Name: 전기장에 의한 해제 및 측정 (EFIRM)에 의해 Exosomal 바이오 마커의 검출 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 2 s
Description: 학습하세요 생물체액에서 엑소좀을 효율적으로 추출하고 전기장을 이용해 용해시킨 후 전기화학적 측정으로 RNA와 단백질 화물을 신속 분석하는 방법을. 이 기술은 바이오마커 발견 연구에 활용됩니다.

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이 작품은 연구 자원을위한 국가 센터 (FW에) 부여 UL1TR000124을 통해 번역 상 과학, 건강의 국립 연구소를, 전진을위한 국가 센터에 의해 지원되었다; 펠릭스 &amp; 밀드레드 깨갱 기증 교수 및 (DTWW에) 반스 가족 기금 (MT에) 상 수 T90DE022734에서 국립 보건원 (National Institutes of Health)의 치과 및 두개 안면 연구소의 국립 연구소. 내용은 전적으로 저자의 책임이며 반드시 국립 보건원의 공식 견해를 대변하지 않습니다.

1. 자기 비드 기반 엑소 추출 <ol><li> 비드를 재현 탁하는 마이크로 원심 분리 튜브에 인산 완충 생리 식염수 (PBS) 완충액 495 ㎕를 스트렙 타비 딘으로 코팅 된 자성 미립자의 5 μL의 혼합 된 용액을 피펫. 자기 랙을 사용하여 세 번 세척하고 PBS 500 μL와 구슬을 재현 탁. 랙 샘플 튜브를 마이크로 원심 수납 할 하우징 유닛의 측면에 자석의 배열이다. <ol><li> 각각의 세척을 위해, 먼저 튜브 1 분 동안 선반에 앉아서 조심스럽게 구슬을 방해하지 않고 뜨는 버퍼를 제거하기 위해 피펫 팁을 사용하자. </li><li> 측면에 자석이없는 일반 랙에 튜브를 놓습니다. 튜브에 PBS의 500 μl를 추가하고 함께 해결책과 구슬을 혼합하는 피펫을 사용합니다. 다시 용액으로부터 비드를 분리하는 자기 선반에 다시 넣어 튜브. </li><li> PBS의 자화 및 재 부유를 통해 버퍼의이 제거를 수행합니다3 회 총. 이 자성 입자의 초기 세척을 수행한다. </li></ol></li><li> 자기 랙의 비자 성 부분 상에 배치 된 튜브, PBS 완충액 490 μL로 비드를 재현 탁. 피펫 구슬의 혼합물에 1.0 ㎎ / ㎖ 농도의 스톡 오티 닐화 마우스 항 인간 CD63 항체 5 μL. 용액에 구슬과 항체를 혼합하는 피펫을 사용합니다. </li><li> 샘플 회에 구슬과 비오틴 항체 혼합물의 microcentrifuge 튜브를 놓습니다. 90 ° 5 초 동안 기울를 1 초 동안 5 °에서 진동에 왕복 회전에 대한 샘플 회전의 회전 매개 변수를 설정합니다. 실온에서 30 분 동안 이러한 매개 변수에 샘플 비드 혼합 튜브를 회전합니다. </li><li> 결합 후 결합되지 않은 항체를 제거합니다. <ol><li> RT에서 회전 30 분 후, 5 분 동안 다시 자기 랙에 튜브를 배치합니다. </li><li> 마이크로 피펫을 이용하여 액체 상을 제거하여 구슬 세 세척을 수행하고, 500 μ 씻어; PBS의 리터. 트리플 세척 한 후, 랙의 자화되지 않은 부분에 490 카제인 PBS의 μL과 장소에 구슬을 재현 탁. </li></ol></li><li> 항체 코팅 구슬을 사용 엑소 추출. <ol><li> 타겟 샘플 ID와 각 튜브 레이블. 마이크로 원심 튜브에 혈청 또는 타액의 10 μL 샘플을 피펫. 여러 번 피펫 팅하여 샘플 및 자기 구슬을 혼합하는 피펫을 사용합니다. </li><li> 회 전자에 샘플 및 안티 인간 CD63 항체 구슬 튜브를 삽입하고 실온에서 2 시간 동안 회전합니다. 단계 1.2에 기재된 바와 같이 동일한 회 파라미터를 사용한다. </li><li> 회전 샘플의 2 시간 후, 솔루션에서 별도의 구슬 자화 마이크로 피펫과 액상을 제거하고, 트리스 - 염산 완충액 500 μL에 구슬을 재 부유하여 트리플 세척을 수행합니다. 결과 구슬은 이제 엑소 좀 바인딩 및 전기장 방출 및 측정을위한 준비가되어 있습니다. </li></ol></li></ol> 2. 전기장 유도 출시차 Exosomal 내용의 측정 <ol><li> GADPH 프라이머와 전극의 초기 프리 코팅 <ol><li> 플라스틱 잘은 개별 전극의 교차 오염을 방지하기 위해 전극 배열을 적용합니다. 이 실험을 위해, 베어 금으로 제조 작업, 카운터 및 기준 전극으로 구성된 어레이의 각 전극 부 16 센서 전극 어레이를 사용한다. </li><li> 초순수 증류수로 튜브에 재고 시약을 피펫 팅 100 nm의 DNA 프로브, 0.3 M KCl을, 10 mM의 피롤의 재고 혼합물을 준비합니다. 와동에 의해 철저하게 섞는다. 참고 : 본 연구를 위해, 선택된 DNA 프로브 엑소 좀 내에 존재하는 것으로 알려져 참조 GAPDH 유전자에 대응한다. 사용되는 프로브 서열은 다음과 &#39;- 비오틴 AGGTCCACCACTGACACGTTG 5&#39;-3. 모든 전극에이 혼합물을 사용합니다. </li><li> 피펫 각 금 전극의 표면 상에 모노머-DNA 프로브 혼합물을 60 μL. 작업, (C)의 적절한 범위가되도록하여 전극을 검사액체 혼합물에 의해 ounter, 전극과 기준 전극. </li><li> 프로브 Electropolymerize 단량체 혼합물을 전극 표면에 환상 구형파 (CSW) 전계 프로파일을 적용하여 전극 표면에 전도성 고분자 층을 생성한다. 이 전기장은 9 초 동안 350 MV를 적용하고 바로 1 초 동안 950 MV로 전환 구성되어 있습니다. 인가 전기장의 100 초, 총 10 사이클 용 전극이 환상 구형파 프로파일을 적용한다. </li><li> 전극의 표면으로부터 액체를 제거하는 센서 표면을 증류수와 질소 가스와 건조로 3 회 헹군다. 그 액체가 제대로 전극에서 제거되어 있는지 확인합니다. </li></ol></li><li> 엑소화물 하역 <ol><li> 로드 5 비드 - 엑소 좀 복잡한 혼합물의 495 μL에 검출기 프로브의 1 μM의 μL와 혼합 피펫을 사용합니다. 주 : 검출기 프로브가 3 &#39;말단에 형광 분자에 접합 된 DNA 프라이머 서열이다. 검출기 확률값본 연구를 위해 사용 된 전자 서열 엑소 좀 내에있는 GAPDH mRNA에 대응한다. 형광 검출기 공액 프로브의 서열은 : 5&#39;- 플루오 레세 GCAGTGGGGACACGGAAGGCC-3 &#39;. </li><li> 피펫 아래 자석 배열과 금 전극 표면 상에 프로브와 엑소 - 비드 복합체의 60 μL. 이 자석 어레이가 센서의 작용 극에 대응하도록 정렬 된 여섯 2.54 mm 직경 네오디뮴 자석으로 이루어져있다.도 2a는 자석 비드 - 엑소 용액의 배치를 도시한다. </li><li> 샘플이 전극 표면에로드되면, -300 MV에서 9 초 및 200 MV (200 초 총)에서 1 초에 CSW 전기장의 20주기를 적용합니다. 해제 exosomal화물은 전극의 표면에 프라이머 혼성화한다. 엑소 좀의 표면 마커는 조사의 대상이되는 경우. 실험의이 부분을 건너 2b는이 과정을 도시한다. </li> &lt;리&gt; 워시 오프 트리플 증류수로 전극 표면을 세정함으로써, 전극 표면에 결합되지 않은 분석 물질. 질소 가스와 함께 전극을 건조. </li></ol></li><li> 기자 항체 및 판독 <ol><li> (1,000 희석 1 HRP) 카제인 / PBS에 희석 고추 냉이 과산화 효소에 결합 150 단위 / ml의 방지 형광 항체의 60 μl를 추가합니다. </li><li> 프로브 샌드위치 복잡한 안티 플루 HRP에 전기장 구동 결합을 사용합니다. 1 초와 전극 표면에 5 사이클을 1 초 동안 500 MV에 대해 -200 MV를 적용합니다. 그림 2a는 단백질과 핵산 시스템 모두에 대해 캡처 및 검출기 프로브 단지를 보여줍니다. </li><li> 증류수 및 질소 가스를 이용하여 건식 세척 트리플 센서면. </li><li> 언 바운드 초과 방지 형광 항체의 워시 오프에 이어, 3,3 &#39;, 5,5&#39;- 테트라 메틸 벤지딘 (TMB) 기판의 60 μl를 추가합니다. 멀티 채널 피펫을 사용하여 각 센서 표면에이 기판을 넣습니다. </li><li> . 16 개의 채널을 동시에 측정 할 수있는 전기 화학적 텐쇼을 60 초 동안 사용하여 -200 Mv로, 전극 전류를 측정함으로써, 현재의 판독 전류 측정을 수행 2C는 판독시 전류 프로파일의 일례도이다. </li></ol></li></ol><img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/52439/52439fig2highres.jpg" /> EFIRM 방법 그림 2. 구성 요소. (A) 항 - 인간 CD63 코팅 자성 미립자를 사용하여 체액에서 엑소 좀을 추출하고 입자 엑소 좀 복잡한에 적용 순환 광장 파도를 사용 엑소화물을 하역하는 방법. 릴리스 엑소에서 RNA / DNA / 단백질 표적을 검출하기 위해 사용되는 바이오 센서의 전극 (B) 방식. 큰 전류 크기가 t에 해당 (C) EFIRM 방법론에서 전류 측정 판독의 대표적인 예생체 분자의 높은 수준 O. 이 그림은 웨이 등 알에서입니다. (14)는 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52439/52439fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

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</ol>

데이비드 웡 RNAmeTRIX 주식, 분자 진단 회사의 공동 설립자이다. PeriRx LLC는 RNAmeTRIX에서 분자 진단에 관한 지적 재산권을 재사용 권. 데이비드 웡 PeriRx 컨설턴트입니다.

결과가 나타내는 바와 같이, 항 인간 CD63 코팅 된 자성 나노 입자는 특히 70 ~ 100 nm의 범위의 크기를 갖는 작은 입자를 포착 할 수있다. 이 캡처 된 입자는 엑소 좀 이전에 관찰 된 프로파일과 일치한다. 또한, 입자의 캡처 다음 저전압 CSW의 사용은 비드 표면에서 제거화물 릴리스 전통적인 용해 완충액 기반 방법과 동일한 DNA 분해 프로파일을 일으키는 것으로 도시되어있다. 이 데이터는 exosomal화물 릴리스의 워크 플로가 엑소의 지질막의 중단에 대한주기적인 구형파의 응용 프로그램을 통해 간단하게 할 수 있음을 나타냅니다. 상기 간단한 방법은 악영향 엑소화물에 영향을 미칠 수있는 버퍼를 용해시키기위한 필요없이 급속화물 방출을 허용하고, 그 결과 EFIRM 방법은 초 원심 분리 및 분해의 사용 전통적인 방법에 비해 exosomal 콘텐츠 연구 바람직한 방법이 될 것으로 보인다버퍼. EFIRM 방법의 민감도, 특이도, 쉽게는 핵산과 단백질 목표도 내부 콘텐츠를 테스트 신속하게 체액에서 엑소 좀을 추출에 이상적이다...

An erratum was issued for <a href="http://www.jove.com/video/52439">Detection of Exosomal Biomarker by Electric Field-induced Release and Measurement (EFIRM)</a>. The disclosures were updated.

An erratum was issued for <a href="http://www.jove.com/video/52439">Detection of Exosomal Biomarker by Electric Field-induced Release and Measurement (EFIRM)</a>.

Errata: Detection of Exosomal Biomarker by Electric Field-induced Release and Measurement (EFIRM)

엑소 조사 RNA 1, 2 DNA 및 단백질 3화물을 운반 지질 마이크로 소포를 검사 조사의 새로운 분야입니다. 엑소 생물학의 이전 조사는 혈액 4, 소변 5, 모유 6, 침 7로 biofluids에서 엑소 좀의 식별을 주도했다. 연구는 원격으로 본체 (8)의 서로 다른 시스템 간의 통신을 명상, 엑소 좀 다른 세포질 통로에 역할을한다는 것을 증명하고있다. 역할의 엑소 좀은 세포 간 통신에서 재생하기 때문에, 그들이 질병 상태와 상관 생체 분자 표적 (단백질, RNA 및 DNA)를 패키지 가설이 성립된다. 시험관 3 및 동물 모델 (9) 연구는이 가설을 확증하기 위해 나타납니다. 바이오 마커 발견에 대한 콘텐츠를 조사 exosomal, 그것은 선택적 엑소 biofluids로부터 격리를위한 방법론을 개발하는 것이 필요하다, 유도 expulsi엑소 좀에서화물 및 엑소 생체 분자의 정량에. 이 일의 범위에서, 엑소 좀은 구조가 약 70 ~ 100 nm의 직경을 갖는 표면 마커 CD63을 갖는 것으로 정의한다. 연구진은 일반적으로 첫 번째 초 원심 분리 (10)에 의해 엑소 좀을 정화하고 용해 버퍼 키트의 사용을 통해 exosomal 내용을 처리합니다. 용해 버퍼 방법의 사용은 분에서 시간에 이르기까지 배양 시간이 필요합니다. 이 과정은 잠재적으로 엑소화물을 손상 및 열화를 샘플링 될 수 있습니다. 예를 들어, 주변의 세포 외 환경으로 용해 완충액을 통해 방출 타액 엑소의 RNA는 exosomal의 RNA 후 - 용균 측정 안정화 시약 (11)의 첨가없이 특히 어려운 태스크를 버퍼링하게 1 분 아래의 반감기를 갖는다. 용해 및 안정화를위한 다양한 시약을 추가하는 복리 효과는 복잡 에이전트를 소개하고 analy을 방해 할 수 있습니다exosomal 내용의 동생. 또 다른 방법은 빠르게 exosomal 내용을 하역하고 안전하게 특성에 대한화물을 보존 도움이 될 수 있습니다. 본 연구에서는 exosomal 콘텐츠 릴리스 불균일 전기장의 사용을 제안한다. 전기 필드는 편광 및 세포막을 형성하는 지질 이중층을 방해하는 기능을 수행하는 것으로 알려져있다. 우리의 실험 작업은 엑소 좀의 마이크로 소포 구조를 방해하고 수행화물을 해제하기위한 비 균일 순환 구형파 (CSW)의 사용을 탐구한다. 이 방법은 대부분의 생체 분자가 중단되지 않을 것임을 의미하는 수백 밀리 볼트 범위의 전압을 사용합니다. 우리는 환상 구형파의 사용량이 주변 환경으로의 유체 타액 엑소 mRNA의 함량의 방출을 작동 할 수 있다는 것을 입증한다. exosomal 함량이 릴리스 원활 바이오 마커의 발현 정도를 정량화하는데 사용될 수있다 전극 시스템과 통합되어 12,13.이 제안 된 방법은 엑소 콘텐츠의 빠른, 민감한, 그리고 용해 버퍼 무료로 분석 할 수 있습니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/52439/52439fig1highres.jpg" /> EFIRM 워크 플로우 1. 개요를 그림.. EFIRM 방법은 크게 정화 및 분석 엑소 좀에 필요한 세 가지 주요 단계로 구분된다. 이 CSW exosomal 기반 컨텐츠 방출 및 분석 방법은 엑소 격리를위한 자기 고유의 CD63 마이크로 비드와 함께 사용된다. 이러한 CD63-친화 비즈 타액 샘플 (및 기타 biofluids)에서 엑소 좀의 선택적 분리를 위해 할 수 있습니다. 인큐베이션과 자화 비드 엑소 좀을 이용하여 추출 후, 비드는도 1. 컨텐츠 방출 실험과 분석을 기초 부 CSW위한 전기 화학적 센서 시스템으로 마이그레이션 작업의 개요를 제공 아르EFIRM 방법의 흐름.

<table><tbody><tr><td>Helios 16채널 리더 시스템(칩 인터페이스 포함)&nbsp;</td><td>유전유체학, 미국</td><td>&nbsp; RS-1000-16</td><td></td></tr><tr><td>16x 센서 칩, 베어 골드, 5개 칩 팩</td><td>Genefluidics, USA</td><td>SC1000-16X-B</td><td></td></tr><tr><td>비오틴화 항인간 CD63 항체</td><td>Ancell, 미국</td><td>215-030</td><td></td></tr><tr><td>Dynabeads MyOne Streptavidin T1</td><td>Invitrogen, 미국</td><td>65601</td><td></td></tr><tr><td>네오디늄 마그네틱스(1/10" 직경 x 1/32" 두께)</td><td>K& J Magnetics, 미국</td><td>DH101</td><td></td></tr><tr><td>초순수 증류수</td><td>Life Technologies, 미국</td><td>10977-023</td><td></td></tr><tr><td>Mettler Toldeo 3 M KCl 솔루션</td><td>Fisher Scientific, 미국</td><td>1911512</td><td></td></tr><tr><td>Pyrrole</td><td>Sigma-Aldrich, 미국</td><td>W338605-100g</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Fluorescein-POD, Fab fragments</td><td>Roche, 독일</td><td>11426346910</td><td></td></tr><tr><td>3,3&prime;,5,5&prime;-tetramethylbenzidine substrate (TMB/H2O2, low activity)</td><td>Neogen, USA</td><td>330175</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline Solution</td><td>Life Technologies, 미국</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Casein/PBS</td><td>Fisher Scientific, USA</td><td>37532</td><td></td></tr></tbody></table>

전기장에 의한 해제 및 측정 (efirm)에 의해 exosomal 바이오 마커의 검출

Detection of Exosomal Biomarker by Electric Field-induced Release and Measurement (EFIRM)

엑소 좀은 세포 간 의사 소통의 매개 역할을 microvesicular 구조입니다. 그것은 그들이 질병 차별적 인 바이오 마커를 가지고 있는지 확인 엑소 좀의 내부화물을 연구하는 관심입니다. exosomal 분석을 수행하기위한, 그것을 추출하여 내부 콘텐츠를 손상시키지 않고 타겟 biofluids에서 엑소 좀을 분석하기위한 방법을 개발하는 것이 필요하다. 전계 방출 유도 및 측정 (EFIRM)는 구체적 biofluids에서 엑소 좀을 추출 그들의화물을 하역하고, 내부 RNA / 단백질 함량을 테스트하기위한 방법이다. 항 인간 CD63에 특이적인 항체를 사용하여 자성 미립자, 엑소 좀은 제 biofluids으로부터 침전된다. 다음 추출, 저전압 전기 순환 구형파 (CSW)는 기공을 막 중단 및화물 하역의 원인에 적용됩니다. 엑소 좀의 함유량 ...로서 대한 전극 표면에 고정화 DNA 프라이머 또는 혼성화 항체분자 내용의 ntification. EFIRM 방법은 용해 완충액없이 분석 엑소 좀의 추출 및 언화물 유리하다. 이 방법은 엑소 모두 RNA와 단백질의 특이 표적 바이오 마커 검출을 수행 할 수있다. 크기 기반의 기술과 반대로 EFIRM 특히 그 표면 마커에 기초하여 엑소 좀을 추출한다. 투과 전자 현미경 (TEM) 분석은 엑소 및 캡쳐 및 분석을위한 방법의 기능을 설명한다. EFIRM 방법은 인간 폐암 H640 세포를 주입 구 마우스의 분석 식염수 컨트롤을 수신 (11) 쥐에 대해 자신의 엑소 프로파일을 테스트하기 위해 (엑소 마커 인간 CD63-GFP를 발현하는 형질 감염된 세포주) exosomal 도포 하였다. exosomal 바이오 마커의 상승 된 레벨 (참고 GAPDH 유전자 및 단백질 표면 마커 인간 CD63-GFP)는 H640 모두 혈청 및 타액 샘플 주입을 위해 쥐를 발견 하였다. 또한, SalI로버지니아 및 혈청 샘플은 선형성 (R = 0.79)가 입증되었다. 이러한 결과는 말초 질환의 검출을위한 타액 엑소 바이오 마커의 실행 가능성에 대한 암시이다.

TEM을 사용하여 구슬의 엑소 캡처의 검증 항 인간 CD63 자성 비드를 이용하여 타액에서 엑소 좀의 분리는 투과 전자 현미경 (TEM) 이미지를 이용하여 추출 프로토콜 다음 검증 하였다. TEM은 엑소 좀의 알려진 프로파일과 일치 바로 인접 (도 3a를 참조하고, 3B) 70 ~ 100 나노 입자와 자성 비드를 보여줍니다. 아니 70 ~ 100 nm의 과립은 이전에 그들에게 결합 항 - 인간 CD63 항체가 (그림 3C 및 3D 참조)하지 않은 타액의 자기 구슬 관찰되지 않았다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/52439/52439fig3highres.jpg" /><br ...

엑소좀은 생체 유체 내에서 발견되는 미세소포 구조로, 잠재적으로 중요한 질병 차별적 바이오마커를 운반할 수 있습니다. 여기에서는 비균일 전기순환 구형파를 사용하여 엑소좀이 파괴된 후 엑소좀을 특이적으로 추출하고 RNA/단백질 표적 모두에 대한 엑소좀 화물을 신속하게 테스트하기 위한 새로운 방법을 사용합니다.

전기장에 의한 해제 및 측정 (EFIRM)에 의해 Exosomal 바이오 마커의 검출

Exosomes are microvesicular structures that play a mediating role in intercellular communication. It is of interest to study the internal cargo of ...

본 절차의 전반적인 목표는 생체 유체로부터 엑소좀을 효율적으로 추출하고, 엑소좀 내 화물을 방출시켜 신속하게 분석하는 것입니다. 이는 먼저 엑소좀 마커 타겟팅 항체가 부착된 자성 미세입자를 사용하여 생체 유체에서 엑소좀을 추출한 후, 추출된 엑소좀을 전극 표면에 로딩함으로써 달성됩니다. 다음으로, 전기장을 이용하여 엑소좀을 용해하며, 방출된 엑소좀 화물을 전극 표면의 프로브에 하이브리드화합니다.리포터 분자 또한 시스템에 하이브리드화됩니다. 마지막 단계는 전극 표면에 기질 용액을 첨가한 후 전류를 측정하여 판독값을 얻는 것입니다. 최종적으로, 전류의 전기화학적 측정을 통해 엑소좀 샘플 내의 핵산 또는 단백질 함량을 확인합니다.초원심분리와 라이신 완충액을 이용한 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 엑소좀 함량을 추출하고 테스트하는 방법이 간단하고 신속하다는 점입니다. 우리는 이 기술에 대해 매우 기대하고 있는데, 이 efim 기술을 통해 질환 상태나 정상 상태의 장기에서 혈관을 통해 배출되어 구강으로 들어오는 정보를 최초로 활용할 수 있게 되었기 때문입니다. 이 기술을 통해 이러한 정보를 포착하고 분자 함량을 방출시켜 유연한 방식으로 동시에 검출할 수 있습니다.이 질병 식별 정보와 관련하여, 일반적으로 이 방법에 익숙하지 않은 사용자는 주의를 기울이지 않을 경우 자성 미립자 사용에 어려움을 겪을 수 있습니다. 또한, 생물학적 시료 분석에 전기화학적 방법을 사용하는 것이 일부 사용자에게는 새로운 패러다임일 수 있습니다. 자성 미립자의 사용과 전극 로딩 과정을 습득하기 어렵기 때문에 이 방법에 대한 시각적 시연이 매우 중요합니다. 자성 미립자를 취급하고 전극에 로딩할 때 특별한 주의가 필요합니다.먼저 strept adin이 코팅된 자성 마이크로입자가 10 µg/mL 농도로 포함된 스톡 용액을 재현탁하고 5 µL를 취합니다. 비드 세척을 위해 PBS 495 µL가 담긴 마이크로 원심분리 튜브에 해당 용액을 첨가합니다. 우선 튜브를 자성 랙에 1분 동안 세워두고, 비드가 흐트러지지 않도록 주의하며 버퍼를 제거합니다.그런 다음 튜브를 비자성 랙으로 옮깁니다. 비즈를 세척하기 위해 500 µL의 PBS와 PET를 추가합니다. 마지막 세척 후 재사용할 때까지 이 과정을 총 3회 반복하십시오.비즈를 490 µL의 PBS에 현탁시킨 후, 1 mg/mL 스탁 용액에서 Biotinylated mouse anti-human

detection-exosomal-biomarker-electric-field-induced-release

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이 동영상에서는 마그네틱 마이크로비즈를 사용하여 타겟 바이오유체에서 엑소좀을 분리하는 절차를 보여줍니다. 이 절차를 통해 엑소좀을 빠르게 포획할 수 있으며, 엑소좀은 다운스트림 분석에 사용할 수 있습니다.

마그네틱 비드 기반 엑소좀 추출: 생체 유체에서 특정 엑소좀을 분리하는 기술

이 기사에서는 전혈에서 엑소좀을 분리하고 반자동 기기를 사용한 나노 입자 추적에 의한 추가 분석 방법을 제시합니다. 제시된 기술은 액체 현탁액의 입자를 시각화하고 분석하기 위한 매우 민감한 방법을 제공합니다.

엑소 정량화 및 크기 측정을위한 혁신적인 방법

세포 외 소포는 응고, 면역 반응, 암 또는 약물 전달이나 재생 의학의 잠재적 치료제를 포함하여 생리 학적 및 병리학 적 과정에 중요한 역할을한다. 이 프로토콜은 조정 가능한 저항 펄스 감지 기능을 사용하여 다양한 유체 절연 및 비 절연 외 소포의 정량화 및 크기 특성화하기위한 방법을 제시한다.

정량화 및 조정 가능한 저항 펄스 감지 기능을 사용하여 세포 외 소포의 크기 프로파일 링

이 프로토콜에서 우리는 형광 기반 나노-추적 분석 하 여 인간의 전체 혈액에서 세포 외 vesicles의 신속한 격리 및 특정 마커의 특성화에 대 한 완벽 한 워크플로우를 설명합니다. 제시 결과 재현성의 높은 레벨을 표시 하 고 셀 문화 supernatants 조정 될 수 있습니다.

나노-추적 분석 인 혈에 있는 단일 Extracellular Vesicles의 빠른 형광 기반 특성

질병 및 악성 세포에 대 한 엑 소 좀 유래 바이오 마커의 임상 번역은 신속 하 고 정확한 정량 방법의 결여에 의해 방해 된다. 이 보고서는 작은 부피의 혈 청 또는 혈장 샘플에서 특정 엑 소 좀을 정량화 하는 저 배율 어두운 영역 현미경 이미지의 사용을 설명 합니다.

종양 유래 엑 소 솜을 정량화 하는 나노 플라즈마-강화 된 산란 및 저 배율 현미경 이미징 사용

우리는 마우스 perigonadal 지방 조직 및 인간 혈장에서 분리된 세포외 소포의 크기 분포 및 총 입자 농도를 추정하기 위하여 새로운 나노 입자 추적 분석 계기를 사용하는 방법을 보여줍니다.

세포외 소포의 정량화 및 크기 측정을 위한 나노 입자 추적 분석

이 논문은 세포외 소포 하위 집합의 특성화를 위해 처리량이 증가한 차세대 다중 매개변수 분석 플랫폼을 제안합니다. 이 방법은 마이크로어레이 바이오칩에 갇힌 소포 표적을 검증하기 위해 원자력 현미경에 의한 도량형 및 형태역학적 분석과 라만 분광법의 결합을 기반으로 합니다.

세포외 소포 하위 집합 분석을 위한 Multiplexed Surface Plasmon Resonance Imaging Chip의 다중 모드 분석 플랫폼

여기서는 형광 표지된 microRNA의 풍부함에 대한 체외 평가를 통해 microRNA 패키징의 역학을 연구하고 세포외 소포체(EV)로 내보낼 수 있는 간단한 프로토콜을 설명합니다.

유세포 분석을 사용하여 세포외 소포체로의 miRNA 방출 추적

여기에서는 인간 피험자의 눈물 및 타액과 같은 생물학적 액체에서 수집된 세포외 소포체(EV)의 특성화 방법을 보여줍니다. 이 방법에 사용된 스캐너는 샘플의 1μL에서 EV의 표현형, 크기 및 총 입자 수를 감지할 수 있습니다.

Characterizing Extracellular Vesicles from Biological Fluids(생물학적 유체로부터 세포외 소포체 특성화)

여기서는 라벨 없는 표면 증강 라만 분광법(SERS)을 사용하여 개별 작은 세포외 소포(sEV)를 분석하는 프로토콜을 제시하여, 최소 침습 질환 진단과 sEV의 치료 전달 매개체 평가를 가능하게 합니다.

질병 진단 및 치료에 개별 sEV의 표면 강화 라만 산란 기반 생체감지 적용 탐구

학습하세요 생물체액에서 엑소좀을 효율적으로 추출하고 전기장을 이용해 용해시킨 후 전기화학적 측정으로 RNA와 단백질 화물을 신속 분석하는 방법을. 이 기술은 바이오마커 발견 연구에 활용됩니다.

전기장에 의한 해제 및 측정 (EFIRM)에 의해 Exosomal 바이오 마커의 검출

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