Name: 작은 볼륨 생물 검정은 물 - 펄스 진폭 변조 (WATER-PAM) 형광 측정을 사용하여 세균 / 식물 플랑크톤의 공동 문화를 평가하는 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 54 s
Description: 배우세요 미세조류와 세균의 공동 배양에서 WATER-PAM 형광 측정을 이용한 소형 생물 검정법으로 광합성 건강도를 평가하는 방법입니다. 이 기법은 미생물-조류 상호작용 연구에 활용됩니다.

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이 작업은 캐나다 자연과학 및 공학 연구 위원회(보조금 402105), 캐나다 혁신 재단(보조금 129087) 및 앨버타 교육 및 훈련(보조금 AAETRCP-12-026-SEG)의 지원을 받았습니다.

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소형 형식으로 조류 성장. 현재 실험에서 복제가 증가 될 수 있도록 마이크로 타이 터 플레이트에서 1ml의 배양 부피 조류 배양의 소형화를 허용한다. 이 녹조류는 실험 내내 건강 보장하는 것이 중요하다; 조류의 영양 요건이 충족 될 수 있도록, 다양한 조류 매체를 평가하기 위해 마이크로 타이 터 플레이트 포맷을 사용하여, 성장 곡선 (도 2)를 수행한다. 또한,이주기 일주 (명암주기)과 온도를 최적화하는 것이 중요 할 수있다. 주어진 조류에 대한 적절한 최적화는 26 D에 대한 피크 형광에서 건강한 조류 문화를 유지하고 1백40일 (그림 2) 후 잠재적 인 양자 수율을 검출 할 수 있습니다. 증발 효과를 최소화. 그것은 &quot;에지 효과&quot;뿐만 액체 기재 분석법의 증발 효과를 최소화하는 것이 중요하다 O 일반적bs...

식물 플랑크톤의 생리는 전통적으로 원뿔 플라스크에 20 ㎖에서 carboys 1-7에서 5 L에 이르는 메조 규모의 실험에서 연구되어왔다. 각 시점에 대한 복제 샘플을 희생하는 것이 관리하기 어려운 실험 장치를 만들어으로이 실험 규모는 실험 모니터링을위한 서브 샘플링을 필요로한다. 줄이거 나 대량의 서브 샘플링 및 의사 - 복제의 제한을 제거한다 조류 생리학 실험 실험 용적을 소형화하여 일주 동일한 인큐베이터 공간을 사용하면서 기능은 독립적 인 실험의 수를 증가시키는. 마이크로 타이 터 플레이트 포맷은 가변 실험적 조건에서 조류를 조작 1ml의 배양 부피를 사용하여 조류 생물 검정을 위해 개발되었다. 실험이 작은 부피 복제물의 수가 증가 될 수 있도록 허용 복제에 의한 샘플 간의 감소 가변성 실험의 재현성을 증가(그림 2) 12 1백40일에 대한 실험 컨트롤 (즉, 무균 조류 배양)를 유지하면서 실험하고, 진정한 복제를 할 수 있습니다. 이 마이크로 타이 터 플레이트 형식은 쉽게 같은 실험 다양한 질문에 대한 적응 : 박테리아가 조류 호스트와 공생 중성 또는 병원성 상호 작용을해야합니까? 조류의 복합 자극의 추가 또는 독성인가? 이들 및 다른 문제는이 새로운 포맷을 사용하여 9-11 빠른 높은 처리량 방법으로 해결할 수있다. 48 웰 마이크로 타이 배양 플레이트는 각 1 ㎖를 잘 단일 시간 시점에서 샘플링 독립적 인 실험 장치가 될 수 있습니다. 다양한 매개 변수를 포함하여 1 ml의 볼륨에서 샘플링, 이에 국한되지 수 있습니다 WATER-펄스 진폭 변조 (WATER-PAM) 형광 측정 (재료 및 장비 표 참조) 1을 사용 엽록소 형광 및 광 화학적 매개 변수3. WATER-PAM의 형광 측정 조류 13의 실험을 모니터링하는 데 사용할 수있는 신속하고 비 침습적 방법이다. 14, 15 (WATER-PAM 4 ml의 볼륨 - - 2 중간에 희석 문화의 300 μL 150) 그것은 작은 문화 볼륨에서 광합성 효율과 광계 건강을 측정 할 수 있습니다. WATER-PAM의 형광 측정에 더하여,이 설정을 포함한 다른 다양한 파라미터를 측정하는데 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 : 조류 세포 및 조류 세포 형태의 변화에​​ 부착 된 박테리아를 시각화하는 현미경; 단위 (CFU) 수를 형성하는 박테리아 식민지; 및 조류 세포 수 및 식별 주민들을위한 유동 세포 계측법.

<table><tbody><tr><td>10 cu. ft. 일주일 인큐베이터 (6012-1)</td><td>Caron Corporate</td><td>112310-6012-1-11</td><td><a href="http://www.caronproducts.com">www.caronproducts.com</a></td></tr><tr><td>Nunc EasYFlask 25 cm2, 벤트/클로즈 캡, 7 ml 작업 용량, 200/cs</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td> <td>N156340<a href="http://www.fishersci.ca">www.fishersci.ca</a></td></tr><tr><td>멀티웰 TC 플레이트 &ndash; 48-웰</td><td>BD Biosciences 디스커버리 랩웨어</td><td>353078</td><td><a href="http://www.bdbiosciences.com/">www.bdbiosciences.com</a></td></tr><tr><td>P1000 Gilson 피펫팅 표준&mdash; Gilson's Pipetman</td><td>Mandel Scientific Company Inc.</td><td>GF-F123602</td><td><a href="http://www.mandel.ca">www.mandel.ca</a></td></tr><tr><td>P10mL Gilson 피펫팅 표준&mdash; Gilson's Pipetman</td><td>Mandel Scientific Company Inc.</td><td>GF-F161201</td><td><a href="http://www.mandel.ca">www.mandel.ca</a></td></tr><tr><td>Wide 오리피스 팁 비멸균 [100&ndash; 1,250 &마이크로; l]</td><td>VWR International</td><td>89079-468</td><td><a href="http://www.ca.vwr.com">www.ca.vwr.com</a></td></tr><tr><td>Ultrafine Tips 비멸균 [100&ndash; 1,250 &마이크로; l]</td><td>VWR International</td><td>89079-470</td><td><a href="http://www.ca.vwr.com">www.ca.vwr.com</a></td></tr><tr><td>Finntip 10 ml [Vol: 1 - 10 ml]</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td> <td>9402151<a href="http://www.fishersci.ca">www.fishersci.ca</a></td></tr><tr><td>WATER-Pulse Amplitude Modulation (Water-ED)</td><td>Heinz Walz GmbH, Effeltrich, Germany</td><td>EDEE0232</td><td><a href="http://www.walz.com">www.walz.com</a></td></tr><tr><td>15 mm 직경 석영 유리 큐벳 (WATER-K)</td><td>Caron Corporate</td><td></td><td><a href="http://www.caronproducts.com">www.caronproducts.com</a></td></tr><tr><td>염화나트륨 (결정질/ACS 인증), Fisher Chemical</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td><a href="http://www.fishersci.ca"> www.fishersci.ca</a></td></tr><tr><td>BD Difco Marine Broth 2216</td><td>BD Biosciences Discovery Labware</td><td>BD Biosciences Discovery Labware</td><td><a href="http://www.bdbiosciences.com">www.bdbiosciences.com</a></td></tr><tr><td>BD Bacto Agar</td><td>BD Biosciences Discovery Labware</td><td>BD Biosciences Discovery Labware</td><td><a href="http://www.bdbiosciences.com">www.bdbiosciences.com</a></td></tr><tr><td>L1 미디엄 키트, 50 L</td><td>NCMA [국립 해양 조류 및 미생물군 센터</td><td>NCMA [국립 해양 조류 및 미생물군 센터</td><td><a href="http://www.ncma.bigelow.org">www.ncma.bigelow.org</a></td></tr></tbody></table>

작은 볼륨 생물 검정은 물 - 펄스 진폭 변조 (water-pam) 형광 측정을 사용하여 세균 / 식물 플랑크톤의 공동 문화를 평가하는

A Small Volume Bioassay to Assess Bacterial/Phytoplankton Co-culture Using WATER-Pulse-Amplitude-Modulated (WATER-PAM) Fluorometry

배양 실험 1-7에 걸쳐 서브 샘플링 될 수 있도록 미세 조류의 실험 조작을위한 종래의 방법은 대량 배양 (5 L 내지 20 ml)에 사용했다. 대량의 서브 샘플링 다양한 이유로 문제가 될 수있다 : 1)는 총 부피와 표면적의 변화 원인은 다음 실험 기간 동안 배양 체적비; 2) 의사 복제 (즉, 동일한 치료 플라스크 8에서 샘플)는 종종 오히려 진정한 복제물 (복제 치료에서 즉, 샘플링)보다 채용을 복제; 3) 실험 기간은 총 부피에 의해 제한된다; 4) 배양 무균 또는 일반적인 세​​균 미생물 오염은 일반적으로 서브 샘플링 동안 발생 장기 실험 동안 유지하기 어렵다. 미세 적정 플레이트의 사용은 최대 48 내의 별도의 처리 1 ㎖의 각각의 배양에 사용되는 복제 볼륨을 가능12.65 X 8.5 X 2.2 cm 판함으로써 실험 볼륨을 감소하고 치료를 서브 샘플링하지 않고 광범위한 복제를 허용. 9-11 스크리닝 세균성 조류 공동 배양, 조류 생리 테스트 및 독소 : 또한,이 기술은 실험을 포함한 다양한 포맷에 맞게 수정 될 수있다. 조류, 박테리아 및 / 또는 공동 문화와 개인 우물로 제한 등 다양한 실험 절차에 대한 샘플링,하지만 할 수 있습니다 WATER-펄스 진폭 변조 (WATER-PAM) 형광 측정, 현미경, 세균 집락 형성 단위 (CFU) 수와는 유동 세포 계측법. 마이크로 타이 터 플레이트 포맷 WATER-PAM 형광 측정의 조합은 광 화학적 수율 및 샘플, 높은 재현성과 낮은 가변성과 다른 광 화학적 파라미터의 다수의 신속한 측정이 가능하며 실험의 과정 속에 든 대형 유리 병 또는 원추형 플라스크를 서브 샘플링 많은 함정을 피할 .

WATER-PAM의 형광 측정 수치. 물 - 펄스 진폭 변조 (PAM) 형광 측정은 형광 (엽록소 콘텐츠에 대한 프록시) 및 조류 문화의 광합성 수율 (PSII 건강)를 결정하는 빠르고 효율적인 방법입니다. PAM WinControl 소프트웨어는 원시 데이터 값의 스프레드 시트 (다음 어두운 적응 조류 시료 기본적인 파라미터이다)를 생성한다 : 어두운 적응 세포의 F 0 = 형광 F의 m = 최대 형광 발광 다이오드 포화 후 (LED) 펄스 어두운 적응 샘플 (19)의 F의 V / F의 m = (F m에 -F 0) / F의 m은 = 잠재적 인 양자 수율 <p clas...

이 절차의 목표는 미세조류 스크리닝을 위해 마이크로타이터 플레이트 형식을 사용하는 재현성과 적응성을 입증하는 것입니다. 이 신속한 스크린은 WATER-PAM(Pulse-Amplitude-Modulated) 형광 측정법을 결합하여 소량의 박테리아-조류 공동 배양과 함께 Photosystem II(PSII) 건강 지표로 광합성 수율을 측정합니다.

작은 볼륨 생물 검정은 물 - 펄스 진폭 변조 (WATER-PAM) 형광 측정을 사용하여 세균 / 식물 플랑크톤의 공동 문화를 평가하는

Conventional methods for experimental manipulation of microalgae have employed large volumes of culture (20 ml to 5 L), so that the culture can be ...

다음 실험의 전반적인 목표는 조류 배양물의 건강 상태나 생리적 특성에 영향을 미칠 수 있는 미생물 공생체 또는 병원균을 식별하기 위해, 조류 배양물을 빠르게 스크리닝하는 소형화된 조류 바이오어세이를 소개하는 것입니다. 이는 먼저 배지를 사용하여 조류와 박테리아의 대조군 혼합물을 만들고, 다양한 농도로 실험용 조류-박테리아 공배양물을 제조함으로써 수행됩니다. 다음 단계는 견고하고 재현 가능하며 신속한 스크리닝을 위해 혼합물 분주액이 담긴 48-웰 플레이트를 준비하는 것입니다.다음으로, 플레이트를 배양하며 펄스 진폭 변조 형광 측정법(pulse amplitude modulated fluorometry)을 사용하여 모니터링하는데, 이 방법은 시스템의 광합성 건강 상태를 추론할 수 있는 측정값을 제공합니다. 이러한 시계열 실험 결과는 박테리아가 조류에 미치는 영향이 병원성인지, 공생 관계인지 또는 중립적인지를 보여줍니다. 시계열 실험 중에 추가적인 소량 스크리닝을 적용할 수도 있습니다.대량의 시료를 사용하는 기존의 조류 바이오어세이 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은, 소형화된 바이오어세이를 통해 적은 부피로 실험이 가능하므로 반복 횟수를 늘릴 수 있다는 점입니다. 이 방법은 원래 세균성 병원체 또는 공생균에 대한 조류의 반응을 파악하기 위해 개발되었으나, 화학적 생성 활성 분자나 영양소가 유사한 건강 및 생리 상태에 미치는 영향에 관한 질문을 해결하는 데에도 적용될 수 있습니다. 이 방법이 생소한 연구자는 초기에는 소형 마이크로 타이터 플레이트 형식으로 분주 및 조류 시료를 옮기는 과정에서 어려움을 겪을 수 있는데, 이는 실험의 성공을 위해 세심한 무균 조작법과 철저한 실험 계획이 필요하기 때문입니다.실험 시간을 계획하십시오. 박테리아가 정지기에 도달하고 조류 세포가 초기 대수 성장기에 도달하는 시점을 일치시켜야 합니다. 실험을 시작하기 전, 사용되는 박테리아 및 조류 균주에 대해 충분히 이해하는 것이 매우 중요합니다.초기 대수 증식기가 언제인지와 더불어, 박테리아 및 조류 균주의 초기 농도, 그리고 암적응에 필요한 시간을 파악하는 것이 중요합니다. Pam을 사용할 때 박테리아를 준비하려면, 유리 시험관에 형성된 바이오필름을 박테리아 배양액 속으로 씻어 내린 다음, 배양액 1 mL를 무균적으로 취하여 마이크로 원심분리 튜브로 옮깁니다.마이크로 원심분리관을 1분 동안 원심분리합니다. 14,000 gs에서 펠렛이

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본 논문은 성장의 다른 방법을...

공동 문화 모델 녹농균 Biofilms는 라이브 인간 에어웨이 세포에 들어라

분석은 박테리아와 곰팡이의 초기 biofilm 형성을 측정하는 빠른 방법을 설명합니다. 이 방법은 미생물의 biofilm 형성에 대한 하층으로 microtiter 접시를 사용하고, biofilm은 크리스탈 바이올렛 스트레인을 사용하여 시각입니다. 분석도 초기 biofilm 형성에 대한 질적 양적 분석 또는를 제공합니다.

Microtiter 디시 Biofilm 형성 분석

출처: Weber, N. et. al., 필라멘트 시아노박테리움 포르미디움 라쿠나의 자연 변형, 단백질 발현 및 냉동 보존. J. Vis. 경험. (2022년)이 비디오는 사상체 시아노박테리아의 광주성을 연구하기 위한 집중된 LED 기반 분석을 보여줍니다. 박테리아는 광원을 향해 이동하여 조명 중심에 조밀한 축적물을 형성하며, 이는 캡처된 이미지의 픽셀 강도 분석을 통해 시각화되고 정량화됩니다.

집중광 조명을 이용한 사상체 시아노박테리아의 광주성 분석

이 비디오는 페그 플레이트를 사용하여 생물막을 효율적으로 제거하는 항균 화합물을 스크리닝하는 분석을 보여줍니다. 이 방법론은 항균 화합물로 처리한 후 생물막의 대사 상태를 모니터링하여 최소 생물막 박멸 농도를 쉽게 측정할 수 있습니다.

항균제 스크리닝을 위한 Peg Plate Biofilm Assay

여기에서는 외딴 해양 환경에서 유기 및 무기 영양소 가용성과 미생물 및 바이러스 군집의 풍부함 및 구조를 평가하기 위한 포괄적인 프로토콜을 제시합니다.

물 화학 및 해양 미생물에 필드 가이드 - 바다에서 보이지 않는 선수를 해명

부르크 홀데 리아의 sartisoli RP037-mChe와 전 세포 bioreporter 분석은 물 불포화 모델 시스템에서 공기로 채워진 모공을 해소 균사체에 의한 능동 수송 후 세균 분해 가능한 유기 오염 물질 (즉, 플루 오렌)의 분수를 감지하기 위해 개발되었다.

전체 셀 Bioreporter 접근 물 불포화 시스템에서 유기 오염 물질의 운송과 생체 이용률을 평가하기 위해

이 논문은 다른 방법과 관련하여 적절한 운동 성장 매개 변수를 추정하기 위해 사용할 수있는 벤치 규모의 광합성 생물 반응기의 조립 공정 및 작동에 대해 설명합니다. 이 시스템은 센서, 데이터 수집 및 제어 장치 및 오픈 소스 데이터 수집 소프트웨어를 사용하여 pH, 빛 및 온도를 지속적으로 모니터링합니다.

키네 성장 시험을위한 온도, 빛 및 pH 모니터링을 갖춘 벤치 규모의 조류 광합성 생물 반응기의 건설 및 설치

시각적 클러스터링 함께에서 cytometry 수생 biofilms 공부는 쉬운--사용 하 고 빠른 방법을 제공 합니다. 그것은 biofilm 특성, biofilm 커뮤니티 구조에 변화의 탐지 및는 biofilm에 포함 하는 비 생물 적인 입자의 탐지에 사용할 수 있습니다.

Cytometry와 수생 Biofilms의 특성

이 간행물은 맞춤형 조명 체계를 갖춘 실험실 광생물 반응기 (PBR)의 설계에 대해 설명합니다. 중탄산염을 탄소원으로 사용하는 시아노박테리아 또는 미세조류의 성장은 용적 산소 생산을 측정함으로써 지속적으로 모니터링됩니다. 이러한 PBR은 실험 중 사용자 개입이 거의없는 신속하고 복제 된 실험실 성장 비교를 용이하게합니다.

온라인 성장 측정 및 사용자 정의 가능한 조명 체계를 갖춘 실험실 광생물 반응기 운영

빠른 반복률 형광계 (FRRf)는 광계 II 광생리학 및 일차 생산성을 측정하는 유익한 방법입니다. 여기서 우리는 큐벳 타입 FRRf를 사용하여 기질 동물 플랑크톤에 대한 후생대 조류, Colacium sp.의 PSII 광생리학을 측정하는 프로토콜을 설명한다.

Cuvette-type Fast Repetition Rate Fluorometer에 의한 Colacium sp.의 부착 단계의 광생리학 측정

이 프로토콜은 펄스 진폭 변조된 엽록소 형광 측정법에 의한 비광화학적 담금질의 완화를 측정하기 위한 고처리량 방법을 도입한다. 이 방법은 현장에서 자란 글리신 맥스 에 적용되며 유전 적 다양성 또는 번식 집단을 스크리닝하기 위해 다른 종에 적응할 수 있습니다.

펄스 진폭 변조된 엽록소 형광계를 이용한 작물에서의 비광화학적 담금질의 고처리량 분석

배우세요 미세조류와 세균의 공동 배양에서 WATER-PAM 형광 측정을 이용한 소형 생물 검정법으로 광합성 건강도를 평가하는 방법입니다. 이 기법은 미생물-조류 상호작용 연구에 활용됩니다.

작은 볼륨 생물 검정은 물 - 펄스 진폭 변조 (WATER-PAM) 형광 측정을 사용하여 세균 / 식물 플랑크톤의 공동 문화를 평가하는

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