Name: 마우스의 반복 저산소 전처리 및 과도 중간 대뇌 동맥 폐쇄 후 신경 혈관 보호의 정량화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-04T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 48 s
Description: 학습하세요 마우스에서 반복 저산소 전처리를 통한 뇌경색 후 신경혈관 보호 효과를 정량화하는 방법을. 이중 정량화 기법은 허혈성 뇌졸중 연구에 중요한 통찰을 제공합니다.

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RHP 프로토콜 개발에 기여한 Gidday 연구소와 tMCAo 수술을 지원한 UTSW(Neuro-Models Facility)에 특별한 감사를 드립니다. 이 연구는 미국심장협회(AMS)와 해거티 뇌 손상 및 복구 센터(UTSW; AMS), 키와니스 국제공항 일리노이-동부 아이오와 지구의 경련성 마비 연구 재단(JMG).

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전신 저산소증 마우스 (즉, 2 시간 11 % O 2)에 하나의 노출은 &quot;일시적으로&quot;짧은 지속되는 저산소 전처리 도전에 후생 유전 학적 반응을 의미하는 결과 tMCAO, 29 일부터 뇌를 보호하고, 기준 표현형 내에서 복원 일. 저산소 전처리 자극의 반복 프리젠 테이션은 크게 신경 표현형의 기간을 연장. 6 많은 연구는 반복적 인 자극 열차의 빈도, 규모 및 기간이 응답의 중요한 결정 요인이라는 것을 보여 주었다. 예를 들어, 단순히 동일한 강도 및 저산소증의 지속 시간 (2 시간 11 % 산소) 주당 3 회 (MWF)이 2 이상의 결과 tMCAO 6에서 신경 혈관 보호를위한 치료 창을 확장하지 않은 주 그러나이 장기 유도하기에 충분 하였다 반복 망막 용어 허혈성 허용. (30) 흥미롭게도, 비록 전신 저산소증 (5 노출 5 시간 8 % O 2 &lt;/ 서브&gt;) 5 저산...

성인 장애와 사망의 네 번째 주요 원인의 주요 원인으로, 뇌졸중은 미국의 성인 인구가 직면 한 가장 쇠약 질병 상태 중 하나입니다. 뇌졸중의 1 동물 모델은 허혈 손상을 감소시키는 새로운 방법과 실험 조사 허용 졸중 회복을 개선시킨다. 등의 중개 연구에 대한 하나의 새로운 길을 사전 조정된다. 전처리는 후속하는, 더 심한 부상으로부터 손상을 줄이기 위해 비 손상 자극의 의도적 인 사용이다.이 저산소 전처리는 생체 내 및 시험 관내 연구에서 모두 스트로크에 대한 보호를 제공하는 뇌의다면 발현 변화를 생성하는 것으로 나타났다 . (3) 그러나, 저산소증에 하나의 노출은 성인 쥐에서 허혈에 대한 허용 오차 미만의 72 시간을 유도, 단기 신경을 제공합니다., 린 등 기압 성 저산소증에 14 시간 매일 노출의 4도 네 후 주. FO싶게 그 신경은 일주. 5 반복 저산소 전처리 (RHP) 지속 하였다는 주파수, 기간, 저산소 노출의 강도의 확률 적 변화에 의해 특징입니다. 단일 전처리 도전 달리 RHP 쥐 여덟 주까지 지속 cerebroprotective 표현형을 유도한다. 6 RHP 최종 저산소 노출 후 주 경색 부피, 혈액 - 뇌 장벽 (BBB) ​​장애, 혈관 염증 및 백혈구 diapedesis 감소 . RHP 구체적 허혈성 반구에서 B 세포 개체군을 유지하면서, T 세포, 단핵 세포 및 대식 세포 개체군을 감소시켜 허혈성 뇌의 염증을 감소시켰다.도 7은 실제로 RHP 뇌졸중을 포함한 모든 CNS 부상 전에 마우스의 면역 표현형을 유도. RHP 처리 건강한 쥐로부터 분리 RHP 처리 B 세포는 항원 제시 및 항체 생산의 하향 조절 모두에, 고유 항 염증 표현형을 나타내었다.염증성 적응성 면역 기전에 전체적인 감소뿐만 아니라 특정 CNS 염증성 질환에 대한 내인성 면역 억제를 유도하기 위하여 RHP에게 우수한 방법론하게 할뿐만 아니라 염증성 병태를 포함 전신성 상해 또는 질병 모델. 우완는 과도 중간 대뇌 동맥 폐색 (결과 tMCAO) 다음 경색 볼륨 및 BBB 중단을 모두 줄일 수 있습니다. 이러한 일반적으로 사용되는 결과 tMCAO 같이 뇌졸중 동물 모델은 극적 뇌졸중 병태 생리에 대한 이해뿐만 아니라, 더욱 효과적인 neurotherapeutics의 디자인을 향상시킬 수있다. 우선 고이즈미 총리 등의 알에 의해 개발., 1986 년, 8 결과 tMCAO 절차는 설치류에서 뇌졸중 및 재관류 다음과 같은 염증을 조사하기위한 바람직한 방법 중 하나를 유도하는 널리 사용되는 방법이다. 결과 tMCAO위한 방법들이 발전함에 따라, 실리콘 코팅 된 섬유의 최근 이용은 또 다른 모델 9,10 &lt;비교 지주막 하 출혈의 위험을 줄일/ SUP&gt; 불행하게도 결과 tMCAO 자주 경색 볼륨에 다양한 변화를 생산 불구하고, 신뢰성을 향상시킬 수있다. 11-13 이러한 연구의 대부분은 2,3,5- 트리 페닐 클로라이드 (TTC)로 염색하여 관상 뇌 부분에서 경색 영역을 서술 고려 경색 정량 금 표준은 선명한, 복제 가능한 결과를 생성하기위한 간단하고 저렴한 방법이기 때문이다. TTC는 미토콘드리아에 존재하는 탈수소 효소의 기판 역할을합니다. 뇌 조각은 TTC 용액에 노출되면 포르 마잔의 비 수용성 감소 제품, 가능한 미토콘드리아에 깊은 붉은 색 침전 경우, TTC는 선택적으로 살아있는 세포로 촬영됩니다. 때문에 허혈성 조직에서 미토콘드리아 기능 장애의,이 조직 손상과 건강한 조직의 분화를 허용, 흰색 남아있다. (14) 우완 또한 허혈성 반구에서 BBB 중단을 줄일 수 있습니다. (6) 따라서, BBB 무결성의 이중 정량화 같은 B 내에서TTC 기반 경색 볼륨과 비는 내인성 보호의 전체 효과에 대한 유용한 정보, 치료 및 치료 동물에서 BBB 중단 및 경색 사이의 잠재적 인 인과 관계를 제공 할 것 15 결정. 뇌졸중 이차 중단 BBB,,를 통해 말초 혈액의 유입은 궁극적으로 허혈성 뇌졸중 환자에서 감염과 사망률의 비율을 증가, 허혈성 반구에 백혈구 인구, 염증성 사이토 카인, 산화 스트레스, vasogenic 부종, 출혈성 변환을 증가 . 16,17 동물 모델에서 BBB 중단을 측정하는 일반적인 방법은 뇌에 에반스 청 (EB) 염색 누설 정량화 통해서이다. 15,18-21 EB 선택적 알부민, 구형 단백질 혈청에 결합 (MW = 65 kDa의) 즉 손상되지 않은 동물에 BBB를 통과하지 않습니다. (22) 허혈성 뇌졸중에 이어, EB는 뇌를 침투, 광학 밀도 withi의 측정을 허용, 620 nm에서 형광을N 관류 부상 실질. (22) 광학 밀도는 EB는 (rongeur)로하여 사후 대뇌 피질의 혈관에서 세척 된 BBB의 투과성에 직접적으로 비례한다. EB 관리와 동물 TTC 염색 뇌의 즉각적인 처리와 함께, 경색 볼륨과 BBB 중단을 모두 효과적으로 정량화 할 수있다. 이것은 신경 상해 및 BBB 붕괴가 뇌졸중 후 뇌의 프로세스가 수반되지임을 인식하여야한다, 그래서 23,24 희생의 시간의 선택은 중요한 고려 사항이다. 다음 프로토콜 RHP 방법, 임시 동맥 폐색을 유발 결과 tMCAO 방법 자세히 모델링 인간 환자에서 중간 대뇌 동맥 폐색, 신경 및 혈관 뇌졸중 손상 엔드 포인트를 결정하는 이중 조직 학적 방법. TTC는 전체 경색 부피의 정량화를 허용 세포사 누적 조직 손상을 측정매화, EB는 BBB 손상의 반구 정량을 제공한다.

<table><tbody><tr><td>유량계, 레귤레이터</td><td>VetEquip, Inc</td><td>Specialty 주문</td><td>4 개의 유량계가 6.0mm 플렉시블 PVC 튜브에 부착되어 플라스틱 암 커넥터로 각 유도 챔버의 입구 포트에 연결됩니다. 이 유량계는 6.5" x 1" x 1" 금속 막대에 볼트로 고정되어 있습니다. 이 금속 막대는 DISS 배출구가 있는 MI-246-P 압력 게이지에 볼트로 고정되어 있습니다. 이 압력계 및 유량계 장비는 렌치를 사용하여 각각의 새로운 가스 실린더에 부착할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>21% O2 탱크</td><td>AirGas</td><td>OX USP200</td><td></td></tr><tr><td>11% O2 tank</td><td>AirGas</td><td>특수 주문</td><td></td></tr><tr><td>8% O2 tank&nbsp;</td><td>AirGas</td><td>특수 주문</td><td></td></tr><tr><td>15 L 유도 챔버</td><td>VetEquip</td><td>941454</td><td></td></tr><tr><td>Moor Laber Dopper Flow&nbsp;</td><td>무어 악기&nbsp;</td><td>moorVMS-LDF1-HP</td><td>0.8 mm 직경 프로브&nbsp;</td></tr><tr><td>고강도 조명기&nbsp;</td><td>Nikon</td><td>NI-150</td><td></td></tr><tr><td>줌 스테레오 현미경&nbsp;</td><td>NIkon</td><td>SMZ800</td><td>다른 수술용 현미경을 사용할 수 있습니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>Kent Scientific Right Temperature CODA</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>단종</td><td>권장 대체품은 RightTemp 온도 모니터링 및 항상열 제어 기능이 있는 PhysioSuite(Kent Scientific, #PS-RT)입니다.</td></tr><tr><td>Hovabator 인큐베이터</td><td>Stromberg의</td><td>2362-E</td><td>우리의 모델은 2362N입니다. 2362E는 나중 모델이며 전자 온도조절기가 포함되어 있습니다.</td></tr><tr><td>V010 마취 시스템&nbsp;</td><td>VetEquip</td><td>901807</td><td>포함: 10피트 고압 산소 호스, 프레임, 유량계, 산소 플러시 어셈블리, 기화기, 호흡 회로, 챔버, 노즈콘, 폐기물 가스 배출 튜브 및 두 개의 VapoGuard 필터</td></tr><tr><td>250 ml 이소플루란&nbsp;</td><td>버틀러 샤인</td><td>NDC-11695</td><td></td></tr><tr><td>D-6 수의사 트림 동물 무선 트리머&nbsp;</td><td>안디스&nbsp;</td><td>#23905</td><td>교체용 칼날은 Andis (#23995)</td></tr><tr><td>Betadine&nbsp에서</td> 구할 수 있습니다.<td>피셔 사이언티픽</td><td>19-898-867&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Q-tips</td><td>여러 판매자&nbsp;</td><td>카탈로그 번호를 사용할 수 없음&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>거즈 패드</td><td>Fisher Scientific</td><td>67622</td><td></td></tr><tr><td>수술용 드레이프</td><td>Fisher Scientific</td><td>GM300&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>실크 봉합사&nbsp;</td><td>Look/Div Surgical Specialties</td><td>SP115</td><td></td></tr><tr><td>나일론 봉합</td>사 <td>Look/Div Surgical Specialties</td><td>SP185</td><td></td></tr><tr><td>Durmont #5 forceps (2)&nbsp;</td><td>고급 과학 도구&nbsp;</td><td>11251-35</td><td>각도 45&deg;</td></tr><tr><td>수술용 가위</td><td>파인 사이언스 도구&nbsp;</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>3mm Vannas</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>INS600177</td><td>직선 블레이드</td></tr><tr><td>Hartman Hemostats&nbsp;</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>13002-10</td><td></td></tr><tr><td>오클루딩 필라멘트</td><td>워싱턴 대학교</td><td>전문 주문</td><td>필라멘트는 워싱턴 대학교에서 실리콘 코팅되어 UTSW 시설에 유료로 제공됩니다.</td></tr><tr><td>Evans Blue</td><td>Sigma Aldritch</td><td>E2129-10G</td><td></td></tr><tr><td>여과지&nbsp;</td><td>Sigma Aldritch</td><td>WHA1001150</td><td>150mm, 원, 1등급&nbsp;</td></tr><tr><td>무게 보트</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-202-101</td><td>2.5" 직경</td></tr><tr><td>0.9% 염화나트륨 주입 USP&nbsp;</td><td>박스터 제약&nbsp;</td><td>2B1321</td><td></td></tr><tr><td>0.3 cc 인슐린 주사기와 29 게이지 바늘</td><td>Becton Dickinson Labware</td><td>309301</td><td></td></tr><tr><td>평평한 바닥 재조정기&nbsp;</td><td>브레인트리 사이언티픽&nbsp;</td><td>페이스북&nbsp; M</td><td>2.0" 직경</td></tr><tr><td>TTC</td><td>Sigma</td><td>T8877</td><td></td></tr><tr><td>10x PBS, pH 7.4</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP399-20</td><td></td></tr><tr><td>수조</td><td>다수 판매자&nbsp;</td><td>카탈로그 번호를 사용할 수 없음&nbsp;</td><td>TTC가 있는 섬광 튜브는 수조 대신 흐르는 따뜻한 물에 수동으로 고정할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>스티로폼 보드</td><td>여러 판매자&nbsp;</td><td>카탈로그 번호를 사용할 수 없음&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>대형 주사기</td><td>키트 펌프시스템 Inc</td><td>P-SYRKIT-LG</td><td></td></tr><tr><td>관류 펌프</td><td>펌프시스템 Inc</td><td>NE-300&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>60cc 주사기</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9203256</td><td></td></tr><tr><td>27 게이지 날개 주입 세트</td><td>Kawasumi Laboratories, Inc</td><td>D3K1-25G 1</td><td></td></tr><tr><td>20ml 섬광 바이알</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-367-126</td><td></td></tr><tr><td>스테인리스 스틸 주걱</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-373-25A</td><td></td></tr><tr><td>알토 아크릴 1.0mm 마우스 뇌, 관상</td><td>CellPoint 과학적&nbsp;</td><td>카탈로그 번호를 사용할 수 없음&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>0.21mm 스테인리스 스틸 블레이드, 25pk</td><td>CellPoint Scientific&nbsp;</td><td>카탈로그 번호를 사용할 수 없음&nbsp;</td><td>재사용 가능한 저온 유지 장치 블레이드는 저렴한 대안입니다.</td></tr><tr><td>4% 파라포름알데히드</td><td>산타크루즈 생명공학&nbsp;</td><td>SC-281692</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost 현미경 슬라이드&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>HP Scanjet G4050</td><td>다중 판매자&nbsp;</td><td>카탈로그 번호를 사용할 수 없음&nbsp;</td><td>다른 상용 스캐너는 프로토콜의 이 단계에 적합합니다.</td></tr><tr><td>이미지J&nbsp;</td><td>National Institute of Health</td><td>카탈로그 번호를 사용할 수 없음&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>분석 저울</td><td>Mettler Toledo&nbsp;</td><td>XSE 205U</td><td></td></tr><tr><td>정밀 소형 오븐&nbsp; &nbsp;</td><td>써모 사이언티픽&nbsp;</td><td></td><td></td>PR305225M</tr><tr><td>1.7ml 마이크로 원심분리기 튜브(Eppendorfs)</td><td>Denville Scientific&nbsp;</td><td>C2170</td><td></td></tr><tr><td>포름아미드</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP228-100</td><td></td></tr><tr><td>96-웰 플레이트</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-200-9</td><td></td></tr><tr><td>Epoch 마이크로플레이트 분광광도계&nbsp;</td><td>바이오텍&nbsp;</td><td>카탈로그 번호를 사용할 수 없음&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스의 반복 저산소 전처리 및 과도 중간 대뇌 동맥 폐쇄 후 신경 혈관 보호의 정량화

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

뇌졸중의 실험 동물 모델은 스트로크의 병리를 이해하고보다 효과적인 치료 전략을 개발하기위한 매우 중요한 도구입니다. 반복적 저산소 전처리 (RHP) 대 이주 프로토콜 국소 허혈성 뇌졸중의 쥐 모델에서 중추 신경계 (CNS) 상해에 대하여 장기간 보호를 유도한다. 우완 두 기간 (2 ~ 4 시간)와 강도 (8 %와 11 % O 2)에 따라 다릅니다 저산소증 9 확률 적 노출로 구성되어 있습니다. 우완는 내인성 중추 신경계 보호 표현형의 장기 유도를 제안, 경색 볼륨, 혈액 - 뇌 장벽 (BBB)​​ 중단 및 저산소증에 마지막 노출 다음 주 이후 행정 염증 반응을 감소시킨다. 경색 볼륨 및 BBB 중단의 이중 정량 방법은 우완 또는 다른 추정 neuroprotectants와 생쥐의 신경 혈관 보호 기능을 평가하는데 효과적이다. 성인 남성 스위스 웹스터 마우스는 21 % O로 우완 또는 기간 - 상응하는 노출에 의해 미리 조정했다 <suB&gt; 2 (즉, 실내 공기). 60 분 과도 중간 대뇌 동맥 폐색 (결과 tMCAO)은 최종 저산소 노출 다음 이주을 유도 하였다. 폐쇄 및 재관류 모두 두개 레이저 도플러 flowmetry에 의해 확인되었다. 재관류 후 스물 두 시간, 에반스 블루 (EB)를 정맥 꼬리 정맥 주사를 통해 투여 하였다. 2 시간 후, 동물을 이소 플루 란과 과량 뇌 섹션에 의해 희생시켰다은 2,3,5- 트리 페닐 테트라 졸륨 클로라이드 (TTC)로 염색 하였다. 경색 볼륨은 정량 하였다. 다음으로, EB는 결과 tMCAO 후 BBB 중단을 결정하기 위해 48 시간 동안 조직으로부터 추출 하였다. 요약하면, RHP 다른 CNS 기반 및 전신성 염증성 질환 상태에 대한 병진 전위, 마우스에서 스트로크 부상 장기 내인성 신경 혈관 보호를 유도하기 위해, 최소한의 비용으로 복제 할 수있는 단순한 프로토콜이다.

이 연구는 연령 10 주 우완으로 무작위 배정의 시작에 있었다 (N = 10) (25) 남성 스위스 웹스터 마우스 또는 21 % O 2 (N = 15) 그룹을 포함. 2 주 최종 우완 노출 후, 수술은 눈을 멀게 그룹으로 수행하고 일 사이에 카운터. 결과 tMCAO 다음, 1 마우스는 수술 후 회복 중 사망하고 재관류 CBF 기준을 충족하지 않았기 때문에 1 마우스는 연구에서 제외되었다. 모두 제외 마우스는 21 % O 2 군에서 있었다. 에 따라 지침 도착, 28 표 2는 수술 매개 변수를 보여줍니다. 간접 경색 볼륨, 반구 부종 (즉, 부종), 그리고 에반스 블루 (EB) extravasations는 모든 데이터가 짝 T-테스트 (평균, 표준 편차가 표시)로 분석 하였다. 그림 2에 표시되며, 아웃 라이어는 거짓 검색 속도 검출 4 이상 값을 제거 1 % (을 Graphpad 프리즘), 이하 (2 21 %, RHP 2)...

이 프로토콜은 마우스의 일시적인 중대뇌동맥 폐색 후 경색 부피와 혈액-뇌 장벽 파괴를 감소시키는 반복적인 저산소증 전조건화 또는 전신 저산소증에 대한 짧은 노출을 설명합니다. 또한 신경혈관 보호의 효능을 평가하기 위해 뇌졸중 후 경색 용적과 혈액-뇌 장벽 파괴의 이중 정량화에 대해 자세히 설명합니다.

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...

다음 실험의 전반적인 목표는 경색 부피와 혈뇌장벽(blood brain barrier) 무결성을 동시에 측정하여, 반복적 저산소 사전처리(repetitive hypoxia preconditioning, RHP) 이후의 신경 보호 효과를 정량화하는 것입니다. 이는 뇌졸중으로부터 신경혈관 보호 기능을 제공하기 위해 지속 시간과 강도가 서로 다른 9회의 무작위 저산소 노출을 마우스에게 가함으로써 수행됩니다. 그 후 마우스에 뇌졸중을 유도하고 에반스 블루(Evan's blue)를 주입합니다.Evans blue는 알부민과 선택적으로 결합하여, 동물 희생 후 주입을 통해 혈뇌장벽 손상 정도를 정량화할 수 있게 합니다. 뇌를 적출하고 TTC로 염색하여 경색 부피를 정량화합니다. 결과는 반복적인 저산소성 사전조건화가 허혈성 뇌졸중 모델 마우스에서 신경 보호 효과가 있음을 보여줍니다.단일 노출 저산소 사전처리와 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 RHP가 생쥐에서 최소 8주 동안 신경 보호 효과를 생성한다는 점입니다. 이 이중 정량화 방법은 혈뇌장벽 붕괴 시 경색 부피를 동시에 측정하는 방법과 같이 뇌졸중 연구의 핵심 질문에 답할 수 있습니다. 이 방법은 허혈성 뇌졸중에 대한 통찰력을 제공하는 데 사용될 수 있을 뿐만 아니라, RHP는 다른 중추신경계 기반 및 전신성 염증성 질환 상태에도 적용될 수 있습니다. 시작하려면 생쥐를 두 그룹으로 나눕니다.8% 및 11% 산소에 노출되는 RHP 군과 동시에 21% 산소에 노출되는 대조군에 대하여, 각 케이지의 상단 필터 덮개를 제거하고 사료 및 물병이 들어있는 상태의 케이지를 각각의 산소 탱크와 연결된 챔버에 넣습니다. 챔버의 덮개를 닫고 고정합니다. 탱크의 메인 가스 밸브를 열고 각 유도 챔버의 초기 유량을 2 liters per minute 또는 LPM으로 설정합니다.5분 동안 노출시킨 후, 남은 노출 시간 동안 유량을 1 LPM으로 줄입니다. 노출이 끝나면 유량을 0 LPM으로 줄이고 가스 밸브를 닫습니다. 탱크의 경우입니다.챔버 덮개를 열고 각 케이지의 필터 상단 덮개를 교체하십시오. 다음 저산소 노출 시까지 케이지를 표준 사육 환경에 두십시오. 매 사용 후에는 각 유도 챔버를 소독제와 탈취제로 분무 소독하십시오.프로토콜의 2주 과정 동안 RHP군과 대조군 마우스를 매일 같은 시간에 노출시키십시오. 그런 다음 본문에 설명된 대로 일시적 중대뇌동맥 폐쇄(tMCA

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의학

증거가 축적되고, 그 허혈 (PC) - 뇌에 대한 비 손상 허혈성 도전 - 후속 손상 허혈성 모욕을 과도 전압 보호 기능을 부여. 우리는 C57BL6 / J 생쥐의 일시적인 국소 대뇌 허혈 (중간 대뇌 동맥 폐색, MCAO에 의한)에 초기 허혈 내성 (IT) 유도 컨디셔닝 자극으로 양측 경동맥 폐색 (BCCAO)를 설립했다.

초점 대뇌 국소 빈혈에 조기 허혈성 공차를 유도하기 위해 적절한 전처리 자극으로 양측 경동맥 동맥 폐색

출처: Zheng, Y., et al. 뇌허혈에 대한 산성 사후 조절의 신경 보호를 연구하기 위한 실험 모델. J. Vis. 경험. (2017년)이 비디오는 중대뇌동맥폐색(MCAO)의 마우스 모델에서 허혈성 손상에 대한 신경 보호 효과를 평가하기 위해 산성 사후 컨디셔닝(APC)의 적용을 보여줍니다. MCAO 모델에서 재관류와 관련된 단계와 흥분 독성, 산화 스트레스 및 신경 사멸을 완화하기 위한 재관류 중 APC의 적용을 간략하게 설명합니다.

 뇌허혈의 마우스 모델에서 산성 사후 컨디셔닝의 신경 보호 효과 평가

출처: Poinsatte, K., et al., 마우스의 반복적인 저산소 전처리 및 일시적인 중대뇌 동맥 폐색에 따른 신경혈관 보호의 정량화. J. Vis. 경험. (2015년)이 비디오는 허혈성 뇌졸중을 유발하기 전에 제어된 저산소증 주기에 마우스를 노출시켜 반복적인 저산소 전처리(RHP) 방법을 보여줍니다. 이 실험은 혈액-뇌 장벽 안정성, 신경 적응 및 염증에 미치는 영향을 평가합니다.

마우스의 반복적 저산소 전처리에 대한 신경 적응

출처: Lee, SE, et al. 일시적인 중대뇌동맥 폐색 마우스 모델을 사용하여 Glycyrrhizae Radix et Rhizoma 추출물의 신경 보호 효과 평가. J. Vis. 경험. (2018년)이 비디오는 중대뇌동맥 폐색 마우스 모델에서 테스트 화합물의 신경 보호 효과를 평가하는 절차를 보여줍니다. 이 화합물은 뇌에 들어가 신경 사멸을 예방하고 경색 부피를 줄여 치료되지 않은 마우스에 비해 신경 보호 효과를 확인합니다.

중대뇌동맥 폐색 마우스 모델에서 시험 화합물의 신경 보호 효과 평가

뇌졸중의 병태 생리를 이해하기 위해, 신뢰할 수있는 모델을 사용하는 것이 중요하다. 마우스에서 가장 자주 사용되는 뇌졸중 모델 중 하나를 설명한다 본 논문의 중간대 뇌동맥 폐색 (MCAO) 모델이라 재관류 (또한 관내 또는 필라멘트 봉합사 모델 지칭).

마우스의 중간 대뇌 동맥 폐색 및 재관류 유도 스트로크에 대한 수술 적 접근

말단 중간 대뇌 동맥 분기 (MCAO)의 수술 폐색 실험 뇌졸중 연구에서 자주 사용하는 모델입니다. 이 논문은 마우스에서 생체 내에 길이 현미경을위한 기회를 제공하는 측의 두개 창에 삽입, 결합 영구 MCAO의 기본적인 기술을 설명한다.

측면 만성 두개골 창 준비 활성화 생체 마우스의 말초 중간 대뇌 동맥 폐색에 따라 관측

우리는 실리콘으로 코팅된 봉합사를 사용하여 중대뇌동맥의 폐색에 의해 유도된 뇌졸중의 마우스 모델을 설명합니다. 이 프로토콜은 영구적인 폐색 또는 일시적인 허혈을 유도한 후 재관류를 유도하는 데 적용할 수 있습니다.

경색 지역의 중간 동맥 폐색 기술 및 시각화를 사용하여 마우스의 허혈성 뇌졸중 및 허혈 - 재관류 유도

산성 후 조절은 뇌 허혈을 예방합니다. 여기서는 APC를 실행하는 두 가지 모델을 제시합니다. 이들은 시험 관내에서 산소 - 글루코스 부족 후에 산성 버퍼 corticostriatal 슬라이스를 전달함으로써 생체 내에서 중간 대뇌 동맥 폐색 후 20 % CO 2 흡입에 의해 각각 달성된다.

대뇌 허혈에 대한 산성 후행 조절의 신경 보호를 연구하기위한 실험 모델

대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 마우스 모델 선의 이상 조사를 설립 하다. 우리는 distally 오른쪽 중간 대뇌 동맥과 바로 일반적인 경 동맥 선 하 고 국 소 빈 혈의 10 또는 40 분 후 혈액 흐름을 복원.

대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 2 배 폐색 마우스 모델

이 프로토콜은 중뇌동맥의 내강 내 폐색을 통한 마우스의 일시적인 국소 대뇌 허혈 모델을 설명합니다. 또한 자기 공명 영상 및 행동 테스트를 사용하여 결과 평가의 예를 보여줍니다.

뇌졸중의 일시적인 중뇌동맥 폐색 모델

여기에서는 C57BL/6J 마우스에서 경두개 전기응고를 통해 원위 중뇌동맥 폐색(dMCAO) 모델을 확립하고 후속 신경학적 행동 및 조직병리학적 특징을 평가하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

원위 중동맥 폐색 기법을 사용한 마우스의 급성 허혈성 뇌졸중 유도

학습하세요 마우스에서 반복 저산소 전처리를 통한 뇌경색 후 신경혈관 보호 효과를 정량화하는 방법을. 이중 정량화 기법은 허혈성 뇌졸중 연구에 중요한 통찰을 제공합니다.

마우스의 반복 저산소 전처리 및 과도 중간 대뇌 동맥 폐쇄 후 신경 혈관 보호의 정량화

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