Name: 같은 산소 포도당 박탈과 재산 소화 체외 허혈 - 재관류 손상 모델 공부 뇌 혈관 장벽 부전 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 56 s
Description: 학습하세요 산소-포도당 박탈 및 재산소화를 이용한 체외 허혈-재관류 손상 모델로 뇌혈관장벽 기능 장애를 연구하는 방법입니다. 면역형광 염색과 공초점 현미경을 통해 세포 구조 변화를 분석할 수 있습니다.

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우리는 재정 지원을 위해 스콧과 백인 병원 연구 보조금 프로그램을 인정하고 텍사스 A &amp; 공 초점 레이저 현미경의 사용에 대한 의학 통합 이미징 연구소의 M 건강 과학 센터 대학. 우리는 원고 편집에 대한 도움말 씨 글렌 Cryer을 인정합니다.

내피 세포의 1. 시드 <ol><li> 성인 스프 라그 돌리 쥐에서 RBMEC의의 차 문화를 얻습니다 (또는 상업적를 얻을). </li><li> 100cm의 피브로넥틴 (50 μg의 / ㎖) 래트 뇌 내피 세포 성장 배지를 사용하여 코팅 된 배양 접시에서 배양을 RBMECs. 포화 상태에 도달 할 때까지, 매 2 일 매체를 변경합니다. </li><li> 80-90%의 포화 상태에 도달에서 부드럽게 소용돌이 5 ml의 인산염 완충 식염수 (PBS)에있는 세포를 씻으십시오. 세포를 37 ° C로 평형화 따뜻한 0.25 % 트립신 에틸렌 디아민 테트라 아세트산 (EDTA) 용액 1 ㎖, 그들을 노출시킴으로써 분리된다. </li><li> 세포를 분리 및 분산 될 때까지 2-5 분 동안 37 ℃에서 세포를 배양한다. 참고 : 세포를 분리 배양 접시를 누릅니다. 현미경보기 세포 접시의 표면으로부터 세포의 완전한 분리를 확인하기 위해. </li><li> 트립신을 중화하기 위해 페트리 접시에 5 ml의 완전한 미디어를 추가합니다.분리 된 세포를 함유하는 배지를 피펫 및 15 mL의 원심 분리 튜브로 수집. . </li><li> 5 분 동안 220 XG에서 내피 세포를 포함하는 미디어를 원심 분리기. </li><li> 뜨는을 대기음 후 자동 세포 계수기 또는 혈구를 사용하여 계산됩니다 피펫 세포와 부드럽게를 혼합하고 아래로 3-5 ml의 신선한 쥐의 뇌 내피 세포 성장 매체에 cells.Suspend에게 펠렛을 함유 펠렛을 유지합니다. </li><li> 물론 당 10,000-15,000 세포 사이의 범위 파종 밀도 / 웰, 8 아니라 멸균 챔버 슬라이드 시스템 프리 코트 피브로넥틴 (50 μg의 / ㎖)에 0.7 cm (2) 세포 현탁액을 전송합니다. 합류가 될 때까지 37 ℃에서 세포를 성장 주 : 실험에 의해 필요에 따라 웨스턴 블롯 또는 다른 실험을 수행하기 위해, 셀은 10cm의 세포 배양 접시 나 특별한 요리에서 성장 될 수있다. </li></ol> 2. 산소와 체외에서 포도당 박탈 - 재산 소화모델 참고 : 다음 프로토콜 Zulueta 등의 알에서 적응하고있다. 1997; 주홍 H 등. 2012 8,9. <ol><li> 에 RBMECs에 OGD-R의 효과를 (그림 1 참조) 공부 저산소 세포 배양 시스템을 사용합니다. 설치 및 제조자의 지시에 따라서, 실험을 시작하기 전에 저산소증 세포 배양 시스템을 교정. </li><li> 37 ° C 배양기에서 합류 챔버 슬라이드 (단계 1.8)를 제거합니다. 탈산 소화와 챔버 슬라이드에서 완전 배지를 교체에는 글루코스, 둘 베코 변형 이글 배지 (DMEM), 37 ° C에서 2 시간 동안 95 %, N (2) 및 5 % CO 2로 저산소증 챔버 내에 배치는 OGD 상태를 나타내는 없음. </li><li> 37 ° C에서 95 % O 2, 5 % CO 2 인큐베이터로 세포를 이동하고 신선한 쥐의 뇌 내피 세포 완전한 매체와 함께 제공하고, 37 ℃에서 1 시간 동안 배양한다. 참고 :이 단계는 재산 소화 상황을 나타냅니다. </li><li> 면역 현지화 및 로다 민 팔로이 딘 라벨링 챔버 슬라이드를 사용하여 (제 3 장 참조). </li></ol> 로다 민 Phalloidin의 사용 ZO-1과 F 액틴 라벨링 3. 면역 형광 현지화 <ol><li> 잘 1 시간 동안 OPTI-MEM / 감소 된 혈청 미디어 / 100 ㎕에 RBMEC의 단일 층을 포함하는 챔버 슬라이드를 노출. 인산염 완충 식염수 (PBS, pH를 7.0-7.2) 100 ㎕에 챔버 슬라이드 3 회 반복한다. </li><li> (PH 7.0-7.2)를 15 분 동안 PBS에 (PH 7.0-7.2)을 4 % 파라 포름 알데히드 100 μl를 사용하여 세포를 수정하고 PBS로 3 번 이상 챔버 슬라이드를 씻는다. </li><li> 또 다른 15 분 동안 PBS에서 0.5 % 트리톤 X-100 100 ㎕ (pH가 7.0-7.2)를 사용하여 세포를 Permeabilize 하시려면. 시간 동안 PBS에 2 % 소 혈청 알부민 (BSA) 100 ㎕로 차단. ZO-1 또는 F-액틴에 대해이 단계 중 하나를 얼룩 / 라벨 세포 중 하나 후. <ol><li> 면역 역을 위해150, 4 ℃에서 N / O 2 % BSA-PBS에서 제조 : ining 1에 ZO-1에 대하여 항 - 토끼 항체와 함께 일차 세포를 배양한다. , PBS로 세포에게 (PH 7.0-7.2)을 3 회 반복한다. 플루 오레 신 이소 티오 시아 네이트 (FITC) 100 ㎕와 함께 인큐베이션은 실온에서 1 시간 동안 항 - 토끼 이차 항체를 -tagged. </li><li> 로다 민 Phalloidin의 라벨링, 블로킹 다음, 20 분 동안 2 % BSA-PBS에서 제조 1:50 희석 로다 민 팔로이 딘 100 ㎕에 세포를 노출. </li><li> 면역 형광 염색과 PBS에서 로다 민 팔로이 딘 라벨, (PH 7.0-7.2)에서 세포를 씻으십시오. DAPI와 안티 - 페이드 시약을 포함하는 설치 미디어를 사용하여 챔버를 탑재합니다. </li></ol></li><li> 60 X 물 침지 렌즈를 사용하여 세포를 시각화하고 세포를 공 초점 현미경으로 단일 광학 평면에 스캔됩니다. </li></ol>

<ol><li>Eltzschig, H. K., Eckle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia+and+reperfusion--from+mechanism+to+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Ischemia and reperfusion--from mechanism to translation.</a> Nat Med. 17 (11), 1391-1401 (2011).</li>
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허혈 - 재관류 손상에 대한 생체 외 모델로 OGD-R은 잘 신경 세포 (10, 11)을 공부 설립되었습니다. 투과도 및 TJ 무결성 9 뇌 내피 세포 및 변경에 OGD의 효과를 나타내는 연구가있다. 그러나, 우리의 연구는 다음과 같은 허혈성 뇌졸중 발생 생체 조건에서 허혈성 재관류 손상에 가까운 표현이다 OGD의 효과뿐만 아니라 재산 소화를 보여줍니다. 저산소 허혈 조건 세포층 투과성 vasogenic 부종 4를 증가시킴으로써 중단 BBB 선도, 중추 신경계의 염증을 유도하는 것으로 알려져있다. 재관류 손상은 세포 외 칼륨, 흥분성 신경 전달 물질, 및 내피 신경 부종, 면역 세포 활성화의 방출 상승, 과도한 활성 산소 종 생산, ATP가 고갈되는 매우 복잡하고 역동적 인 과정이다. 이,에서 턴 C, 생산, 클레아 제와 단백질 분해 효소의 유도 사이토 카인로 이어지는 다양한 카스파를 ...

허혈 재관류 (IR)은 부상 뇌졸중, 심근 경색, 외상, 말초 혈관 질환, 외상성 뇌 손상과 관련된 다양한 1,2- 쇠약 합병증 및 사망의 원인으로 자주 발견된다. 뇌 혈관 IR 부상 염증과 부종 3에 이르는 초기 보조 부상입니다. 산화 및 염증 다음 대사성 스트레스의 결과로서 발생하는 합병증의 하나는 항상성 자유 라디칼 형성에 주요한 균형, 혈액 - 뇌 장벽의 변화 (BBB) ​​단단한 접합부 (TJS) 및 미세 혈관 투과성 4,5의 손실이다. 현재, BBB에 IR 손상의 효과를 연구하기 위해 사용되는 생체 내 모델에서 중간 대뇌 동맥 폐색 (MCAO) microembolism 및 트랜스 제닉 또는 녹아웃 동물을 포함한다. Hossmann 6 논의 그러나, 각각의 단점과 한계가있다. MCAO 모델은 effec을 연구하는 데 사용됩니다산화 환원 스트레스의 TS, BBB의 접합부 통신의 변화와 뇌와 면역 세포 사이의 상호 작용. 그러나, 이들은 그러한 내부에 정밀한 미세 수술 절차 및 어려움에 대한 요구와 같은 다양한 기술적 과제를 제시한다. 뇌허혈을 연구하는 유전자 변형 또는 녹아웃 동물의 사용이 경색 형성에 유전자에 의존하는 분자의 영향, 혈관 해부학의 변화와 다양한 체중 (6)과 같은 문제가있을 수 있습니다 동안 Microembolism는 순간적으로 BBB를 분해. 따라서, 허혈의 체외 모델은 의약품에 대한 역학적 연구를 수행하는 그들의 적용에 주로 최근에 관심을 증가 발견했다. 그러나, 시험관 연구의 결과는 완전히 생체 연구를 나타내지 있으므로 취급시주의를 6으로 해석해야합니다. 내피 세포의 단층 및 미세 혈관 투과성이 낮은 산소 농도의 반작용 효과가 있었다오가와 (7)에 의해 연구. 쥐의 뇌 미세 혈관 내피 세포 (RBMECs)는 체외 BBB을 개발하는데 사용되었다. 이 프로토콜에 제시된 산소 포도당 박탈과 재산 소화 (OGD-R) 기술은 Zulueta 등의 알과 주홍 등 8,9에 의해 연구에서 적용되고있다. 우리는 0 % O 2, 5 % CO 2 및 95 % N 2를 포함하는 저산소증 / 무산소 증 챔버에 넣어서 OGD-R에 뇌 내피 세포를 노출시켰다. 세포는 나중에 각각 면역 현지화 및 로다 민 팔로이 딘 라벨을 사용하여 TJ 무결성 및 스트레스 섬유 형성의 변화에​​ 대해 평가 하였다. zonula occludens-1의 (ZO-1)의 면역 형광 염색 ZO-1과 같이, TJ의 무결성을 판단하기 위해 수행된다 TJ 단백질 결합에 중요한 발판 막이다. 로다 민 Phalloidin의 라벨링은 세포 골격의 사상 액틴 수 (F- 액틴)를 결정하고, 내피 세포에서 액틴 스트레스 섬유 형성의 명확한 표시이다. &lt;P 클래스 = &quot;jove_content는&quot;&gt;이 방법의 목적은 BBB 내피 세포 TJ 무결성 및 F 액틴 스트레스 섬유 형성을 연구하기위한 생체 외 IR 모델로서 OGD-R의 개발에 대한 통찰력을 제공하는 것이다. 결과는 TJ 단백질의 운명에 대한 정보를 제공, ZO-1, R-OGD 다음 스트레스 섬유 형성한다. 이러한 관계를 이해하는 것은 OGD-R을 다음 트리거되는 기본 분자 메커니즘을 결정하고 OGD-R 처리 다음 BBB 중단을 향상시키기 위해 잠재적 인 치료 전략을 개발 할 수있는 기회를 제공 할 것입니다.

<table><tbody><tr><td>Proox 모델 110</td><td>Biospherix</td><td>모델 110</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, 포도당 없음</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>11966-025</td><td></td></tr><tr><td>Rhodamine Phalloidin</td><td>Life Technologies</td><td>R415</td><td></td></tr><tr><td>ZO-1 Rabbit Polyclonal Antibody</td><td>Life Technologies</td><td>617300</td><td></td></tr><tr><td>Nunc Lab Tek II-CC 8&nbsp; 잘 살균, 유리&nbsp; 슬라이드&nbsp;</td><td>Thermo scientific</td><td>177402</td><td></td></tr><tr><td>FITC-tagged anti-rabbit secondary antibody&nbsp;</td><td>산타크루즈</td><td>sc-2090</td><td></td></tr><tr><td>DPBS 1X</td><td>써모 사이언티픽</td><td>SH 30028.03</td><td>사용 가능한 다른 PBS를 사용할 수 있습니다</td></tr></tbody></table>.

같은 산소 포도당 박탈과 재산 소화<em&gt; 체외</em&gt; 허혈 - 재관류 손상 모델 공부 뇌 혈관 장벽 부전

Oxygen-Glucose Deprivation and Reoxygenation as an In Vitro Ischemia-Reperfusion Injury Model for Studying Blood-Brain Barrier Dysfunction

허혈 재관류 (IR)는 부상 허혈성 뇌졸중과 관련된 이환율과 사망율에 크게 기여하는 것으로 알려져있다. 허혈성 뇌 혈관 사고는 모든 뇌졸중의 80 %를 차지한다. IR 부상의 일반적인 원인은 활성 산소의 형성을 유발 조직에 혈액, 영양소, 산소의 급성 / 만성 폐색 다음과 같은 유체의 급속한 유입이다. 허혈성 뇌졸중은 혈액 - 뇌 장벽 (BBB)​​ 부전 vasogenic 뇌부종 따른다. 구조적으로, 혈관 내피 세포 간의 긴밀한 접합 (TJS)은 혈액 - 뇌 장벽 (BBB)​​의 무결성을 유지하는데 중요한 역할을한다. IR 부상이 아닌 특정 염증 반응으로 이어지는 초기 보조 부상입니다. 염증 다음 산화 및 신진 대사에 영향을 미치는 스트레스는 BBB 투과성 꽉 접합 (TJ) 무결성의 중단을 포함하여 보조 뇌 손상을 트리거합니다. 우리의 프로토콜은 체외 제공 &lt;/ EM&gt; 쥐 뇌 내피 세포 TJ 무결성 및 스트레스 섬유 형성에 산소 - 글루코스 손실과 재산 소화 (OGD-R)의 예. 현재 생체 내 모델에서 여러 실험은 IR 손상의 효과를 연구하기 위해 사용된다; 그러나 그들은 이러한 기계적인 관계를 공부 수술, 유전자 따라 분자의 영향과 어려움을 수행함에있어 기술적 문제 등 여러 가지 한계를 가지고. 그러나, 체외 모델은 그 많은 한계를 극복하는 데 도움이 있습니다. 제시된 프로토콜은 잠재적 인 치료 전략을 제공하는 다양한 분자 메커니즘 및 기계적인 관계를 연구하기 위해 사용될 수있다. 그러나, 체외 연구 결과는 생체 내 연구에서 표준과 다를 수 있습니다주의를 해석되어야한다.

피브로넥틴 프리 코트 눈크 II 챔버 슬라이드에 배양 한 세포를 Biospherix ProOx 모델 (110)에 실 어서 OGD-R을 행 하였다. 로다 민 팔로이 딘 얼룩 라벨을 사용하여 F-액틴 스트레스 섬유 형성을 나타내는도 2와 골격 조립체에 도시 된 바와 같이도 3에 도시 된 바와 같이 OGD-R에 셀을 실시 후, 그들은 면역 형광 기술을 사용하여 ZO-1 접합부 염색을 위해 처리 하였다. 있었다 대조군 세포를 OGD-R 실시 내피 세포 TJ 무결성도 2의 손실을 나타내는, 불연속 접합을 보였다 OGD-R을받지 않는 지속적인 접합부 무결성 없었다. OGD-R 처리를 실시하지 않은 대조군 세포는 전혀 또는 최소한 F 액틴 스트레스 섬유 나타났다 형성 OGD-R을 실시 내피 세포는 액틴 세포 골격 조립도 3의 변화를 나타내는 증가 된 F 액틴 스트레스 섬유 형성을 증명하면...

Ischemia-Reperfusion (IR) 손상은 높은 이환율 및 사망률과 관련이 있습니다. 여기에 설명된 산소-포도당 결핍 및 재산소화(OGD-R)의 체외 모델의 목표는 다양한 세포, 특히 혈액-뇌 장벽(BBB) 내피 세포에 대한 허혈 재관류 손상의 영향을 평가하는 것입니다.

Ischemia-Reperfusion (IR) injury is known to contribute significantly to the morbidity and mortality associated with ischemic strokes. Ischemic ...

본 실험 과정의 전반적인 목표는 혈뇌장벽 기능 장애 연구를 위한 인비트로(in vitro) 허혈 재관류 손상 모델로서 산소-포도당 결핍의 역할을 입증하는 것입니다. 이는 챔버 슬라이드에서 배양된 뇌 혈관 내피세포의 배지를 탈산소화된 무포도당 배지로 교체하고 저산소 챔버 환경에 2시간 동안 노출시켜 산소-포도당 결핍 상태를 유도한 후, 세포를 다시 정상 조건으로 1시간 동안 되돌려 재산소화를 유도함으로써 수행됩니다. 세포 처리 후, ZO-1의 면역형광 염색과 필라멘트성 액틴의 로도민-팔파린 표지가 진행됩니다.그 후 공초점 현미경의 60 x 수침 렌즈를 사용하여 세포를 촬영함으로써 분석을 위한 단일 광학 슬라이스를 얻습니다. 이 절차의 시연은 본 연구실의 대학원생인 hem nega가 진행합니다. 절차를 시작하기 위해 성체 spra dolly 쥐에서 유래한 일차 배양 RBM eecs를 준비하십시오. 상용화된 세포주를 사용해도 무방합니다.피브로넥틴이 코팅된 100 centimeter 디쉬에서 R BM EECS를 배양하며, 쥐 뇌 내피세포 성장 배지를 사용하고 격일로 배지를 교체합니다. 세포가 80에서 90%까지 밀집될 때까지 배양합니다. 그 후 5 milliliters의 PBS로 세포를 부드럽게 세척합니다.다음으로, 0.25% trypsin EDTA 용액 1 mL를 가하고 플레이트를 회전시켜 세포를 플레이트에서 분리합니다. 그런 다음 세포를 2~5분 동안 배양합니다. 디시의 측면을 가볍게 두드려 세포의 분리를 촉진하고, 현미경으로 관찰하여 세포가 완전히 분리되었는지 확인합니다.트립신 처리를 종료하려면 완전 배지 5 mL를 추가한 다음, 분리된 세포가 포함된 배지를 피펫으로 추출하여 15 mL 원심분리 튜브에 수집합니다. 세포가 포함된 배지를 220 G에서 5분 동안 원심분리하고, 상층액을 흡입하여 제거합니다. 그 후, 5 mL 피펫을 통해 세포를 부드럽게 흘려보내어 세포 펠릿을 3~5 mL의 신선한 배지에 재부유시킵니다.이제 세포 수를 측정하고 피브린과 액틴이 코팅된 8웰 챔버 슬라이드의 각 웰에 20,000에서 30,000개의 세포를 분주합니다. 물론, 다른 용도에 따라 다르게 배양할 수도 있습니다. 그런 다음 세포가 합류(confluent) 상태가 될 때까지 챔버 슬라이드를 배양하여 준비합니다.저산소 세포 배양 시스템을 설치하고 교정합니다. 제조업체의 지침에 따라 챔버 환경은 95% 질소, 5% 이산화탄소, 37 °C로 설정해야 합니다. 이제 포도당이 없는 DMEM을 저산소 챔버에 4~6시간 동안 두어 탈산소화합니다.세포의 배지를 탈산소화된 포도당 무첨가 DMEM으로 교체하고, 세포를 저산소 챔버에 2시간 동안 두어 스트레스를 주기 시작합니다. 2시간 후, 세포를 다시 쥐 뇌 혈관 내피 세포 완전 배지로 옮깁니다. 그 다음, 세포를 일반 조건으로 1시간 동안 되돌려 재산소화합니다.R-B-M-E-C 단일층의 각 웰에 100 to 200 µL의 최적화된 환원 혈청 배지를 처리하고 1시간 동안 더 배양합니다. 그런 다음 웰당 100 to 200 µL의 PBS를 사용하여 챔버 슬라이드를 3회 세척합니다. PBS에 희석된 4% paraldehyde로 세포를 고정하고 실온에서 15분 동안 배양한 후, 이전과 동일하게 PBS로 세포를 3회 세척합니다.이제 각 웰에 PBS에 희석된 0.5% Triton X 100 100~200 µL를 가하여 세포를 투과성 있게 만들고, 플레이트를 상온에서 15분 동안 더 배양합니다. 세포 투과화가 완료되면 블로킹 용액을 처리하고 상온에서 1시간 동안 세포에 작용하도록 둡니다. 그 다음, ZO-1 단백질에 대해 면역형광 염색을 수행하거나 F-actin을 염색합니다.ZO-1에 대한 세포 면역형광 염색을 수행하려면, 1차 항체와 함께 4°C에서 하룻밤 동안 배양하십시오. 다음 날, 고정액을 제거할 때와 마찬가지로 PBS로 세포를 세 번 세척합니다. 그 후, FITC가 표지된 anti-rabbit 2차 항체 100~200 µL에서 실온으로 한 시간 동안 배양하여 세포를 rhodamine-phalloidin으로 표지합니다.블로킹 용액을 1시간 동안 처리한 후, 2% B-S-A-P-B-S로 1:50으로 희석한 R domine Phin 100에서 200 µL를 세포에 20분 동안 처리합니다. 2차 항체 또는 R domine Phin 배양 후, 이전과 동일하게 PBS로 세포를 3회 세척합니다. 그런 다음 탄성체를 벗겨내어 챔버를 제거합니다.anti-fade가 포함된 봉입제를 사용하여 슬라이드를 마운팅하고 DPI 이미지를 획득합니다. fibronectin이 코팅된 챔버에서 배양한 세포를 60 x 대물렌즈를 사용하여 단일 평면에서 공초점 현미경으로 관찰합니다.슬라이드를 저산소 챔버에 넣어 OGDR을 처리했습니다. 앞서 설명한 방법대로 진행하였습니다. 이후 ZO-1 junctional 분석을 위해 세포를 처리했습니다.염색된 대조군 세포는 지속적인 접합부 무결성을 보인 반면, 산소 및 포도당 결핍 세포는 불연속적인 접합부를 나타냈습니다. 또한, F actin을 시각화하기 위해 phalloidin으로 라벨링하여 세포골격의 변화를 관찰했습니다. 스트레스 섬유 형성의 경우, 대조군 세포에서는 F actin의 스트레스 섬유 형성이 없거나 최소한이었으나, OGDR 처리를 거친 세포에서는 스트레스 섬유 형성이 증가했습니다.이 영상을 시청한 후, 여러분은 산소 및 포도당 결핍 및 재산소화(oxygen, glucose deprivation and reoxygenation)를 수행하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 이는 혈뇌 장벽, 밀착 연접의 무결성 및 스트레스 섬유 형성을 연구하기 위한 허혈-재관류 손상 모델로 활용될 수 있습니다.

oxygen-glucose-deprivation-reoxygenation-as-an-vitro-ischemia

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

출처: Alluri, H., et.al. 혈액-뇌 장벽 기능 장애를 연구하기 위한 체외허혈-재관류 손상 모델로서의 산소-포도당 결핍 및 재산소화. J. Vis. 특급 (2015). 이 비디오는 저산소 및 영양 결핍 상태를 시뮬레이션하여 산소-포도당 결핍 및 그에 따른 재산소화가 쥐의 뇌 미세혈관 내피 세포(RBMEC)에 미치는 영향을 보여줍니다. 이러한 상태는 ATP 고갈, 세포 내 칼슘 증가, 반응성 산소종(ROS)의 생성을 초래하여 세포 접합 단백질을 분해하고 스트레스 섬유 형성을 유도하여 세포 간 상호 작용을 약화시킵니다.

산소-포도당 결핍 및 재산소화가 세포-세포 상호작용에 미치는 영향

전신 저혈압과 함께 양측 경동맥 폐색 재현 심각도 해마에 손​​상 쥐 세계적인 뇌 허혈을 생산하고 있습니다. 동물의 주제는 뇌 손상의 예측 패턴 장애인, 그들은 적당하게 복구하고, 사망률은 상대적으로 낮다.

2 혈관 폐색 / 저혈압 : 세계적인 두뇌 국소 빈혈의 쥐 모델

체외에서 외상성 뇌 손상 모델은 생체 뇌의 변형으로 재현하기 위해 개발되고있다. 스트레치에 의한 손상은 성상 세포, 뉴런, glial 세포, 대동맥, 뇌 혈관 내피 세포에 대한 고용되었습니다. 그러나 우리의 시스템은 체외 TBI 모델을 설정하는 BBB의 합법적 인 모델을 구성하는 속성을 가지고 혈액 뇌 장벽 (BBB) ​​모델을 사용합니다.

로 뇌 미세 혈관 내피 세포 (CEnd를)에 기지개<em&gt; 체외</em혈액 뇌 장벽의&gt; 외상성 뇌 손상 모델

허혈성 뇌 손상의 여러 측면을 재생할 수 있습니다 entorhino - 해마의 Organotypic 슬라이스 문화에 대한 프로토콜은 제공됩니다. 신경 세포의 변화에​​ 더하여 neurovasculature의 변화를 연구함으로써,이 프로토콜은 손상 후 신경 조직 플라스틱 변화를 연구하는 다양한 도구입니다.

에서 신경 혈관 리모델링의 분석 Entorhino - 해마 Organotypic 슬라이스 문화

이 프로토콜은 마우스의 일시적인 중대뇌동맥 폐색 후 경색 부피와 혈액-뇌 장벽 파괴를 감소시키는 반복적인 저산소증 전조건화 또는 전신 저산소증에 대한 짧은 노출을 설명합니다. 또한 신경혈관 보호의 효능을 평가하기 위해 뇌졸중 후 경색 용적과 혈액-뇌 장벽 파괴의 이중 정량화에 대해 자세히 설명합니다.

마우스의 반복 저산소 전처리 및 과도 중간 대뇌 동맥 폐쇄 후 신경 혈관 보호의 정량화

허 혈 성 뇌졸중 공부 하기 어려운 어떤 영향을 받는 뇌 영역에 이다의 구체적인 기여 산소 포도 당 부족 (지도부)에 노출 하는 복잡 한 이벤트입니다. 이 문서는 고립 된 이다 그들의 반응성 및 확산 지도부 조건 하에서 연구 하는 방법론을 소개 합니다.

사이토 반응성 및 확산에서 체 외에 허 혈 성 같은 조건 모니터링

프로토콜의 목표는 생체 외에서 혈액-뇌 장벽 (BBB) 기반 모델 기본 돼지 뇌 내 피 세포 (pBECs)의 설립에 대 한 최적화 절차를 제시 하는입니다. 모델 쇼 높은 재현성, 높은 견고, 전송 및 세포내 매매 신약의 연구에 적합.

생체 외에서 혈액-뇌 장벽 돼지 뇌 내 피 세포를 기반으로 하는 모델의 설립에 대 한 방법 개선

이 절차의 전반적인 목표는 비보에 허 혈 성 뇌졸중의 쥐 모델에서 뇌혈관 장애의 평가 대 한 높은 재현 기법을 제공 하는입니다.

허 혈 성 뇌졸중의 쥐 모델에서 뇌혈관 장애의 비보에 평가

여기서, 우리는 높은 수율과 재현성을 가진 배아 피질에서 뉴런 및 성상세포 농축 배양, 또는 뉴런 glia 배양을 확립할 수 있는 특정 배양 매체를 사용하여 간단한 접근법을 제시합니다.

이혈증에서 신경 신경-Glia 상호 작용의 역할을 공부 하기 위한 세포 배양 모델

여기에서는 일차 인간 뇌 미세 혈관 내피 세포, 성상 세포 및 혈관 주위 세포를 기반으로 혈액 뇌 장벽의 삼중 세포 배양 모델을 구축하는 방법을 설명합니다. 이 다세포 모델은 시험관 내 허혈성 뇌졸중 중 신경 혈관 단위 기능 장애의 연구 또는 약물 후보의 스크리닝에 적합합니다.

시험관 내 허혈성 뇌졸중 연구를 위한 인간 혈액-뇌 장벽의 삼중 일차 세포 배양 모델

혈액뇌장벽(BBB)은 안정적이고 건강한 뇌 환경을 유지하는 데 중요한 역할을 합니다. BBB 기능 장애는 많은 신경 질환과 관련이 있습니다. 우리는 뇌혈관 병리, BBB 무결성, BBB가 유전학 및 질병에 의해 어떻게 변형되는지 조사하기 위해 BBB의 3D 줄기세포 유래 모델을 개발했습니다.

신경 질환을 모델링하고 치료적으로 표적화하기 위한 체외 혈액-뇌 장벽 재건

학습하세요 산소-포도당 박탈 및 재산소화를 이용한 체외 허혈-재관류 손상 모델로 뇌혈관장벽 기능 장애를 연구하는 방법입니다. 면역형광 염색과 공초점 현미경을 통해 세포 구조 변화를 분석할 수 있습니다.

같은 산소 포도당 박탈과 재산 소화

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