쥐 망막 및 원격 사지 허혈 양상의 보호 효과에 기능을 평가하기 위해 전위도를 사용하여

이 절차의 전반적인 목표는 ERG를 사용하여 정상 광 손상 및 원격 허혈 전처리 및 광 손상 쥐에서 시각 기능을 테스트하여 망막에 대한 원격 사지 허혈의 보호 효과를 입증하는 것입니다. 이것은 먼저 어둡게 12 시간 동안 쥐를 적응시킴으로써 달성됩니다. 두 번째 단계는 LED 조명 자극과 디지털 증폭기를 사용하여 기준선 어두운 적응 ERG를 기록하는 것입니다.

다음으로, 쥐를 밝고 연속적인 빛에 노출시켜 망막 스트레스를 가합니다. 마지막 단계는 빛 손상 쥐와 원격 사지 허혈이 전화된 쥐의 ERG 기록을 비교하고 A파에서 볼 수 있는 광수용체 반응과 B파에서 볼 수 있는 내부 망막 반응을 측정하는 것입니다. 궁극적으로 어두운 적응 ERG는 스코토픽 시각 기능을 평가하는 데 사용됩니다.

따라서 이 방법은 원격 허혈 기반 신경 보호에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 또한 다른 형태의 망막 손상 및 질병 약물 검사, 시각적 결함이 있는 동물의 스크리닝에도 적용할 수 있습니다. 이 절차를 시작하려면 쥐를 어둠 속에서 12 시간 동안 적응시킨 다음 케타민 자일라진 칵테일을 주사하여 마취하십시오.

동물이 의식을 잃으면 반사 반응이 없는지 확인하기 위해 발을 약간 꼬집어 마취 깊이를 확인합니다. 다음으로, 아트로핀 한 방울과 프록시 메탄 한 방울을 각막에 바릅니다. 10cm 길이의 검은 실로 자릅니다.

그런 다음 실로 고리를 만들고 안구를 약간 앞으로 당기고 눈꺼풀에서 각막을 깨끗하게 유지하기 위해 약간 단단히 짜여서 고리를 눈의 적도 위로 밀어 넣습니다. 그런 다음 carmer 안약을 각막에 바릅니다. 머리를 ganzfeld의 개구부에 놓고 가열된 플랫폼 위의 흡수성 침구 위에 쥐를 놓습니다.

그런 다음 내부 온도 프로브를 직장에 삽입하여 체온이 섭씨 37도로 유지되는지 확인하고 코드를 쥐의 꼬리에 테이프로 붙여 온도 프로브를 제자리에 고정합니다. 그런 다음 참조 전극을 뒷다리에 피하로 삽입합니다. 전극이 입에서 미끄러지는 것을 방지하기 위해 음극을 입에 단단히 놓으십시오.

연결 리드를 안정된 표면에 부착합니다. 그런 다음 양극을 각막 중앙에 놓고 미크론 매니퓰레이터를 사용하여 전극이 각막에 부드럽게 닿도록 합니다. 전극이 제자리에 놓이면 간즈펠트와 동물을 포함하여 설정된 구멍을 불투명한 재료로 덮어 어두운 적응을 보존합니다.

획득 소프트웨어에서. 샘플링 레이트로 2킬로헤르츠를 설정하고, 사전 수집 샘플링을 위해 5밀리초, 수집 시간을 100-1000밀리초로 설정합니다. 그런 다음 대역 통과 필터를 1에서 1000헤르츠로 설정하고 샘플링이 플래시 후 100밀리초 동안 트리거되는지 확인합니다.

이제 녹음 기준선을 확인합니다. 외부 노이즈가 없어야 하지만 ampliifier 노이즈 및 호흡 진동. 그런 다음 테스트 플래시를 실행합니다.

이것은 테스트 플래시에 대한 응답으로 나타나는 일반적인 ERG 파형입니다. 완료되면 동물이 10분 동안 어둠에 다시 적응하도록 합니다. 그런 다음 기준선이 안정적인 신호를 위해 다시 확인합니다.

그 후, 녹음 시작 녹음 세션이 끝나면 동물의 체온 안정성을 확인하십시오. 전극을 제거한 다음 카머 폴리머를 각막에 다시 도포합니다. 그 후, 동물이 완전히 움직이고 활동할 때까지 열 패드에서 회복한 후 동물 사육장으로 돌아갈 수 있도록 합니다.

이 그림은 어두운 적응 ERG에서 파동과 B 파의 측정을 보여줍니다. 여기에 표시된 추적은 어둡게 적응된 눈의 각막에서 T 0으로 표시된 시간에 주어진 밝은 섬광까지 기록됩니다. 파동의 진폭은 기준선에서 첫 번째 골까지 측정됩니다.

B 파의 진폭은 A 파의 저점에서 다음 양의 피크까지 측정됩니다. 지연 시간은 stimulus artifact에서 트레이스의 관심 지점(예: A 파의 저점)까지 측정됩니다. 원시 지배 ERG 신호는 광 자극이 증가함에 따라 증가합니다.

파동은 제곱미터 제곱미터당 약 0.4 로그 스코토픽 칸델라 초에서 명백해지며, 트윈 플래시 패러다임을 사용하여 혼합된 ERG 신호를 원뿔 및 막대 응답으로 분리했습니다. 일단 마스터하면. 이 기술은 30분 이내에 완료할 수 있습니다.