Functional Characterization of Na<sup>+</sup>/H<sup>+</sup> Exchangers of Intracellular Compartments Using Proton-killing Selection to Express Them at the Plasma Membrane

Nina Milosavljevic; Mallorie Po&#235;t; Michael Monet; El&#233;onore Birgy-Barelli; Isabelle L&#233;na; Laurent Counillon

doi:10.3791/52453

나의 기능적 특성 + / H + 선택을 양자가 살해 사용하여 세포 내 구획의 교환기...

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Biology

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Functional Characterization of Na⁺/H⁺ Exchangers of Intracellular Compartments Using Proton-killing Selection to Express Them at the Plasma Membrane

나의 기능적 특성 + / H + 선택을 양자가 살해 사용하여 세포 내 구획의 교환기는 플라즈마 막에서 그들을 표현하는

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07:38 min

March 30, 2015

DOI: 10.3791/52453-v

Nina Milosavljevic*¹, Mallorie Poët*¹, Michael Monet¹, Eléonore Birgy-Barelli¹, Isabelle Léna¹, Laurent Counillon¹

¹Université Nice-Sophia Antipolis, Laboratoire de Physiomédecine Moléculaire, CNRS UMR7370, and Laboratories of Excellence Ion Channel Science and Therapeutics

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

이 글의 첫 번째 부분에서는 원형질막에서 소포성 Na⁺/H⁺ 교환체를 발현하는 돌연변이 세포주를 선택하는 방법을 보여줍니다. 두 번째 부분에서는 세포 내 pH 측정 및 빠른 이온 흡수를 기반으로 하는 프로토콜을 제공하며, 이는 이러한 교환기의 이온 선택성과 운동 파라미터를 결정하는 데 사용됩니다.

다음 실험의 전반적인 목표는 세포 내에서 발현된 나트륨 양성자 교환기의 활성을 측정하는 것입니다. 이는 먼저 양성자 사멸 선택에 의해 원형질막에서 세포 내 나트륨 양성자 교환기를 발현하는 세포를 선택함으로써 달성됩니다. 두 번째 단계로, 선택된 세포를 산성화한 다음 세포 내 pH 회수를 측정하여 세포의 나트륨 양성자 교환 활성을 확인합니다.

그런 다음 이온 수송의 빠른 역학을 측정하여 수송된 양이온 및 억제제에 대한 친화도 상수를 측정합니다. 궁극적으로, 세포 내 pH의 변화와 선택된 체세포의 빠른 동역학을 모니터링하면 세포 내 단백질 교환의 기능적 특성을 분석할 수 있습니다. 돌연변이 수송체를 발현하거나 세포별로 사용하는 것과 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 원형질막에서 백색형 세포 내 수송체의 발현을 가능하게 하여 그 기능을 직접 측정할 수 있다는 것입니다.

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