모리스 물 미로 테스트 : 마우스 스트레인 및 테스트 환경을위한 최적화

이 절차의 목표는 1 2 9 6 FBB 배경 변형과 함께 사용하도록 맞춤화된 Morris Water maze Protocol을 사용하여 알츠하이머병의 마우스 모델에서 인지 결함을 식별하는 것입니다. 이것은 스트레스로 인한 성능 결핍을 완화하기 위해 먼저 쥐를 작업에 적응시킴으로써 달성됩니다. 두 번째 단계는 플랫폼을 흘수선에서 1인치 위로 올려 시각 및 운동 기능을 평가하는 시각적 플랫폼 작업을 사용하는 것입니다.

다음으로, 숨겨진 플랫폼 시험은 플랫폼이 수면 아래 5mm 깊이로 잠기는 곳에서 수행됩니다. 마지막 단계는 플랫폼을 제거하는 프로브 시험을 사용하여 공간 참조 메모리를 평가하고 사용되는 검색 전략 유형을 결정하는 것입니다. 궁극적으로, 이 맞춤형 물 MA 절차를 통해 일반적으로 사용되는 알츠하이머병 마우스 모델에서 공간 학습 및 기억을 평가할

일반적으로 이 방법을 처음 접하는 개인은 마우스 라인의 배경 변형률 및 마우스가 테스트되는 환경을 기반으로 사용되는 훈련 시험 및 프로브의 수와 같은 테스트 절차를 최적화해야 할 필요성 때문에 어려움을 겪을 것입니다. 절차의 이 부분은 마우스가 진입 및 제거를 당기는 데 적응합니다. 먼저 상자를 편안한 높이로 올리고 섭씨 21도의 온도에서 약 1cm 수준까지 2리터의 물을 채웁니다.

생쥐를 시험장으로 데려온 후 케이지에서 피험자를 꺼내 피험자 식별을 확인한 다음 꼬리에 무독성 영구 마커를 표시하여 절차를 거치지 않은 생쥐와 구별합니다. 약 5초 동안 전사 비커에 마우스를 놓습니다. 그런 다음 비커에서 마우스를 사전 처리 풀에 부드럽게 붓고 20초 동안 풀에 마우스를 넣습니다.

시간이 경과한 후 비스듬히 움직이지 말고 마우스 앞에 스쿱을 부드럽게 놓습니다. 마우스가 스쿠프에 들어가 탐색하도록 허용 필요한 경우 천천히 들어 올리면서 스쿠프를 마우스 아래로 부드럽게 밀어 마우스가 스쿠프에 올라타도록 권장합니다. 국자로 쥐를 놀라게 하지 않도록 주의하십시오.

케이지의 각 마우스에 대해 10일 동안 하루에 한 번씩 이 절차를 반복합니다. 각 동물이 끝나면 수영장에서 배설물과 침구를 집어 들고 그물을 우리 사이의 이동 비커로 사용합니다. 테스트 1일차, 2일차, 3일차에 매일 6번의 시도와 각 시도 사이에 약 10분의 간격을 두고 가시적인 교육을 수행합니다.

먼저 마우스 성능 추적 소프트웨어를 설정하고 프로토콜의 텍스트 부분에 있는 지침에 따라 실행 시트를 만듭니다. 소프트웨어가 구성되면 먼저 커튼을 걸어 공간적 단서가 가려지도록 방을 설정합니다. 그런 다음 섭씨 21도의 수돗물을 채워 욕조를 설치합니다.

온도계를 사용하여 수온이 이 온도의 1도 이내로 유지되는지 확인하십시오. 테스트 전반에 걸쳐. 높이가 13cm에 달하고 4.5 x 4.5cm 크기의 굵은 S 자 모양의 문자가 양각으로 새겨진 깃발이 장착 된 플랫폼을 욕조의 첫 번째 미리 결정된 위치에 배치하여 물 표면에서 약 1 인치 위로 올라갑니다.

이제 케이지에서 첫 번째 마우스를 가져옵니다. 피험자 식별을 확인하고 올바른 색상의 영구 마커를 사용하여 꼬리를 표시한 다음 전사 비커에 넣습니다. 마우스를 욕조에 부드럽게 넣습니다.

타이머를 시작하고 추적 소프트웨어가 동물을 추적하고 있는지 확인하십시오. 마우스를 사용하여 플랫폼을 찾을 수 있도록 최대 2분 동안 기다립니다. 마우스가 플랫폼을 찾으면 플랫폼에서 마우스를 20초 동안 기다립니다.

동물이 2분 동안 플랫폼을 찾지 못하면 마우스를 떠서 20초 동안 플랫폼에 올려 놓습니다. 플랫폼에서 20초 동안 진행한 후 적응 훈련에서와 같이 플랫폼에서 마우스를 제거하고 종이 타월을 깐 가열된 케이지에 넣고 가열 패드와 열 램프로 약 31°C까지 데웁니다.amp 30초 동안 . 그런 다음 가열 패드만 있는 상태로 마우스를 보관 케이지로 옮기되 열 램프는 사용하지 않고 시도 사이에 회복합니다.

그물로 쓰레기통을 청소한 후 그룹의 각 마우스에 대해 이 단계를 반복합니다. 각 마우스가 완료되면 첫 번째 시도, 플랫폼을 두 번째 미리 결정된 위치로 이동합니다. 커튼을 건 후 4일차부터 10일차까지 숨겨진 플랫폼 훈련을 수행합니다.

이전과 마찬가지로 커튼에 전략적으로 큐를 배치하십시오. 신호가 크고 더 나은 가시성을 위해 대비되는 색상을 포함하는지 확인하고 욕조 내부에서 마우스가 볼 수 있는 거리와 높이로 설정되어 있는지 확인합니다. 프로토콜의 서면 부분에 있는 지침에 따라 소프트웨어를 구성합니다.

그런 다음 플랫폼이 물 표면에서 약 5mm 아래에 있도록 먼저 물을 채워 욕조를 설정합니다. 미리 결정된 위치에 플랫폼을 놓습니다. 플랫폼의 위치는 모든 날과 시험에서 거의 테스트되기 위해 동일하게 유지됩니다.

It.It 동물들이 비공간적, 비해마 운동 전략을 개발하지 않도록 시작 위치를 변경하는 것이 필수적입니다. 미로를 풀려면 무독성 흰색 온대 페인트를 사용하여 물을 불투명하게 만드십시오. 수영하는 동안 플랫폼 상단이 동물의 눈높이에서 보이지 않도록 하려면 이 작업을 수행하십시오.

이전에 마우스를 식별하고 표시한 후 마우스를 미로에 부드럽게 부어 ENT가 벽을 향하도록 합니다. 각 마우스는 고유한 평가판을 위해 동일한 시작 위치에 배치됩니다. 마우스의 초기 릴리스 시 타이머를 시작하고 테스터가 마우스에게 쉽게 보이지 않는 영역에 서 있습니다.

동물이 플랫폼에 도착하면 15초 동안 플랫폼에 머물면서 방 내 공간적 위치를 지정합니다. 마우스가 60초 이내에 플랫폼을 찾지 못하면 마우스를 부드럽게 떠서 플랫폼에 놓습니다. 플랫폼에서 15초 후 미로에서 마우스를 제거하고 가열된 케이지로 되돌립니다.

이전에 잔해의 미로를 청소한 후 그룹에 남아 있는 쥐에 대해 이 절차를 반복합니다. 따라서 4일차부터 9일차까지 각 시도 사이에 약 20분씩 하루에 4번의 숨겨진 플랫폼 교육 시험을 수행합니다. 6일, 7일, 8일차에 플랫폼 교육과 최종 프로브 시험 전에 프로브 시험을 수행합니다.

10일차에는 미로에 플랫폼이 없다는 점을 제외하고 숨겨진 플랫폼 교육과 유사한 방식으로 프로브 시험을 수행합니다. 미리 결정된 방출 지점에서 마우스를 풀어주고 마우스가 미로에서 60초 동안 수영하도록 합니다.10일째의 프로브 시험 이후, 프로브 시험 중에 추가 시험이 수행되지 않습니다. 동물 추적 소프트웨어를 사용하여 동물의 경로 길이, 동물이 미로의 각 사분면에서 보낸 시간의 백분율, 동물이 이전에 플랫폼이 있던 영역을 수영하는 횟수를 추적할 수 있습니다.

실험 목록 탭을 열고 데이터 분석 탭과 물 미로 탭에서 측정값을 얻습니다. Excel 스프레드시트로 직접 내보냅니다. 그런 다음 프로토콜의 서면 부분에 있는 지침에 따라 데이터를 분석합니다.

인간 P3,0,1 LTL 유전자를 함유하는 41 TP 3 0 1 L 마우스 및 46 대조군을 약 6.5개월령에 이 프로토콜을 사용하여 시험하였다. 이는 형질전환에서 Tau P 3 0 1 L 발현이 3개월 동안 지속되었음을 나타냅니다. 각 그룹에는 거의 동일한 수의 수컷과 암컷의 경로 길이가 포함되어 있습니다.

보이지 않는 플랫폼 훈련은 대조군과 TP 3 0 1 L 마우스 간에 차이가 없었습니다. 이러한 차이의 부족은 제어 및 타우 P 3 0 1 LM이 시각 또는 운동 능력에서 차이가 없다는 것을 나타내며, 따라서 숨겨진 시험 테스트의 성능 저하가 기억 장애에 기인할 수 있음을 나타냅니다. 그러나 숨겨진 플랫폼 훈련 중에 TP 3 0 1 LM은 모든 훈련 블록에서 훨씬 더 긴 경로 길이를 보여주었습니다.

마지막으로, 4건의 프로브 시험에서 대조군이 개선되었습니다. Tau P 3 0 1 L 마우스는 제어하지 않은 반면, 마우스를 제어하지 않은 마우스는 과제를 해결하기 위해 공간 전략을 더 잘 사용할 수 있었고 플랫폼을 목표 영역으로 지역화하는 방법을 더 잘 배웠습니다. 다른 마우스 라인과 함께 사용하기 위해 이 절차를 조정할 때 대조군의 학습률을 평가하고, 필요한 타격 훈련 시험의 수를 식별하고, 첫 번째 프로브 시험을 삽입해야 하는 시기를 결정하는 것이 중요합니다.