청각 통로의 Optogenetic 자극에 대한 쥐의 등쪽 달팽이 핵의 직접 시각화

이 절차의 전반적인 목표는 마우스 모델의 달팽이관 핵에 외과적으로 접근하여 광유전학 기반 실험을 가능하게 하는 것입니다. 이것은 먼저 개두술을 위해 마우스를 준비하고 두피 위에 있는 피부, 연조직 및 근육을 옆으로 수축시킴으로써 달성됩니다. 두 번째 단계로, 개두술은 람다 봉합선까지 약 2mm 떨어진 왼쪽 두정골 사이에 이루어집니다.

이 영역은 달팽이관 핵 위에 있습니다. 다음으로, 5개의 프렌치 흡입관을 사용하여 DCN 위에 있는 왼쪽 소뇌의 가장 측면 부분을 흡인합니다. 결과는 DCN의 방해받지 않는 보기를 보여줍니다.

정위 유도와 같은 보조 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 달팽이관 핵을 직접 시각화하고 광원 또는 전극 배열과 같은 신경 시뮬레이터를 뇌간 표면에 배치할 수 있다는 것입니다. 이 방법은 광유전학과 청각 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 유전자 전달과 같은 보철물은 청각 뇌간이 충분한 안면 및 시간 해상도로 빛에 의해 자극될 수 있도록 하지 않습니다.

복강내 투여를 통해 케타민과 자일라진을 마우스에 마취한 후 발가락 핀치 금단 반사를 확인하고 심박수와 호흡수를 모니터링하여 적절한 마취를 확인합니다. 그런 다음 건조를 방지하기 위해 양쪽 눈에 수의사 연고를 바르십시오. 다음으로, 수술 부위에 방해받지 않고 접근할 수 있도록 두피 위에 있는 수염을 면도합니다.

그런 다음 마우스를 작은 동물 입체 홀더에 넣으십시오. cl 조정amp 적절한 호흡을 할 수 있을 만큼 느슨하지만 마우스의 머리를 완전히 고정할 수 있을 만큼 충분히 조이도록 합니다. 현미경으로 귓바퀴 바로 사이의 정중선에서 시작하여 후두부의 새끼 부분까지 피부를 통해 수직으로 절개합니다.

그런 다음 피부를 측면으로 변위시킵니다. 두개골의 왼쪽 두정골, 두정간 뼈 및 후두골 위에 있는 근육을 메스 또는 홍채 가위로 제거합니다. 그 동안, 면봉 어플리케이터로 10-15초 동안 부드러운 압력을 가하여 출혈을 최소화합니다.

다음으로, 시상면(sagittal) 및 람다(lambda) 봉합사 라인을 식별합니다. 한 쌍의 론 주얼리를 사용. 왼쪽 두정골 사이에 약 2mm 떨어진 곳에 개두술을 하고 람다 봉합선에

이 영역은 개두술 후 DCN 위에 있습니다. 소뇌 위에 있는 경막의 얇은 층을 주의 깊게 관찰하고 메스 날을 사용하여 제거해야 합니다. 면봉으로 응고된 혈액을 제거하거나 식염수를 소뇌에 부드럽게 떨어뜨려 혈액을 제거합니다.

그런 다음 5개의 프렌치 흡입관을 사용하여 왼쪽 소뇌의 가장 측면 부분을 흡인하고 DCN 위에 올려 흡인합니다. 흡인할 경우 현미경의 초점면을 달팽이관 핵의 예상 깊이로 설정하여 시각화를 개선하고 선명한 이미지를 보장합니다. 왼쪽 소뇌의 약 1/4에서 1/3을 제거합니다.

DCN에 인접한 주요 랜드 마크는 우수한 반원형 운하의 AM입니다. 흡인에 따라 DCN의 추가 출혈, 뇌척수액 축적 및 소뇌 변위는 혈액 응고를 방지하기 위해 개두술에 식염수를 빠르게 주입하는 것으로 나타납니다. 치아 포인트와 석션을 사용하여 부드럽게 두드리는 방법을 사용하여 DCN을 직접 시각화할 수 있는 경로를 확보합니다.

DCN이 명확하게 보이고 위에 있는 혈액 및 CSF가 없는 경우 5마이크로리터 가스 밀폐 Hamilton 주사기로 벡터를 압력 마이크로 주입합니다. 둔기에 의한 외상을 최소화하고 DCN 내에서 주입량을 국소화하기 위해 얕은 베벨이 있는 34 게이지 바늘을 사용합니다. 그런 다음 팁이 DCN 표면 아래에서 더 이상 보이지 않을 때까지 마이크로 매니퓰레이터로 바늘을 천천히 삽입합니다.

1.5마이크로리터의 벡터를 주입하기 시작합니다. 이 작업이 완료되면 천천히 바늘을 빼낸 다음 피부를 근사화하고 표준 복구 절차에 따라 마우스가 회복되도록 합니다. 2-4주간의 치유 및 바이러스 매개 유전자 전달 배양 후, 벡터 주입 마우스를 다시 마취한 다음 개두술 부위의 흉터 조직을 제거합니다.

그 후, DCN 위에 남아 있는 소뇌와 흉터 조직의 조합을 확인합니다. 5 프렌치 석션을 사용하여 위에 있는 소뇌와 흉터 조직을 흡인합니다. 열망을 따라.

식염수를 개두술에 빠르게 바르십시오. 출혈을 예방하려면 부드러운 치아 포인트 두드리기와 흡입을 함께 사용하여 DCN을 직접 시각화할 수 있는 경로를 확보하십시오. DCN은 이제 광유전학 기반 생리학 실험에 액세스할 수 있으며, 여기에 표시된 것은 DCN 표면에 직접 레이저 광섬유를 배치하는 것으로, 감염된 DCN 표면에서 옵신에 감염된 DCNA 청색광 펄스 시리즈의 광학 자극을 허용하여 광학적으로 구동되는 청각 뇌간 반응을 일으킵니다.

마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 청색광 레이저에 결합된 광섬유를 달팽이관 핵 표면에 직접 놓고 켭니다. 여기에서 우리는 달팽이관 핵 표면에 있는 펄스된 청색광을 식별할 수 있습니다. 이 절차에 따라 핵을 전기적으로 시뮬레이션하는 것과 같은 다른 방법을 수행할 수 있으며, 이를 통해 음향적으로 유발된 것뿐만 아니라 전기적으로 유발된 신경 반응을 광학 시뮬레이션에 의해 유발된 것과 직접 비교할

이 동영상을 시청한 후에는 달팽이관 핵에 대한 직접적인 시각화 및 접근이라는 궁극적인 목표를 가지고 개두술 및 소뇌 흡인을 준비하고 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.