Name: 행동 분석 실험에 대한 염색 곤충 : 마취의 짝짓기 행동 초파리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 13 s
Description: 학습하세요 Drosophila 행동 실험을 위한 비침습적 식용 염료 표시법. CO2 마취보다 빠르고 안전하며 짝짓기 성공률에 영향을 주지 않는 곤충 개체 식별 기술을 탐색하세요.

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우리는 짝짓기 실험에 도움을 준 알렉스 Hitchen와 멕 부스에게 감사의 말씀을 전합니다. 이 작품은 TP에 H015604 / 1 / NERC 보조금 NE에 의해 지원되었다.

식용 색소와 플라이 음식 1. 준비 <ol><li> 바닥에 음식의 약 20 ㎖ (그림 1)과 표준 초파리 병을 가져 가라. 끓는 물 1 L 이용한 식품 믹스하기 배합 사용 한천 10g, 85g의 포도당, 옥수수 가루 60g, 효모 40g을 서서히 끓는하고 5 분 동안 교반한다. 혼합물을 75 ℃로 냉각되면 10 % nipagen의 25 ML을 추가합니다. </li><li> 음식은 냉각시키고, 두 방울 추가 고화 후 - 음식 위로 청색 식용 색소 (대략 0.5 내지 1 ㎖) 및 바이알의 표면 전체에 걸쳐 (도 1). 선호하는 경우 다른 색상의 염료를 사용합니다. </li><li> 염료가 식품의 상부층에서 흡수되도록 냉장고에서 이틀 동안 음식 남기기; 이 숙성 기간 동안에 파리 과도한 수분 손상을 방지한다. 과도한 습기가 여전히 다음 이후에 남은 물기과를 가릴 수있는 문제의 경우 조직에 작은 종이 조각을 추가를 제거합니다. </li><li> 전송은 개별적으로 또는 그룹으로 음식에 파리. 참고 : 파리는 음식에 배치되는 일일 내 장 염색을 얻을 것입니다. 또한, 전에 완전히 실험 (식품 염료에 노출 관찰되지 않았다 성숙 기간 동안 사망률 증가)로 염색 음식에 파리를 성숙. </li><li> 염색 파리 비 염색 파리에서 쉽게 구별 될 수 있는지 확인합니다. 염료의 높은 농도, 또는 다른 염료를 사용하여 1.4 - 그들이 구별 될 수없는 경우, 반복 단계 1.1. </li></ol> 음식 색을 사용하여 2. 두 남자 상대의 시험 <ol><li> 자손을 생산하는 경우, 여성과 남성 파리 쌍 포함 된 여러 바이알 (남성과 여성의 작은 그룹을 애벌레의 과밀을 방지하기 위해주의를 기울여야하지만,도 적합하다)를 설정합니다. 7 일 - 암컷이 알을 낳기 모든 5 새로운 유리 병에 파리를 이동할 수 있습니다. 관심의 종류에 적합한 온도에서 보관 유리 병 (22 ° C 형 (F)또는 D. pseudoobscura 및 D. subobscura 및 D. 25 ° C의 melanogaster의). </li><li> pseudoobscura 25 ° C, D.에서 6 시간 - - 수집 실험 파리는 남성과 여성을 수집하기 전에 설정 한 시간에 수집 유리 병에서 모든 파리를 제거하기 전에 그들이 처녀 (D. melanogaster의 될 것입니다 보장하기 위해 18 시간 22 ° C에서, 그리고 D.의 subobscura - 22 ° C에서 24 시간). 참고 : 파리는 처녀가 아닌 경우이 의지 바이어스 짝짓기 실험 (15)에 자신의 행동. <ol><li> 저장 및 개별적으로 표준 75 X 20mm 플라스틱 병에서 성숙한 남자 (음식 ~ 20 ㎖를 포함). 남성은 그룹 16에 보관 때 남성 짝짓기 행동과 어떤 종에서 볼 피트니스에 부정적인 영향을 피할 수 있습니다. </li><li> 원하는 치료로 남성의 절반을 노출 (CO이 경우 2 마취). CO 2 매트를 사용하거나 필요한 시간 동안 파리를 노출 누릅니다. 말의 저장 절반ES 상대까지 색깔 음식의 각 처리에서 발생한다. 이 짝짓기 시험 동안 그들을 시각적으로 구별 할 것입니다. </li><li> 전송을 위해 파리 흡인기 (17)를 사용합니다. 치료 및 남성의 색 상태 모두를 식별하기 위해 각 바이알 레이블. 여기에, 네 개의 트리트먼트 사용 (마취, 비 색깔 = G-NC, 마취, 색깔 = GC, 마취, 비 착색, NG-NC 및 마취, 색깔, NG-C). </li></ol></li><li> 10의 그룹으로 성숙 신선한 음식 바이알에 새로 등장 여성을 전송합니다. </li><li> 삼일, D.의 pseudoobscura - - 오일, D.의 subobscura -. D에 대한 (예를 들어, 22 ° C를 연구되고 18 저장소 종에 적합한 온도에서 날아 칠일 파리가 짝짓기 나이 (D. melanogaster의에 성숙 할 수 있도록 허용 . pseudoobscura 및 D의 subobscura 25 ° C D. melanogaster의 경우). </li><li> 계속 (개별 유리 병에 여성 이동음식 ~ 20 ml)을 결합 유리 병에 순응의 결합 시험 전에 일일를 aining. 유리 병이 차별화 될 수 있도록 이러한 병 레이블. 중립 라벨을 사용하여 실험을 눈 멀게주의하십시오 (즉, 1-150) 그래서 어떤 병에 파리의 신원을 추측 할 수 없습니다. 참고 : 각 유리 병에 파리를 배치하는 사람이 그들이 염색 된 치료주의 할 것이다 각 유리 병에 배치 파리의 신원을 알고 있어야합니다. 그러나, 짝짓기 시계 관찰자는 자신의 정체성을 모르는 것이다. 이 두 개 이상의 실험자이 필요합니다 설정하는 하나 하나 관찰을 수행합니다. </li><li> (10) 사이의 결합 시험 시작 - 자정, 또는 빛이 파리가 (파리에 대해 &quot;새벽&quot;)에 노출되는 빛 / 어둠주기에 오는 일치 한 번에. 흡입기를 사용 (하나의 여성 비행 포함) 각각의 짝짓기 유리 병에 두 남성 파리를 추가합니다. 두 남성 (다른 치료에서 마취 있는지 확인 또는제어) 및 그 하나는 가능한 서로를 구별 할 수 있도록하고, 염색 된 남성주의해야 할 장 염색이있다. </li><li> (- 색 색깔 또는 비 중) 교미가 발생하면, 동료 남성의 상태를 기록한다. 2 시간 동안 마지막 시련, 가정하면 암컷은 짝짓기를하지 않습니다. 2 시간이 종에 적합하지만, 다른 초파리는 다소 시간이 필요할 수 있습니다. </li></ol> 3. 단일 남성 짝짓기 시험 <ol><li> 단일 남성 시험의 경우, 두 가지 변화와 프로토콜 2를 반복합니다 : <ol><li> 단계 2.3에서 색깔의 음식에 남성을 보관하지 않습니다. </li><li> 단계 2.7에서 각 바이알에 단 하나의 남성을 추가합니다. </li></ol></li><li> 단계 2.8에서, 비행 바이알, 정합 완료 메이팅 시작하고 시간이 기록되어야하는 시간에 부가되는 시간을 기록한다. 이 값에서, 성공, 대기 시간 및 기간을 짝짓기 계산합니다. </li></ol> 4. 데이터 분석 <ol><li> 아나에 적합한 통계 패키지를 사용하여용해. 데이터가 정상입니다 만, 두 치료가 t-시험 또는 이와 동등한 일반화 선형 모델 (GLM)를 사용하는 경우. 두 남성 실험을 위해, 이항 시험 또는 기본 통계 패키지로 제공된다 이항 GLM을 사용합니다. 참고 : 예를 들어 데이터의 경우, 모든 분석은 R 버전 3.0.3 (19)을 실시 하였다. </li><li> 각각의 치료 (20) 대기 시간 및 기간의 주파수 히스토그램을 플로팅 및 샤피로 - 윌크으로 정상에 대한 테스트를 사용하여, 정상의 짝 대기 시간과 짝짓기 기간 데이터를 확인합니다. 정상이 아닌 경우이를 변환하거나, 비모수 통계 20 당량을 사용한다. 참고 : 하나의 남성 실험의 예 데이터 로그 변환이 정상과 등분의 요구 사항을 충족. </li><li> 데이터가 표준화 될 수있는 경우 두먼트 (21)를 사용하는 경우, 사용 t-테스트 남성 단일 결합 시험에서 상대 지연 및 지속 시간의 차이를 조사한다. 다중 처리는 사용되는 경우,분산 분석 (ANOVA) (20)를보십시오. 데이터를 정규화 할 수없는 경우, 해당하는 비 파라 메트릭 테스트 (21)를보십시오. </li><li> 경쟁 남성 (20)의 짝짓기 성공에 식용 색소 또는 CO 2 마취 중 하나의 효과를 테스트하기 위해 이항 테스트를 사용합니다. 예컨대 데이터의 경우처럼 다수의 처리가 사용되면, 오류 이항 구조 (21)를 사용 GLM. </li><li> 예컨대 데이터의 두 남성 시험 들어 에러 이항 구조와 GLMS를 사용한다. 하나 GLM는 응답 변수 (0 = 가스실 및 가스화하지로서 CO 2 검사 설명 variables.One GLM으로 장착 응답 변수 (컬러 = 0이고 비 착색 = 1) 종, 가스 상태 및 가스 처리로서 색을 조사 = 1)를 장착 종 색상 상태 및 가스 처리와. 각각의 경우에 최대 모델을 생성하고, AIC (20)에 기초하여 단순화 된 모델을 수행한다. </li></ol>

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저자는 그들이 더 경쟁 금융 이익이 없다는 것을 선언합니다.

이 데이터는 CO 2 마취의 영향은 거의 영향을 보여주는 두 세 가지의 종과 종 사이의 일관성이 있음을 보여줍니다. 우리의 결과는 음식 염료와 라벨 2 마취 D.에 대한 CO보다 남성 짝짓기 성공에 낮은 영향을 미쳤다 제안 melanogaster의. 이러한 실험 음식 염료 쉽고 싸게 여러 수컷 관련된 결합 분석법 라벨 날아간하는데 사용될 수 있다는 것을 입증한다. 세 가지 모델 초파리 종의 만 D., 검사 melanogaster의 경쟁력있는 상황에서 정합 성능에 CO 2 마취 효과를 나타내었다. 대조적으로, 종 중에 D. 대한 이전 결과 반대로 상대 지연의 측면에서 단일 결합 시험에서 가스의 컬렉션에 효과가 없었다 melanogaster의 5. 경쟁의 영향은 따라서 만 검출 가능한 CO 2 마취 미묘한 니스 효과를 강조 할 수있다상황에 따라 남성 남성 경쟁이입니다. 초기 수집 및 일일에 노출 재판에 앞서 D.의 남성의 능력에 부정적인 영향을 미칠 짝짓기를 얻기 위해 melanogaster의. 이일 이전 시험에 노출 그러나 효과적인 결과를 보이지 못했다. D. 두 pseudoobscura 및 D. subobscura은 시험 중 임의의 가스에 노출 된 효과적인 결과를 보이지 못했다. 한 설명은 것입니다 D. 남성 처녀 보장하기 위해 다른 종보다 - (6 시간 이전 0)이 이전의 삶에서 수집해야하기 때문에 melanogaster의 주식 2 초 노출에 취약했다. 따라서 남성 D. 파리의 표피는 여전히 강화하기 위해 자신의 표피에 대해 더 이상 가지고있는 다른 종에 비해 강화 된 바와 같이이 시대의 melanogaster의 더 민감 할 수있다. 일반적으로, 이것은 CO 2 마취 효과가 특정 종에서 적절 타겟 종의 효과를 테스트해야 조사관 있다는 생각을 지원한다. CurrentlY, CO 2 마취의 효과에 대한 작업의 대부분은 다른 관련 종에 적용하는 것이 적절하지 않을 수 있습니다 때문에 초파리 5,11,22에서 수행하고있다. 파리를 구별하기 위해 제시된 대안 비 침습적 방법은 음식 염료입니다. 이러한 처리 결과는 모든 종에 걸쳐 조사에 영향을 미치지 아니 제안한다. 그 사용은 개인을 구별하는 저렴하고 쉽게 볼 마커를 제공하는데 성공하면서 그러나, 염료 D.에서 구별하기 쉽다는 것을 주목해야한다 pseudoobscura 및 D. D.보다 subobscura melanogaster의. 이전 저자는 4,6 (적색, 녹색 및 청색) 여러 가지 색상을 사용했다. 우리는 D. 모든 종에서 구별하는 가장 쉬운 특히으로 푸른 색을 발견 pseudoobscura 및 D. subobscura. 잠재적으로 많은 개별적으로 표시 flie 더 복잡한 실험을 허용하는 여러 가지 색상을 사용하여의. 어떤 음식 염료 소비 할 때 가능성이 소화되고, 파리 색상을 실패하지만, 다른 염료의 예비 시험은 필수적이다. 다른 염료)은 독성을 가지고 날아 생존을 감소시키고, 14 피해야있다. 더 비싼 얼룩을 이용한 대체 착색료 방법은 D. 위해 장내 무결성을 검사하는 데 사용되어왔다 23 melanogaster의. 이러한 대안을 제공 할 수 있지만, 고가의 염색 방법 (23). 파리 컬렉션에서 염색이 식품에 저장 될 수있는 방법은 염료 CO 2 날개 클리핑만큼 빠르다. 음식의 흡수는 (~ 3 시간) 빠른, 그래서 다른 연구 (6)에 사용되는 색깔의 음식에 저장 O / N은, 파리를 표시하기에 충분하다. (10-12일) 24 마킹 날개 (영구) 클리핑이나 형광등 먼지 비교 - (5 시간 ~ 4) 그러나, 착색의 기간이 상대적으로 짧다. 초파리 종으로서에 따라 다릅니다, 다른 염료는 다소 다른 종에 대해서 유효합니다, 일부 균주로 (예를 들어, 녹아웃 돌연변이) 다이어트의 변화에 취약 할 수있는, 염료의 사용은 그 효과에 대한 예비 시험 특히 긴 경우 필요합니다 염료에 장기간 노출 14 독성이있을 수 있습니다. Kalaw 등. (14)의 연구와는 달리, 우리는 D.에 대한 색깔의 음식에 여러 일 동안 저장 후 유의 한 사망률 발견 melanogaster의 (3 일), D. pseudoobscura (오일), 또는 D. subobscura (7 일), 아마도 염료의 차이로 사용했다. 염료 기술을 성공적으로 사용하기위한 중요한 단계는 선택한 염료 종과 변형을 사용하고 잘 작동하는지 확인하는 단계입니다 1.5입니다. 대체 기술은 현장 실험 24에서 사용하기 전에 즉시 외부로 착색 분진을 적용하는 단계를 포함한다. 이 방법은 필드에서 t 인해 개인을 추적하기 위해 사용되어왔다O 마킹 기간 및 마킹 질량의 용이성 24 날아간다. 우리가 명시 적으로 결합 시험에서이 방법을 테스트하지 않았지만, 그것은 먼지가 특히 초파리 25, 26, 짝짓기에 중요한 감각에 미칠 수있는 영향을 검토하는 것이 중요 할 것입니다. 종 그러나, 장 염색이 가능하지 않은, 이 방법이 적합 할 수있다. 결론적으로 우리는 테스트 세 종 (D.의 pseudoobscura 및 D의 subobscura)의 두 CO 2 마취 또는 수컷의 짝짓기 능력에 식용 색소 중 하나의 발견 아무런 효과가 없다는 것을 발견했다. D. 들어 검출 된 CO 2 마취의 부정적인 영향을 melanogaster의,하지만 식용 색소는이 종에 성공 짝짓기에 영향을 미치지 않았다. 전반적으로, 염색 방법은 동일 또는 CO 2 마취를 필요 방법보다 더 낫다고 초파리 개인을 식별하기위한 단순 및 저렴한 비 침습적 방법을 제공한다. 그것가능성이 방법은 종의 범위에서 작동하는 것입니다.

지난 몇 년 동안이 진화 1,2에 어떻게 성적 선택과 경쟁 남성 사이에 미치는 영향에 대한 관심이 증가하고있다. 교미 행동에 대한 실험은 개발 및 3,4- 성 선택 이론 테스트에서 중요한 역할을 해왔다. 속 초파리의 특정 연구하여 종에서는 성적 선택과 행동의 이해에 크게 기여하고있다. 그러나, 일반적으로 사용되는 표준 기술은 5,6- 결합 실험의 결과를 인공적으로 치우치게 할 수 있는지 여부를 조사하는 것이 중요하다. 마취는 종종 실험 7 취급 및 식별을 위해 사용됩니다. 예를 들어, 파리 일반적 메이팅 수집 전에, 또는 (CO 2) 마취 이산화탄소를 이용하여 실험 치료 또는 유전자형으로 분류. 둘 이상의 개인이 구별 될 필요가 실험에서, FL을 anaesthetise 것이 일반적이다IES와 날개 오프 클립 부분은 각각의 처리 그룹 또는 5,8- 동정을 행 하였다. 그것은 그러나, CO 2 처리가 행동에 미치는 영향을 이해하는 매우 중요합니다. CO 2 마취의 효과가 초파리 melanogaster의에서 조사 된이있는 2 짝짓기를 더 크게했다 및 전반적인 비 마취 남성 또는 남성보다 낮은 짝짓기 성공을 거두었 감기 5 노출을 사용하여 마취 CO에 노출 된 남성. 이 효과는 관찰 모두 마취 실험 당일에 도포했을 때 복구 할 수는 파리 하루 주어진 경우. 그러나이 연구는 하나의 남성 각 여성 5에 제출에만 검사 시험에서 제한되었다. 여성이 때문에 마취에 대한 남성의 적합성에 미묘한 손실의 검출을 허용 할 수 있습니다 남성 간의 경쟁을 허용, 여러 남성 9,10 발생하는보다 현실적인 시나리오입니다. CO 2 마취의 사용은 또한 수있다실내는 성인 D.의 다산과 장수를 줄이기 위해 발견 그들은 우화 직후에 노출되었을 때 처녀를 수집하는 것은 11을 날아 때 일반적인로, melanogaster의. 2 마취를 공동의 대안은 그들에게 염료 4,6,10,12,13과 색깔의 음식을 공급하여 파리를 표시하는 것입니다. 이 염료는 색의 파리가 무색 파리에서, 또는 다른 색으로 표시 파리 구별 될 수 있도록, 파리의 창자를 입력하고 복부를 통해 볼 수 있습니다. 염색 보충 효모 붙여 넣기 (6)를 통해, 또는 새로운 염색 음식 기판 (13)에 노출을 통해, 음식 (12)에 직접 추가되는 : 방법은 어떻게 적용 할 수 다르다. 이러한 마킹 기술이 결합 성능 4,6에 영향을 보여주지 보인다. 그러나, 종이에 직접 성인 D. 같은 식용 색소의 효과를 검토 melanogaster의 수명은 14 강한 감소를 발견했다. 이전 작업은 ALM 초점을 맞추고있다OST 완전히 D.에 melanogaster의 모두 CO 2 마취 5,11 및 착색료 방법 (14)의 효과에 관해서. 현재, CO 2 마취 또는 장 색상의 사용이 다른 초파리의 짝짓기 행동에 영향을 미치는 방법에 대한 약간의 정보가있다. 다음의 연구는 초파리의 세 가지 종 (D. melanogaster의, D.의 pseudoobscura 및 D.의 subobscura)의 정합 동작에 CO 2 마취 효과를 평가한다. CO 2에 날아 포집 효과와 두 남성 단일 결합 실험 모두에서 확인 하였다. CO 2의 효과는 다양 D. 밝혀졌다 melanogaster의 5와 2를 공동 노출과 결합 사이의 너무 다른 대기 기간이 시험 하였다. 마취 날개 클리핑에 방법을 표시 대안 : 파리 스테인 음식 염료의 사용도 평가된다.

<table><tbody><tr><td>플라스틱 튜빙</td><td>Fisher Scientific</td><td>TWT-200-061G</td><td>다른 튜빙이 적합할 수 있지만 1ml 피펫 팁 내에 맞아야 합니다.</td></tr><tr><td>미세 메쉬</td><td>: 모든 잡화</td> <td>-</td> <td>미세 커튼 메쉬가 적합합니다</td></tr><tr><td>: 1 ml 피펫 팁</td><td>VWR</td><td>83007-376</td><td>다양한 브랜드의 피펫 팁이 적합합니다</td></tr><tr><td>플라스틱 바이알</td><td>Sarstedt</td><td>58.49</td><td>더 큰 바이알 또는 병도 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>면봉</td><td>Lewis Medical Solutions</td><td>28170</td><td>면의 크기는 사용된 바이알의 크기에 따라 다릅니다.</td></tr><tr><td>블루 식용 색소</td><td>Thesugarcraftcompany</td><td>-</td><td>다른 염료 색상 및 브랜드는 다양한 결과를 가질 수 있습니다.</td></tr><tr><td>CO2 탱크</td><td>BOC</td><td>BOC 40VK</td><td></td></tr><tr><td>Sharpie 마커</td><td>Steadtler</td><td>Lumocolor 313 S</td><td>다양한 색상을 사용할 수 있지만 Lumocolor S는 내구성과 섬세함의 탁월한 조합을 제공합니다</td></tr><tr><td>스톱워치</td><td>Salter</td><td>SL3920</td><td>좋은 디지털 디스플레이가 있는 모든 스톱워치는 괜찮을 것입니다.</td></tr></tbody></table>

행동 분석 실험에 대한 염색 곤충 : 마취의 짝짓기 행동<em&gt; 초파리</em

Dyeing Insects for Behavioral Assays: the Mating Behavior of Anesthetized Drosophila

초파리를 이용하여 결합 실험은 성적 선택과 행동의 이해에 크게 기여했다. 실험은 종종 시험에서 개인을 구별하는, 간단 간단하고 저렴한 방법이 필요합니다. 이에 대한 표준 기술은 각 비행 클리핑 CO 2 마취 후 라벨 또는 날개입니다. 그러나, 이는 침입 성 및 동작에 영향을 미치는 것으로 밝혀졌다. 다른 기술은 파리를 식별하기 위해 채색을 사용했다. 이 문서에서는 식용 색소를 사용하여, 그들을 개별적으로 실험 내에서 확인할 수 있습니다 라벨링 초파리을위한 간단하고 비 침습적 방법을 제안한다. 이 방법은 두 남성이 여성과 짝짓기 경쟁 시험에서 사용된다. 염색 빠르고 쉽게 식별을 허용했다. 시험 세 종간 착색의 강도에 약간 차이가 있지만,이 있었다. 데이터는 염료를 보여주는 제시 초파리 멜라노에서 CO 2보다 짝짓기 행동에 낮은 영향을gaster. CO 2 마취의 영향은 D.으로, 초파리의 종에 의존 도시 pseudoobscura 및 D. subobscura, D. 반면 영향을 보여주는 melanogaster의 남성은 짝짓기 성공을 감소했다. 제시된 방법은 염료 실험 광범위한 설계에도 적용 가능하다.

두 남성 짝짓기 시험 - 2 마취 짝짓기 행동에 CO의 효과 CO 2의 마취 효과의 변화를 설명하는 것으로 최상의 모델은 요소로 (D. D.의 pseudoobscura과의 subobscura 서로간에 차이가 없었다로 융합)와 종을 함유 하였다. D.에서 pseudoobscura 및 D. subobscura 두 남성 시험 (Z 1589 = 0.087, P = 0.931)에서 짝짓기 성공에 CO 2 마취의 유의 한 효과가 없었다. D. 들어 melanogaster의, 2 마취를 CO에 노출 된 남성은 상당히 낮은 짝짓기 성공 (Z1,589 = 2.467, P = 0.014)을했다. 더 큰 효과 종 및 치료 (χ 2 1589 = 6.83, P = 0.009) 사이에 상당한 상호 작용 D. 때 들키지이 있었다 melanogaster의 컬렉션에서 가스에 노출 또는 일일 시험 (표 1) 전 하였다. Howev어, D. melanogaster의 남성은 CO 2의 효과를 보여주지 않았다 2 이일 실험 시험 전에 CO에 노출. 두 남성 짝짓기 시험 - 짝짓기 행동에 장 채색의 효과 모델 단순화는 식용 색소의 유의 한 효과는 세 가지 종 (&gt; 0.1 P) 중 어떤 발견되고 있었다. 치료 또는 가스 상태가 분석에 포함되었을 때 이들은 (P는&gt; 0.1) 또한 유의하지 않았다. 치료법에 걸쳐 컬러 파리 성공적인 교배 비율은 표 2에 나타낸다. 파리 사이 착색 차가 컬러 및 착색 음식도 1에서 볼 수있다. 장내 식용 색소 강도 D. 컸다에 보관 pseudoobscura 및 D. D.보다 subobscura melanogaster의. 단일 결합 실험 - CO에게 마취 m 2를 사용하는 효과운 전압 동작 CO 2 마취 최근 등장 성인 수집하는 데 사용 된 세 가지 경우 중 어느 한 종을위한 정합 지연 시간의 차이는 없었다. 효과는 D.의 짝짓기 기간 동안 발견 subobscura는 그것은 2 이일 결합 시험 (; 표 2 그림 2와 3) 전에 CO에 노출되었을 때. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig1.jpg" /> 그림 1. 컬러 및 비 컬러 플라이 식품 (A)의 유리 병을 보여주는 사진과 남성 D. 장내 착색의 힘 Subobscura (B). <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig2.jpg" /> 남성은 마취시키다 때, 싱글 남성 시험에서 조사 세 종의 교미 대기 시간 그림 2. 평균 95 % 신뢰 구간D (조명 막대)하거나하지 마취 (어두운 바)를 할 때 성적 성숙하기 전에 처녀로 수집. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/52645/52645fig3.jpg" /> 성적 성숙하기 전에 처녀로 수집 할 때 남성이 (어두운 막대) 마취 (조명 막대)을 마취하거나하지 된 그림 3. 평균 및 단일 남성 시험에서 조사 세 종의 교미 기간에 대한 95 % 신뢰 구간,. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> 치료 </td><td> 종 </td><td> 번호 시험 </td><td> 번호 파리 색깔의 짝 그 </td><td> p- 값 </td><td> 번호 파리 가스실에 어울리게 그 </td><td> p- 값 </td></tr><tr><td rowspan="3"> CO 2 컬렉션 </td><td> D. 멜 </td><td> 73 </td><td> (36) </td><td> (1) </td><td> (27) </td><td> 0.0344 </td></tr><tr><td> D.의 PSE </td><td>79 </td><td> (41) </td><td> 0.8221 </td><td> (44) </td><td> 0.3682 </td></tr><tr><td> D. 서브 </td><td> (71) </td><td> (40) </td><td> 0.3425 </td><td> (33) </td><td> 0.6353 </td></tr><tr><td rowspan="3"> 이 18 시간을 CO에 노출 이전 </td><td> D. 멜 </td><td> 57 </td><td> (28) </td><td> (1) </td><td> (19) </td><td> 0.0163 </td></tr><tr><td> D.의 PSE </td><td> (65) </td><td> (32) </td><td> (1) </td><td> (31) </td><td> 0.8043 </td></tr><tr><td> D. 서브 </td><td> (68) </td><td> (38) </td><td> 0.3961 </td><td> (35) </td><td> 0.9036 </td></tr><tr><td rowspan="3"> 이 이일을 공동 노출. </td><td> D. 멜 </td><td> (56) </td><td> (19) </td><td> 0.0222 </td><td> (32) </td><td> 0.3497 </td></tr><tr><td> D.의 PSE </td><td> (70) </td><td> (32) </td><td> 0.5504 </td><td> (33) </td><td> 0.7202 </td></tr><tr><td> D. 서브 </td><td> (56) </td><td> (29) </td><td> 0.8939 </td><td> (26) </td><td> 0.6889 &lt;/ TD&gt; </tr></tbody></table> 표 심사 모든 종과 치료의 맞은 편에 두 남자의 선택 실험 1. 결과. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> 종 </td><td> 특성 </td><td> DF </td><td> t 값 </td><td> p- 값 </td></tr><tr><td rowspan="2"> D. melanogaster의 </td><td> 대기 시간 </td><td> (58) </td><td> 1.379 </td><td> 0.174 </td></tr><tr><td> 지속 </td><td> (58) </td><td> 1.243 </td><td> 0.221 </td></tr><tr><td rowspan="2"> D.의 pseudoobscura </td><td> 대기 시간 </td><td> (109) </td><td> 0.419 </td><td> 0.676 </td></tr><tr><td> 지속 </td><td> (109) </td><td> 0.436 </td><td> 0.664 </td></tr><tr><td rowspan="2"> D.의 subobscura </td><td> 대기 시간 </td><td> (83) </td><td> 0.098 </td><td> 0.922 </td></tr><tr><td> 지속 </td><td> (83) </td><td> 1.767 </td><td> 0.081 </td></tr></tbody></table> 단일 결합의 결합 대기 시간에 CO 2 마취에 컬렉션의 효과를 검사 실험 및 기간에서 표 2. 결과. 시험은 초파리의 세 종 (D. melanogaster의, D.의 pseudoobscura 및 D의 subobscura)에서 수행 하였다.

이 프로토콜은 초파리 또는 다른 곤충을 개별적으로 식별하는 간단하고 비용 효율적인 방법을 설명합니다. 3종의 초파리에 대한 짝짓기 성공을 조사한 시연 데이터는 이 방법이 CO2 마취의 사용과 비슷하거나 더 우수하다는 것을 보여줍니다.

Mating experiments using Drosophila have contributed greatly to the understanding of sexual selection and behavior. Experiments often require simple, easy ...

본 실험 절차의 전체적인 목적은 행동 실험에서 초파리를 식별할 수 있도록 비침습적인 방식으로 곤충들이 서로 시각적으로 구분되게 만드는 것입니다. 이를 위해 먼저 표준 초파리 배양병에 담긴 일반 초파리 먹이 표면에 식용 색소 몇 방울을 떨어뜨려 시각적으로 염색합니다. 그 다음, 초파리를 배양병에 넣고 3시간 동안 유지하면 초파리의 복부가 강하게 착색됩니다.예를 들어, 암컷이 특정 색으로 염색된 수컷을 더 매력적으로 느끼는지 관찰하기 위해 교배 실험을 수행할 수 있습니다. 궁극적으로, 이 염색 기술은 실험적 식별을 용이하게 하기 위해 곤충에 표시를 남기는 빠르고 간단하며 비침습적인 방법입니다. 파리의 날개 일부를 제거하는 것과 같은 기존 방법보다 이 기술을 사용할 때 얻는 주요 장점은 더 빠르고, 침습성이 낮으며, 이후의 행동에 영향을 줄 가능성이 적다는 점입니다.이 방법은 파리의 개체 또는 클래스를 식별하는 것이 중요한 매우 다양한 실험에서 유용하게 활용될 수 있습니다. 또한 충분히 간단하여 학교나 대학의 기초 실험에서도 사용할 수 있습니다. 이 기술의 시연은 리버풀 대학교의 박사 과정 학생인 Rudy Verse Bo와 Chloe Hayes가 진행하겠습니다. 먹이가 부어진 후 응고되면, 먹이 위에 0.5에서 1 mL의 청색 식용 색소를 첨가하고, 색소가 바이알 전체 표면에 퍼지도록 합니다.그런 다음, 식단이 먹이의 상단 층에 흡수될 수 있도록 4°C에서 이틀 동안 보관하십시오. 다음으로, 실험 필요에 따라 파리를 해당 먹이로 옮깁니다. 하루 이내에 염색된 파리를 염색되지 않은 파리와 쉽게 구분할 수 있으며, 염색된 파리를 이용한 교배 실험을 수행할 수 있습니다.흡입기를 사용하여 개별 처녀 수컷을 20 mL의 먹이가 들어 있는 표준 75 x 20 mm 플라스틱 바이알로 옮깁니다. 두 마리의 수컷을 이용한 교배 실험을 수행하는 경우, 각 처리군의 수컷 절반을 색소 먹이가 들어 있는 바이알에 넣습니다. 그다음, 갓 우화한 암컷들을 10마리씩 묶어 신선한 먹이가 든 바이알로 옮깁니다.이제 양 성별의 초파리가 해당 종에 적합한 온도에서 교배 가능 연령까지 성장하도록 합니다. 초파리가 준비되면 실험군 수컷에게 원하는 처리를 실시합니다. 예를 들어, 다른 초파리들은 이산화탄소로 마취하며, 실험 전날 바이알에 라벨을 붙여 초파리의 처리 상태와 색상 상태를 식별할 수 있도록 합니다.암컷 파리들을 20 milliliters의 먹이가 들어 있는 개별 바이알로 옮겨 교배 바이알에 적응시키고, 실험의 맹검화를 위해 바이알에 중립적인 라벨을 붙입니다. 그런 다음, 단일 암컷 파리가 들어 있는 각 교배 바이알에 적절하게 한두 마리의 수컷 파리를 추가합니다.두 차례의 수컷 교배 실험을 위해 인큐베이터의 조명이 켜지는 시간에 맞춰 교배 시험을 시작하십시오. 각 수컷이 서로 다른 처리군에 속하며, 파리 한 마리는 복부 염색이 되어 있는지 확인하십시오. 각 수컷 파리의 처리군과 색상을 기록하십시오.2시간 이내에 교미가 발생하면, 단일 수컷 교미 시험의 경우 교미한 수컷의 dice 상태를 기록하십시오. 교미가 시작된 시간과 종료된 시간을 기록합니다. 그런 다음 해당 시험의 교미 성공 잠복기와 지속 시간 데이터를 계산하십시오.이산화탄소 마취 효과의 변이를 설명하기 위해 발견된 최적의 모델에는 종(species)이 요인으로 포함되어 있습니다. 예를 들어, 이러한 대표적인 실험들에서 이산화탄소 마취는 초파리의 교미 성공률에 유의미한 영향을 미치지 않는 것으로 나타났습니다.초파리(Drosophila melanogaster)의 수컷 두 차례 시험에서 Pseudo obscure 및 Drosophila sub obscure 초파리를 대상으로 하였으나, 이산화탄소 마취에 노출된 수컷의 경우 교미 성공률이 유의하게 낮게 관찰되었으며, 특히 수집 시점이나 시험 하루 전 가스에 노출된 Drosophila melanogaster에서 그 효과가 더욱 크게 나타났습니다. 세 종 모두에서 먹이 색소 처리된 초파리의 교미에는 유의미한 차이가 관찰되지 않았으며, 분석에 해당 처리 내용을 포함하거나 단일 교미 시험 내 곤충의 교미 상태를 고려했을 때도 차이가 없었습니다. 교미에 있어 차이가 없었습니다.이산화탄소 마취를 사용하여 갓 우화한 성충을 수집했을 때, 세 종 모두에서 잠복기가 관찰되었습니다. 교미 기간에 미치는 영향은 교미 실험 2일 전에 이산화탄소에 노출된 drosophila sub obscure 파리에서만 나타났습니다. 이 영상을 시청하고 나면, 실험 중에 파리를 표지하기 위한 비침습적 기술로서 장 염색법을 사용하는 방법에 대해 충분히 이해하시게 될 것입니다.이 절차를 수행할 때는 사용하는 염료가 대상 종에 미치는 영향을 테스트하는 것이 중요합니다. 일부 염료는 독성이 있을 수 있으며, 일부 색상은 짝짓기 성공률에 직접적인 영향을 줄 수 있습니다. 예를 들어, 일부 종에서는 빨간색 식용 색소를 선호할 수 있습니다.본 연구에서는 경쟁 교미 시험에서 초파리를 구분하기 위해 이 염색 기법을 사용하였습니다. 하지만 이 방법은 공격성, 영역 방어, 먹이 선호 활동 또는 사회적 행동을 평가하는 분석과 같이 초파리를 개별적으로 식별해야 하는 다양한 다른 실험에도 활용될 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

Drosophila melanogaster은 한 세기 이상에서 많은 중요한 생물 학적 과정의 분자 및 세포 기초를 이해하기 위해 사용되었습니다 유전자와 behaviorally 다루기 쉬운 모델 시스템이다. Drosophila 잘 플라이 행동의 유전적 기초에 대한 통찰력을 얻기 위해 악용되었습니다.

분석의 방법 Drosophila 행동

이 비디오 문서에서는, 우리는 초파리 비행 성인 과일의 후각에 의존 식품 검색 행동에 대한 배고픔이나 포만감의 효과를 측정 할 수있는 자동화 된 분석을 설명합니다.

먹이 찾아 돌아다 행동에 대한 단일 비행 분석에 초파리

여기에서는 스트레스를 받는 개인의 회피를 정량화하는 프로토콜을 제시합니다. 이 패러다임은 강력하면서도 사용자 친화적이며 Drosophila melanogaster의 한 종류의 사회적 상호 작용에 대한 유전자와 환경의 영향을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

사회 회피의 정량화에 대한 간단한 분석 초파리

이 프로토콜은 미용 행동을 측정하기위한 견고하고 정량적 인 데이터를 산출하는 Drosophila 의 확장 가능한 개별 그루밍 분석 기술을 설명합니다. 이 방법은 일정 기간 동안 비 - 손질 된 동물의 몸에 염료 축적의 차이를 비교하는 것에 기초합니다.

Drosophila 그루밍 행동의 부량

이 문서 melanogaste 동기 부여를 공부 r에 초파리에서 남성 짝짓기 드라이브를 사용하는 행동 분석에 대해 설명합니다. 이 방법을 사용하여, 연구자는이 동기를 기초가 유전 적 분자 및 세포 메커니즘을 밝히기 위해 고급 플라이 neurogenetic 기술을 이용할 수있다.

측정과 남성의 변경 결합 드라이브<em&gt; 노랑 초파리</em

우리는 초파리 Drosophila melanogaster 에서 짝짓기 행동에 영향을 미치는 환경 및 유전 신호를 분석하는 분석법을 시연합니다.

환경에서 신호의 결합 효과에 미치는 영향을 시험하는 방법<em&gt; Drosophila melanogaster</em

이 프로토콜은 구애 조건 조절이라고 불리는 Drosophila 학습 및 기억 분석을 설명합니다. 이 고전적 분석은 비 수용성 전제 암컷에 의한 성적 거부 이후의 남성 구애 행동의 감소에 근거합니다. 이 자연적 형태의 행동 소성은 학습, 단기 기억 및 장기 기억을 시험하는데 사용될 수 있습니다.

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이 프로토콜은 간단한 성인 Drosophila 행동 관측실을 만드는 방법, 그리고 상대적으로 간단하고 저렴한 방법을 통해 관찰실에서 과일 파리의 다른 유형의 형태 또는 행동의 고화질 사진 / 비디오를 찍는 방법에 대해 설명합니다.

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자폐 스펙트럼 장애(ASD)는 사회적 및 의사소통 행동의 장애 및 반복적 행동의 출현과 관련이 있습니다. 초파리 모델에서 ASD 유전자와 행동 결핍 사이의 상관 관계를 연구하기 위해 이 논문에서는 사회적 간격, 공격성, 구애, 그루밍 및 습관화 행동을 분석하기 위한 5가지 행동 패러다임을 설명합니다.

자폐 스펙트럼 장애의 초파리 모델에서 행동 평가를 위한 패러다임

이 논문은 CsChrimson 및 GtACR2를 활용하여 특정 뉴런을 활성화하고 침묵시키는 Drosophila melanogaster의 광유전학적 조작 방법을 제시합니다. 광유전학을 활용하여 열택 및 미각 행동을 탐구하고 이러한 과정을 제어하는 기본 신경 메커니즘에 대한 통찰력을 제공하는 네 가지 실험이 설명됩니다.

Drosophila melanogaster에서 신경 회로의 광유전학적 조작을 위한 행동 분석

이 프로토콜은 전통적인 포유류 모델에 대한 대안으로 운동 기능 장애의 정량화를 통해 초파리의 신경 독성을 평가하기 위한 고처리량, 비용 효율적인 방법을 제시합니다. 민감하고 재현 가능하며 윤리적으로 유리한 모델을 사용하여 제약 화합물, 환경 제제 또는 유전자 변형의 신경독성 영향을 평가하는 것을 목표로 합니다.

신경독성에 대한 판독으로서의 Drosophila melanogaster 의 운동 기능 장애에 대한 행동 분석

학습하세요 Drosophila 행동 실험을 위한 비침습적 식용 염료 표시법. CO2 마취보다 빠르고 안전하며 짝짓기 성공률에 영향을 주지 않는 곤충 개체 식별 기술을 탐색하세요.

행동 분석 실험에 대한 염색 곤충 : 마취의 짝짓기 행동

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