2015년 4월 22일
이 프로토콜은 초파리 또는 다른 곤충을 개별적으로 식별하는 간단하고 비용 효율적인 방법을 설명합니다. 3종의 초파리에 대한 짝짓기 성공을 조사한 시연 데이터는 이 방법이 CO2 마취의 사용과 비슷하거나 더 우수하다는 것을 보여줍니다.
이 절차의 전반적인 목표는 행동 실험에서 곤충을 식별하기 위해 비침습적 방식으로 곤충을 서로 눈에 띄게 구별하는 것입니다. 이것은 먼저 표준 플라이 바이알에서 일반 초파리 식품의 표면을 식용 색소 몇 방울로 눈에 띄게 염색함으로써 수행됩니다. 다음으로, 파리를 바이알에 3시간 동안 첨가하면 초파리는 복부에 강한 착색을 나타내야 합니다.
예를 들어, 암컷이 특정 색으로 염색된 수컷이 더 매력적이라고 생각하는지 관찰하기 위해 짝짓기 실험을 수행할 수 있습니다. 궁극적으로, 이 염료 기술은 곤충을 쉽게 실험적으로 식별할 수 있도록 곤충을 라벨링하는 빠르고 간단하며 비침습적인 방법입니다. 파리의 날개 일부를 제거하는 것과 같은 기존 방법에 비해 이 기술을 사용하는 주요 이점은 더 빠르고 덜 침습적이며 후속 행동에 영향을 미칠 가능성이 적다는 것입니다.
이 방법은 파리의 개체 또는 종류를 식별하는 것이 중요한 다양한 실험에서 유용할 수 있습니다. 또한 학교나 대학의 간단한 실험에 사용할 수 있을 만큼 쉽습니다. 이 기술을 시연하는 사람은 리버풀 대학의 박사 과정 학생인 Rudy Verse Bo와 Chloe Hayes입니다.음식을 부르고 응고시킨 후 음식 위에 0.5ml에 1ml의 파란색 식용 색소를 첨가하고 바이알의 전체 표면에 염료를 펴 바르는 것으로 시작합니다.
그런 다음 음식을 섭씨 4도에서 이틀 동안 보관하여 식단이 음식의 최상층에 흡수될 수 있도록 합니다. 다음으로, 실험의 필요에 따라 파리를 음식에 옮깁니다. 하루 안에 다이어트 파리는 염색되지 않은 파리와 쉽게 구별하여 염색된 파리와 짝짓기 시험을 수행할 수 있습니다.
흡인기(aspirator)를 사용하여 처녀 수컷을 20ml의 음식이 들어 있는 표준 75 x 20mm 플라스틱 바이알로 옮깁니다. 두 마리의 수컷 짝짓기 시험을 수행하는 경우, 각 치료 그룹에 있는 수컷의 절반을 색깔 있는 음식이 있는 바이알에 넣습니다. 다음으로, 새로 출현한 암컷을 10명씩 그룹으로 나누어 신선한 식품 바이알로 옮깁니다.
이제 암수 모두 종에 적합한 온도에서 짝짓기 연령으로 성숙하도록 합니다. 초파리가 준비되면 실험용 수컷을 원하는 치료에 노출시킵니다. 예를 들어, 다른 파리는 이산화탄소로 마취하고 바이알에 라벨을 붙여서 시험 전날 파리의 처리 상태와 색상 상태를 모두 식별합니다.
암컷을 20ml의 먹이가 들어 있는 개별 바이알로 옮겨 파리가 짝짓기 바이알에 적응하도록 하고, 바이알에 중립 라벨을 붙여 실험을 블라인드합니다. 그런 다음 한 마리의 암컷 파리가 들어 있는 각 짝짓기 바이알에 하나 또는 두 마리의 수컷 파리를 추가합니다. 적절합니다.
두 번의 수컷 짝짓기 시험을 위해 인큐베이터에 불이 켜지는 것과 일치하도록 짝짓기 시험을 시작하십시오. 각 수컷은 다른 치료를 받았고 한 마리의 파리가 복부 염색을 보이는지 주의하십시오. 각 수컷 파리의 처리와 착색을 기록하십시오.
2시간 이내에 교미가 이루어지면 단일 수컷 짝짓기 시험을 위해 짝짓기를 하는 수컷의 주사위 상태를 기록하십시오. 짝짓기가 시작되고 중지되는 시간을 기록합니다. 그런 다음 시험에 대한 짝짓기 성공, 대기 시간 및 기간 데이터를 계산합니다.
이산화탄소의 영향 변화를 설명하기 위해 발견 된 가장 좋은 모델. 마취는 종을 요인으로 포함합니다. 예를 들어, 이러한 대표적인 실험에서 이산화탄소 마취는 초파리의 짝짓기 성공에 큰 영향을 미치지 않았습니다.
Pseudo obscure 및 drosophila sub obscure 파리는 drosophila melanogaster에 대한 두 개의 남성 시험에서 그러나, 이산화탄소 마취에 노출 된 남성의 경우 훨씬 더 낮은 짝짓기 성공이 관찰되었으며, drosophila melanogaster가 수집 시 또는 시험 하루 전에 가스에 노출되었을 때 훨씬 더 큰 효과가 나타났습니다. 세 종 중 어느 것에도 대해 식용 유색 파리에서 짝짓기에 큰 차이가 관찰되지 않았으며, 분석에 처리를 포함하거나 단일 짝짓기 시험에서 곤충의 짝짓기 상태를 포함하지도 않았습니다. 짝짓기에는 차이가 없습니다.
최근에 출현한 성체를 채취하기 위해 이산화탄소 마취를 사용했을 때 세 종 중 하나에서 잠복기가 관찰되었습니다. 짝짓기 기간에 대한 영향은 짝짓기 시험 이틀 전에 이산화탄소에 노출되었을 때 초파리 아(drosophila sub)에 의해서만 나타났다. 이 비디오를 시청한 후에는 실험 중에 파리에 라벨을 붙이기 위한 비침습적 기술로 장 염색을 사용하는 방법에 대해 잘 알게 될 것입니다.
이 절차를 시도하는 동안 관심 염료가 초점 종에 미치는 영향을 테스트하는 것이 중요합니다. 일부 염료는 독성이 있을 수 있으며 일부 색상은 짝짓기 성공에 직접적인 영향을 미칠 수 있습니다. 예를 들어, 일부 종에서는 빨간색 식용 색소가 선호될 수 있습니다.
여기에서 우리는 경쟁적인 짝짓기 시험에서 파리를 구별하기 위해 이 염료 기술을 사용했습니다. 그러나 공격성, 영역 방어, 음식 선호 활동 또는 사회적 행동을 평가하기 위한 분석과 같이 파리를 개별적으로 식별해야 하는 다양한 다른 실험에도 사용할 수 있습니다.
이 프로토콜은 식용 색소를 사용하여 개별 Drosophila 및 기타 곤충을 식별하는 비침습적 방법을 설명합니다. 이 기술은 행동 실험 중 쉽게 식별할 수 있게 해주며, CO2 마취와 같은 전통적인 방법에 비해 비슷하거나 개선된 결과를 보여줍니다.
Non-invasive labeling methods are critical for maintaining behavioral assay integrity in early-stage target validation and phenotypic screening workflows. This food dye technique reduces confounding variables from invasive procedures, supporting more reliable compound screening and mechanistic de-risking in neurobehavioral discovery. The approach enables scalable, reproducible individual identification across species, aligning with enterprise needs for standardized preclinical models.
The method integrates into discovery biology workflows as a preprocessing step for behavioral phenotyping, preceding compound exposure and readout collection in lead identification cascades.