Name: 마우스 기관에 적용 높은 정밀도 아연 동위 원소 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: 학습하세요 마우스 기관에서 아연 동위원소 비율을 고정밀 측정하는 방법을. 이온 교환 크로마토그래피와 질량분석기를 활용하여 아연 분포와 수송 메커니즘을 연구하고 질병 진단에 활용할 수 있습니다.

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FM은 chaire 디부 우수 IDEX 소르본 파리 시테 통해 ANR에서 자금을 인정하고, INSU PNP 승인을 통해, 연구소 Universitaire 드 프랑스뿐만 아니라 소르본 파리 시테 (ANR-10-LabX에-0023과 ANR에서 LABEX UniverEarth 프로그램 -11-IDEX-0005-02). 우리는 또한 유럽 공동체의 H2020 프레임 워크 프로그램 / ERC 보조금 협정 # 637503 (원시)에서 유럽 연구위원회의 자금 지원을 주셔서 감사합니다.

참고 : 동물을 포함하는 절차는 Université 파리 디드로의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다. 재료 1. 준비 <ol><li> 하위 종기 더러움을 정화하기 위해 산의 1 L (HNO 3의 HBr)를 증류. </li><li> 뜨거운 (~ 100 °의 C)에서 커와 팁 어댑터 청소 적어도 이틀 동안 HNO 3 산욕을 농축시켰다. </li><li> 며칠 동안 감기 3 N HNO 3 조에서 피펫 팁을 세척하고 탈 이온수 개별적으로 세 번 씻어. </li></ol> 2. 샘플 준비 <ol><li> 케타민과 자일 라진의 복강 내 주사하여 쥐를 마취. 발가락 핀치 방법으로 마취를 평가합니다. </li><li> 1.5 ㎖의 튜브에 헤파린의 존재하에 심장 천자에 의해 혈액을 수거. </li><li> 원심 분리 (10 분, 1,500 XG)에 의해 혈액 세포에서 플라즈마를 분리 및 폴리 프로필렌 (C)에 플라즈마를 전송폴리 프로필렌 정보를 사용하여 ryogenic 병. </li><li> 심장을 관통 DPBS를 간 정맥을 절단하고 주입하여 기관에서 남아있는 혈액을 제거합니다. 자궁 전위에 의해 마우스의 죽음을 평가합니다. </li><li> 멸균 스테인레스 스틸 악기와 장기를 수확있는 경우 지방 주변을 무료로, 폴리 프로필렌 극저온 유리 병에서 그들을 동결 스냅. </li></ol> 3. 화학 정제 <ol><li> 첫째, 집중 (30 %)의 ~ 1 ml의 H 2 O 2와 농축 (~ 15 M) HNO 3 ~ 1 ML의 혼합에 샘플을 녹인다. 흄 후드 내부의 모든 단계를 수행합니다. <ol><li> 15 ml의 테플론 비커에 관심있는 모든 기관을 놓습니다. 그런 다음, 비커 5 H 2 O 2 / HNO 3를 추가합니다. 유기물의 산화 반응 및 CO 2의 방출로 인한 스플래시를 피하기 위해 몇 분 동안 열기 비이커 유지. </li><li> 마지막으로, ABO 핫 플레이트에 넣어 비이커솔루션 시간이나 때까지 몇 UT 100 ° C는 완벽하게 알 수있다. </li></ol></li><li> 비커를 열고 약 100 ℃의 핫 플레이트에 솔루션을 건조. </li><li> 샘플이 건조되면, 샘플에 1.5 N의 HBr 1 ㎖을 추가; 비커를 닫고 몇 시간 100 ℃에서 핫 플레이트에 용해 할 수 있습니다. </li><li> 한편 500 μL 열을 준비합니다. <ol><li> 컬럼에 AG1X8 200-400 메쉬 수지의 500 μl를 추가하고 아래의 쓰레기 비커와 열 선반에 넣어. 5 ㎖ MΩ ⋅ cm, 물, 0.5 N HNO 3 5 ㎖, 물 5 ㎖, 0.5 N HNO 3 5 ㎖ 18.2을, 그리고 물을 5 ml의 : 교번하여 수지를 씻어. 1.5 N HBr을 5 ml의 수지를 조정. </li></ol></li><li> 비커 실온까지 냉각 할 수 후 열판에서 비커를 제거하고 약 30 분간 초음파 욕조에 넣어합니다. </li><li> 비이커 냉각시키고 수지를 세척 후, 비커를 연다. T로 끝 어댑터를 넣어그는 주사기 피펫 팁을 추가; 샘플의 1 ml에 피펫 (수지를 선동하지 않기 위해 매우 느리게) 수지에로드합니다. </li><li> 모든 액체가 컬럼을 통해 통과하면 1.5 N의 HBr 5 mL를 추가한다. </li><li> 1.5 N의 HBr의 5 ml의 칼럼을 통해 합격 한 후, 깨끗한 15 비이커와 쓰레기 비커를 교체합니다. </li><li> 한 번에 0.5 N HNO 3 2.5 ml의 5 mL를 추가합니다. 이 단계에서 아연이 수지로부터 용출된다. </li><li> HNO 3의 5 ml의 컬럼을 통과하면, 비커를 제거하고 건조 할 때까지 100 ℃의 핫 플레이트에 놓습니다. </li><li> 열 홀더에서 열을 제거; 수지 쓰레기 (각 샘플에 대한 새로운 수지를 사용). </li><li> 샘플이 건조되면, 작은 컬럼에 산 (100 μL)의 동일한 부피의 프로토콜을 반복 한 후 건조 할 때까지 핫 플레이트 위에 놓는다. 샘플은 질량 분석을위한 준비가되었습니다. </li></ol> 4. 대량 분석 측정 <ol><li> 아연 동위 원소 COMPO 분석멀티 콜렉터 - 유도 결합 플라즈마 질량 분석기 (MC-ICP-MS)에 sition. <ol><li> 표 1에 요약 시스템 파라미터를 사용한다. </li></ol></li><li> (62) 니켈, 구리 (63), (64) 아연, 구리 (65), (66) 아연, 아연 67, 68 아연의 질량 (M / Z)에서 수집하는 패러데이 컵을 놓습니다. </li><li> 동위 원소 분석을 위해 0.1 M HNO 3 500 PPB의 아연을 함유 한 용액을 준비합니다. </li><li> 100 μL / 분 테플론 분무기와 함께 분무 챔버를 사용하여 아연 500 ppb의 용액을 분석한다. 각 샘플에 대해, 각 주사의 통합 시간은 8.389 초 30 인 스캔 (30 사이클의 1 블록)를 측정한다. </li><li> 빈 솔루션 (샘플을 다시 용해하는 데 사용되는 0.1 M HNO 3 용액)에서의 피크 제로 강도를 뺀 배경을 수정합니다. </li><li> 제어 및 62 니켈 피크의 강도를 측정하여 정확한 수 (64) 니켈 동중 간섭.올바른, 64 니켈 / 62 니켈의 비율이 자연이라는 악기 질량 바이어스에서이 값을 (0.2548)을 가정 한 다음과 같은 질량 64 64 니켈을 제거 : 측정 (64) 아연 실제 = 64 아연 - 니켈 측정 (64) = 64 아연 - (64 니켈 / 62 니켈)는 62 X 자연은 니켈 측정. </li><li> JMC 리옹 아연 표준의 500 ppb의 표준 용액 (또는 IRMM-3702과 같은 다른 가능한 표준)으로 각각의 샘플을 다단계로 악기 대량 편견을 수정합니다. 이전과 샘플 1을 뺀 후에 측정 1,000 곱하여 두 표준 66 아연 / 64 아연 비율 평균하여 샘플의 66 아연 / 64 아연 비율 나눈 표준 브라케팅 수행 (수학 식 1 참조). JMC 리옹 아연 표준에 전형적인 외부 정밀도는 0.05 permil / AMU (2 표준 편차, 2 SD)입니다. </li></ol>

<ol><li>Marechal, C. N., Telouk, P., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+analysis+of+copper+and+zinc+isotopic+compositions+by+plasma-source+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Geology%22%5BJournal%5D)">Precise analysis of copper and zinc isotopic compositions by plasma-source mass spectrometry.</a> Chemical Geology. 156 (1), 251-273 (1999).</li>
<li>Marechal, C. N., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion-exchange+fractionation+of+copper+and+zinc+isotopes%5BTitle%5D)+AND+%22Geochim.+Cosmochim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Ion-exchange fractionation of copper and zinc isotopes.</a> Geochim. Cosmochim. Acta. 66 (9), 1499-1509 (2001).</li>
<li>Weiss, D. J., Mason, T. F. D., Zhao, F. J., Kirk, G. J. D., Coles, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+discrimination+of+zinc+in+higher+plants%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytologist%22%5BJournal%5D)">Isotopic discrimination of zinc in higher plants.</a> New Phytologist. 165 (3), 703-710 (2005).</li>
<li>Jouvin, D., Louvat, P., N, M. F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotopic+fractionation%3A+why+organic+matters%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Zinc isotopic fractionation: why organic matters.</a> Environ Sci Technol. 43 (15), 5747-5754 (2009).</li>
<li>Moynier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+fractionation+and+transport+mechanisms+of+Zn+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Geology%22%5BJournal%5D)">Isotopic fractionation and transport mechanisms of Zn in plants.</a> Chemical Geology. 267 (3-4), 125-130 (2009).</li>
<li>Moynier, F., Herzog, G., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+composition+of+zinc%2C+copper%2C+and+iron+in+lunar+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Geochim.+Cosmochim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Isotopic composition of zinc, copper, and iron in lunar samples.</a> Geochim. Cosmochim. Acta. 70 (24), 6103-6117 (2006).</li>
<li>Moynier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotopic+fractionation+of+zinc+in+tektites%5BTitle%5D)+AND+%22Earth+Planet.+Sci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Isotopic fractionation of zinc in tektites.</a> Earth Planet. Sci. Lett. 277 (3-4), 482-489 (2009).</li>
<li>Chen, H., Savage, P., Teng, F. Z., Helz, R., Moynier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotope+fractionation+during+magmatic+differentiation+and+the+isotopic+composition+of+the+bulk+Earth%5BTitle%5D)+AND+%22Earth+Planet.+Sci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Zinc isotope fractionation during magmatic differentiation and the isotopic composition of the bulk Earth.</a> Earth Planet. Sci. Lett. 369-370, 34-42 (2013).</li>
<li>Moeller, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calibration+of+the+new+certified+materials+ERM-AE633+and+ERM-AE6447+for+copper+and+IRMM+3702+for+zinc+isotope+amount+ratio+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Geostd.+Geoan.+Res%22%5BJournal%5D)">Calibration of the new certified materials ERM-AE633 and ERM-AE6447 for copper and IRMM 3702 for zinc isotope amount ratio determination.</a> Geostd. Geoan. Res. 36 (2), 177-199 (2012).</li>
<li>Bigeleisen, J., Mayer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calculation+of+equilibrium+constants+for+isotopic+exchange+reactions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Phys%22%5BJournal%5D)">Calculation of equilibrium constants for isotopic exchange reactions.</a> J. Chem. Phys. 15, 261-267 (1947).</li>
<li>Luck, J. M., Ben Othman, D., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zn+and+Cu+isotopic+variations+in+chondrites+and+iron+meteorites%3A+Early+solar+nebula+reservoirs+and+parent-body+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Geochim.+Cosmochim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Zn and Cu isotopic variations in chondrites and iron meteorites: Early solar nebula reservoirs and parent-body processes.</a> Geochim. Cosmochim. Acta. 69 (22), 5351-5363 (2005).</li>
<li>Moynier, F., Dauphas, N., Podosek, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Search+for+70Zn+Anomalies+in+Meteorites%5BTitle%5D)+AND+%22Astrophys.+J%22%5BJournal%5D)">A Search for 70Zn Anomalies in Meteorites.</a> Astrophys. J. 700 (2), L92-L95 (2009).</li>
<li>Paniello, R., Day, J., Moynier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zn+isotope+evidence+for+the+origin+of+the+Moon%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Zn isotope evidence for the origin of the Moon.</a> Nature. 490 (7420), 376-380 (2012).</li>
<li>Pichat, S., Douchet, C., Albarede, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotope+variations+in+deep-sea+carbonates+from+the+eastern+equatorial+Pacific+over+the+last+175+ka%5BTitle%5D)+AND+%22Earth+and+Planetary+Science+Letters%22%5BJournal%5D)">Zinc isotope variations in deep-sea carbonates from the eastern equatorial Pacific over the last 175 ka.</a> Earth and Planetary Science Letters. 210 (1-2), 167-178 (2003).</li>
<li>Moynier, F., Fujii, T., Shaw, A., Le Borgne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneous+of+natural+Zn+isotopes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">Heterogeneous of natural Zn isotopes in mice.</a> Metallomics. 5 (6), 693-699 (2013).</li>
<li>Balter, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bodily+variability+of+zinc+natural+isotope+abundance+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Com.+Mass.+Spec%22%5BJournal%5D)">Bodily variability of zinc natural isotope abundance in sheep.</a> Rapid Com. Mass. Spec. 24, 605-612 (2010).</li>
<li>Balter, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+Cu%2C+Fe%2C+and+Zn+isotopic+patterns+in+organs+and+body+fluids+of+mice+and+sheep%2C+with+emphasis+on+cellular+fractionation%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">Contrasting Cu, Fe, and Zn isotopic patterns in organs and body fluids of mice and sheep, with emphasis on cellular fractionation.</a> Metallomics. 5 (11), 1470-1482 (2010).</li>
<li>Urgast, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+isotope+ratio+imaging+of+rat+brain+thin+sections+from+stable+isotope+tracer+by+LA-MC-ICP-MS%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">Zinc isotope ratio imaging of rat brain thin sections from stable isotope tracer by LA-MC-ICP-MS.</a> Metallomics. 4, 1057-1063 (2012).</li>
<li>Marin-Carbonne, J., Rollion-Bard, C., Luais, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-situ+measurements+of+iron+isotopes+by+SIMS%3A+MC-ICP-MS+intercalibration+and+application+to+a+magnetite+crystal+from+the+Gunflint+chert%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Geol%22%5BJournal%5D)">In-situ measurements of iron isotopes by SIMS: MC-ICP-MS intercalibration and application to a magnetite crystal from the Gunflint chert.</a> Chem. Geol. 285 (1-4), 50-61 (2011).</li>
<li>Fietzke, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Boron+isotope+ratio+determination+in+carbonates+via+LA-MC-ICP-MS+using+soda-lime+glass+standards+as+reference+material%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anal.+Atom.+Spec%22%5BJournal%5D)">Boron isotope ratio determination in carbonates via LA-MC-ICP-MS using soda-lime glass standards as reference material.</a> J. Anal. Atom. Spec. 25, 1953-1957 (2010).</li>
</ol>

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측정의 재현성이 다른 분석 세션 동안 수행 동일한 샘플 복제의 분석을 통해 평가된다. 예 6에서, 우리는 같은 지상파 록 7 번 복제 된 우리가 표 2에보고 된 결과를 얻었다. 동위 원소 분별 (10)의 이론에서 예상하고 지금까지 어떤 태양계 물질의 측정 (예, 운석 11-13, 3-5, 심해 퇴적물 (14), 동물 15-17 식물)으로, 결과는 질량을 따라 종속 법 (도 1 참조). 68 아연 및 아연 64 질량 사이의 차이가 66 및 64 아연 Zn으로 차이가 두 배이므로 δ 68 아연은 약 66 배 아연 (도 1) δ이다. 이것은 우리의 측정은 그 데이...

높은 정밀도의 측정은 (더 이상 100 PPM / 원자 질량 단위) 아연 안정 동위 원소 조성은 다중 콜렉터 플라즈마 소스 질량 분석기의 개발로 약 15 년 감사 가능한 왔으며 보낸 주로 어스 적용된 행성 과학. 의료 분야에 응용 프로그램은 소설이며, 아연의 대사 (예를 들어, 알츠하이머 병)를 수정 질환의 바이오 마커로서 강력한 잠재력을 가지고있다. 이 논문은 여러가지 마우스의 장기에 고정밀 아연 천연 안정 동위 원소 비율을 측정하는 방법을보고한다. 같은 인간의 샘플에 적용될 수있다. 이 방법은 장기 원자의 나머지 아연의 화학적 정제 한 다음 질량 분광기상에서 동위 원소 비의 분석 용해 이루어져있다. 아연 동위 측정 품질은 화학 정제의 품질 (아연의 순도, 낮은 빈 샘플 콘텐츠에 의존샘플에 존재하는 아연의 양에 ared, 높은 화학적 과정의 수율)과 계기 바이어스 컨트롤. 최종 Zn으로 분획의 고순도가 매트릭스 효과를 동중 간섭 비 등압 간섭 모두를 제거하는데 필요하다. 동중 핵종 직접 간섭 (예를 들어, 64 니켈)을 만듭니다. 비 동중 간섭은 소위 &quot;매트릭스&quot;효과를 생성하고, 시료 1로 비교되는 순수한 아연 표준에 비해 이온화 상태를 변경하여 측정 분석의 정밀도를 변경. 저 빈 (&lt;10 NG)는 외부 아연에 의한 샘플의 어떤 오염이 없음을 나타냅니다 바이어스 측정 된 동위 원소 조성 것. 아연 동위 원소가 이온 교환 크로마토 그래피에 2 중 분획 수있는 바와 같이, 모든 아연 원자의 컬렉션에는 동위 원소 분획은 화학적 방법으로 전체 수율을 가져야한다는 것을 의미하는 발생하지 않는 것을 보장. 마지막으로, 질량 분석기 측정시 악기 동위 원소 분별의 보정은 &quot;표준 브라케팅&quot;방법을 통해 이루어집니다. 따라서, 주요 어려움 얻기 위해 정확한 측정은 다른 원자 또는 분자의 깨끗 전체 수율 화학 정제를 생산, (빈 즉, 낮음) 외부 오염을 제어하고, 질량 분석기에 쓸모 동위 원소 분류를 수정하고 있습니다. 본 논문에서는 마우스의 장기뿐만 아니라 질량 분광법 측정으로부터 아연을 분리하기 위해 분석 프로토콜을 설명한다. 추출은 음이온 교환 수지의 마이크로 컬럼 (0.5 μL, 0.1 μL)에 희석 산의 낮은 양 (HBr로 / HNO 3 용지)를 사용하여 수행된다. 그것은 전체 수율을 가지며, 측정 재현성을 외부 Zn으로 66 / 64 아연 비율에 더는 50ppm 이하를 갖는다. 메트의 또 다른 장점OD는 아주 빠르다는 것이다. 방법은 하나 따라서 잘 이러한 분석 방법이 개발되었다 지학에 비해 많은 수의 샘플을 분석 할 필요가있는 의료 과학하도록 구성된다.

<table><tbody><tr><td>다중 수집 유도 결합 플라즈마 질량 분광기</td><td>Thermo-Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>음이온 교환 수지 AG1 X8 200-400</td><td>Bio-Rad</td><td>140-1443-MSDS</td><td></td></tr><tr><td>테플론 비커</td><td>Savillex&nbsp;</td><td>200-015-12</td><td></td></tr><tr><td>수축 테프론으로 만든 자체 제작 테프론</td><td></td><td></td><td></td> 콜런</tr></tbody></table>

마우스 기관에 적용 높은 정밀도 아연 동위 원소 측정

High Precision Zinc Isotopic Measurements Applied to Mouse Organs

우리는 마우스 기관에서 높은 정밀도 아연 동위 원소 비율로 측정 할 수있는 방법을 제시한다. 아연은 자연스럽게 마우스 기관 사이에 분획있다 (5) 안정 동위 원소 (64 아연, 아연 66, 67 아연, 68 아연 및 아연 70)로 구성되어있다. 우리는 먼저 아연 원자를 확보하기 위해 다른 기관을 용해하는 방법을 보여줍니다; 이 단계는 HNO 3, H 2 O (2)의 혼합물에 의해 실현된다. 우리는 그 다음 묽은의 HBr / HNO 3 매체에 음이온 교환 크로마토 동중 간섭 (예, 니켈)로부터 특히 다른 모든 요소에서 아연 원자를 정제. 이러한 처음 두 단계는 고순도 화학 물질을 사용하여 깨끗한 실험실에서 수행된다. 마지막으로, 동위 원소 비율은 낮은 해상도, 다중 콜렉터 유도 결합 플라스마 질량 분석계를 사용하여 측정된다. 샘플 correc 인 스프레이 챔버 및 질량 분광기에 의해 유도 된 분획을 사용하여 동위 원소 주입표준 (표준 브라켓 기술)의 비율로 샘플의 비율을 비교하여 테드. 이것은 전체 전형적인 절차는 50ppm (2 SD) 재현성 동위 원소 비를 생성한다.

1.5 N의 HBr에서 메인 아연 종 (ZnBr3-) 음이온 교환 수지와 함께 강한 착물 형성은 대부분의 다른 요소는 수지와 상호 작용하지 않는 상태. 아연은, 희석 HNO 3 매질을 변화 -6,7- 수지로부터 방출되는 Zn을 Zn과의 분화 ​​2+ 변경함으로써 회수된다. 동위 원소 비율은 전형적으로 표준 편차에 대하여 1,000 분율로 표현된다 : <img alt="식 (1)" fo:content-width="2.5in" src="/files/ftp_upload/52479/52479eq1.jpg" /> X = (66) 또는 (68)과 함께 사용 기준 물질은 Zn으로 &quot;리&quot;표준 JMC 3-0749 L 1이다. &quo...

쥐 장기에서 고정밀 아연 동위원소 비율을 측정하는 기술을 소개합니다.

We present a procedure to measure with high precision zinc isotope ratios in mouse organs. Zinc is composed of 5 stable isotopes (64Zn, 66Zn, 67Zn, 68Zn ...

이 절차의 전반적인 목표는 마우스 장기 내의 아연 동위원소 비율을 높은 정밀도로 측정하는 것입니다. 이를 위해 먼저 서로 다른 장기들을 산에 용해하여 모든 원자를 용액 상태로 유리시킨 후, 오차 제거 용액 처리를 거쳐 건조된 물질을 브롬화수소에 재현탁시킵니다. 그 다음, 컨디셔닝된 중력 컬럼을 이용한 이온 교환 크로마토그래피를 통해 시료의 다른 모든 원소로부터 아연을 정제합니다. 마지막으로 질산을 사용하여 수지로부터 아연을 용리합니다.마지막 단계는 다검출 유도결합 플라즈마 질량분석계를 사용하여 아연 동위원소 비율을 측정하는 것입니다. 궁극적으로, 동위원소 조성은 서로 다른 장기 내 아연 동위원소의 평형 분포 측정을 통해 신체의 아연 균형을 변화시키는 질병을 진단하는 데 사용됩니다. 따라서 이 방법은 마우스 장기 간 아연의 자연적 분포 및 운송 메커니즘에 대한 통찰력을 제공하기 위해 개발되었습니다.이 방법은 모든 동물에 적용할 수 있으며, 궁극적으로는 알츠하이머병과 같이 장기 간의 아연 균형을 변화시키는 질병을 진단하는 데 사용할 수 있습니다. 텍스트 프로토콜에 상세히 설명된 대로 재료와 시료를 준비하여 이 절차를 시작하십시오. 흄 후드 내에서 화학적 정제 작업을 수행하여 30% 과산화수소 약 1 mL와 농축 질산 약 1 mL의 혼합물을 만드십시오. 분석 대상이 되는 전체 장기를 15 mL 테플론 비커에 넣으십시오.그 다음 혼합물을 비커에 넣습니다. 유기물의 산화 반응과 이산화탄소 방출로 인해 액체가 튀는 것을 방지하기 위해 몇 분 동안 비커를 열어둡니다. 마지막으로, 용액이 완전히 투명해질 때까지 또는 약 2시간 동안 비커를 100 °C 정도의 핫플레이트 위에 둡니다.다음으로, 비커 뚜껑을 열고 핫플레이트에서 약 100 °C로 용액을 건조시킵니다. 샘플이 건조되면, 샘플에 1 mL의 hydrogen bromide를 첨가합니다. 비커를 닫고 100 °C의 핫플레이트에서 몇 시간 동안 용해시킵니다.그동안 500 µL 컬럼을 준비합니다. Ag one x 8 200 400 mesh 수지 500 µL를 컬럼에 넣고 하단에 폐액 비커가 놓인 컬럼 랙에 거치합니다. 18.2 MΩ·cm 초순수 5 mL와 0.5 N 질산 5 mL를 교대로 두 번 사용하여 수지를 세척한 후, 물 5 mL로 세척합니다.마지막으로 5 mL의 hydrogen bromide로 레진을 컨디셔닝합니다. 다음으로, 핫플레이트에서 비커를 꺼내 초음파 세척기에 넣습니다. 약 30분 동안 비커가 상온으로 식도록 둡니다. 비커가 식고 레진 세척이 완료되면 비커를 엽니다.시린지에 팁 어댑터를 장착하고 피펫 팁을 끼웁니다. 그런 다음 샘플 1 mL를 피펫으로 취해, 레진이 흔들리지 않도록 매우 천천히 레진 위로 로딩합니다. 모든 액체가 컬럼을 통과하면, 브롬화수소 5 mL를 첨가합니다.브롬화 수소가 컬럼을 통과하게 한 다음, 폐액 비커를 깨끗한 15 milliliter 비커로 교체합니다. 그다음 질산을 2.5 milliliters씩 나누어 총 5 milliliters를 첨가합니다. 이 단계에서 아연이 수지로부터 용출됩니다.질산이 컬럼을 통과하면, 비커를 꺼내 100 °C의 핫플레이트 위에 올려 건조시킵니다. 컬럼 홀더에서 컬럼을 분리하고 수지를 폐기합니다. 시료가 건조되면, 동일한 부피의 산을 사용하여 더 작은 100 µL 컬럼으로 프로토콜을 반복한 후, 건조될 때까지 핫플레이트 위에 둡니다.이제 시료를 질량 분석에 사용할 준비가 되었습니다. 다검출기 유도결합 플라즈마 질량분석계(multi collector inductively coupled plasma mass spectrometer)를 사용하여 아연 동위원소 조성을 분석하십시오. 텍스트 프로토콜에 요약된 매개변수를 사용하여 기기를 설정하십시오.Faraday 컵을 배치하여 nickel 62, copper 63, zinc 64, copper 65, zinc 66, zinc 67 및 zinc 68의 질량 대 전하 비를 수집합니다. 다음으로, 100 µL/min Teflon nebulizer와 결합된 spray chamber를 사용하여 0.1 M 질산에 녹인 500 ppb zinc 용액을 분석합니다. 각 샘플에 대해 각 스캔의 적분 시간이 8.389 seconds인 30회의 스캔을 측정합니다.공시료 대조군(blank solution control)의 피크 상 제로 강도를 빼서 배경값을 보정하고, 발생 가능한 니켈 64 동중원소(ISO baric) 간섭을 보정합니다. 니켈 62 피크의 강도를 측정하여 니켈 64와 니켈 62의 비율이 천연 비율이라고 가정합니다. 이 값을 기기 질량 편향(instrumental mass bias)에 따라 보정한 다음, 텍스트 프로토콜에 기술된 대로 질량 64에서의 니켈 64를 제거합니다. 각 샘플의 전후에 500 ppb 농도의 JMC Leon 아연 표준 용액을 측정하는 브래케팅(bracketing)법을 통해 기기 질량 편향을 보정합니다.다음은 Delta Zinc 68 대 Delta Zinc 66의 3-동위원소 도표로 나타낸 이 방법의 전형적인 결과입니다. 서로 다른 장기들의 경우, 모든 장기가 기울기 2의 직선상에 위치합니다. 이는 동위원소 분별이 질량 의존적이며, 생쥐의 장기들이 동위원소적으로 구별됨을 보여줍니다.흥미롭게도, 적혈구와 뼈는 혈청, 뇌 및 간과 비교했을 때 delta Zinc 66가 풍부합니다. 이러한 분획화는 서로 다른 장기의 아연 결합 환경 간의 동위원소 평형 분포로 잘 설명됩니다. 비디오를 시청하고 나면 생쥐 장기의 고정밀 아연 동위원소 측정 방법을 충분히 이해하게 될 것입니다.주요 어려움은 외부 아연으로 인해 샘플이 오염되는 것을 방지하는 것이라는 점을 잊지 마십시오. 따라서 청결한 실험실에서 작업하고 고순도의 화학 시약을 사용하는 것이 필수적입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Chemistry

화학

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