Name: 이온 선택적 자체 참조 미세 전극 기술을 이용하여 세포 외 이온 플럭스 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 18 s
Description: 배우세요 이온 선택적 자체 참조 미세 전극 기술을 사용하여 살아있는 세포와 조직의 세포 외 이온 플럭스를 비침습적으로 측정하는 방법을. 이 기술은 전기생리학 및 세포 생물학 연구에 정확한 데이터를 제공합니다.

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이 작업은 National Science Foundation 보조금 MCB-0951199, NIH 보조금 EY01910, California Institute of Regenerative Medicine 보조금 RB1-01417 및 Fundação para a Ciência e Tecnologia (FCT) 보조금 SFRH/BD/87256/2012의 지원을 받았습니다.

1. 이온 선택적 자체 참조 바께 미세 준비 <ol><li> 이온 선택성 미소 전극의 제조 <ol><li> 열은 미세 풀러를 사용하여 필라멘트 (1.5 mm 외경 1.12 mm 내경)없이 얇은 벽으로 둘러싸인 붕규산 모세 혈관을 당깁니다. 참고 :이 팁을 직경 3-4 μm의를 제공합니다. 작은 팁 전자 노이즈에 미소 전극이 더 민감하게하고 또한 이온 농도의 변화에​​ 더 느리게 응답과 연관된 더 높은 저항을 갖는다. 유용한 정보는 스미스 외. (26)에 의해 발표 된 논문에서 찾을 수 있습니다. </li><li> 친 지성 이온 운반체 칵테일의 유지를 돕기 위해 내면 소수성을 렌더링하는 전극 silanization합니다. 를 건조&gt; 100 ℃의 오븐에서 금속 랙 및 열 O / N에 미소 전극을 배치합니다. 랙은 2mm 직경의 구멍과 금속판을 통해 방법의 일부를 천공한다. ml의 G 구멍에 전극 (250) 위쪽 팁 배치그들에 아가씨 커. </li><li> 아침에, 오븐을 끄고 절연 장갑을 착용하고있는 동안, 조심스럽게 자리에 전극과 비커와 금속 선반을 제거합니다. 열을 유지하기 위해 오븐 문을 닫습니다. </li><li> 라텍스 또는 니트릴 장갑, 실험실 코트와 눈 보호구를 착용 할 것. 플라스틱 파스퇴르 피펫으로, 각 전극의 기지에서 실란 화 솔루션 나는 한 방울을 배치 (장소에 비커를 유지, 피펫 액세스를위한 붓는 입술을 사용한다). 실란 화 용액을 핫 플레이트에 의해 기화 전극 내부 silanizes된다. 이 단계에 대한 화학 추출기 흄 후드를 사용합니다. 몇 시간이 남아있는 실란 화 솔루션이 증발 할 수 있도록하는 뜨거운 오븐에서 랙 / 비커 / 전극을 다시 배치합니다. 참고 : 안전을 위해, 다시 오븐을 끄지 마십시오. 이 유해 및 가연성 증기를 포함 할 수 있습니다로는에 전환 할 수 없습니다 나타내는 오븐에 레이블을 배치합니다. </li><li> 냉각 후, 미세 저장 항아리 INSI에 미소 전극을 저장400g의 건조제와 유리 데시 드. 미소 전극 많은 주 동안 이렇게 저장할 수 있습니다. 참고 : 다른 실란 화 방법은 스미스 등에 설명되어 있습니다 (26). </li><li> 측정 될 100mM의 이온을 함유하는 용액을 50 내지 100 μL (약 1cm의 길이) (표 1 및도 1b)로 미세 전극을 백 채운다. 미세 필라멘트에 분젠 버너에서 뽑아 일회용 플라스틱 파스퇴르 피펫의 열을 사용합니다. 막힘을 방지하기 위해 이후 DH 2 O의 피펫을 씻어. 주 : 대안 적으로, 외부 용액 (27)의 이온 농도에 맞게 백필 용액의 이온 농도를 조절한다. </li><li> 기포의 유무를 확인하기 위해 해부 현미경 하에서 미세 전극을 관찰한다. <ol><li> 수직으로 전극을 누른 상태에서 거품이 손톱으로 가볍게 미세 현재 탭 경우 (아래 팁) 및 / 또는 거품을 밀어바늘을 교체 실리콘 튜브 변성 주사기를 사용하여 배압을인가함으로써 팁을이야. </li></ol></li><li> 이온 특정 이온 운반체 칵테일 15-20 NL (30-50 ㎛의 길이)로 미세 전극 팁을 채우기 (표 1 참조). 현미경 슬라이드의 짧은 가장자리에 이온 운반체 칵테일의 작은 방울을 배치합니다. 해부 현미경 하에서 미세 팁을 관찰하고 미세 팁이 약 절반 초 동안 이온 운반체 칵테일에 닿을 때까지 현미경 슬라이드를 향해 이동합니다. 모세관 압력에 의해 미세 전극에 이온 운반체 칵테일을 그립니다. 참고 :이 전자 간섭 (노이즈)에이 취약 할 수 프로브의 전기 저항을 증가시키고 또한 응답 시간을 둔화 이온 운반체 칵테일의 긴 열을 피하십시오. </li><li> 금 1mm 남성 커넥터와 AgCl을은 (Ag +) 선 (그림 1B)와 직선 미세 홀더에 미세 전극을 마운트합니다. &lt;/ 리&gt; <li> 입체 컴퓨터 제어 전자 micropositioner (그림 1A)에 장착 된 헤드 단계로 미세 전극 홀더를 연결합니다. </li><li> 샘플이 측정 될 때까지 용액을 측정하기에 적합한 미세 전극 팁을 배치 (생리 식염수는, 배양액 등) 미세 전극은 HR 또는 둘, 또는 밤새 안정 될 수 있도록. </li></ol></li><li> 기준 전극의 제조 <ol><li> 기준 전극 (도 1C)는 상기와 동일한 모세관이다. 5cm 길이로 다이아몬드 연필로 모세관을 잘라 분젠 화염에 1-2 초 동안 각 끝 부분에 불이 연마. </li><li> 염화나트륨의 3 M 용액 ~ 200 μL와 이들 전극 채우기 2 % 아가 로스 CH 3 CO 2 K (칼륨 아세테이트) 또는 KCl을. 이온 액에 따라 측정 할 선택 (기준 전극은 측정되는 이온을 함유하지 않아야 표 1 참조). 혼합아가로 오스 거의 전자 레인지에 끓는에 대한 해결책 및 열. 아가 로스를 교반하여 용해 (용액은 맑은 간다). </li><li> 플라스틱 파스퇴르 피펫에 기준 전극을 부착하고 모세 혈관에 뜨거운 용액을 그립니다. </li><li> 사용하기 전에 밀봉 된 관이 3 M 용액에 찬 3 M의 NaCl, CH 3 CO 2 K 또는 KCl을 솔루션 및 저장소에 전극을 삭제합니다. 공기 방울 어떤 기준 전극을 폐기하십시오. </li><li> 직선 미세 전극 홀더 기준 전극 내부 (프리 필드 3 M 용액으로) AgCl을은 (Ag +)과 펠렛과 금 2mm 남성 커넥터 (그림 1C)를 장착하고 수동 마이크로 포지셔너에 전극 홀더를 부착 자기 스탠드에 장착. </li></ol></li></ol> 2. 이온 선택적 자체 참조 바께 미세 교정 <ol><li> 상기 기준 용액과 관심 이온을 함유하는 용액을 교정 준비하는 단계; 표 1 참조 </str&gt; 옹. 솔루션 샘플이 될 것이다 (예를 들어 문화 미디어, 생리 식염수)에 농도를 브래킷. 즉, 하나의 교정 액을 상기 측정 용액에 비해 이온의 낮은 농도를 포함하는, 하나 이상 있어야한다. <ol><li> 예를 들어, K + 1 mm의 포함 식염수를 사용합니다. 이 농도를 브래킷에, 연속 희석 10, 1 및 0.1 mM의 농도로 탈 이온수에서의 KCl 분말을 용해. 이러한 교정 솔루션을 사용합니다. 대안 적으로, 이러한 솔루션들 중 적어도 두 개를 사용한다. </li></ol></li><li> 이온 선택 미세 각 보정 용액에 기준 전극을 담그고 전압 값이 전용 소프트웨어를 사용하여 전압을 기록하기 전에 1 분 내지 3에 대해 안정되도록 (표 1 참조). </li><li> 소프트웨어 TXT 파일 등 데이터 (증폭기 출력)로서 저장, 스프레드 시트 파일로 데이터를 복사한다. 의 대수에 대해 미세 출력 (MV)을 플롯몰 이온 농도 (도 2A). </li><li> 선형 회귀를 적용하고 네른스트의 기울기, 절편 및 R 2 값을 계산합니다. 네른스트 슬로프 가의 이온이 58 ± 11 MV / 10 년 2 가의 이온이 29 ± 11 MV / 10 년이면 미세 전극을 그대로 (양이온, 네른스트 슬로프 음이온이 음수, 양수). 또한, 좋은 미소 전극 강한 선형 상관 관계 (도 2B R 2&gt; 0.9)이 있어야합니다. 참고 : 여기에 사용되는 증폭기의 MV 출력 (MV)이 10 배 증가와 함께 읽고 있습니다. 값은 10의 계수로 나눌 수있다. </li><li> 실제 이온 농도 (그림 2B)로 미세 전극의 원시 MV 출력을 변환하는 선형 회귀 공식을 사용합니다. </li></ol> 이온 선택 미세 전극 기법 3. 검증 <ol><li> 인공 소스를 준비 <ol><li> 인공 소스 모세 혈관 같은 모세 혈관과 같다위. 열 단계 1.1.1에서와 같이 미세 풀러를 사용하여 모세관을 당깁니다. </li><li> 염화나트륨,의 KCl 1 M 용액 200 μL, CaCl2를 H 2 O 2 또는 4의 pH 완충액이 모세관 백필. 선택에 따라, 이온 소스 인공 용액 (표 1 참조)을 측정한다. 참고 : 또는 더 큰 팁 직경 (~ 20 μm의)와 함께 전극을 끌어 동일한 솔루션 팁을 작성하지만, 0.5 % 아가로 오스를 포함 (아가로 오스 솔루션의 대량 흐름을 방지 할 수 있습니다). </li><li> 미세 조작기에 인공광 모​​세관 마운트 시료에서의 이온 플럭스를 측정하기 위해 사용되는 용액에 담궈. 구배의 안정화를 허용하도록 1 시간 30 분 동안 용액에 인공광 남기기. </li></ol></li><li> 이온 선택성 미소 전극의 검증 <ol><li> measu하는데 사용 용액 인공광 모​​세관으로부터 약 일cm 떨어진 이온 선택 미세 전극을 담그고샘플에서의 이온 플럭스 Re 및 이전과 기준 전극으로 회로를 닫는다. 전압 값은 1 내지 2 분 동안 전용 소프트웨어를 사용하여 전압을 기록하기 전에 1 분 내지 3에 대해 안정되도록. 이 값은 (또한 참조, 배경 또는 빈 값으로 참조 문헌에) 버퍼 값에 해당합니다. </li><li> 인공 광원으로부터 약 5 ㎛, 이온 선택 미세 전극을 이동시키고 1 내지 2 분 동안 소프트웨어를 사용하여 전압을 기록하기 전에 전압 값이 1 분 내지 3에 대해 안정되도록. </li><li> 인공 소스 모세관으로부터 멀리 10, 20, 40, 80, 160, 320, 640 및 1280 μm의 이온 선택성에 미세 전극을 배치하여 상기 절차를 반복한다. </li><li> txt 파일 등의 데이터를 추출하고 스프레드 시트 파일로 값을 복사합니다. </li></ol></li><li> 캘리브레이션 값과 동일한 방식으로 MV 값에 대응하는 이온의 농도를 계산한다. 값을 플롯. 아니TE : 이온 플럭스가 존재하는 경우, 미세 전극이 두 위치 (도 3b) 사이의 이온 농도의 차이를 검출한다. 인공 소스 용액보다 측정 종 이상의 이온을 포함하는 경우, 농도가 제대로 (이 경우 이온 플럭스의 방향을 검출하는 이온 선택성 미세 전극의 기능을 검증 멀리보다 소스에 더 가까워 야 유출, 인공 싱크, 매체를 측정보다 낮은 특정 이온 농도, 그것은) 유입되어야한다. <ol><li> 픽 (Fick)의 확산 법칙을 이용하여 이온 플럭스를 계산 : J = C μ C는 용액 중의 이온 농도 (몰 cm -3)이며, μ 이온 이동도를이다 (DC / DX) (몰 cm의 N -1 초 -1) , 및 직류 거리 DX (cm) (도 2c)을 통해 농도 차이이다. 이온 플럭스 데이터는 대개 pmol의 cm -2 (S)로 표시되는-1 또는 nmol의 센티미터 -2 초 -1. 주 :.. 스미스 등 26에 의해 설명 이온 플럭스 계산의 다른 방법이 사용될 수있다. 주요 차이점은 확산 계수의 사용 대신에, 이온의 이동성과 샘플없이 식염수에서 이온 플럭스의 측정으로부터 계산 된 배경 이온 플럭스 (또한 드리프트 또는 보정 팩터 전압)의 감산을 포함한다. </li><li> 소스 (도 2D)로부터의 거리에 대해 각 단계의 이온 플럭스의 평균 플롯. 광원으로부터 멀리 이동하는 이온 플럭스의 다른 크기를 감지 이온 선택 미세 전극의 기능을 검증하는 자속 값의 지수 감소를 관찰한다. </li><li> 큰 신호 대 N으로 올바른 방향 및 크기 측정 값의 유효성을 검증하기 위해 기록되는 것은 각각의 특정 이온에 대해 한 번 인공광 유효성 검사를 수행하여OISE 비율. 참고 : 시료없이 완충액의 이온 플럭스 측정 백그라운드 레벨 또는 잡음을 나타낸다. 일반적으로, 버퍼 측정 변수의 방향을 표시합니다 아주 작은 플럭스로 이어지는 이온 농도의 뚜렷한 변동을 보여줍니다. </li></ol></li></ol> 상공 회의소 측정 4. 준비 주 : 실험 전에 샘플을 측정 할 것을 고려하고 샘플이 얼마나 장착 미세 측정에 고정화된다. <ol><li> Xenopus의 난자는 측정이 800 μm의 나일론 메쉬 (nitex 메쉬)의 1cm 사각형을 잘라 플라스틱 페트리 접시 (그림 1E)로 접착제 laevis의하십시오. </li></ol> 5. 이온 플럭스 측정 <ol><li> 보정 용액과 동일한 방법으로 샘플을 측정을 수행하기 위해 사용되는 버퍼에 존재하는 이온의 농도를 측정한다. X. laevis의 난자는 마크의 수정 된 벨소리 (MMR)이 필요합니다. 디100의 NaCl, 2의 KCl, 2 염화칼슘은, 하나의 MgCl 5 HEPES : issolve의 NaCl, KCl을, 염화칼슘, 및 탈 이온수의 MgCl로는 HEPES (MM)의 최종 농도에 도달한다. NaOH를 사용하여 7.5로 버퍼의 pH를 조정합니다. </li><li> 측정 챔버에 샘플을 놓고 미세 전극 (도 3a)의 근접 위치를 정의하는 micropositioner 사용 (약 10 μm의 거리)에 가까운 샘플 이온 선택 미세 전극을 가지고. </li><li> 전용 소프트웨어를 사용하여 가까운 위치와 거리 (먼) 샘플에서 위치 사이의 미세 전극의 낮은 주파수 (0.3 Hz에서) 여행 (100 ㎛)를 시작합니다. 미세 전극의 이동은 시료의 표면에 수직 인 것으로 확인. 참고 : 미세 전극의 여행이 소프트웨어를 설정할 수 있습니다. 대형 여행은 측정 동안 동안 작은 플럭스 쉽게 검출 가능 판독 구배 샘플링 간격을 길게하고 시간 해상도를 감소 증가시킨다. 참조 <st룽&gt; 예를 들어 그림 3A. </li><li> 소프트웨어를 이용하여 기록을 시작한다. 미세 전극은 각각의 위치에서 일시 정지 MV에 전위를 컴퓨터 상에 기록된다. 신호의 안정화를 허용, 최소 2 분 동안 측정을 얻습니다. 짧은 시간 경과 실험, 전체 시간 경과에 대한 관심의 위치에서 기록 잠재적 인 변화를. </li><li> txt 파일 등의 데이터를 추출하고 스프레드 시트 파일로 값을 복사합니다. </li><li> 캘리브레이션 값과 동일한 방식으로 MV 값에 대응하는 이온의 농도를 계산한다. 값을 플롯. 주 : 이온 플럭스가 존재하는 경우, 미세 전극이 두 위치 (도 3b) 사이의 이온 농도의 차이를 검출한다. </li><li> (단계 3.3.1) 이전처럼 확산 픽의 법칙을 이용하여 이온 플럭스를 계산한다. </li><li> 새로운 샘플을 측정하기 전에 버퍼 측정을 반복하고 모든 새를 위해 플럭스 측정 및 계산의 절차를 반복샘플. </li></ol> 6. 통계 분석 및 데이터 프레 젠 테이션 <ol><li> 및 / 또는 혼합 효과 28 ANCOVA 모델을 이용하여 상기 제어 조건 하에서 이온 플럭스에 시간의 위치의 영향을 독립적으로 테스트한다. 주 : 공분산 분석 (ANCOVA)은 두 범주 연속 대책 독립 변수로서 이용 될 수 있도록하여 일반 ANOVA 및 회귀 혼합 일반 선형 모델이다. 또한, 개인 및 최종 중첩 효과 당 반복 측정에 의한 상관 된 오류의 존재하에 혼합 효과 모델은 모두 고정 랜덤 효과 정확한 추정치를 모델링하는데 사용된다. </li><li> 여러 테스트를 28 페로 니 보정과 그룹 레벨 사이의 학생 T의 -test를 사용하여 쌍으로 비교를 계산합니다. </li><li> 박스 플롯은 위치와 시간에 따라 이온 플럭스 측정을 요약하기 위해 생성한다. 기술 페어 학생 T에서 P 값을 포함(도 3d) 다음과 같이 상기 P 값의 유의 수준을 나타낸다 : * : p &lt;0.05; ** : P &lt;0.01; *** : P &lt;0.001 (29) </li></ol>

저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

생체 내에서 세포 외 이온 플럭스의 성공적인 측정을위한 가장 중요한 단계는 : 소음의 감소, 이온 선택성 미소 전극과 기준 전극의 정확한 제조 한 샘플과 두 전극의 위치. 잡음을 최소화하기 위해, 기록 방식이 바람직 또한 접지되어 금속 얹어 (제진) 테이블과 접지 된 패러데이에 있어야한다. 또한, 현미경 섀시는 또한 접지되어야한다. 전기 노이즈의 소스는 광원을 포함한다. 광섬유 &#39;팬이없는&#39;광원은 최소한의 전기적인 노이즈가 발생합니다. 마지막으로, 소유자는 염화물 미세에 실버 와이어와 펠렛을 유지하는 (차아 염소산 나트륨 표백제에 딥과 DH 2 O에 린스)를 사용하여 소음을 최소화 이온 선택적 미세 또는 측정 될 것이다 기준 전극에 공기 방울의 국지적 인 존재 같은 실패미세 전극의 전도성은 존재하지 않거나 손상 될 것입니다. 따라서, 홀더에 장착하기 전에이를 현미경으로 전극을 확인하는 것이 중요하다. 공기 방울을 제거하기위한 세...

<html> 모든 동물 세포는 외부 환경으로부터 세포질을 분리 지질 이중층 막에 의해 둘러싸여있다. 셀 이온 (1)의 능동 수송에 의해, 내부 전기 막 잠재력, 음을 유지합니다. 막 전위는 셀이 막 (2)에 다양한 분자 장치를 조작하기 위해 활용할 수있는 저장된 에너지 원이다. 뉴런과 다른 흥분성 세포는 큰 막 잠재력을 가지고있다. 나트륨 채널의 신속한 개폐는 막 전위 (탈분극)을 축소하고 신경 세포 (2)의 길이를 따라 이송되는 활동 전위를 생성한다. 이외에도 이러한 급격한 전기 변화에서, 많은 조직과 장기 생성하고 중요한 장기 전기 잠재력을 유지한다. 예를 들어, 피부 및 각막 상피 생성 및 이온의 펌핑 방향 (주로 나트륨 및 염화물) (3)에 의해 트랜스 - 상피 세포 외 전위 및 전류를 유지한다. 내인성 세포 외 전류의 측정은 진동 프로브 4-6과 세포막과 상피 세포층의 전기 파라미터의 측정을 허용 미세 전극 시스템 7-10를 사용하여 막 또는 트랜스 - 상피 전위의 측정을 사용하는 동안 십t &quot;&gt; 이들은 아무 수득 관련된 이온 종의 표시. 선택적 이온 운반체와 미소 전극은 용액에서 특정 이온 농도를 측정 할 수 있습니다. 이온 구배 또는 플럭스는 서로 다른 위치에 둘 이상의 전극을 이용하여 측정 될 수있다. 그러나, 각 프로브의 극한 전압 드리프트가 달라도 측정 부정확 또는 존재하지 않았다 구배에도 검출을 일으키는 것이다. 이 두 점 사이의 낮은 주파수로 이동된다 &quot;자체 참조&quot;모드에서 사용되는 단일 전극이 문제를 해결한다. 이제 이온 플럭스가 비교적 느린 안정된 신호 드리프트의 배경에 대해 알 수있다 (도 3b 참조). </P&gt; 이온 성 측정 시스템은 단일 조직 또는 세포에 가까운 작은 세포 외 이온의 플럭스를 검출하는 이온 선택성 자체 참조 미소 전극을 사용한다. 시스템은 미세 전극의 움직임을 제어하기위한 미세 전극 및 마이크로 스테퍼 모터 드라이버로부터의 신호를 처리하여 증폭기로 구성된다. 회로를 닫을 이온 선택 미세 전극 및 기준 전극은 headstage 프리 앰프 (도 1a)를 통해 증폭기에 접속된다. 컴퓨터 소프트웨어 미세 운동 (주파수, 거리)의 파라미터를 결정하고, 또한 상기 증폭기의 출력을 기록한다. 스테퍼 모터는 입체 micropositioner 통해 미세 이동을 제어한다. 이온 선택 미세 진동 저주파 1 특정 칼슘 플럭스 (11)를 측정하기 위해 1990 년에 개발되었다. 뿐만 아니라 칼슘, 상업적으로 접근 이온 운반체 칵테일 지금 MICR을 할 수 있습니다oelectrodes 나트륨, 염화 칼륨, 수소, 마그네슘, 질산 암모늄, 불화 리튬, 또는 수은 민감. 기본적으로, 자기 - 참조 이온 선택 미세 기술은 전압계에 의해 측정 될 수 전위로 용액에 용해 특정 이온의 활성을 변환한다. 이온 운반체 칵테일 혼합되지 않는 액체 이온 교환 특성 (유기, 친 유성) 단계입니다. 선택적 이온 운반체 (귀속) 특정 이온을 가역적 및 미세 전극 (전해액)에 함유 수용액 및 미세 전극을 침지시킨 수용액 (도 1d) 간의 전송들을 복합체. 이 이온 이동은 전기 화학 평형에 이르게하고 미세 전극과 기준 전극 사이의 전위의 변화는 전압계에 의해 측정된다. 전압은 네른스트 E에 따라 특정 이온 활성의 대수에 비례이온 농도 (도 2A와 B)의 계산을 허용 quation. 현재, 몇몇 시스템들은 유사한 개념 또는 원리를 이용하여 이온 플럭스의 측정을 허용한다. 예를 들어, 및 뉴만 Shabala 14-16 의해 개발 스캐닝 이온 선택 전극 기법 (SIET) (12, 13) 또는 미세 전극 이온 플럭스 추정 (MIFE) 기술이 널리 시판 특정 이온을 결정하기 위해 연구 커뮤니티에서 사용하는 동물, 식물 및 단일 생존 세포 모델에 걸쳐 다양한 세포막 및 조직에서 발생하는 플럭스. 이온 선택 미소 전극은 뇌동맥 쥐 18 꽃가루 튜브 19 스케이트 망막 세포 20 수소 유속, 마우스 뼈 (21), 각종 이온 칼슘 플럭스를 수소 칼륨 및 칼슘 플럭스 식물 뿌리 (17)에 걸쳐, 염화물 플럭스를 측정하기 위해 사용되어왔다 곰팡이 균사 (22)과 R의 플럭스단일 세포 중에 각막 창상 23, 그리고 마지막으로 칼슘 플럭스 12, 24에서 치유. 또한 이온 선택적 자체 참조 미소 전극 (25)에 대한 자세한 내용은 다음 리뷰를 참조하십시오. 다음 문서를 준비하고 단일 세포 수준에서의 이온 선택 자체 참조 미세 전극 기술을 이용 내인성 세포 외 이온 플럭스의 측정을 수행하는 방법을 상세히 설명한다.

<table><tbody><tr><td>아이오앰프&nbsp;</td><td>&nbsp; BioCurrents Research Center, Woods Hole, MA, USA</td><td>미국</td><td>매사추세츠주 우즈 홀에 있는 BioCurrents Research Center에서 만든 증폭기 없음; 유사한 시스템은 "에서 구입할 수 있습니다. XBL 기능이 중요합니다." (http://www.xuyue.org/) 또는 " YoungerUSA" (http://www.youngerusa.com/) 또는 해당 전자 제품(http://www.applicableelectronics.com/)</td></tr><tr><td>IonAmp32&nbsp;</td><td>&nbsp; BioCurrents Research Center, Woods Hole, MA, USA</td><td></td><td>BioCurrents Research Center, Woods Hole, MA, USA에서 만든 소프트웨어 없음; 유사한 시스템은 "에서 구입할 수 있습니다. XBL 기능이 중요합니다." (http://www.xuyue.org/) 또는 " YoungerUSA" (http://www.youngerusa.com/) 또는 해당 전자 제품(http://www.applicableelectronics.com/)</td></tr> <tr><td>헤드 스테이지 프리 앰프</td><td>&nbsp; BioCurrents Research Center, Woods Hole, MA, USA</td><td>INA116</td><td>BSR 전압 팔로워 INA116, BioCurrents Research Center에서 설계, Woods Hole, MA, USA; 유사한 시스템은 "에서 구입할 수 있습니다. XBL 기능이 중요합니다." (http://www.xuyue.org/) 또는 " YoungerUSA" (http://www.youngerusa.com/) 또는 해당 전자 제품(http://www.applicableelectronics.com/)</td></tr><tr><td>MicroStep 드라이버</td><td>&nbsp; BioCurrents Research Center, Woods Hole, MA, USA</td><td>X</td><td>, Y 및 Z 포지셔닝에는 3개의 MicroStep 드라이버가 필요하지 않습니다. BioCurrents Research Center, Woods Hole, MA, USA에서 제작했습니다. 유사한 시스템은 "에서 구입할 수 있습니다. XBL 기능이 중요합니다." (http://www.xuyue.org/) 또는 " YoungerUSA" (http://www.youngerusa.com/) 또는 적용 가능한 전자 제품(http://www.applicableelectronics.com/)</td></tr> <tr><td>수동 마이크로 포지셔너&nbsp; &nbsp;</td><td>세계 정밀 기기&nbsp;</td><td>모델 KITE-R</td><td>유사한 시스템은 적용 가능한 전자제품(http://www.applicableelectronics.com/)마그네틱 스탠드에서 구매할 수 있습니다</td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>World Precision Instruments</td><td>모델 M10</td><td>유사한 시스템은 Applicable Electronics(http://www.applicableelectronics.com/)진동 절연 표에서 구입할 수 있습니다</td></tr><tr><td>.&nbsp; &nbsp;</td><td>뉴포트 Inc.&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>모델 VW-3036-OPT-023040</td><td>유사한 시스템은 적용 가능한 전자제품(http://www.applicableelectronics.com/)에서 구매할 수 있습니다.</td></tr> 세 <tr><td>가지 차원의 마이크로포지셔너의 일부입니다: 꺾쇠 괄호, 90도;, 슬롯형 면</td><td>Newport Inc.&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>모델 360-90</td><td>세 개의 dimantionnal micropositionner의 집합체는 또한 X, Y, Z 제어를 위한 세 개의 전기 회전 모터, MCA-2 조절 가능한 각도 포스트가 있는 MPH-1 마운팅 암, 그리고 다양한 Newport 커넥터와 진동 테이블에 볼트로 고정하는 나사가 필요합니다</td></tr>. <tr><td>세 가지 차원의 micropositioner의 일부: Peg-Joining Dovetail Stage 0.5 inch X Travel</td><td>Newport Inc.&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>460PD-X</td><td>없음</td></tr><tr><td>3차원 마이크로포지셔너의 일부: 퀵 마운트 리니어 스테이지, 0.5인치 XY Travel</td><td>Newport Inc.</td><td>460A-XY</td><td>없음</td></tr><tr><td>Kwik-Fil 필라멘트가 없는 얇은 벽의 붕규산 유리 모세혈관&nbsp;</td><td>세계 정밀 기기&nbsp;</td><td>TW150-4</td><td>없음</td></tr><tr><td>전극 풀러&nbsp;</td><td>나리시게</td><td>&nbsp; PC-10</td><td>없음</td></tr><tr><td>금속 랙</td><td>자체 제작</td><td>없음</td><td>금속 전극 홀더는 10cm x 15cm 크기의 강철 바닥에 반 센티미터 간격으로 2mm 너비의 구멍을 드릴링하여 집에서 제작</td></tr><tr><td>QL</td><td></td><td>모델 10 랩 오븐</td><td>없음</td></tr><tr><td>실란화 솔루션 I&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>85126</td><td>위험, 제공자가 권장하는 대로 처리&nbsp;</td></tr><tr><td>유리 페트리 접시; Pyrex</td><td>Fisher Scientific</td><td>316060</td><td>없음</td></tr><tr><td>전극/마이크로피펫 저장 항아리</td><td>World Precision Instruments&nbsp;</td><td>E215</td><td>없음</td></tr><tr><td>유리 건조제</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-595E</td><td>에는 드라이라이트 건조제(WA Hammond Drierite Co. Ltd, Xenia, OH, USA)가 포함되어 있습니다. 밀봉에 바셀린을 올려 밀폐시킵니다.</td></tr><tr><td>플라스틱 파스퇴르 피펫&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>11597722</td><td>없음</td></tr><tr><td>Bunsen 버너</td><td>Fisher Scientific</td><td>S97329</td><td>없음</td></tr><tr><td>현미경 슬라이드</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8902</td><td>없음</td></tr><tr><td>직선 미세전극 홀더</td><td>Warner Instruments</td><td>QSW-A15P</td><td>는 금색 1 mm 남성 커넥터와 Ag/AgCl 와이어가 있습니다</td></tr><tr><td>. 직선형 미세전극 홀더&nbsp;</td><td>AgCl(Ag+) 펠릿이 내부에 있고 금색 2 mm 남성 커넥터가 있는</td> <td>World Precision Instruments</td><td>MEH3S</td>;</tr><tr><td>6cm 페트리 접시</td><td>VWR</td><td>60872-306</td><td>없음</td></tr><tr><td>Nitex 메쉬</td><td>Dynamic Aqua-Supply Ltd.</td><td>NTX750</td><td>접착제 없음</td></tr><tr><td>; 록타이트 에폭시</td><td>VWR</td><td>500043-451</td><td>플라스틱 계량 보트에 접착제와 경화제를 같은 비율로 혼합하고 철저히 혼합합니다. 빨리 설정되지만 완전 경화를 위해 24시간 동안 RT로 두십시오</td></tr><tr><td>. 탈이온수&nbsp;</td><td>시그마-알드리치</td><td>99053</td><td>없음</td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>시그마-알드리치</td><td>S7653</td><td>없음</td></tr><tr><td>염화칼</td>륨 <td>시그마-알드리치</td><td>P9333</td><td>없음</td></tr><tr><td>염화칼슘</td><td>시그마-알드리치</td><td>C1016</td><td>없음</td></tr><tr><td>염화마그네슘</td><td>시그마-알드리치</td><td>M8266</td><td>없음</td></tr><tr><td>헤페스</td><td>시그마-알드리치</td><td>H3375</td><td>없음</td></tr><tr><td>수산화 나트륨</td><td>: 시그마 -알드리치</td><td>S8045</td><td>없음</td></tr><tr><td>, 칼륨 아세테이</td>트 <td>: 시그마 - 알드리치</td><td>P1190</td><td>:</td></tr><tr><td>아가 로즈</td><td>시그마 - 알드리치</td><td>A9539</td><td>없음</td></tr></tbody></table>

이온 선택적 자체 참조 미세 전극 기술을 이용하여 세포 외 이온 플럭스 측정

Measurement of Extracellular Ion Fluxes Using the Ion-selective Self-referencing Microelectrode Technique

동물, 식물 및 단일 세포로부터 세포 외부로부터 세포질을 분리 세포막라는 장벽에 의해 밀폐된다. 이러한 상피 세포층로서 또한 외부 또는 다세포 유기​​체의 다른 구획에서 내부를 분리 장벽을 형성한다. 이러한 장벽의 주요 기능은 세포막 또는 세포 층에 걸쳐 이온의 미분 분포이다. 두 속성이 배포 허용 : 1) 막과 상피 특정 이온에 선택적 투과성을 표시; 2) 이온은 세포막 및 세포 층에 걸쳐 펌프를 통해 운반된다. 이러한 속성은 조직의 생리를 유지하는 중요한 역할을 수리하는 동안, 손상 후 신호를 신호로 작동, 또는 병적 인 상태에서. 이온 선택적 자체 참조 미세 전극은 단일 세포와 조직 수준의 칼슘, 칼륨, 나트륨 등의 이온의 특정 플럭스를 측정 할 수 있습니다. 미세 전극은 이온 운반체 칵테일을 포함특정 이온에 선택적으로 투과. 내부 도금액 관심 이온 농도 세트를 포함한다. 미세 전극의 전위는 이온의 외측 농도에 의해 결정된다. 이온 농도의 변화에​​ 따라, 미세 전극의 전위는 이온 활성의 로그 함수로서 변화시킨다. (인해 이온 플럭스 농도 구배 예) 앞뒤로 이온의 소스 또는 싱크 가까이 이동할 때 미세 전극 전위는 이온 플럭스 / 구배에 비례하는 진폭 변동한다. 증폭기는 미세 신호를 증폭하고 출력은 컴퓨터 상에 기록된다. 이온 플럭스는 그러한 특정 이온 이동성 전극 전위 변동, 미세 전극의 편위 및 다른 파라미터를 이용하여 픽의 확산 법칙에 의해 계산 될 수있다. 본 논문에서는, 우리는 이온 선택적 자체 참조 미세 전극을 사용하여 세포 외 이온 플럭스를 측정하는 방법 상세 설명몇 가지 대표적인 결과를 제시 거라고.

우리는 이전에 칼슘 유입이 하나의 셀 (24) 부상 후 나타나는 것으로 나타났습니다. 따라서 우리는 다른 이온 플럭스는 단일 세포 상처에 발생 여부를 물었다. 우리는 X를 사용 난자, 단일 셀 상처 치유 30-34과 전기 생리 기록 24,35-39에 대한 잘 확립 된 모델을 laevis의. 흥미롭게도, 칼륨 이온은 X. 내부 더 농축하여 laevis의 것은 난자 (약 110 mM)을 (MMR 1 배에서 1 mM)을 사용하는 세포 외 용액에서 40 상처에 따라 칼륨의 유출을 시사한다. 상기 가정을 확인하기 위해, 우리는 X. 과정 중에 칼륨 플럭스를 측정 이온 선택 자체 참조 미세 전극을 이용하여 난자 세포막 laevis의 치유. 난자 상처하려면 먼저 큰 팁 크기 (~ 50 μm의)와 모세관 전극을 당깁니...

세포막의 수송체는 세포막 또는 세포층을 가로질러 이온을 차등적으로 분리할 수 있으며 조직 생리학, 복구 및 병리학에서 중요한 역할을 합니다. 우리는 생체 내에서 단일 세포 및 조직에서 특정 이온 플럭스를 측정할 수 있는 이온 선택적 자체 참조 미세전극에 대해 설명합니다.

Cells from animals, plants and single cells are enclosed by a barrier called the cell membrane that separates the cytoplasm from the outside. Cell layers ...

이 절차의 전체적인 목표는 이온 선택적 자기 참조 미세 전극 기술을 사용하여 생체 내(in vivo) 세포 외 이온 흐름을 측정하는 것입니다. 이는 먼저 이온 선택적 전극과 참조 미세 전극을 조립함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 이온 선택적 자기 참조 미세 전극을 교정하고 검증하는 것입니다.다음으로, 전압 기록의 형태로 생물학적 시료의 이온 특이적 플럭스 측정을 수행합니다. 마지막으로, 전압 기록을 이온 플럭스로 변환합니다. 궁극적으로, 이 기술을 통해 살아있는 세포 또는 조직에서 특정 세포외 이온 플럭스를 비침습적으로 정확하게 측정할 수 있습니다.이 방법은 재생이나 병리학뿐만 아니라 생리학 또는 노화의 핵심 질문들에 답하는 데 도움을 줄 수 있습니다. 예를 들어, 이 방법을 통해 조직 형태 형성 성장 또는 분화와 같은 생물학적 과정을 조절하는 특정 이온 흐름을 식별할 수 있습니다. 이 절차의 시연은 포스닥인 Dr.Gim Ardi와 Dr.Benjas 연구실에서 진행합니다. 전극 교정 장착 전, 1 mm 금제 수형 커넥터와 염화은 코팅 은선이 장착된 미세 전극 홀더에 미리 채워진 이온 선택성 전극을 장착하십시오.그 다음 마이크로 전극 홀더를 3축 컴퓨터 제어 전자 마이크로 포지셔너에 부착합니다. 이온 선택성 전극 자체에는 이미 전해질과 분석 대상 이온에 해당하는 이온 포어 칵테일 용액이 포함되어 있어야 합니다. 장착이 완료되면 전극을 1mM 염화칼륨 용액에 담급니다.또한, 한천(agar) 내의 3 M 염 용액, 염화은(silver chloride)이 코팅된 은 펠릿 및 기준 전극용 2 mm 금 수단자(gold male connector)가 포함된 직선형 마이크로 전극 홀더에 기준 전극을 장착하십시오. 염 용액의 선택은 측정하려는 이온 종에 따라 달라집니다. 기준 전극을 준비한 후, 전극 홀더를 마그네틱 스탠드에 미리 장착된 수동 마이크로 포지셔너에 연결하십시오.전극을 장착한 후, 1 mM 염화칼륨 용액에 담가야 합니다. 시작하기 전, 이온 선택성 전극 장치를 위해 분석 대상 이온이 포함된 전해질 교정 표준물질의 희석 계열을 준비하십시오. 예를 들어, 약 1 mM의 생리학적 농도에서 칼륨 양이온을 검출하려는 경우, 10, 1, 0.1 mM 농도의 염화칼륨 용액으로 3-log 계열을 제조하십시오.이는 분석에 필요한 검출의 동적 범위를 최대화합니다. 이온 선택 전극을 보정하려면, 먼저 이온 선택 전극과 참조 전극 모두를 가장 농도가 낮은 보정 용액(이 경우에는 0.1 millimolar)에 담급니다. 실온에서 1~3분 동안 짧게 안정화시킨 후, 정상 상태 전압을 측정하여 기록합니다.나머지 검정 표준물질들에 대해 전압 측정을 반복하고, 측정된 전압을 몰 이온 농도의 로그 값에 대해 도식화하십시오. 각 표준 용액에 대해 선형 회귀 분석을 적용하여 검정 곡선의 기울기, 절편 및 결정 계수(R² 값)를 확인하십시오. 네른스트 기울기를 계산할 때는 측정된 전압을 전압 증폭기의 총 이득으로 나누어야 함을 유의하십시오.측정 프로토콜을 시연하기 위해, 칼륨 민감성 미세 전극을 사용하여 천공된 개구리 난모세포로부터의 칼륨 이온 유출을 분석합니다. 이온 선택성 전극 설정을 시작하기 전, 800 µm 나일론 메시에서 1 cm 크기의 조각을 잘라 플라스틱 페트리 접시에 접착합니다. 또한, 다음과 같은 조성의 Mark 변형 링거액을 미리 준비합니다: 100 mM NaCl, 2 mM KCl, 2 mM CaCl₂, 1 mM MgCl₂ 및 5 mM HEPES. 수산화나트륨을 사용하여 버퍼의 pH를 7.5로 조절하고, 완성된 버퍼의 일정량을 페트리 접시에 넣습니다.개구리 세포, 이온 선택 전극 및 참조 전극을 페트리 접시에 조심스럽게 배치합니다. 그런 다음 세포를 천공하고 마이크로 포지셔너를 작동시켜 이온 선택 전극이 시료로부터 약 10 microns 거리에 위치하도록 합니다. 명칭상 시료와 전극 사이의 현재 거리를 근접 위치(close position)로 지정합니다.다음으로, 이온 선택 전극이 10 µm의 근접 위치에서 100 µm의 원거리 위치로 주기적으로 이동했다가 다시 근접 위치로 돌아오도록 마이크로 포지셔너를 작동시키며, 이때 이동 속도는 0.3 Hz, 즉 10초당 3회 왕복하도록 설정합니다. 마이크로 포지셔너 작동 중에 전극의 이동 방향이 세포의 손상된 접선 표면에 대해 정확히 수직인지 확인하고, 전압 측정 및 기록 소프트웨어를 활성화합니다. 마이크로 포지셔너는 전압 데이터가 수집되는 동안 근접 위치와 원거리 위치에서 잠시 멈추도록 프로그래밍되어 있습니다.난모세포 상처 치유 과정 중에는 데이터가 지속적으로 기록되며, 이는 더 긴 실험의 경우 약 15분 정도 소요됩니다. Opus 올챙이 꼬리 재생 측정과 같이 며칠에 걸친 과정을 관찰하는 경우에는 1, 3, 6, 12, 24시간 등 서로 다른 시점에서 각각 2분 동안 측정을 수행합니다. 실험이 완료되면 전압 데이터를 텍스트 파일로 추출하여 해당 값들을 스프레드시트에 복사하십시오.이전에 결정한 검정 곡선을 사용하여 측정된 전압 값을 그에 해당하는 이온 농도로 변환하십시오. 외삽된 이온 농도를 생물학적 시료로부터의 거리의 함수로 도식화하십시오. 마지막으로, 픽의 확산 법칙(Fick's law of diffusion)을 사용하여 이온 플럭스를 계산하십시오.여기서 C는 용액 내의 이온 농도, MU는 이온 이동도, DC DX는 거리 dx에 따른 농도 차이를 나타냅니다. 생물학적 실험에 앞서, 이온 선택성 전극의 NER 기울기 절편 값과 전체 교정 곡선을 페트리 접시에 배치한 1 M 이온원으로부터 생성된 인공 이온 구배를 통해 검증할 수 있습니다. 칼륨 이온 농도의 변화를 annu 부위 상처와 가깝거나 먼 거리에서 도식화하여 분석합니다.데이터에 따르면 세포 손상 시작 시점에 대규모 칼륨 유출 이벤트가 발생하며, 상처 치유가 진행됨에 따라 칼륨 유출은 점차 감소하여 상처가 완전히 치유되는 15분 후에 정지 상태의 수준으로 돌아갑니다. 또한, 측정된 칼륨 이온 농도를 이온 유속으로 변환했을 때, 손상 후 칼륨 유속의 급격한 증가와 점진적인 감소는 손상되지 않은 대조군 난모세포와 비교했을 때 통계적으로 유의미한 효과인 것으로 나타납니다. 이 절차 이후에는 세포 간 및 세포 내 이온 유속의 특성에 관한 추가적인 질문에 답하기 위해 형광 생체전기 표지법과 같은 다른 방법들을 수행할 수 있습니다.

measurement-extracellular-ion-fluxes-using-ion-selective-self

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 프로토콜은 세포외 플럭스 분석을 통해 1차 백혈병 세포의 세포외 산성화율(ECAR) 및 산소 소비율(OCR)을 측정하기 위한 생화학적 접근 방식을 제공합니다. 이러한 세포의 대사 프로파일에 대한 평가는 세포의 요구를 특성화하는 데 도움이 되어 맞춤형 치료로 이어집니다.

Extracellular Flux Assay: 세포의 대사 프로파일을 측정하는 방법

이 비디오에서는 형광 리포터와 융합된 광 의존성 이온 채널 단백질을 발현하는 배아 신장 세포 배양이 이온 이동에 대한 빛의 영향을 보여줍니다. 전체 세포 패치 클램프는 이온의 움직임을 모니터링하는 데 사용됩니다.

광유전학적 전기생리학: 빛에 의존하는 이온 채널을 가진 세포의 기록

이 동영상은 이온 선택성 및 이온 영동 미세전극을 사용하여 전기 신호를 측정하고 비교함으로써 뇌 절편의 세포 외 공간을 특성화하는 방법을 보여줍니다. 이 프로세스는 공간의 부피 분율과 비틀림 정도를 결정하는 데 도움이 됩니다.

Ion-Selective and Iontophoresis microelectrodes를 사용한 뇌 절편의 세포외 공간 특성화

이 글의 첫 번째 부분에서는 원형질막에서 소포성 Na+/H+ 교환체를 발현하는 돌연변이 세포주를 선택하는 방법을 보여줍니다. 두 번째 부분에서는 세포 내 pH 측정 및 빠른 이온 흡수를 기반으로 하는 프로토콜을 제공하며, 이는 이러한 교환기의 이온 선택성과 운동 파라미터를 결정하는 데 사용됩니다.

나의 기능적 특성<sup&gt; +</sup&gt; / H<sup&gt; +</sup&gt; 선택을 양자가 살해 사용하여 세포 내 구획의 교환기는 플라즈마 막에서 그들을 표현하는

우리는 뇌 조직의 이온 농도 측정을 위한 두 가지 유형의 이온 선택성 미세 전극(이중 배럴 및 동심원)의 제조, 보정 및 특성을 보여줍니다. 그런 다음 이들은 쥐 해마 절편 준비에 사용되어 흥분 활동이 세포 외 칼륨과 나트륨 농도를 모두 변화시킨다는 것을 보여줍니다.

뇌 조직에서 측정 세포 외 이온의 신호에 대한 두 번 질주과 동심 미소 전극

이 프로토콜은 초파리에서 격리 Malpighian (신장) 세관에서 유체 분비 속도를 측정 할 수있는 램지 분석의 사용을 설명합니다. 또한, 이온 전극의 특정 사용 transepithelial 이온 플럭스의 계산을 가능하게 분비 유체 나트륨 및 칼륨 농도를 측정하기 위해, 설명한다.

램지 분석의 사용은 유체 분비 및 이온 플럭스 요금을 측정하는<em&gt; 초파리</em&gt; Malpighian하는 Tubule

이 기사에서는 HEK293 세포를 사용한 전기생리학적 전체 세포 패치 클램프 기록으로 채널로돕신의 이온 선택도를 측정하는 방법을 설명합니다. 여기에서는 음이온 선택성 채널로돕신의 염화물 선택성을 조사하기 위한 실험 절차를 설명합니다. 그러나 이 절차는 뚜렷한 선택성을 가진 다른 채널로돕신으로 이전할 수 있습니다.

Channelrhodopsins에서 이온 선택성의 전기 생리 학적 결정을위한 전체 셀 패치 - 클램프 기록

이 원고는 양성자 교통 시스템의 활동을 측정 하 양성자-선택적 전극 및 패치 방법 클램핑의 응용 프로그램을 설명 합니다. 이러한 메서드는 일반적으로 양성자 수송 활동, 적당 한 감도, 시간 해상도 및 부족 한 세포내 환경 제어 등을 연구 하는 데 사용 하는 기술의 몇 가지 제한 사항이 극복.

전기 중립 전송기의 활동을 연구 전기 생리학 측정의 응용

칼륨 이온은 세포의 휴식 막 잠재력에 기여 하 고 extracellular K+ 농도 세포 흥분의 중요 한 레 귤 레이 터 이다. 우리가 확인 하 고, 보정 하 고 monopolar K+를 사용 하는 방법을 설명-선택 microelectrodes. 같은 전극을 사용 하 여 성인 hippocampal 조각 전기 evoked K+ 농도 역학 측정 수 있습니다.

만들기, 테스트 및 성인 뇌의 조직 조각에 칼륨 이온 선택적 Microelectrodes를 사용 하 여

여기 설명 (1) 갓 그대로 뇌 내 피 "튜브" 및 내 피 칼슘과 막 내 피 파생 hyperpolarization 동안 잠재적인의 (2) 동시 측정을 분리에 대 한 프로토콜이 있습니다. 또한, 이러한 메서드는 내 피 세포 칼슘 및 개별 또는 대화형 실험 변수로 전기 신호의 약리 튜닝 수 있습니다.

세포내 칼슘과 갓 고립과 그대로 마우스 대뇌 피에 막 잠재력의 동시 측정

이 프로토콜은 램지 분석, 이온 선택적 미세 전극, 스캐닝 이온 선택적 전극 기술 (SIET) 및 시험관 위축 분석 뒤에 방법론을 간략하게 설명하며, 말피기안 튜블러와 힌구트로 구성된 성인 모기 배설 시스템을 연구하기 위해 적용되어 이온 및 유체 분비 속도, 수축 활동 및 변형 변환을 공동으로 측정합니다.

성인 모기에 있는 배설 시스템의 Neuropeptides 및 그밖 규제기관의 활동을 공부하기

배우세요 이온 선택적 자체 참조 미세 전극 기술을 사용하여 살아있는 세포와 조직의 세포 외 이온 플럭스를 비침습적으로 측정하는 방법을. 이 기술은 전기생리학 및 세포 생물학 연구에 정확한 데이터를 제공합니다.

이온 선택적 자체 참조 미세 전극 기술을 이용하여 세포 외 이온 플럭스 측정

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