li> 마시는 세션을 포함하여 항상 음식과 수돗물을 제공합니다. </li><li> 자손이 태어날 때 에탄올 노출 절차를 중단. 출생시 라이브 강아지와 강아지의 무게의 수를 기록한다. 출생 후의 일 0으로 출생의 날을 지정합니다. </li><li> 출생 후 하루 2 ~ 3 약 10 새끼에 새끼를 추려. t을 시도O 각 쓰레기 여성 동물 남성의 동등한 비율을 유지한다. 이것이 가능하지 않다면, 남성 및 여성의 개수가 다른 10 새끼로 추려. </li><li> 기록 강아지 무게 출생 후 2~3일. </li><li> 같은 산전 처리 조건에서 동물 동성 쌍 약 출생 후 하루 21 ~ 24과 집에서 동물을 유아. 잠재적 인 쓰레기 효과를 제한하는 실험 당 각 쓰레기에서 이상 1-2 쥐를 사용하지 마십시오. </li></ol></li></ol> 2. 사회적 행동 <ol><li> 구하여 필요한 모든 재료와 장비를 준비합니다. <ol><li> 사회적 상호 작용을위한 장치를 얻습니다. 청소하고 소독하기 쉬운 물질로 구성 오픈 탑과 챔버를 사용합니다. 장치의 전면에는 촬영을하기 위해 경질 투명 플라스틱 (~ 2mm 두께)로 피복되어야한다. 라인은 투명 플라스틱 (~ 2mm 두께)와 내부 벽과 바닥은 청소 및 악취 제어에 도움이됩니다. 다시 내부 WA 따라 장소 거울LL 분석에 도움이됩니다. 참고 : 대표 데이터가 여기에 장치의 내부 측면과 바닥을 커버하는 사용자 정의 챔버 오픈 탑 단단한 투명 플라스틱 (2mm 두께)와 (× 43cm 키가 큰 폭 95cm 길이 × 47cm)를보고 사용 하였다. 미러는 후면 벽을 따라 배치했다. 특정 치수 및 재료가 사회적 행동의 측정을 위해 중요하지 않은, 그러나, 그 크기가 충분히 정품 사회적 상호 작용을 보장하기 위해 큰 다른 행위와 구별 될 수있는 것이 추천된다. 즉, 동물이 서로 가까이에 항상되지 않도록 장치는 충분히 커야한다. </li><li> 모든 촬영이 가시 스펙트럼 내에서 거의 또는 전혀 주변 조명으로 실시로 낮거나 빛이없는 조건에서 기록의 비디오 카메라가있는 얻습니다. 네이티브 어두운 조건에서, 카메라가 있지만, 적외선 스펙트럼 내에서 높은 해상도를 가지고, 기록 할 수있는 임의의 카메라를 확인추가 적외선 조명 장치와 야간 모드 또는 충분합니다. </li><li> 주변 장치에 위치 적외선 조명 장치는 영상 녹화 장치의 조명을 향상시킬 수있다. </li><li> 실험실 등급의 목재 칩 (미루 나무 칩)을 구합니다. </li><li> 세션 및 냄새 조절 장치 사이의 청소 브러시​​, 빗자루, 이산화 염소 및 이소 프로필 알콜 (70 %)을 얻었다. </li></ol></li><li> 장치의 적응과 사회적 행동 <ol><li> 실험이 단계를 들어, 나이가 최소 90 일입니다 성인 쥐에서 측정을합니다. </li><li> 이전에는 각 세션에, 어떤 숲 칩을 제거 세션 사이의 냄새를 제어하고 신선한 나무 칩을 제공하기 위해 이소 프로필 알코올로 청소 장치를 닦습니다. 나무 조각이 완전히 장치의 바닥을 커버 있는지 확인합니다. 깨끗하고 필요에 따라, 예컨대 이산화 염소 같은 적절한 제로 살균 장치. </li><li> 세 일 연속으로 동물과 케이지 동료를 배치30 분 동안 챔버는 장치에 동물을 적응. 적응 세션 동안 모든 실내 조명이 꺼집니다. </li><li> 동물 개별적으로 24 시간 동안 신선한 침구, 음식, 물과 새 케이지에서 세 번째로 적응 세션 집의 끝에서 사회적 상호 작용 동기를 부여합니다. </li><li> 동물 후 다음 날 24 시간에 기록 사회적 상호 작용을 분리 하였다. <ol><li> 청소 장치로부터 목재 칩을 제거하고 이산화 염소 소독, 악취 제어, 이소 프로필 알코올로 닦아, 세션 이전 목재 칩을 대체. </li><li> 상호 작용을 기록하기 위해 하나 이상의 카메라를 배치. 위치에 적어도 하나의 카메라 장치의 전면에있어서의 뒤쪽 벽에 거울들은 분석을위한 부가적인 관점을 제공 할 수 있도록. </li><li> 동물을 한 번에 하나씩 검색하고 모피 패턴의 고유 한 특징이 주목 될 수 있도록 카메라 앞에 동물을 잡아. 이러한 식별 기능모피는 분석보다는 인위적 동물 마킹 동안 래트를 구별하는데 사용될 수있다. 참고 : 설치류 사회적 상호 작용의 여러 측면이 후각 신호와 가능 도입 외국 냄새는 피해야한다 어디든지 파트너, 냄새를 포함하기 때문에. 롱 - 에반스 래트는 전형적으로 동물의 임의의 주어진 쌍들을 구별하기 위해 사용될 수 모피 패턴의 일부 기능을 가지고있다. 다른 균주 (예, 흰쥐)의 경우와 같은 향료 색소와 같은 꼬리를 마킹 대안 적 방법이 사용될 수있다. 그것은 관심의 많은 행동이 특정 목표에 관한 것이다 것을 인식하는 것이 중요하다 (예., anogenital가 꼬리의 기지 근처에 지시 스니핑, 목, 또는 측면 또는 배를 향해 적극적인 공격의 목덜미에 지시 장난 공격). 지금까지의 관심이 대상에서 꼬리의 끝 부분에 가까운 동물을 표시하는 것이 좋습니다. </li><li> 적어도 12 분 동안 사회적 상호 작용의 기록 영상.</li><li> 세션 전체 싸움을 위해 동물을 모니터링합니다. 가능하면 실험이 세션 동안 방에되지 않도록, 모니터 또는 창을 통해 동물을 볼. 참고 : 격투가 드물게 성인 쥐 연구에서 관찰되지 않은, 그러나, 동물 세션에 걸쳐 모니터링해야한다. 이 세션은 과도한 싸움이있을 경우 중단해야 또는 동물에 상해 나 부상의 흔적이있다. </li></ol></li></ol></li><li> 행동 코딩 및 분석. <ol><li> PAE 1,18로 이전 작업에 따라 관심의 다음 동작을 확인합니다. 다음 문제 중 첫 번째 발생에 지속 시간, 빈도 및 대기 시간을 정량화; 나무 조각에 파고 /, anogenital 스니핑, 파트너 아래 / 위로 (교차) 파트너의 몸 (몸 냄새)의 다른 스니핑을 크롤링 (파트너의 정리)를 allogrooming, 양육하고, 스니핑, 권투, (피닝 포함) 레슬링 . 각 동작의 예는 예시 아르이 문서의 비디오 구성 요소의 개발. </li><li> 비디오에서 관심의 사회적 행동을 정량화. 관심의 각 동작에 대한 첫 번째 인스턴스에 주파수, 총 시간 및 대기 시간을 가져옵니다. 참고 : 이러한 조치를 얻기 수동으로 달성 될 수있다, 그러나, 디지털화 된 비디오의 컴퓨터 분석을 사용하여 이러한 조치를 정량화하는 것이 좋습니다. 비디오 및 행동의 정량의 재생을위한 매트랩 (www.mathworks.com) 스크립트는이 기사에 대한 보충으로 제공됩니다. </li><li> 모든 쥐 완료 코딩 한 후 그 결과 지속 시간, 빈도 및 대기 시간 데이터는 통계 패키지로 분석된다. </li></ol></li></ol>

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저자는 공개할 이해 상충이 없습니다.

여기에 설명 된 태아 알코올 노출 패러다임은 임신 중 쥐 댐에 의한 에탄올의 자발적인 소비 (5 % v / v)로 포함한다. 타이밍, 도즈, 기간 및 노선 에탄올 투여뿐만 아니라, 조사중인 종에 대하여 다를 문헌에서 표현 뇌 발달 동안 에탄올 비인간 동물을 노출시키기위한 수많은 프로토콜들이있다. 노광 다양한 프로토콜의 장점의 완전한 치료가 여기에 제공되지 않지만, PAE에 대한 자발적인 마시는 방법의 몇 가지 장점이 강조 프로토콜에서 설명. 우리는 이전에 래트 댐 차 음식 소스 (24)의 일부로서 5 % 에탄올을 소비하는 유동식 프로토콜, 통상적으로이 분야의 연구에서 사용되는 방법을 이용했다. 이러한 접근법에 대한 제어 조건이 칼로리 섭취량은 에탄올이 소모 댐의 것과 멍에시킨 쌍 먹인 그룹과 임의 량의 (ad libitum) 접근 할 수있는 그룹을 포함차우합니다. 두 그룹의 쥐 댐 (에탄올, 사카린) 영양과 칼로리 섭취 그룹 변동성 사이 줄이고, 낯선 음식 소스의 강제 섭취로 인한 스트레스의...

어린이의 추정 1~5%는 태아 알코올 증후군 (FAS), 부분 FAS (PFAS), 및 알코올 관련 신경 발달 장애 (ARNDs)를 3 등 태아 알코올 스펙트럼 장애 (FASDs) 2, 진단된다. 사회적 행동과인지의 적자는 FASDs 4-7 소아에서 관찰 된 가장 흔한 부작용 중입니다. 부정적인 결과가 FASDs 8-10과 인간, 비교적 미묘한하지만, 그럼에도 불구하고 지속적으로 발생할 수 FAS의 눈에 띄는, 형태 학적 행동 및인지 적자 특성으로 이어질하지 않는 적당한 PAE 무거운 태아 알코올 노출 (PAE)에 적자를 국한되지 않습니다 및 비 - 인간 동물 뇌 발달 11시 에탄올에 노출. 적당한 PAE의 행동 및 해당 신경 생물학적 결과를 이해의 중요성은 FASD 케이스의 대다수가 덜들 내에 있음을 나타내는 현재의 추정에 의해 강조된다스펙트럼 (12)의 evere 범위. 여러 독립적 인 실험실을 포함, 두뇌 발달하는 동안 노출을 에탄올 관련 설치류 사회적 행동의 변화를보고 플레이 14,16,17를 변경 조사와 상호 작용 1,13-15을, 감소, 사회적 자극에 응답에 적극적인 상호 작용 17, 18, ​​변경을 증가 사회적으로 획득 한 식품 환경 및 사회적 인식 메모리 (22)에 19 ~ 21, 및 적자. 사회 행동 적자는 무거운 (혈중 에탄올 농도 (BECS) ~ 300mg의 / DL) 22, 23 또는 에탄올의 더 온건 한 수준 (BECS ~ 80 ㎎ / DL) 1, 및 기타 중요한 매개 변수의 넓은 범위에 걸쳐 노출 이후에 관찰되었다 행동 측정시 노광 타이밍, 노출 기간,​​ 연령 등 다양한 요인. 이전 연구는 사회 INT의 특정 측면에 그 변경을 증명했다성인이 eraction는 1,18 사카린에 노출 제어 동물에서 적당한 알코올에 노출 쥐를 구별. 특히, 중간 PAE는 지속적으로 공격적인 행동의 증가, 그리고 성인이 (파트너의 스니핑 예) 사회 조사의 낮은 수준을 제시 레슬링의 강력한 증가와 관련이있다. 사회적 행동의 변화가 PAE의 신뢰할 수있는 결과이기 때문에, PAE 다음과 같은 사회적 행동의 정량은 사회적 행동에 PAE 관련 변경의 신경 기지의보다 완전한 이해와 중재 방법의 개발을 향해 진행에 대한 중요성을 보유 할 수있다. 이 논문과 관련 비디오의 목표는이 성인 자손의 사회적 행동의 정량 중간 PAE 프로토콜 및 방법에 대한 교육을 제공하는 것입니다 확실하게 구별 태아 알코올에 노출 된 비에 노출 된 쥐의 자손에서.

<table><tbody><tr><td>사카린 나트륨 염 수화물</td><td>시그마</td><td>S1002</td><td></td></tr><tr><td>190 프루프 에탄올</td><td>시그마</td><td>493538</td><td></td></tr><tr><td>구슬 유리 마시는 튜브</td><td>피셔</td><td>14-955K</td><td></td></tr><tr><td>천연 고무 화이트 # 4 스토퍼 한 구멍</td><td>플라스틱 LSG4M181</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 "벤드 튜브 - 볼 포인트</td><td>Ancare</td><td>TD-199-3"</td><td></td></tr><tr><td>종이 눈금자</td><td></td><td>해당 없음 N/A</td><td><a href="http://www.vendian.org/mncharity/dir3/paper_rulers">www.vendian.org/mncharity/dir3/paper_rulers</A></td></tr><tr><td>사회적 상호작용을 위한 장치</td><td>맞춤형</td><td>N/A</td><td>95cm X 47cm X 43cm</td></tr><tr><td>비디오 카메라</td><td>해당</td><td>없음</td><td>저조도 또는 저조도 기록 가능</td></tr><tr><td>적외선 조명기</td><td>Vitek</td><td>VT-IR1-12</td><td></td></tr><tr><td>Teklad 실험실 등급 sani-chips</td><td>Harlan</td><td>7090A</td><td></td></tr><tr><td>브러시 및 쓰레받기</td>, <td>해당 사항 없음</td><td>이</td><td></td></tr><tr><td>소프로필 알코올</td><td>시그마</td><td>W292907</td><td></td></tr><tr><td>이산화염소(1.5mg 정제)</td><td>Quiplabs</td><td>N/A</td><td>제조업체의 권장 사항에 따라 준비</td></tr></tbody></table>

보통 태아 알코올 노출과 성인 쥐의 사회적 행동의 정량화

Moderate Prenatal Alcohol Exposure and Quantification of Social Behavior in Adult Rats

사회적 행동의 변화는 태아 알코올 스펙트럼 장애(FASD)가 있는 어린이에서 관찰되는 주요 부정적인 결과 중 하나입니다. 여러 독립 실험실은 뇌 발달 중 알코올에 노출된 설치류의 사회적 행동에 대한 강력한 변화를 광범위한 노출 기간, 시기, 용량 및 행동 정량화 시점의 연령에 걸쳐 입증했습니다. 이 실험실의 이전 연구에서는 쥐의 중등도 태아 알코올 노출(PAE) 후 레슬링 증가 및 조사 감소를 포함하여 성인기까지 잘 지속되는 특정 형태의 사회적 상호 작용에서 신뢰할 수 있는 변화를 확인했습니다. 이러한 행동 변화는 중등도의 PAE1에 의해 변경된 신경 회로를 식별하는 데 유용했으며, 사회적 행동에서 PAE 관련 변화의 신경 기반에 대한 보다 완전한 이해를 향해 나아가는 데 중요할 수 있습니다. 이 논문은 쥐댐이 임신 기간 동안 자발적으로 에탄올 또는 사카린을 소비하는 중등도의 PAE(대조군)를 수행하는 절차와 성체 자손의 사회적 행동을 측정하는 절차를 설명합니다.

많은 번식 라운드의 과정을 통해 에탄올 상태에서 암컷 쥐가 지속적으로 4 시간 마시는 세션 당 에탄올의 약 2.1 g / kg의 평균을 마신다. 쥐 댐 45 분 시점에서 측정 된 약 60 ㎎ / DL의 피크 모체 혈청 에탄올 농도 결과 술 튜브를 도입 한 후의 제 15 ~ 30 분 동안 네 시간 합계의 약 절반을 소비한다. 마시는 기간의 나머지에서 3.5 시간 동안, 그들은 0.4 g / kg 체중 / 시간 이하, 비교적 안정된 속도로 5 % 에탄올을 소비하는 것을 계속한다. 자발적인 에탄올 소비량이 수준의 패턴은 산모의 체중 증가, 자손의 출생 체중, 산자, 모성 보호, 태반 습 중량, 행동 테스트에서 자손의 무게, 전체 뇌, 해마 또는 소뇌 젖은 무게에 유의 한 영향을주지 않습니다. 대표적인 수단과 각각의 행동 측정을위한 남성 saccharin- 에탄올에 노출 된 쥐의 SEM표 1에 도시 된 재. 이들 데이터는 사전 실험으로부터 모으고 태아 ...

여기에 제시된 프로토콜의 목표는 태아기 뇌 발달 과정에서 쥐를 중간 수준의 알코올에 노출시키는 절차를 설명하고 성인기 동안 사회적 행동의 변화를 정량화하는 것입니다.

Alterations in social behavior are among the major negative consequences observed in children with Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASDs). Several ...

성체 쥐에서의 중등도 태아기 알코올 노출 및 사회적 행동 정량화. 이 영상에서는 태아기 알코올 노출 패러다임과 이후 성체기에서의 사회적 행동 정량화 과정을 설명합니다. 이 영상에 기술된 모든 절차는 뉴멕시코 대학교 보건과학 센터 및 메인 캠퍼스의 기관 동물 보호 및 사용 위원회(Institutional Animal Care and use Committee)의 승인을 받았습니다. 먼저 체중이 평균 125~150g인 6~7주령의 성체 암컷 쥐와 검증된 수컷 쥐 종자를 준비하여 시작하십시오.일반적으로 12주령의 동물을 사용하며, 동물이 새로운 사육 환경에 적응할 수 있도록 최소 1주일의 시간을 줍니다. 전체적으로 태아기 알코올 노출 일정은 2주간의 노출 전 기간, 동물이 알코올에 노출되지 않는 교배 기간, 그리고 임신 기간 내내 진행되는 태아기 노출 기간으로 구성됩니다. 각 단계의 상세 내용은 다음과 같습니다.임신 전 음주 수준을 평가하기 위해, 암컷 쥐에게 2주 동안 알코올 농도를 점진적으로 높인 사카린수를 자율 섭취하게 합니다. 이 평가의 목적은 음주 프로토콜의 후속 단계에서 원하는 수준으로 음주하는 쥐를 식별하는 것입니다. 또한, 알코올 노출 패러다임의 이 과정은 모든 암컷 쥐가 임신 전에 음주 경험을 가졌음을 보장합니다.다음의 준비물을 모아 음용 튜브를 준비합니다. 사카린 나트륨염 수화물, 190 proof 에탄올, 비드 글라스 음용 튜브, 천연 고무 백색 1공 4번 스토퍼, 볼 포인트가 달린 1인치 굴곡 튜브 및 종이 자를 준비합니다. 수돗물에 용해된 0.066% 사카린 수용액 스톡 솔루션을 조제합니다. 0.066% 사카린 수용액의 일부를 사용하여 2.5% 에탄올을 함유한 사카린 스톡 솔루션을 만들고, 나머지 일부를 사용하여 5% 에탄올을 함유한 스톡 솔루션을 조제합니다.종이 자를 튜브에 테이프로 붙여 음수 튜브를 준비합니다. 튜브의 20 millimeter 표시선까지 당일의 해당 용액을 채웁니다. 암컷 쥐의 기초 체중을 반드시 측정하십시오. 음수 세션은 암기 사이클 시작 1시간 후부터 시작하여 하루에 4시간 동안 진행됩니다.1일 차와 2일 차에 암컷 쥐에게 0.066% saccharin 수용액을 제공합니다. 3일 차와 4일 차에는 2.5% ethanol이 포함된 SAC 용액을 제공합니다. 5일 차부터는 5% ethanol 용액을 이용한 음수 세션을 위해 5% ethanol이 포함된 SAC 용액을 제공합니다.임신 전 음주 단계가 완료될 때까지 계속합니다. 모든 음주 세션 동안 사료와 수돗물을 제공합니다. 4시간의 음주 세션이 종료되면, 체중 1kg당 소비된 에탄올 용액의 무게를 정량합니다.임신 전 음주 단계가 완료되면, 전체 집단의 평균 에탄올 섭취량과 표준 편차를 계산하고, 평균 섭취량이 집단 평균보다 1 표준 편차 이상 높거나 낮은 쥐들은 제외하십시오.남은 쥐들을 사카린 대조군 또는 산전 에탄올 노출 조건 중 하나에 배정하십시오. 임신 전 음수 수준을 최대한 비슷하게 맞추십시오. 두 그룹의 각 암컷 쥐를 검증된 수컷 번식 쥐와 짝지어 주십시오.교배 단계 동안 암컷 쥐에게 알코올을 투여하지 않습니다. 질 플러그(vaginal plug) 확인을 통해 임신이 확정되면, 임신 1일부터 암컷 쥐와 Hauser를 각각 개별적으로 측정합니다. 그룹 배정에 따라 알코올 또는 사카린 용액을 제공하십시오.매일 4시간 동안 음수 세션 중에 사료와 수돗물에 접근할 수 있도록 합니다. 임신 기간 내내 매일 음수 세션을 계속하십시오. 매일 음수량을 정량화하고 쥐 어미의 체중을 매주 측정하십시오.새끼가 태어나면 알코올 노출 절차를 중단하십시오. 출생일을 생후 0일로 지정하십시오.생후 2일 또는 3일경에 한 배의 새끼 수를 10마리로 맞추고 새끼들의 체중을 기록합니다. 생후 약 21일에서 24일 사이에 이유시키고, 동일한 산전 처리 조건을 가진 동일 성별의 동물과 쌍을 지어 사육합니다. 잠재적인 litter effect(배 효과)를 제한하기 위해 실험당 각 배에서 1~2마리 이상의 쥐를 사용하지 마십시오.성체기의 사회적 행동 정량화. 필요한 모든 재료와 장비를 준비합니다. 본 실험에서는 길이 95 centimeters, 너비 47 centimeters, 높이 43 centimeters의 맞춤 제작 챔버를 사용합니다.챔버는 세척과 소독이 용이한 복합 플라스틱 재질로 제작되었으며, 투명 플라스틱 전면부와 개방형 상단부로 구성되어 있습니다. 바닥과 측벽은 세척을 용이하게 하기 위해 플라스틱으로 마감되었습니다. 내부 뒷벽은 분석을 돕기 위해 거울 타일로 덮여 있습니다.추가로 필요한 재료에는 저조도 또는 무광 조건에서 촬영 가능한 비디오 카메라가 포함됩니다. 이상적으로는 카메라는 적외선 스펙트럼에서 고해상도를 갖추어야 하며, 장치 주변에 적외선 조명기를 배치하여 장치의 조명을 개선해야 합니다. 비디오 녹화용으로는 실험실 등급의 모래 칩, 세션 사이에 장치를 청소하기 위한 브러시와 쓰레기받이, 그리고 세션 간 쥐의 냄새를 제거하기 위한 70% isopropyl alcohol이 필요합니다.성체 단계에서의 측정을 위해, 실험의 이 단계가 시작될 때 쥐의 연령은 최소 90일이어야 하며, 3일 연속으로 동물과 동거 개체를 장치에 30분 동안 두어 장치에 적응시킵니다. 각 세션 전에는 기존의 우드칩을 모두 제거합니다. 장치는 이소프로필 알코올로 닦아내고 새로운 우드칩을 제공하며, 적절한 세정제를 사용하여 장치를 세척 및 소독합니다.필요에 따라 우드칩이 장치 바닥을 완전히 덮도록 해야 합니다. 적응 세션 동안, 세 번째 적응 세션이 끝날 때 모든 실내 조명을 끕니다. 동물들을 신선한 우드칩, 먹이 및 물이 제공된 새 케이지에 개별적으로 수용하십시오.동물들을 분리한 24시간 후인 다음 날에 사회적 상호작용을 기록합니다. 사회적 행동을 평가하기 위해, 먼저 장치를 세척하고 우드칩을 교체하는 것으로 시작하십시오. 상호작용을 기록하기 위해 하나 이상의 카메라를 배치합니다. 본 연구실에서는 개별 동물을 식별하는 방법으로 털 패턴의 고유한 특징을 활용하며, 동물을 표시하는 다른 대안들은 본문에 설명되어 있습니다. 사회적 상호작용 촬영이 완료되면, 본 연구실에서 관심을 가지는 행동들을 식별하십시오.우리는 파트너 지향 행동 및 환경을 향한 기타 행동들을 정량화했습니다. 이전 연구에서 레슬링 및 항문/생식기 냄새 맡기 또는 상호 그루밍과 같은 사회적 탐색의 다른 측정 지표들은 에탄올에 노출된 동물과 식염수에 노출된 동물을 안정적으로 구분해냈습니다. 다음 비디오 클립에서 관심 대상인 각 행동의 예시를 보여줍니다.레슬링은 한 마리 또는 두 마리의 동물이 상대에게 덮치려 시도할 때 발생하며, 흔히 한 마리가 상대 동물을 옆면이나 등으로 눌러 고정하는 결과로 이어집니다. 레슬링 전에는 주로 추격 행동이 나타나며, 복싱, 교차하며 지나가기, 생식기 냄새 맡기 등의 다른 행동이 뒤따를 수도 있습니다. 이러한 행동의 연속은 동물들이 서로 떨어질 때 종료됩니다.동물들이 서로 완전히 떨어져 있었을 때, 때때로 빠르게 다시 레슬링을 시작하는 경우가 있습니다. 이 두 번째 bouts는 별개의 사례로 기록합니다. 레슬링은 쌍을 이룬 두 동물 모두의 참여가 필요하므로, 기록 시 해당 쌍에 대한 측정값은 동일해야 합니다.또한 어떤 동물이 상대방을 눌렀는지 또는 눌렸는지, 그리고 어떤 동물이 추격 및 덮치기 행동을 했는지 기록하는 것이 좋습니다. 레슬링 양상의 행동들이 구성하는 개별 행동들을 따로 코딩하는 것도 유용할 수 있습니다. 복싱 동작에 대해 더 세밀한 분석이 필요한 경우, 두 동물 모두 뒷다리로 일어선 채 네 발로 서로를 밀치는 행동을 관찰하십시오.교차(crossing over) 또는 하단 진입(under) 행동 시, 한 마리의 동물이 의도적으로 상대 동물의 위로 올라타거나 아래로 파고듭니다. 이러한 행동 과정에서 한 마리의 동물이 상대의 항문 생식기 부위를 냄새 맡습니다. 항문 생식기 후각 탐색의 한 가지 기능은 개체 식별입니다.신체 냄새 맡기(Body sniffing)는 파트너의 신체 다른 부위를 냄새 맡는 행위를 말하며, 주로 파트너의 옆구리나 측면을 향해 이루어집니다. 동물 상호 그루밍(Animal alle grooming)은 파트너의 털을 다듬어주는 행위입니다. 그루밍은 일반적으로 목덜미와 머리 부위를 향해 이루어집니다.동물이 뒷다리로 일어나는 rearing 행동을 포함하여, 베딩을 파거나 킁킁거리는 행동은 기구에 사용된 기질에 대한 행동을 측정하는 일반적인 환경 지향적 행동입니다. 행동의 코딩 및 정량화를 위해 본 연구실에서 개발한 맞춤형 MATLAB 프로그램을 사용합니다. 이 프로그램의 주요 기능은 가변 속도의 비디오 재생, 관심 행동별로 상태(on/off)를 통해 행동의 유무를 표시하는 토글 버튼, 각 행동의 시작과 종료 시점에 대한 자동 시간 코딩, 그리고 각 행동의 총 지속 시간, 빈도 및 첫 발생까지의 잠복기를 포함한 데이터 출력입니다. 모든 동물에 대한 코딩이 완료되면, 결과로 얻은 지속 시간, 빈도 및 잠복기 데이터를 통계 패키지를 통해 분석합니다. 여기에 제시된 예시에서 레슬링의 빈도, 지속 시간 및 첫 발생 잠복기와 항문 생식기 킁킁거리기의 지속 시간이 사카린 노출 동물과 에탄올 노출 동물 간에 유의미하게 차이가 있음을 확인할 수 있습니다.다른 행동 측정 항목에서는 그룹 간의 차이가 나타나지 않았습니다. 이 비디오에서 제시한 방법들은 태아기 에탄올 노출에 따른 사회적 행동 분석 과정을 단순하고 효율적인 프로토콜로 간소화하였습니다. 이 접근 방식은 태아기 발달 단계에서 중간 정도 수준의 에탄올에 노출된 쥐와 노출되지 않은 동물을 구분하는 데 유용할 뿐만 아니라, 노출 시기, 용량, 기간 및 행동 분석 시 연령의 변화를 포함한 다른 에탄올 노출 프로토콜의 평가에도 쉽게 적용될 수 있습니다.또한, 분석 과정에서 정량화하는 특정 행동들을 조정하여 발달의 다양한 단계에서 에탄올 노출이 미치는 주요 영향을 파악할 수 있습니다.

moderate-prenatal-alcohol-exposure-quantification-social-behavior

Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

에탄올로 유도된 발달 손상의 분자 메커니즘을 이해하려면, 우리는 에탄올 노출 zebrafish 모델을 개발하고 에탄올에 노출된 후 발생하는 신체적, 세포 및 유전자 개조를...

태아 알코올 노출의 Zebrafish 모델에서 Teratogenic 변경 사항 평가

실험 디자인은 태아의 뇌 임신 중 세포 사멸 및 신경성 펩타이드의 응용 프로그램에서 알코올 노출의 효과를 공부에 여기에 초점을 제안했다. 사육에서 태아 뇌의 컬렉션에 대한 자세한 설명이 설명되어 있습니다. 세포 사멸의 결정을위한 기법도 자세히 설명되어 있습니다.

알코올에 의한 C57BL 임신 중 세포 자멸사 / 6 마​​우스에 대하여, 신경 친 화성 펩타이드, ADNF-9의 효과를 테스트하기위한 실험 방법

우리는 동시에 6 마우스 새장을 수용 쉽게 사용할 재료를 사용하여 알코올 증기 챔버의 구조를 보여줍니다. 우리는 더 이상 인간의 임신 3의 삼보 격에 해당하는 태아 알코올 노출의 마우스 모델에서의 사용에 대해 설명합니다. 이 패러다임은 임신과 출생 후의 일 1-12 동안 동물을 노출합니다.

인간 발달의 세 삼 분기의 상당 기간 동안 알코올에 쥐를 노출하는 데 사용 증기 챔버의 건설

심장 혈관 운동과 복잡한 환경에서 자극의 경험은 쥐의 뇌에서 신경 가소성의 여러 조치에 긍정적 인 효과를 가지고있다. 이 문서에서는 휠 실행 환경의 복잡성을 결합하여 이러한 개입의 한계를 해결할 것 "superintervention"이러한 개입의 구현에 대해 설명합니다.

FASD의 동물 모델에서 치료 개입으로 휠 실행 환경의 복잡성

추적 eyeblink 클래식 컨디셔닝 (ECC) 평가 하는 데 사용 되었다 hippocampal 종속 연관 학습 했다 성인 쥐에 투여 초기 신생아 두뇌 개발 하는 동안 알코올의 높은 농도 (11.9 %v / v). 일반적으로, ECC 절차는 많은 심리적, 생물 의학 설정을 통해 뇌 기능 장애를 탐지 하기 위한 사운드 진단 도구입니다.

태아 알코올 스펙트럼 장애의 쥐 모델에서 Hippocampal 기능 장애를 평가 하기 위해 추적 Eyeblink 클래식 컨디셔닝의 사용

이 작품은 적절한 노출 방법에서 배아 처리 및 에탄올 분석에 헤드 스페이스 가스 크로마토그래피를 사용하여 제브라피쉬 배아에서 에탄올 수준을 정량화하는 프로토콜을 설명합니다.

헤드 스페이스 가스 크로마토그래피를 이용한 제브라피시 배아의 에탄올 수치 정량화

여기에 제시된 것은 알코올 사용 장애를 연구하기 위한 마우스의 알코올 의존성에 대한 2BC/CIE 모델에 대한 프로토콜입니다.

만성 간헐적 에탄올 증기 노출과 알코올 사용 장애를 모델링하기 위한 2병 선택

현재 프로토콜의 목표는 성체 제브라피쉬에 대한 사회적 선호도 분석을 수립하고 사용하는 데 필요한 단계를 개략적으로 설명하고 에탄올로 인한 사회적 결함을 특성화하는 데 사용할 수 있음을 입증하는 것입니다.

제브라피시의 태아 알코올 스펙트럼 장애를 모델링하여 불리한 배아 환경이 성인의 사회적 행동에 미치는 영향을 특성화합니다.

이 프로토콜은 쥐의 알코올 소비를 모델링하기 위한 표준 간헐적 접근 2병 선택 가정용 케이지 음주 패러다임을 설명합니다. 또한 음주 행동의 미세 구조 분석을 가능하게 하는 DIY 핥기 감지 시스템으로 표준 프로토콜을 강화하기 위한 단계별 지침을 제공합니다.

Two-Bottle Choice Home Cage Drinking and Microstructural Analysis를 사용한 설치류의 알코올 소비 모델링

법적 제한이 변경되어 카나비노이드 제품에 대한 접근성이 높아짐에 따라 특히 임신 중 이러한 노출의 영향을 연구하기 위한 모델을 개발하는 것이 매우 중요합니다. 자발적 섭취를 통한 중등도의 산전 카나비노이드 노출에 대한 전임상 모델이 개발되어 보다 심층적인 조사가 가능해졌습니다.

신경 발달 결과에 미치는 영향을 평가하기 위한 태아 델타-9-테트라하이드로칸나비놀 노출의 전임상 모델

배우세요 쥐의 태아기 알코올 노출 방법과 성인기 사회적 행동 정량화 기법을. 이 프로토콜은 발달 신경과학 및 행동 연구에 필수적인 동물 모델 실험 절차를 상세히 설명합니다.

보통 태아 알코올 노출과 성인 쥐의 사회적 행동의 정량화

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