Name: EAE와 쥐의 중추 신경계에서 Mononuclear 세포의 분리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-04T04:23:00.000+00:00
Duration: 20 min 51 s
Description: 배우세요 쥐 중추신경계에서 단핵세포를 분리하는 방법을 심장관류와 Percoll 밀도구배법을 사용하여. 혈액 오염을 최소화하고 유세포분석이나 세포배양에 적합한 세포를 얻을 수 있습니다.

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<ol><li> 깊이 쥐가 마취. 70 % 에탄올로 스프레이하고 혈관에서 세포를 (좌심실을 통해 오른쪽 심방과 perfuse를 잘라)를 제거하는 10 분 PBS와 심장 재관류 해. </li><li> 얼음처럼 차가운 PBS를 포함하는 50 ML 튜브의 뇌 및 척수 및 장소를 제거합니다. 얼음처럼 차가운 PBS 10 ML을 포함 10cm 배양 접시에 놓인 70mm 셀 스트레이너의 뇌 및 척수를 자르고. 살균 한 ML 주사기의 플런저의 뒷면을 사용하여 셀 스트레이너를 통해 기관의 각 조각을 누르십시오. 얼음에 50 ML 튜브에 단일 세포 현탁액를 수집합니다. PBS로 세포 스트레이너를 씻고 솔루션은 분명 때까지 튜브에 추가할 수 있습니다. </li><li> G. 390에 80-10 분 원심 분리기 </li><li> PBS + 70 % Percoll 10 ML에 20 ML PBS + 30 % Percoll과 오버레이에있는 세포를 Resuspend. </li><li> 상온 20 분 390g에 원심 분리기. </li><li> 튜브의 상단에있는 지방을 제거합니다. 인터페이스에서 세포를 수집하고 PBS로 두 번 씻는다. 백작. </li></ol>

<ol><li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+clinical+scoring+of+chronic-relapsing+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction and clinical scoring of chronic-relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Visualized Experiments. 5, Forthcoming.</li>
</ol>

이 절차는, 살아있는 동물과 관련된 모든 절차로, 귀하의 기관의 동물 사용 및 관리위원회의 승인을 받아야합니다. 우리는 전에와 절차를 수행하는 동안 동물에 주어집니다 마취의 충분한 수준을 보장하기 위해 최초의 심장병 perfusions을 수행할 때 수의사 또는 동물 기술자가 존재하는 것이, 그리고 동물들이 불필요 통증이나 고통을 받아야하지 않는 것이 좋습니다.

<table><tbody><tr><td>PBS, 1x, 멸균</td><td>시약</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>세포 스트레이너, 70 um</td><td>도구</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>시약</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1644</td><td></td></tr></tbody></table>

eae와 쥐의 중추 신경계에서 mononuclear 세포의 분리

Isolation of Mononuclear Cells from the Central Nervous System of Rats with EAE

이러한 실험 면역 encephalomyelitis (EAE, 1), 또는 급성 회백수염, 라임 neuroborreliosis 또는 neurosyphilis로 CNS의 감염에 대한 면역 반응으로 중추 신경계 (CNS)에 감독 면역 질환을 공부하든, 그것은 자주 CNS - 침투 면역 세포를 분리하는 데 필요한. 이 비디오 프로토콜에서 우리는 EAE와 암흑의 CNS에서 mononuclear 세포 (MNCs) 분리하는 방법을 보여줍니다. 이 절차의 첫 단계는 피를 CNS 물을 대는 혈관에 남아하지 않도록 생리 식염수와 설치류의 심장 재관류가 필요합니다. 모든 혈액 오염 인공적으로 명백한 CNS - 침투 MNCs의 수를 증가하고 침투해 면역의 명백한 구성을 변경할 수도 있습니다. 그렇다면 우리는 단일 세포 현탁액을 준비하는 후속 dilaceration에 대한 쥐의 두뇌 및 척수를 제거하는 방법을 보여줍니다. 이 정지는 MNCs을 분리하기 위해 두 계층 Percoll 기울기에 구분합니다. 세척 후,이 세포가 모든 필요한 절차를 거쳐 준비가 된 것입니다. 이 프로 시저를 사용하여 격리 Mononuclear 세포가 가능한하고 전기 생리학, 유동세포계측법 (외과), 또는 생화학 사용할 수 있습니다. 기술은 멸균 조건하에 수행되는 경우 (조직 문화 후드에 살균 장비를 사용) 세포도 조직 문화 매체 재배하실 수 있습니다. 주어진 세포 인구는 더욱 자기 분리 절차 또는 외과 중 하나를 사용하여 정화하실 수 있습니다.

이 비디오에서는 실험자가 면역 질환 encephalomyelitis와 쥐의 중추 신경계에서 mononuclear 세포를 분리하는 방법을 보여줍니다.

EAE와 쥐의 중추 신경계에서 Mononuclear 세포의 분리

실험적 자가면역성 뇌척수염(EAE, 1)과 같이 중추신경계(CNS)를 대상으로 하는 자가면역 질환을 연구하든, 또는 ...

안녕하세요, 저는 Christine Beaton입니다. 저는 캘리포니아 대학교 어바인 캠퍼스의 생리학 및 생물물리학과 George Chen 교수 연구실의 보조 연구원입니다. 오늘은 쥐의 중추 신경계에서 단핵구를 분리하는 방법을 보여드리겠습니다.본 절차에서는 중추신경계에 잔류 혈액이 남지 않도록 쥐를 깊게 마취시킨 후 심장 관류를 수행합니다. 이후 뇌와 척수를 적출하고 셀 스트레이너(cell strainer)를 사용하여 단일 세포 현탁액을 만든 다음, 퍼콜(percoll) 이중 층 밀도 구배 원심분리를 통해 단핵구를 분리합니다. 그럼 시작해 보겠습니다.이제 심장 관류를 시작할 준비가 되었으므로, 이에 필요한 모든 재료를 보여드리겠습니다. 우선 벨 자(Bell jar)가 필요하며, 바닥에는 휘발성 마취제가 적셔진 종이 타월을 놓았습니다. 할레인(halothane)이나 이소플루레인(isoflurane)을 사용할 수 있습니다.다음으로 필요한 것은 쥐를 고정할 장치와 혈액을 수집할 도구입니다. 여기 쥐를 관류하기 위한 임시 설치 장치가 준비되어 있습니다. 21 gauge 바늘을 사용하며, IV 관류 시스템을 통해 중력으로 공급되는 식염수를 관류할 것입니다.해당 시스템을 사용할 수 없는 경우에는 여러 개의 시린지에 식염수를 채워 수동으로 관류할 수도 있습니다. 하지만 이 방법이 훨씬 더 간편합니다. 또한 Kim wipes를 넣은 10 mL 시린지 배럴이 필요합니다.그리고 절차 동안 쥐가 깊은 마취 상태를 유지할 수 있도록 코에 바를 마취제를 약간 넣겠습니다. 그리고 당연히 기구들이 필요합니다. 오늘은 세포를 배양할 것이 아니기 때문에 무균 절차로 진행하지 않겠습니다.제가 현재 사용하고 있는 모든 기구들은 멸균 상태가 아닙니다. 하지만 당연히 세포를 배양하려는 경우에는 멸균된 기구를 사용해야 합니다. 본 영상의 목적을 위해, 저는 이미 죽은 쥐를 사용하겠습니다.따라서 여러분께 단계별로 보여드리기 위해 절차를 천천히 진행하겠습니다. 물론 실제 시술에서는 쥐가 죽지 않으면서도 깊게 마취된 상태여야 합니다. 심장이 계속 뛰고 있어야 합니다.이제 이 쥐를 가지고 시작해 보겠습니다. 쥐의 등이 저를 향하지 않도록 눕혀 놓고, 코 위에 적신 티무(team) 와이프를 올렸습니다. 그런 다음 가장 먼저 쥐가 깊게 마취되었는지 확인하겠습니다.따라서 각 절차를 수행하기 전에 이 과정을 거쳐야 합니다. 핀셋으로 쥐를 집어 보았을 때 아무런 반

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

현재 문서는 효율적으로 효과적으로 흐름 cytometric 분석을 위해 활용할 수 뇌 및 척수 조직에서 mononuclear 세포를 분리하기 위해 빠른 프로토콜을 설명합니다.

Percoll 그라디언트를 사용하여 두뇌와 척수 Mononuclear 세포의 분리

이 비디오에서는 밀도 구배 원심분리를 사용하여 마우스의 뇌에서 단핵 세포를 분리하는 작업을 수행합니다. 분리된 단핵 세포 현탁액은 추가 다운스트림 분석에 사용할 수 있습니다.

마우스 뇌에서 단핵 세포 분리: 뇌 상주 단핵 세포를 분리하기 위한 밀도 구배 원심분리 기술

이 비디오는 안락사된 쥐로부터 뇌 미세혈관을 분리하는 과정을 보여줍니다. 여기에는 뇌 해부, 조직 세척, 기계적 소화, 그리고 미세혈관의 순수한 분획을 분리하기 위한 반복적인 원심분리가 포함됩니다.

쥐의 뇌에서 신경혈관 단위를 분리하는 방법

이 원고는 다양한 질병 단계에서 각각 유세포 분석 및 정량적 PCR을 사용하여 림프절, 비장, 혈액 및 척수의 면역 세포 분포 및 mRNA 사이토카인 수치를 평가하는 방법과 함께 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE) 모델의 유도 및 채점 방법을 설명합니다.

다양한 조직에서 면역 세포의 질병에 의존하는 유통의 마우스 및 평가에 실험자가 면역 뇌척수염의 유도

세부 사항에 microglial 함수를 이해 하는 노력 microglia 성숙한 vivo에서 속성 정리 microglial 문화 모델의 부족에 의해 방해 되어 있다. 이 프로토콜 정의 매체 조건 하에서 높은 없는 성숙한 쥐 microglia의 강력한 생존을 유지 하기 위해 설계 된 절연과 문화 접근을 설명 합니다.

절연 및 동적 홍보 설치류 Microglia의 문화 Ramified 혈 청 자유로운 매체에 있는 외관

이 프로토콜의 목표는 lissencephalic 및 gyrencephalic 척추동물의 중추 신경계의 여러 영역에서 미세 혈관을 분리하는 것입니다.

5개의 척추동물 단에 걸쳐 중추 신경계 마이크로혈관의 믿을 수 있는 격리

우리는 성인 마우스 뇌 반구의 다른 해부 된 영역에서 microglia의 격리를위한 프로토콜을 제공하고, 전체 길이 전사체의 깊은 단일 세포 RNA 시퀀싱을위한 반자동 라이브러리 준비를 제공합니다. 이 방법은 건강과 질병에서 microglia의 기능적 이질성을 해명하는 데 도움이됩니다.

깊은 단세포 RNA 염기서열 분석에 대한 하나의 성인 마우스 뇌 반구에서 영역 별 Microglia의 격리

이 원고는 마우스에서 활성 실험자가 면역 뇌척수염(EAE)을 유도하는 프로토콜을 제시한다. 중추신경계(CNS)에서 침투된 림프구의 분리 및 특성화 방법도 림프구가 CNS 자가면역 질환의 발병에 어떻게 관여하는지 보여주기 위해 제시된다.

실험적인 자가면역 뇌척수염 중 중추신경계에서 림프구 침투의 흐름 세포 분석

살아있는 쥐의 뇌에서 신경 줄기 세포와 희소돌기아교세포 전구 세포를 분리하는 방법이 여기에 실험적으로 자세히 제시되어 있습니다. 그것은 그들의 웰빙을 손상시키지 않고 동일한 동물로부터 이러한 세포를 여러 번 수집할 수 있습니다.

살아있는 쥐에서 신경 줄기 세포와 희소돌기아교세포 전구 세포를 분리하기 위한 "뇌 착유" 방법

이 연구는 쥐의 골수에서 풍부한 호중구 세포외 트랩(NET)을 분리하는 두 가지 기술을 간략하게 설명합니다. 한 가지 방법은 상용 호중구 분리 키트와 밀도 구배 원심분리를 결합하는 반면, 다른 방법은 밀도 구배 원심분리만 사용합니다. 두 접근법 모두 말초 혈액 호중구의 NET을 능가하는 기능적 NET을 산출합니다.

비슷한 용량의 쥐 골수 호중구를 분리하기 위한 독특한 접근법

현재까지 동일한 마우스에서 모든 주요 중추 신경계 상주 세포 유형을 동시에 분리하기 위한 프로토콜은 충족되지 않은 수요입니다. 이 프로토콜은 신경 염증 중에 복잡한 세포 네트워크를 조사하고 동시에 필요한 마우스 수를 줄이기 위해 순진하고 실험적인 자가면역 뇌척수염 마우스에 적용할 수 있는 절차를 보여줍니다.

성인 자가면역 뇌척수염 마우스에서 주요 중추 신경계 상주 세포 유형의 동시 분리

배우세요 쥐 중추신경계에서 단핵세포를 분리하는 방법을 심장관류와 Percoll 밀도구배법을 사용하여. 혈액 오염을 최소화하고 유세포분석이나 세포배양에 적합한 세포를 얻을 수 있습니다.

EAE와 쥐의 중추 신경계에서 Mononuclear 세포의 분리

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