Name: 신생아 마우스의 뇌실 영역에 플라스미드 DNA의 트랜스포존 중재 통합 아교 모세포종의 소설 모델을 생성합니다 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 58 s
Description: 배우세요 신생아 마우스 뇌실에 트랜스포존 플라스미드 DNA를 주입하여 유전자 변이를 가진 교모세포종을 유도하는 방법입니다. 이 기술은 종양 진행을 생체 발광으로 모니터링하고 조직학적 분석을 통해 뇌종양 연구에 활용됩니다.

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우리는 플라스미드를 후하게 선물하고 이 방법을 숙달하기 위해 제공된 교육에 대해 John Ohlfest 박사와 Stacey Decker13 박사에게 감사드립니다. 파라핀 함유 절편의 Hematoxylin-Eosin 염색 절차를 표준화하는 데 도움을 주신 Marta Dzaman에게 감사드립니다. 또한 이 원고를 정독하고 유용한 제안을 해 준 Molly Dahlgren에게도 감사드립니다. 이 작업은 MGC 및 PRL에 대한 NIH/NINDS 보조금, MCG 및 PRL에 대한 Leah's Happy Hearts Foundation 보조금의 지원을 받습니다. Alex's Lemonade Foundation young Investigator Award 및 CK에 대한 St. Baldrick's Foundation Fellowship.

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이 글에서, 우리는 세부 사항 신생아 마우스의 뇌실 영역을 주변 세포에 종양 플라스미드 DNA의 SB의 transposase- 매개 통합을 사용하여 GBM의 새로운 모델을 생성하기위한 다양하고 재현하는 방법. 우리가 관심있는 새로운 유전자 트랜스포존 플라스미드를 생성하는 프로토콜을 제시, 살아있는 동물에서 종양의 진행을 모니터링하는 방법, 및 이들의 종양 histo 병리학 및 면역 조직 화학적 특징을 특성화하는 방법을 예시한다. 우리의 실험실로 (그림 3) 등 13 보여,이 모델은 안정적 (1) 의사 palisading 괴사, (2) 혈관 증식, (3) 핵 비정 형성, (4) 이상 유사 분열 등 인간의 GBM의 두드러진 특성을 가진 종양 (작성 5) 혈관 주위 및 확산 침공. 신생아 마우스의 사용은 최소의 장비 및 SE에서 비교적 용이 기술적 절차를 제공하는 관점에서 최적 물류 인특정 유전 적...

수술, 방사선 요법, 화학 요법으로 치료 한 경우 다형성 교 모세포종 (GBM)는 15~21개월의 평균 생존 기간으로, 성인에서 가장 흔한 (60 %) 차 뇌종양이다. GBM에 대한 소설 치료는 필수적이다. 실험 요법 적절히 인간 질병의 두드러진 특징을 재현 동물 모델에서 시험을 요구한다. 설치류 교종 세포주를 사용하여 화학이 알킬화제와 돌연변이 유발, 또는 배아 체세포 유전자 변형, 또는 이식을 포함 GBM의 전략을 유도한다. 가장 일반적으로 사용되는 모델은 뇌 내로 또는 피하로 동일한 유전자형의 동물 세포를 이용하여 동계 어느 동소, 신경 교종 세포주 주입을 채용; 또는 이종 세포는 면역에 이식 가장 일반적으로 인간 GBM 세포주, 마우스 3 손상. 이종 이식은 두개 내 종양의 연구에 많은 장점을 제공합니다 재현성의 편의를 위해, standardized 성장률, 죽음과 종양 현지화의 시간. 의사 pallisading 괴사, 핵 atypias, 미만성 침윤, 미세 혈관의 증식 : 착상하고 정확하게 조직 학적을 재현하는 능력의 한계에 사용되는 인공, 침습 수술 방법으로 인간의 GBM (WHO 4 등급)의 특성을 특징으로 인해 그러나 이러한 모델은 한계를 가지고 및 glomeruloid 혈관의 형성은 4-7 나 비정상. 종양 DNA와, 중 바이러스 벡터 8-12, 또는 트랜스포존 매개 통합 13과 체세포의 게놈을 변경하여 GBM의 유도는 더 밀접하게 인간의 질병의 원인을 재현하고 인간의 GBM의 histo-병리학 적 특징을 되풀이. 역사적으로, 중추 신경계의 종양 분류가 관찰되었다 기원의 인식 셀을 기반으로 한, 생존 (14)에 대한 예측 요인이 될 것입니다. GBMs 기본 및 보조로 분류된다. 신흥 증거 TOD님이 차 아교 모세포종 (15)의 매우 이질적인 성격을 가리키는. 보조 GBM (15 %), 낮은 등급의 성상 세포종 (WHO 등급 I)과 anaplasic 성상 세포종의 악성 변환 결과 (WHO 등급 II), 질병의 초기 발병, 더 나은 예후 및 유전자 발현의 &quot;proneural&quot;패턴과 연관된 차 GBM (85 ​​%) 반면, 발성, 불량한 예후와 아교 (클래식), 신경 또는 중간 엽 발현 패턴을 보여줍니다. 유전자 발현의 이러한 패턴의 유래 종양의 실제 셀과 상관 여부 여전히 활발히 연구되고있다. 데이터를 축적하면 GBMs와 연관된 유전 적 돌연변이의 조합이 생존 예측 것을 보여준다. 예를 들어, 염색체 1P / 19q, IDH1 돌연변이, PDGFRα의 증폭의 heterozygocity의 손실 (LOH)는 EGFR 과발현, 노치와 소닉 고슴도치 경로 활성화 NF-반면, 보조 GBMs, proneural 표현 패턴과 더 나은 예후와 연관된1 PTEN 손실과 p53의 변이는 신경, 클래식, 또는 중간 엽 차 GBM과 나쁜 예후 16, 17과 관련되어있다. 대규모 시퀀싱 프로젝트의 출현 및 테스트에 사용할 수 많은 환자 검체의 축적은 GBM의 발병과 진행 및 치료 특별히 맞출 수있는 개인화 된 의학의 가능성에 연루 유전자 돌연변이 및 경로에 대한 새로운 풍부한 정보를 제공합니다 환자의 유전 적 비정상. 궁극적으로, 이러한 체계적인 방법 및 돌연변이 경로의 예측값을 평가하고, 각각의 경우에 가능한 치료법을 테스트 소정 유전자 변형 동물과 GBM의 모델을 필요로한다. 게놈 DNA의 트랜스포존 매개 통합은 실현 가능한 접근 방식을 제공합니다. 잠자는 숲속의 미녀의 트랜스포존 시스템, 트랜스포존의에 T / 선원 클래스의 멤버는, 다단계 proce을에서 (건설) &quot;깨어&quot;했다휴면보다 10 만 년 전 (18, 19)가 된 salmonoid 트랜스 유전자에서 특정 사이트 돌연변이의 SS. 본질적으로, 특정 시퀀스 (반전 반복 / 직접 반복 : IR / DR)에 의해 측면 DNA 트랜스포존은 잠자는 숲속의 미녀의 트랜스의 활동에 의해 &quot;잘라 내기 및 붙여 넣기&quot;방식으로 게놈에 통합 할 수 있습니다. 트랜스는, IR 사이트의 끝을 인식하는 트랜스포존을 소비세 및 기지 T와 A, 전위 (그림 1a) 동안 트랜스포존의 각 끝 부분에 중복 기지 사이에 다른 DNA 사이트에 무작위로를 통합합니다. 잠자는 숲속의 미녀의 트랜스은 세 가지 영역, 트랜스포존 결합 도메인, 핵 이행 순서와 촉매 도메인으로 구성되어 있습니다. 트랜스 포 분자 함께 트랜스포존의 양단을 가져다 전치 있도록, 트랜스의 너무 많은 분자가 존재하는 경우, 그들은 이량하고 억제하는 데 필요한 tetramerize전위 반응 (20). 효율적인 전위 반응은 트랜스포존에 트랜스의 최적 비율을 필요로한다. 트랜스를 코딩하는 DNA는 (시스)에서 트랜스포존과 같은 플라스미드 또는 (트랜스)에서 상이한 플라스미드 상에 전달 될 수있다. 트랜스와 트랜스포존 간의 최적 비를 확보하기 위해, 충분한 활성을 갖는 프로모터에 대해 (( &quot;CIS&quot;모델) 트랜스의 발현 또는 최적화 될 수 주사액에서 플라스미드의 비율에 대해 선택 될 수있다 &quot;트랜스&quot;모델). 잠자는 숲속의 미녀 transposon의 시스템은 기능 유전체학,에서 삽입 돌연변이 유발, transgenesis 및 체세포 유전자 치료 (21) 성공적으로 사용할 수 있습니다. 합성 구조는 휴면 salmonoid 변형에서 기능성 분자를 재 설계이기 때문에, 잠자는 숲속의 미녀의 트랜스는 사람이나 다른 포유 동물 (20)의 다른 트랜스포존에 결합하지 않습니다. 그 발견 이후, 분자 공학 enhanc있다ED IR 시퀀스 및 TATA 디 ​​뉴클레오티드는, 트랜스포존 측부 PT2 트랜스포존 결과의 변화를 통해 부가 SB 트랜스포존 시스템의 전치 효능. 이러한 트랜스포존 IR 사이트 SB의 결합을 최적화 절개 효능을 증가했다. SB의 트랜스도 상당한 개선을 받았다; 본원에 제시된 실험에 사용은 트랜스 SB100X, 포유 동물 세포에서 22 대규모 유전자 스크린 뒤에 DNA 셔플 전략에 의해 생성 하이퍼 트랜스이다. 이보고에서는 신생 생쥐 (23)의 서브 영역의 심실 세포로의 플라스미드 DNA의 비 바이러스, 트랜스포존 매개 통합 마우스에서 극한 GBM을 유도하는, 급속 다용도 재현 방법을 제시한다. 우리는 잠자는 숲속의 미녀의 트랜스를 사용하여 게놈 통합을위한 의무가 새로운 유전자 트랜스포존을 만들고 플라스미드 흡수를 모니터링하는 방법을 설명하는 간단한 방법을 제시하고생물 발광을 사용하여 질병의 진행. 우리는 또한이 모델 재현 GBM의 조직 학적 및 면역 조직 화학적 기능을 특징. 또, 이들 원발성 종양 GBM 세포주를 생성하는 빠른 방법을 제시한다. 종양 동물에게 원래 세포로부터 유도되는 슬리핑 뷰티 모델은 유도 및 종양 진행에 GBM 후보 유전자의 기능적 역할의 평가를 허용한다. 이 시스템은 또한 잘 로컬 미세 환경을 변경할 수 침습적 염증 수술의 필요없이, 면역 능력이 생쥐의 면역 요법을 포함한 새로운 GBM 치료의 테스트에 적합합니다.

<table><tbody><tr><td>쥐와 마우스 어댑터를 사용한 Stoelting's Lab Standard</td><td>Stoelting</td><td>51670</td><td>다른 회사들도 비슷한 프레임을 생산하며, 그 중 작은 마우스 어댑터를 가진 것이 적합합니다&nbsp;</td></tr><tr><td>Quintessential Stereotaxic Injector (QSI)</td><td>Stoelting</td><td>53311</td><td>주사는 그것 없이도 만들 수 있지만&nbsp; &nbsp; &nbsp; 자동 주입기는 재현성과 편의성을 높입니다</td></tr><tr><td>10 &Mu; l 700 시리즈 핸드 핏 MICROLITER 주사기</td><td>해밀턴</td><td>모델 701</td><td>이 주사기 모델은 0.5에서 500 ul의 용액을 안정적으로 전달합니다. 다른 syrnges (예 5 ul, 모델 75)도 사용될 수 있습니다</td></tr><tr><td>30 게이지 피하 주사 바늘 (1.25", 15o 베벨)&nbsp;</td><td>Hamilton</td><td>S/O# 197462</td><td>이 바늘은 다른 침습적 절차 없이 신생아 마우스의 피부와 두개골을 관통하는 데 이상적입니다. 무뎌지면(피부에 쉽게 들어가지 않음) 교체해야 합니다.</td></tr><tr><td>in vivo-jetPEI</td><td>Polyplus Transfection</td><td>201-10G</td><td>분취량은 소량으로 -20 oC&nbsp;</td></tr><tr><td>D-Luciferin, 칼륨 염</td><td>Goldbio.com</td><td>LuckK-1g</td><td>반딧불이 루시피라제의 다른 출처는 마찬가지로 적절합니다</td></tr>. <tr><td>헤마톡실린 용액, Harris Modified</td><td>Sigma Aldrich</td><td>HHS128-4L</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>62550-01</td><td>동결 절제 및 면역조직반미법을 위한 뇌 내장용</td></tr><tr><td>고급 DMEM/F-12, 글루타민</td><td>없음 생명 기술</td><td>12634-010</td><td>신경구 배양을 위해</td></tr><tr><td>B-27&uml; 보충제 (50X), 세럼 프리&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>17504-044</td><td>신경구 배양을 위한 무혈청 보충제</td></tr><tr><td>N2 보충제(100x)</td><td>Life Technologies</td><td>17502-048</td><td>신경구 배양을 위한 무혈청 보충제</td></tr><tr><td>Normocyn</td><td>InvivoGen</td><td>ant-nr-1</td><td>신경구 배양을 위한 항마이코플라즈마 제제</td></tr><tr><td>재조합 인간 EGF</td><td>PEPROTECH</td><td>AF-100-15</td><td>&nbsp; 신경구체</td></tr><tr><td>재조합 인간 FGF-basic</td><td>PEPROTECH</td><td>100-18B</td><td>성장 인자 보충제 &nbsp; 신경구체</td></tr><tr><td colspan="4">[헤더]</td></tr><tr><td>HyClone HyQTase&nbsp; 세포 분리 시약&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>SV3003001</td><td>신경구체의 해리를 위해</td></tr><tr><td>Kimble-Chase Kontes Pellet Pestle</td><td>Fisher Scientific</td><td>K749510-0590</td><td>갓 절제된 종양의 해리를 위해</td></tr><tr><td>Falcon Cell Strainers 메쉬 크기 70 um</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-771-2</td><td>해리된 신경구의 단세포 현탁액 생성용</td></tr><tr><td>Xylenes 조직학 등급</td><td>Fisher Scientific</td><td>C8H10</td><td></td></tr><tr><td>프로토콜 Harris Hematoxylin 무수은(산성화)</td><td>Fisher Scientific</td><td>245-678</td><td></td></tr><tr><td>프로토콜 Eosyn Y 솔루션(강화)</td><td>Fisher Scientific</td><td>314-631</td><td></td></tr></tbody></table>

신생아 마우스의 뇌실 영역에 플라스미드 dna의 트랜스포존 중재 통합 아교 ​​모세포종의 소설 모델을 생성합니다

Transposon Mediated Integration of Plasmid DNA into the Subventricular Zone of Neonatal Mice to Generate Novel Models of Glioblastoma

예후가 좋지 않은 성인에서 가장 흔한 원발성 뇌종양인 교모세포종(GBM)의 발병 및 진행에 대한 새로운 유전자의 기여도를 검사하는 것이 시급합니다. 새로운 잠재적 치료법이 빠르게 등장하고 있으며 인간 질병의 두드러진 특징을 밀접하게 재현하는 실험 모델에서 체계적인 테스트가 필요합니다. 본 명세서에서는 신생아 마우스의 심실하 영역의 세포에 플라스미드 DNA의 트랜스포존 매개 통합을 통해 교모세포종의 새로운 모델을 유도하는 방법을 자세히 설명합니다. 잠자는 숲속의 미녀 전이(transposon) 시스템을 사용하여 게놈 통합에 적합한 새로운 전이(transposon)를 복제하는 간단한 방법을 제시하고 생물 발광, 조직학 및 면역 조직화학을 사용하여 플라스미드 흡수 및 질병 진행을 모니터링하는 방법을 설명합니다. 또한 새로운 1차 교모세포종 세포주를 생성하는 방법에 대해서도 설명합니다. 이상적으로, 이 보고서는 뇌종양 연구자들 사이에서 잠자는 숲속의 미녀 트랜스포존 시스템을 더 널리 보급하여 교모세포종 발병 기전 및 진행에 대한 심층적인 이해와 환자를 위한 효과적인 치료법의 적시 설계 및 테스트로 이어질 것입니다.

SB 유도 된 아교 모세포종의 histo 병리학 적 특징을 특성화하기 위해, C57 / BL6 신생아 생쥐 플라스미드 종양 DNA, 즉, NRAS (PT / CAGGS와 트랜스포존을 코딩과 조합 코드하는 플라스미드 루시페라아제 (PT2 / SB100x 뤽)와 P1으로 주입하면서 -NRASV12)와 SV40 LG 텔레콤 (PT / CMVSV40-LGT) (도 3c) 또는 PDGFβ 짧은 머리 핀의 자형으로 p53의와 NRAS (그림 3D와 함께 GFP 기자 (pT2shp53 / GFP4 / mPDGFβ) 암호화하는 플라스미드). 동물 분사 (그림 2a) 다음날 생물 발광을 모니터링하고 주기적으로이 안락사 때 죽어가는 단계에 도달 할 때까지했다. 빈사 단계는 동물이 증상을 보여주는 장애인 이동성, 웅크 리고 자세, 정치 못한 모피와 체중 감량이되는 임상 단계로 정의된다. 때때로, 동물 원과 갑작스러운 점프에서 산책처럼, 발작...

여기에서는 신생아 마우스의 심실에 주입된 트랜스포존 DNA를 사용하여 새로운 교모세포종(GBM)을 유도, 모니터링 및 분석하는 효율적이고 다재다능한 프로토콜에 대해 설명합니다. 플라스미드를 흡수하는 뇌실하부의 세포는 인간 교모세포종의 조직병리학적 특성을 가진 종양을 변형, 증식 및 생성합니다.

신생아 마우스의 뇌실 영역에 플라스미드 DNA의 트랜스포존 중재 통합 아교 ​​모세포종의 소설 모델을 생성합니다

An urgent need exists to test the contribution of new genes to the pathogenesis and progression of human glioblastomas (GBM), the most common primary ...

본 절차의 목적은 마우스에서 특정 유전자 변이를 보유한 교모세포종의 형성을 유도함으로써, 교모세포종의 새로운 모델을 구축하고 궁극적으로 새로운 치료 접근법을 개발하는 것입니다. 이는 먼저 관심 있는 특정 유전자를 인코딩하는 트랜스포존 플라스미드를 제작함으로써 수행됩니다. 다음 단계로는 트랜스펙션 시약으로 플라스미드를 준비하고, 이를 신생 마우스의 외측 뇌실에 주입하는 과정이 이어집니다.종양 진행 과정에서의 섭취는 루미네선스로 모니터링합니다. 동물의 수가 충분해지면, 조직학적 및 면역조직화학적 분석을 위해 희생시킵니다. 이와 같은 방식으로, 야생형 또는 표적 유전자 배경에서 특정 유전적 변이가 있는 새로운 교모세포종을 유도합니다.이러한 종양은 in vivo에서 연구하거나, 화학요법 제제를 이용한 생화학적 분석 및 세포독성 실험에 적합한 새로운 세포주를 생성하기 위해 in vitro에서 사용할 수 있습니다. 교모세포종 세포주를 정위 주입하는 것과 같은 다른 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은, 매우 구체적으로 선택된 유전자 변형을 사용하여 면역 능력이 있는 한 마리의 동물 내에 존재하는 내인성 세포의 악성 변환을 통해 종양을 유도한다는 점입니다. 이 과정은 인간 질병의 병인을 더 밀접하게 재현하며, 인간 GBM의 두드러진 조직병리학적 특징을 그대로 보여줍니다.이 방법은 성인의 고전적(classical), 전신경(pre-neural), 신경성(neural) 교모세포종 또는 소아 종양에서 서로 다른 유형의 교모세포종을 유발하는 원인 돌연변이가 무엇인지와 같은 신경종양학 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 응용 범위는 새로운 화학요법 제제, 방사선 면역 요법 또는 이들의 병용 요법을 이 모델을 사용하여 in vivo 또는 in vitro에서 비교적 빠르게 테스트할 수 있다는 점에서 GBM 치료까지 확장됩니다.저는 처음에 이 방법의 아이디어를 미네소타 대학교의 동료인 Dr.John과 논의하면서 얻게 되었습니다. 그는 sleeping beauty 트랜스포스 매개 통합을 통해 종양 억제 유전자의 억제제인 온코진을 숙주 게놈 DNA에 삽입하여 초기 뇌종양 모델을 개발한 바 있습니다. 저는 이 방법론이 종양 진행 과정에서 새로운 돌연변이의 영향을 연구하고 뇌암의 표적 치료제 개발을 돕는 데 매우 강력한 도구가 될 것이라고 생각했습니다. 실험 3~4주 전에 수컷 한 마리와 암컷 한 마리를 마우

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이 비디오는 신생아 마우스의 심실에 주입된 트랜스포손 DNA를 사용하여 교모세포종(GBM)을 유도하는 효율적인 기술을 설명합니다. 플라스미드를 흡수하는 뇌실하 영역의 세포는 인간 교모세포종의 조직병리학적 특성을 가진 종양을 변형, 증식 및 생성합니다.

SB 매개 전치를 사용한 교모세포종 유도: 신생아 마우스 뇌에 SB 플라스미드의 전이(Transposon) 매개 통합을 사용하여 새로운 마우스 모델을 생성하는 기술

우리는 신생아 subventricular 영역 electroporation라고 최소한 침입 기술을 보여줍니다. 기술은 신생아 새끼의 측면 심실에 플라스미드 DNA를 주입하고 전달하는 전기 전류를 적용 구성되어 있으며, 유전자 신경 줄기 세포를...

신생아 Subventricular 지대 Electroporation

Neuroblast 이주는 출생 후 신경에 근본적인 이벤트입니다. 우리는 급성 뇌 조각의 시간 경과 영상을 사용하여 생체 내 출생의 일렉트로 그들의 이주 이후의 시각화하여 neuroblasts를 효율적으로 표시하기위한 프로토콜을 설명합니다. 우리는 비디오 추적하여 neuroblast 역학의 정량 분석​​에 대한 설명을 포함한다.

마우스 급성 뇌 조각의 Neuroblast 마이그레이션의 생체 내 출생 일렉트로 및 시간 경과 영상

우리는 종양의 성장하는 동안 재생에 일반적으로 생물 물리학 적 제약 조건을 되풀이되었습니다의 intravital 두 광자 현미경을위한 마우스에서 대뇌 피질의 소성을 glioblastoma의 모델을 설립했다. 종양 위의 두개골을 대체 만성 유리 창에는 두 개의 광자 현미경에 의해 시간이 지남에 따라 종양의 진행을 추적 할 수 있습니다.

소성을 Glioblastoma의 마우스 모델은 뇌 실질 물리적 제약 조건을 유지하고의 intravital 두 광자 현미경에 적합

이 절차는 자궁 내 전기천공법을 통해 발달 중인 마우스 전뇌의 인터뉴런을 표적으로 삼는 방법을 보여줍니다. 이 기술은 피질의 표재층으로 향하는 중간뉴런 아형에서 선택적 유전자 발현을 달성하는 데 특히 효율적이었습니다.

두피의 interneurons의 하위 유형 선택적 일렉트로

여기서 우리는 신생아 마우스 뇌에 아데노 관련 바이러스를 뇌실 내 주입하여 광범위한 신경 세포 전달을 위한 기술을 보여줍니다.  이 방법은 바이러스로 전달된 transgenes의 평생 발현을 달성하는 빠르고 쉬운 방법을 제공합니다.

영구와 광범위한 신경 세포의 형질 도입에 대한 신생아 마우스 뇌의 뇌실 바이러스 감염

두뇌에 있는 유전자의 세포 자치 기능 손실을 유도 하 여 공부 될 수 있다 또는 셀의 스파스 인구에 있는 기능을 얻을. 여기, Cre recombinase 함수 비보의 손실에 floxed 유전자와 대뇌 피 질의 뉴런 개발의 부족 인구에 제공 electroporation utero에서 설명 합니다.

Cre lox 재결합 Electroporation Utero에 통해 마우스 대뇌 피 질에서 유도

레이저 미세 해부 (LMD)는 신경교종 이질성과 침략을 중재하는 통로를 밝히기 위하여 이용될 수 있는 민감하고 높게 재현가능한 기술입니다. 여기에서, 우리는 전사성 분석에 선행된 레이저 LMD를 사용하여 신경교종 조직에서 이산 지역을 격리하기 위하여 최적화된 프로토콜을 기술합니다.

종양 내 이질성, 온코스트림 및 침략의 공간 및 분자 특성화를 위한 신경교종 소구역의 레이저 캡처 미세 분해

전임상 테스트를 위해 일반적인 환자 돌연변이에 의해 유도되는 면역 능력이 있는 자가종양 모델을 활용하는 것은 면역 치료 테스트에 매우 중요합니다. 이 프로토콜은 일반적인 환자 돌연변이를 나타내는 플라스미드 DNA의 전기천공법 기반 전달을 사용하여 뇌종양 마우스 모델을 생성하는 방법을 설명하므로 정확하고 재현 가능하며 일관된 마우스 모델을 제공합니다.

Modeling Brain Tumors In Vivo Using Electroporation-Based Delivery of Plasmid DNA Representing Patient Mutation Signatures(환자 돌연변이 시그니처를 나타내는 플라스미드 DNA의 전기천공법 기반 전달을 사용한 생체 내 뇌종양 모델링)

패혈증은 미생물 감염으로 인한 전신 염증 반응 증후군을 참조하고, cecal 내고 주사 (CLP)을 되나 수술 기법에 의한 시뮬레이션이 될 수 있습니다. 여기 치료 대리인을위한 약초를 구분할 CLP 유발 동물 모델을 사용하는 방법을 설명합니다.

소설 허벌 요법을 평가하는 패혈증의 동물 모델의 사용

배우세요 신생아 마우스 뇌실에 트랜스포존 플라스미드 DNA를 주입하여 유전자 변이를 가진 교모세포종을 유도하는 방법입니다. 이 기술은 종양 진행을 생체 발광으로 모니터링하고 조직학적 분석을 통해 뇌종양 연구에 활용됩니다.

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