Name: Chironomidae (파리목)의 사용 표면 부동 물 기관에 대한 신속한 생물학적 평가 프로토콜로 번데기 Exuviae을 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 27 s
Description: 학습하세요 Chironomidae 표면 부동 번데기 표본 수집 및 처리 기법으로 수질 평가를 수행하는 방법을. 이 효율적인 생물학적 모니터링 프로토콜은 다양한 수생 환경에서 경제적으로 적용 가능합니다.

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구성 및이 문서를 게시하기위한 자금 조달은 미네소타 대학에서 곤충학의학과 Chironomidae 연구 그룹 (LC Ferrington, 주니어, PI)에 다수의 보조금과 계약을 통해 제공되었습니다. 감사합니다 나단 로버츠에 수치로 사용 현장 사진을 공유 비디오에서이 원고와 관련.

필드 컬렉션 용품 1. 준비 <ol><li> 연구 설계에 기초하여 수집하고, 각 샘플에 대한 하나의 샘플 병 (예를 들어, 60 ml)에 취득한다 SFPE 샘플들의 수를 결정한다. </li><li> 각 샘플 항아리 두 개의 날짜와 지역 레이블을 준비합니다. 내부에 하나 배치하고 병의 외부로의 다른 부착. 샘플을 수집, 국가, 주, 카운티, 도시, 물, 몸, GPS 좌표, 날짜, 사람 (들)의 이름 : 각 날짜와 지역 레이블이 다음과 같은 정보가 포함되어 있는지 확인합니다. </li><li> 다른 특정 재료 및 장비 (특정 재료 / 장비의 표 참조)를 수집합니다. </li></ol> 2. 필드 컬렉션 <ol><li> 한 손으로 애벌레 트레이 및 다른 체를 잡으십시오. SFPE 축적 물에 애벌레 트레이를 찍어 (예를 들면, 거품 축적, 그루터기, 긴급 식물, 다시 파편, 소용돌이, 은행 가장자리를 따라) (그림 2A)는 와트를 허용어, exuviae, 이물질은 애벌레 트레이를 입력하고 체를 통해이 물질을 부어합니다. lotic 시스템의 샘플링, 샘플 범위의 하류 끝에서 시작하고 (그림 2B)를 상류 작업하는 경우. lentic 시스템의 샘플링하면, 바람 부는쪽으로 해안선에 시작합니다. <ol><li> 반복 각 미리 정의 된 샘플 범위 내에서 10 분 동안 2.1 단계 (또는 달리 특정 샘플링 정권에 대해 정의) (스트림에서 수집 한 샘플에 대한 일반적으로 100~200m,하지만 수중 모니터링 사이트의 전체 지역에 따라 다름); 적절한 SFPE 축적 영역 사이 이동합니다. </li></ol></li><li> 샘플 사이트에서 물이 가득 물총 병을 사용하여 체의 한 영역에서 이물질을 집중 조심스럽게 집게의 도움과 물총 병에서 에탄올의 흐름과 함께 SFPE 샘플에 사전 표지 샘플 항아리를 전송합니다. 에탄올 샘플 항아리를 채우십시오. </li><li> 반복 2.1 모든 시료 2.2 단계를. </li></ol> 3. 샘플 따기 참고 :이 프로토콜의 나머지 300 SFPE의 표본에 관한 다른 표본 크기에 맞게 수정해야 할 수도 있습니다. 연구 별 목표와 자원을 충족 SFPE 방법을 조정하는 보우 차드와 Ferrington의 9 서브 샘플링과 샘플링 주파수 지침을 참조하십시오. <ol><li> 각 SFPE 샘플에 대한 1-DRAM 용 유리 병을 할당; 각각의 유리 병 내부에 배치하고 에탄올로 가득 찬 유리 병을 ¾ 채우기 위해 날짜와 장소 레이블을 준비합니다. </li><li> 해당 샘플 항아리 뚜껑을 제거하고 부착 번데기 exuviae 확인합니다. 조심스럽게 에탄올로 가득 물총 병을 사용하여 페트리 접시에 뚜껑 내용을 씻어. 찾아 페트리 접시에 라벨 오프 내용을 씻어 부드럽게 집게를 사용하여 샘​​플 항아리의 내부에서 라벨을 제거하고. 따로 라벨을 설정합니다. </li><li> 더 SFPE 샘플 항아리에 남아 있도록 에탄올로 세척, 애벌레 트레이에 샘플 항아리의 내용을 전송합니다. 번데기 exuviae, RESI의 일부를 이동페트리 접시에 트레이에서 때문에, 에탄올. 샘플이 에탄올에 포함되어 있는지 확인합니다. </li><li> 스테레오 현미경 페트리 접시를 놓습니다. 체계적으로 번데기 exuviae의 페트리 접시의 내용을 검사합니다. 유리 병에 핀셋과 장소를 사용하여 요리의 모든 번데기 exuviae을 선택합니다. 부러 표본을 선택하지 마십시오, 건조, 이상 식별 문제를 방지하기 위해 압축 된 (즉, 두흉부와 복부의 절반 이상이 없습니다). 주 : 종 식별은 종종 어떤 경우에는, 속 레벨 식별 부분 표본으로 가능하다하더라도, 전체 시료가 존재하는 것을 필요로한다. <ol><li> 소용돌이 요리와 초기에 감지되지 않았을 수 있습니다 접시의 측면에 붙어있을 수있는 어떤 포함한 추가 번데기 exuviae뿐만 아니라, 어떤 작은 반투명 표본 검사. 두 개의 연속 스캔이 추가 번데기 exuviae을 공개하지 않을 때까지 반복합니다. </li></ol></li><li> 단계를 반복 3.33.4 전부 또는 300 번데기 exuviae가 포착 될 때까지. 300 번데기 exuviae이 포착되었을 때, 애벌레 트레이에 페트리 접시에서 잔류 물을 반환하고 에탄올로 페트리 접시를 씻어. 그런 다음, 빈 샘플 병에 애벌레 트레이에서 잔류 물을 전송 날짜와 지역 레이블을 추가하고, 항아리에 뚜껑을 넣어. 보관 또는 프로젝트 별 프로토콜에 따라 잔류 폐기하십시오. </li></ol> 정렬 4. 샘플 <ol><li> 모든 단지 표본을 커버하기에 충분한 에탄올로 가득 페트리 접시에 표시된 유리 병에서 번데기 exuviae 고른 따르십시오. </li><li> 스테레오 현미경, 분리 된 별개의 형태 학적 그룹 (즉, morphotaxa)으로 표본과는 별도로 표시 튜브가 에탄올로 일 3/4 완전 충전에 각 morphotaxon 놓습니다. <ol><li> chironomid의 morphotaxa 별도의 외부 형태 학적 특성을 활용합니다. 예를 들어, 두흉부에서, 존재, 크기, 형상의 차이를 이용하고,두부 결핵, 정면 사마귀, 정면의 세타, 흉부 뿔의 착색. 복부에서 morphotaxa 분리 (그림 4A)의 항문 로브뿐만 아니라, 복부 세그먼트의 등뼈, hookrows, 샤 그린, 세타, 그리고 박차를 사용합니다. Ferrington를 참조, 등. 5, Sæther 26 PINDER 추가 설명 및 형태 학적 특성의 수치에 대한 라이스 (27). </li><li> 표본은 건조하기 시작하면 추가로 에탄올을 사용합니다. </li></ol></li></ol> 설치 5. 슬라이드 <ol><li> 95 % 에탄올로 각각 morphotaxon 위해 멀티 웰 플레이트의 한 웰을 채운다. <ol><li> 여러 표현을 배치 (예를 들어, 전체의 25 %) 각 morphotaxon의 슬라이드 플레이트의 각 웰에 장착합니다. 표본이 충분히 탈수 적어도 10 분 동안 잘 앉을 수 있습니다. </li></ol></li><li> 해당 사이트, 수집 및 식별 많은 informati 레이블 슬라이드(그림 3)에. </li><li> 스테레오 현미경에 놓고 슬라이드. 참고 : 단계로 녹화 슬라이드 템플릿 일관된 배치하는 데 유용합니다. </li><li> 슬라이드에 Euparal 한 방울을 배치; 그것을 커버 슬립의 크기에 근사하도록 Euparal 확산. Euparal 작업시 적절한 환기를 사용합니다. 참고 : Euparal 작업시 적절한 환기를 사용합니다. </li><li> 집게를 사용 Euparal에 첫 번째 morphotaxon의 대표를 포함시킵니다. 참고 : 실험실 Euparal에서 그것을 포함하기 전에 잎사귀에 부드럽게 표본을 살짝 집게를 사용하여, 표본에서 초과 에탄올을 무효로합니다. </li><li> 뾰족한 집게 및 / 또는 해부 프로브 (그림 4A)를 사용하여 복부에서 두흉부를 분리합니다. <ol><li> ecdysial 봉합 (그림 4B)을 따라 두흉부를 분할하고 봉합 가장자리가 반대편 (그림 4C)에 있도록 두흉부를 엽니 다. </li><li> C의 방향ephalothorax이되도록 복부 측면 (그림 4C)를 직면하고있다. </li><li> 복부 지느러미 측면을 배치; 즉시 두흉부 (그림 4C) 아래에 배치합니다. </li></ol></li><li> 시편에 커버 슬립을 놓습니다. 하나의 에지가 천천히 아래 슬라이드를 감동과 함께, 각도로 커버 슬립을 잡고 공기 방울 형성​​을 줄이기 위해 커버 슬립을 놓습니다. 가볍게 커버 슬립에 눌러 시편을 평평하게합니다. </li><li> 반복 모든 탈수 표본 5.7을 통해 5.3 단계를 반복합니다. </li></ol> 6. 속 식별 <ol><li> 복합 현미경을 사용하여 슬라이드에 장착 된 표본의 속을 결정합니다. 등 Wiederholm 28 Ferrington에 키와 진단을 사용하여 속에 표본을 확인합니다. 5. 필요한 경우 등, Ferrington를 사용 가족 - 레벨 ID를 확인한다. (5). 참고 : Wiederholm 28 Ferrington 이후 다수의 일반적인 설명 및 개정이 계속있다,등. (5)는, 따라서, 이러한 키 및 진단은 불완전 일차 문헌으로 보충 될 필요가있다. </li></ol>

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<li>Ekrem, T., Willassen, E., Stur, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Comprehensive+DNA+Sequence+Library+is+Essential+for+Identification+with+DNA+Barcodes%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Phylogenetics+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">A Comprehensive DNA Sequence Library is Essential for Identification with DNA Barcodes.</a> Molecular Phylogenetics and Evolution. 43, 530-542 (2007).</li>
</ol>

저자는 그들이 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

성공적인 SFPE 샘플 수집, 슬라이드 장착, 따기 분류 및 식별을위한 가장 중요한 단계는 다음과 같습니다 (1) 필드 컬렉션 (그림 2A) 동안 연구 지역 내에서 높은 SFPE 축적의 영역을 위치; (2)을 천천히 시료 채취시 모든 SFPE의 검출을위한 배양 접시의 내용을 주사; (3) (그림 4A)를 장착 슬라이드 동안 복부에서 두흉부를 해부하는 데 필요한 손재주를 개발; (4) 제대로 속에 식별 할 수 chironomid의 번데기의 exuviae의 키 형태의 문자를 인식. 높은 SFPE 축적 (그림 2A)의 영역을 검출하는 것은 성공적인 SFPE 샘플 컬렉션에서 가장 중요한 단계입니다. 번데기 exuviae 수생 식물 또는 보트 램프와 같은 인간의 구조에 걸려 있으며, 파도가 해안 &quot;을 windrows&quot;(30)에 자료를 부동 집중할 수 있습니다...

환경 상태를 평가하는 생물체를 사용하여 생물학적 모니터링 프로그램은 종종 수질을 평가 또는 생태계를 복원 프로그램의 성공을 모니터링하는 데 사용된다. 저서 성 대형 무척추 동물 군집을 사용하여 빠른 생물학적 평가 프로토콜 (RBP)은 1989 1 일부터 국가 수자원 기관 사이에 인기가있다. 예를 들면 딥-NET, Surber 샘플러, 헤스 샘플러 2와 RBPs에 대한 저서 성 대형 무척추 동물을 샘플링의 전통적인 방법, 시간 - 일 수있다 고가의 소비, 단지 특정 microhabitat 3에서 군집을 측정 할 수있다. 특정 수역에 대한 생물학적 정보를 생성하는 효율적인 대안 RBP는 Chironomidae 표면 부동 번데기 exuviae (SFPE) 3의 컬렉션을 포함한다. Chironomidae : 일반적으로 비 무는 작은 벌레로 알려진 (곤충강 파리목)는, 일반적으로 성인으로 부상하기 전에 수생 환경에서 발생 holometabolous 파리 있습니다<html> 60, 물 표면에. chironomid 제품군은 전 세계적으로 기술 된 약 5,000 종, 종 풍부하다; 그러나, 많은 20,000 종 4 존재하는 것으로 추정된다. Chironomids 때문에 높은 다양성과 변수 오염 허용 레벨 5의 많은 수중 생태계에 물과 서식지의 질을 문서화에 유용하다. 또한, 그들은 일반적으로 사회 5, 6에서 50 % 종 이상을 차지 자주 수생 시스템에서 가장 풍부하고 광범위한 저서 성 대형 무척추 동물이다. 지상파 성인의 출현에 따라, 번데기 exuviae (번데기 피부 캐스트) 물 표면에 떠 남아있다 (그림 1). 번데기 exuviae 바람 또는 물 전류의 작용을 통해 함께 은행이나 장애물 뒤에 축적 쉽고 빠르게 이전 24-48 시간 동안 7 등장 chironomid 종의 광범위한 샘플을 제공하기 위해 수집 될 수있다. 다른 사람이 5 매우 민감한 반면 ntent &quot;&gt; 상대 풍부하고 수집 된 SFPE의 분류 학적 조성물은 어떤 종은 허용 매우 오염되어 있음을 고려하여, 수질을 반영 SFPE 방법을 포함하여 기존의 애벌레 chironomid 샘플링 기술에 비해 많은 장점이 있습니다. (1) 최소 (2) 시료는 생물 수집에 초점을 맞출 것이 아니라 살아 있지 않은 피부, 그래서 지역 사회 역학의 궤도는 영향을받지 않는다; 속으로 (3) 식별 및있는 경우, 서식지 교란 샘플링 영역에서 발생 종종 종은, 상대적으로 쉽게 해당 키 및 설명 (3) 주어진 (4) 수집, 처리 및 샘플을 식별하는 기존의 샘플링 방법 3,8,9에 비해 효율적이고 경제적이다 (5) 축적 exuviae 유래 한 분류군을 나타냅니다 microhabitats (10)의 넓은 범위는 (6)에있어서 스트림 및 하천 하구, 락 비롯한 거의 모든 수중 환경에 적용 할 수있다ES, 연못, 바위 웅덩이, 습지, 그들은 모두 미성숙 단계를 완료하고 성공적으로 성인 (11)으로 부상 한 개인을 대표하기 때문에과 (7) SFPE 어쩌면 생태계 건강의 더 민감한 지표. SFPE 방법은 chironomid 지역 사회에 대한 정보를 수집하기위한 새로운 접근 방식이 아니다. SFPE의 사용은 먼저 1900 년대 초 Thienemann (12)에 의해 제안되었다. 연구의 다양한 (예 : 7,16-19) 분류 학적 조사 (예를 들어, 13 ~ 15), 생물 다양성 및 생태 학적 연구에 SFPE를 사용하고, 한 생물학적 평가 (예를 들어, 20 ~ 22). 또한, 일부 연구들은 표본 설계, 샘플 크기 및 종 또는 장군 (예, 8,9,23)의 다양한 검출 레벨을 달성하기 위해 필요한 샘플 이벤트 수의 다양한 측면을 다루었 다. 이러한 연구들은 종 또는 속의 비교적 높은 비율이 적당한 effor 검출 할 수 있음을 나타내t 또는 비용은 시료 처리와 연관된. 예를 들어, 앤더슨과 Ferrington 8은 100 카운트 표본을 기준으로 1/3 번째 적은 시간이 샘플 그물을 찍어 비교 SFPE 샘플을 선택하는 데 필요한 것을 결정했다. 또 다른 연구는 3-4 SFPE 샘플 분류 모든 DIP-NET 샘플 및 종 풍부가 3 증가로 SFPE 샘플 검출 종에서 딥-NET 샘플보다 더 효율적이라고 식별 할 수 있다고 결정했다. SFPE 샘플은 97.8 % (3) 효율적인 동안 예를 들어, 종 사이트에서 15 ~ 16 종의 값을 풍요 로움 평균 딥-NET 효율은 45.7 %이었다. 중요한 SFPE 방법은 유럽 연합 (EU) (24)에 규격화 된 생태 평가 북아메리카 25 (chironomid의 번데기의 exuviae 기법 (CPET)라고도 함), 그러나 본 방법은 상세하게 설명되지 않았다. SFPE 방법 중 하나는 응용 프로그램 등 Ferrington에 의해 설명되었다. <s&gt; 3을; 그러나, 연구의 주요 초점은 SFPE 방법의 효율성, 효과 및 경제를 평가하는 것이다. 이 연구의 목적은 샘플 수집, 처리 실험, 슬라이드 마운팅 및 속 식별 포함한 상세 SFPE 방법의 모든 단계를 설명하기위한 것이다. 대상은 자신의 연구로 기존의 수질 감시 활동을 확대에 관심있는 대학원생, 연구자 및 전문가를 포함한다.

<table><tbody><tr><td>에탄올</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>S25309B&nbsp;</td><td>70-95%</td></tr><tr><td>플라스틱 세척 병</td><td>Fisher Scientific</td><td>0340923B</td><td></td></tr><tr><td>샘플 항아리</td><td>Fisher Scientific</td><td>0333510B</td><td>유리 또는 플라스틱, 60-mL 권장</td></tr><tr><td>테스트 체</td><td>Advantech</td><td>120SS12F</td><td>125-micron 메쉬 크기</td></tr><tr><td>유충 트레이</td><td>BioQuip</td><td>5524</td><td>흰색</td></tr><tr><td>스테레오 현미경</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>유리 쉘 바이알</td><td>Fisher Scientific</td><td>0333926B</td><td>1-드램 크기</td></tr><tr><td>플라스틱 드로퍼</td><td>Thermo Scientific</td><td>1371110</td><td>30 - 35 방울/mL</td></tr><tr><td>미세 집게</td><td>BioQuip</td><td>4524</td><td>#5</td></tr><tr><td>페트리 접시</td><td>캐롤라이나</td><td>741158</td><td>유리 또는 플라스틱</td></tr><tr><td>멀티 웰 플레이트</td><td>Thermo Scientific</td><td>144530</td><td>유리 또는 플라스틱</td></tr><tr><td>유리 마이크로슬라이드</td><td>Thermo 과학</td><td>3010002</td><td>3 x 1 in.</td></tr><tr><td>유리 커버 슬립</td><td>Thermo Scientific</td><td>12-519-21G</td><td>원형 또는 사각형</td></tr><tr><td>Euparal 장착 매체&nbsp;</td><td>BioQuip</td><td>6372B</td><td></td></tr><tr><td>Pigma 펜</td><td>BioQuip</td><td>1154F</td><td>블랙</td></tr><tr><td>프로브</td><td>BioQuip</td><td>4751</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimberly-Clark Professional &trade;</td><td>34120</td><td></td></tr></tbody></table>

chironomidae (파리목)의 사용 표면 부동 물 기관에 대한 신속한 생물학적 평가 프로토콜로 번데기 exuviae을

Use of Chironomidae (Diptera) Surface-Floating Pupal Exuviae as a Rapid Bioassessment Protocol for Water Bodies

저서 대형 무척추 동물 군집을 사용하여 신속한 생물학적 평가 프로토콜이 성공적 수질에 인간의 영향을 평가하기 위해 사용되어왔다. 불행하게도, 그러한 딥 그물 같은 전통적인 저서 유생 샘플링 방법은, 시간 소모적이고 고가 일 수있다. 다른 프로토콜은 Chironomidae 표면 부동 번데기의 exuviae (SFPE)의 컬렉션을 포함한다. Chironomidae은 미성숙 단​​계 일반적으로 수생 서식지에서 발생 파리 (파리목)의 종 풍부한 제품군입니다. 성인 chironomids는, 물에서 나오는 물 표면에 떠있는, 자신의 번데기 스킨, 또는 exuviae를 떠나. Exuviae 종종 제방을 따라하거나이 chironomid 다양성과 풍요 로움을 평가하기 위해 수집 할 수있는 바람이나 물 전류의 작용에 의해 장애물 뒤에 축적된다. 어떤 종은 다른 사람보다 오염에 더 관대하기 때문에 Chironomids는 중요한 생물학적 지표로 사용할 수 있습니다. 따라서, 수집 된 SFPE의 상대 풍부 종 구성 반영수질의 변화. 여기서, 필드의 수집, 처리 실험, 슬라이드 마운팅 및 chironomid SFPE의 식별과 관련된 방법이 상세히 설명된다. SFPE 방법의 장점은 샘플링 영역에서 최소한의 방해, 효율적이고 경제적 인 시료 채취 및 실험실 처리, 식별의 용이성, 적용 거의 모든 수중 환경 및 생태계 스트레스를 잠재적으로 더 민감한 측정을 포함한다. 제한들이 성인 남성과 연관되지 않은 경우에 종 exuviae 번데기를 식별 유생 microhabitat 사용과 무능력을 판별 할 수없는 점 등이있다.

도 1은 chironomid 기간을 나타낸다 미성숙 단​​계 (계란, 애벌레, 번데기는) 일반적으로 발생하는, 또는 밀접하게 수생 환경과 관련된. 애벌레 삶의 단계가 완료되면, 유충은 튜브 같은 피난처를 구성하고 주변의 기판에 비단 분비물과 붙어서 번데기가 발생합니다. 현상 성인 성숙되면 번데기 자체를 해제하고 성인 번데기 exuviae으로부터 나올 수 물의 표면에 아무것도. exuviae 공기로 채우고 표피의 외부 왁시 층 덕분에, 그 세균 왁스층을 분해하기 시작 전까지 물 표면에 떠있는 상태로 남아있다. 그림 2a에 도시 등의 수변 식물이나 쓰러진 나무가 물 표면과 접촉을 할 경우 같은 축적의 영역으로 exuviae 번데기 부동 물의 흐름이나 바람 농축. 애벌레 트레이 자체는 &amp; 번데기를 수집하는 데 사용할 수 있습니다# 160; 이러한 천연 축적 영역에서,도 2b에 도시 된...

저서 거대 무척추 동물을 사용하는 신속한 생물 평가 프로토콜은 종종 수질을 모니터링하고 평가하는 데 사용됩니다. 효율적인 프로토콜에는 Chironomidae surface-floating pupal exuviae(SFPE)의 수집이 포함됩니다. 여기에서는 현장 수집, 실험실 처리, 슬라이드 장착 및 Chironomidae SFPE의 식별 기술에 대해 설명합니다.

Chironomidae (파리목)의 사용 표면 부동 물 기관에 대한 신속한 생물학적 평가 프로토콜로 번데기 Exuviae을

Rapid bioassessment protocols using benthic macroinvertebrate assemblages have been successfully used to assess human impacts on water quality. ...

이 절차의 전반적인 목표는 수질 평가를 위해 Chironomidae 유충과 수면 부유성 유충 샘플을 수집하고 처리하는 기술을 설명하는 것입니다. 이는 먼저 수생 환경에서 Chironomidae 유충의 현장 샘플을 수집함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계에서는 각 현장 샘플에서 300마리의 표본을 부분 샘플로 채취하고, 이 샘플들을 서로 다른 형태학적 그룹으로 분류합니다.마지막 단계에서, 각 그룹의 대표 표본 여러 개를 유리 현미경 슬라이드에 마운팅합니다. 최종적으로, 수질 상태를 평가하기 위해 표본의 속 또는 종을 식별합니다. 전통적인 저서성 대형 무척추동물 채집과 같은 기존 방법과 비교하여 이 기술의 주요 장점은 시료의 수집 및 처리 과정이 효율적이고 경제적이며, 거의 모든 수생 환경에 적용 가능하다는 점입니다.이 기술을 사용하면 생물학적 모니터링 연구에 귀중한 정보를 얻을 수 있으며, 교란, 오염 사건 또는 기후 변화로 인해 시간이 경과함에 따라 지역이 어떻게 변화하는지에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다. 본 내용은 이 기술을 하천 서식지에 적용하는 방법에 중점을 두고 있지만, 강, 호수, 연못, 하구 또는 조수 웅덩이와 같은 다른 수생 시스템에도 쉽게 적용할 수 있습니다. 현장에 나가기 전, 수집할 각 샘플 병의 내부에 날짜 및 지역 라벨 하나를, 외부에 라벨 하나를 부착하십시오.그런 다음 각 샘플에 대해 한 손에는 유충 트레이를, 다른 손에는 체를 들고, 유충 분비물과 잔해물이 유충 트레이나 체를 통한 샘플 내로 유입될 때 분비물이 축적되는 곳의 물에 유충 트레이를 담급니다. 10분 동안 수집한 후, 샘플에서 채취한 물로 채운 병을 사용하여 체의 한 영역으로 모든 잔해물을 모읍니다. 이어서 핀셋을 사용하여 에탄올 흐름 속에서 유충 분비물을 미리 라벨이 부착된 적절한 샘플 병으로 조심스럽게 옮기고, 병을 에탄올로 채웁니다.시료 채취를 시작하려면, 각 동공 삼출물 시료에 대해 날짜와 지역 라벨을 부착한 1 Dr Vial을 준비하고 바이알의 4분의 3 정도를 에탄올로 채웁니다. 그다음, 해당 시료 병의 뚜껑을 열고 뚜껑에 붙어 있는 동공 삼출물이 있는지 확인합니다. 에탄올이 담긴 분무병을 사용하여 뚜껑의 내용물을 페트리 접시로 조심스럽게 헹궈 냅니다.그런 다음 샘플 병 내부에서 라벨을 제거합니다. 라벨에 묻은 내용물을 페트리 접시에 조심스럽게 헹구어 내고 라벨은 따로 둡니다. 이어서 샘플 병의 내용물을 흰색 유충 트레이로 옮기고, 병 내부에 동공 삼출물이 남아 있지 않도록 에탄올로 헹굽니다.유충 트레이에서 동공 삼출물 잔해와 에탄올의 적당량을 페트리 접시로 옮깁니다. 샘플이 에탄올로 충분히 덮였는지 확인하십시오. 그런 다음 페트리 접시를 실체 현미경 아래에 두고 접시 전체를 체계적으로 스캔하여 유기체를 찾습니다.다음으로, 포셉을 사용하여 디쉬에 있는 동공 삼출물을 해당 바이알로 옮깁니다. 추후 식별 문제가 발생하지 않도록 파손되었거나 건조된 동공 삼출물은 가급적 피해서 채취하십시오. 눈에 보이는 모든 동공 삼출물을 옮긴 후, 디쉬의 벽면에 붙어 있을 수 있는 표본을 포함하여 추가 표본이 있는지 확인하기 위해 디쉬를 세 번 더 흔들어 스캔합니다.300마리의 pupae exe가 선택되면, 페트리 접시에 남은 잔여물을 유충 트레이로 돌려보내고 페트리 접시를 에탄올로 헹굽니다. 그런 다음 유충 트레이의 잔여물을 빈 샘플 병으로 옮깁니다. 병에 날짜와 지역 라벨을 부착하고, 샘플 분류를 위해 병 뚜껑을 닫습니다.라벨이 부착된 바이알에서 유충 추출물을 표본이 겨우 잠길 정도의 에탄올이 채워진 페트리 접시에 붓습니다. 다음으로, 실체 현미경 하에서 Chiron Pub ex의 외부 형태적 특성을 이용하여 표본을 형태군(morph axa)별로 분리하고, 서로 다른 형태군을 각각 라벨이 부착된 바이알에 옮깁니다. 해당 바이알을 에탄올로 3/4 정도 채웁니다. 예를 들어 Celi thax로 분류할 때는 가슴각(thoracic horn)의 유무, 크기, 모양 및 색상의 차이를 이용하여 표본을 구별하십시오.복부를 기준으로 분류하는 경우, 복부 마디와 항문엽의 가시, 털, 및 극 돌기를 사용하여 형태 분류군을 구분하십시오. 분류 후, 다공 플레이트의 각 웰에 형태 분류군별로 95% ethanol을 채우고, 각 형태 분류군을 대표하는 여러 개체를 개별 웰에 넣어 최소 10분 동안 충분히 탈수시키십시오. 샘플이 건조되는 동안, 표본을 마운트하기 위해 적절한 채집 장소 및 식별 정보가 기입된 슬라이드를 준비하십시오.현미경 스테이지에 슬라이드 템플릿을 테이프로 고정하고 그 위에 슬라이드를 놓습니다. 그런 다음 URL 한 방울을 슬라이드 위에 떨어뜨려 커버 슬립 크기와 비슷하게 펼칩니다. 포셉을 사용하여 첫 번째 morph axon 표본을 실험실용 와이프 위에 가볍게 두드려 과도한 에탄올을 제거합니다. 이제 표본을 URL에 매립하고, 미세 팁 포셉과 해부용 프로브를 사용하여 sepha thax를 복부에서 분리합니다.이 절차에서 가장 어려운 점은 슬라이드 마운팅 중에 두흉부를 복부에서 분리하는 데 필요한 정밀한 손기술을 습득하는 것입니다. 해부를 성공적으로 수행하려면, 미세 팁 핀셋이나 해부용 프로브를 사용하여 두흉부와 첫 번째 복부 마디 사이의 연결 부위를 분리하십시오. 시연된 바와 같이, 배측 봉합선을 따라 두흉부를 나누십시오.그 다음 두상 흉부를 열어 봉합선 가장자리가 서로 반대 방향을 향하게 하고, 복측이 위를 향하도록 배치합니다. 복부를 등측이 위로 오게 하여 두상 흉부 바로 아래에 놓습니다. 그런 다음 커버슬립을 비스듬히 잡고 한쪽 끝을 슬라이드에 닿게 한 후, 기포 형성을 줄이기 위해 천천히 내려놓습니다.마지막으로, 커버 글라스를 가볍게 눌러 표본을 평평하게 펴고 복합 현미경을 사용하여 슬라이드에 마운트된 표본의 속을 결정합니다. 이 그래프들은 각 호수 내의 전반적인 종 수를 결정하기 위해 미네소타의 16개 도시 호수에서 수집한 Chiron ex 샘플의 분류학적 축적 곡선을 보여줍니다. 각 데이터 선은 하나의 호수를 나타내며, 각 데이터 지점은 2005년 4월부터 10월까지 수집된 월별 샘플을 나타내며, 호수당 4개의 샘플을 획득함으로써 Chiron 군집의 대부분을 회복하고 호수 내의 중요한 계절적 변동을 감지했음을 보여줍니다. 호수 깊이와 인 농도와 같은 환경 변수의 변화가 다양한 호수 화학성 구배에 걸쳐 검출되는 누적 종에 영향을 미칠 수 있으므로, Chiron의 장기 모니터링 연구는 미네소타 전역 호수의 기후 변화를 평가하는 데 사용될 수 있습니다.실제로 이 그래프가 보여주듯, 평균 인 농도 대비 평균 수심의 비율이 증가함에 따라 발견되는 종의 누적 수는 증가합니다. 학생 분비물을 성공적으로 수집하기 위해 가장 중요한 단계는 연구 지역 내에서 분비물이 많이 축적된 구역을 찾는 것입니다. 실험실에서 샘플 분석을 시작할 때, 일부 표본은 색소가 옅어 페트리 접시 바닥에 붙어 있을 수 있으므로 접시 내부를 천천히 살피는 것이 중요합니다.이 영상을 시청한 후, 수질 모니터링 및 평가 프로젝트를 위한 omie 표면 부유 phytoplankton 샘플의 수집 및 처리 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

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환경

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