Name: 테스트를위한 병아리 심장 침략 분석 암 세포의 침윤과 잠재적 안티 침략 화합물의 활동 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 16 s
Description: 학습하세요 병아리 심장 조각을 이용한 3차원 종양 침윤 연구 방법을. 이 기술은 항침윤 약물 후보를 평가하고 암 치료 전략 개발에 기여할 수 있습니다.

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비디오 필름에서 분석 기술을 시연해 준 Marleen De Meulemeester에게 감사드립니다. B. I. R.은 플랑드르 연구 재단(FWO – Vlaanderen)의 박사후 연구원입니다. L.M.M.은 플랑드르 암 리그(Vlaamse Liga tegen Kanker)로부터 Emmanuel van der Schueren 보조금을 받았습니다.

<ol><li>Mareel, M. M., Bracke, M. E., Van Roy, F. M., de Baetselier, P. Molecular mechanisms of cancer invasion. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMareel%2C+MM+%22Encyclopedia+of+Cancer%22">Encyclopedia of Cancer</a>. JR, B. ertino 2, Academic Press. San Diego. 1072-1083 (1997).</li>
<li>Mareel, M., Kint, J., Meyvisch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+study+of+the+invasion+of+malignant+C3H+mouse+fibroblasts+into+embryonic+chick+heart+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Arch.+B.+Cell+Pathol.+Incl.+Mol.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Methods of study of the invasion of malignant C3H mouse fibroblasts into embryonic chick heart in vitro.</a> Virchows Arch. B. Cell Pathol. Incl. Mol. Pathol. 30 (1), 95-111 (1979).</li>
<li>Albini, A., Noonan, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%E2%80%98chemoinvasion%E2%80%99+assay%2C+25+years+and+still+going+strong%3A+the+use+of+reconstituted+basement+membranes+to+study+cell+invasion+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The ‘chemoinvasion’ assay, 25 years and still going strong: the use of reconstituted basement membranes to study cell invasion and angiogenesis.</a> Curr. Opin. Cell Biol. 22 (5), 677-689 (2010).</li>
<li>De Wever, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+and+spheroid+collagen+type+I+invasion+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Single cell and spheroid collagen type I invasion assay.</a> Methods Mol. Biol. 1070, 12-35 (2014).</li>
<li>Wolff, E., Schneider, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((La+transplantation+prolong%C3%A9e+d%E2%80%99un+sarcome+de+souris+sur+des+organes+embryonnaires+de+poulet+cultiv%C3%A9s+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22C.R.+Seances+Soc.+Biol.+Fil%22%5BJournal%5D)">La transplantation prolongée d’un sarcome de souris sur des organes embryonnaires de poulet cultivés in vitro.</a> C.R. Seances Soc. Biol. Fil. 151 (7), 1291-1292 (1957).</li>
<li>Easty, G. C., Easty, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+organ+culture+system+for+the+examination+of+tumor+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An organ culture system for the examination of tumor invasion.</a> Nature. 199, 1104-1105 (1963).</li>
<li>Schleich, A. B., Frick, M., Mayer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+of+invasive+growth+in+vitro.+Human+decidua+graviditatis+confronted+with+established+human+cell+lines+and+primary+human+explants%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Natl.+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Patterns of invasive growth in vitro. Human decidua graviditatis confronted with established human cell lines and primary human explants.</a> J. Natl. Cancer Inst. 56 (2), 221-237 (1976).</li>
<li>Sys, G. M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+In+ovo+CAM-assay+as+a+Xenograftodel+for+Sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">The In ovo CAM-assay as a Xenograftodel for Sarcoma.</a> J. Vis. Exp. (77), e50522(2013).</li>
<li>Bracke, M. E., Van Larebeke, N. A., Vyncke, B. M., Mareel, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinoic+acid+modulates+both+invasion+and+plasma+membrane+ruffling+of+MCF-7+human+mammary+carcinoma+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Retinoic acid modulates both invasion and plasma membrane ruffling of MCF-7 human mammary carcinoma cells in vitro.</a> Br. J. Cancer. 63 (6), 867-872 (1991).</li>
<li>Vermeulen, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transition+from+the+noninvasive+to+the+invasive+phenotype+and+loss+of+alpha-catenin+in+human+colon+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Transition from the noninvasive to the invasive phenotype and loss of alpha-catenin in human colon cancer cells.</a> Cancer Res. 55 (20), 4722-4728 (1995).</li>
<li>Parmar, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-invasive+activity+of+3%2C7-dimethoxyflavone+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharma.+Sci%22%5BJournal%5D)">Anti-invasive activity of 3,7-dimethoxyflavone in vitro.</a> J. Pharma. Sci. 83 (9), 1217-1221 (1994).</li>
<li>Parmar, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-invasive+activity+of+alkaloids+and+polyphenolics+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">Anti-invasive activity of alkaloids and polyphenolics in vitro.</a> Bioorg. Med. Chem. 5 (8), 1609-1619 (1997).</li>
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<li>Romeis, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Das+mikrotom%5BTitle%5D)+AND+%22Mikroskopische+Technik.+15+Verb.+Aufl.+Kapitel%22%5BJournal%5D)">Das mikrotom.</a> Mikroskopische Technik. 15 Verb. Aufl. Kapitel. 7, München: Leibniz. 114-120 (1948).</li>
<li>Van Marck, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-cadherin+promotes+cell-cell+adhesion+and+counteracts+invasion+in+human+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">P-cadherin promotes cell-cell adhesion and counteracts invasion in human melanoma.</a> Cancer Res. 65 (19), 8774-8783 (2005).</li>
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<li>Katritzky, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((QSAR+modeling+of+anti-invasive+activity+of+organic+compounds+using+structural+descriptors%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorg.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">QSAR modeling of anti-invasive activity of organic compounds using structural descriptors.</a> Bioorg. Med. Chem. 14 (20), 6933-6939 (2006).</li>
<li>McKinnell, R. G., Bruyneel, E. A., Mareel, M. M., Seppanen, E. D., Mekala, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+in+vitro+by+explants+of+Lucke+renal+carcinoma+cocultered+with+normal+tissue+is+temperature+dependent%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Invasion in vitro by explants of Lucke renal carcinoma cocultered with normal tissue is temperature dependent.</a> Clin. Exp. Metastasis. 4 (4), 237-243 (1986).</li>
<li>Wanson, J. C., de Ridder, L., Mosselmans, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+of+hyperplastic+nodule+cells+from+diethylnitrosamine+treated+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Invasion of hyperplastic nodule cells from diethylnitrosamine treated cells.</a> Cancer Res. 41 (12 Pt 1), 5162-5175 (1981).</li>
<li>Mareel, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+temperature+on+invasion+of+MO4+mouse+fibrosarcoma+cells+in+organ+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Effect of temperature on invasion of MO4 mouse fibrosarcoma cells in organ culture.</a> Clin. Exp. Metastasis. 2 (2), 107-125 (1984).</li>
<li>Laerum, O. D., Steinsvag, S., Bjerkvig, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+and+tissue+culture+of+the+central+nervous+system%3A+recent+developments+and+current+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neurol.+Scand%22%5BJournal%5D)">Cell and tissue culture of the central nervous system: recent developments and current applications.</a> Acta Neurol. Scand. 72 (6), 529-549 (1985).</li>
<li>Schroyens, W., Mareel, M. M., Dragonetti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+invasiveness+of+human+bladder+cancer+from+cell+lines+and+biopsy+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">In vitro invasiveness of human bladder cancer from cell lines and biopsy specimens.</a> Clin. Exp. Metastasis. 1 (2), 153-162 (1983).</li>
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<li>Bracke, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confrontation+of+an+invasive+%28MO4%29+and+a+non-invasive+%28MDCK%29+cell+line+with+embryonic+chick+heart+fragments+in+serum-free+culture+media%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Confrontation of an invasive (MO4) and a non-invasive (MDCK) cell line with embryonic chick heart fragments in serum-free culture media.</a> In Vitro Cell Dev. Biol. 22 (9), 508-514 (1986).</li>
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<li>De Neve, W. J., Storme, G. A., De Bruyne, G. K., Mareel, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+image+analysis+system+for+the+quantification+of+invasion+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metast%22%5BJournal%5D)">An image analysis system for the quantification of invasion in vitro.</a> Clin. Exp. Metast. 3 (2), 87-101 (1985).</li>
<li>Smolle, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+melanoma+cell+invasion+in+three-dimensional+confrontation+cultures+in+vitro+using+automated+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of melanoma cell invasion in three-dimensional confrontation cultures in vitro using automated image analysis.</a> J. Invest. Dermatol. 94 (1), 114-119 (1990).</li>
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<li>Bracke, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+tangeretin+on+tamoxifen%E2%80%99s+therapeutic+benefit+in+mammary+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Natl.+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">The influence of tangeretin on tamoxifen’s therapeutic benefit in mammary cancer.</a> J. Natl. Cancer Inst. 91 (4), 354-359 (1999).</li>
</ol>

저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

PHFs의 제조 동안, 단편 현탁액에 체류하지 않을 수도 있지만, 혈관 벽에 부착; 이는 배양액의 부피를 증가시킴으로써 극복 될 수있다. PHFs 수가 너무 낮고, 그 크기가 너무 큰 경우, 배양액의 부피를 감소시킨다. 집계 테스트 세포의 실패는 온도 나 미생물 감염에 변동 때문일 수 있습니다. 또한, 집계 무능력 세포의 고유 한 특성 일 수있다. PHF에 골재의 부착 동안에, 접착 불량은 반고체 한천 배지 위에 잠복기를 연장하거나 여과지 흡수에 의해 배양 주위 이상의 유체 배지를 제거함으로써 극복 될 수있다. 이 경우 미생물 오염에 대해서도 확인합니다. 절편 동안 어려움 파라핀 블록의 분해에 기인 할 수있다 : 블록의 저장 기간 (한번 용융 파라핀) 너무 오래 되었으면이 발생한다. 예술 절편 때ifacts은 마이크로톰 나이프의 무결성 및 고정 문화 코퍼스의 aliena의 유무를 체크해야 일어난다. 문화 괴사 지역은 가난한 배양 조건의 징후이다. 이러한 영역은 문화 중심지에 한정되...

침략은 악성 종양의 특징이다. 이 활동은 주변 조직의 파괴에 이르게뿐만 아니라 전이 형성에 연루되어 아닙니다. 암 환자가 침윤 및 전이, 효율적인 안티 침습적 치료법으로 사망 때문에 여전히 종양 세포의 침윤이 개발되었다 모방 부족한 실험실 분석이다. 병아리 심장 분석의 목적은 입체적 종양 침윤을 연구하는 중요한 장기 배양 방법을 제공하는 것이다. 분석은 침습적 및 비 침습적 세포를 구별하고, 종양 침윤에 대한 시험 화합물의 효과를 연구 할 수있다. 분석의 사용 배후의 이론적 근거는 종양은 종양 세포가 지속적으로 기질 (숙주 세포 및 세포 외 기질)과 상호 작용 생태계 있다는 실제적인 개념이며, 이들 분자 상호 침입 통해 그 미세 조정 (1)이다. 그래서, 분석에서 종양 세포 livi 직면종양 세포에 의해 침윤 용 기판으로서, 또한 간질 세포와 행렬 요소의 다른 유형의 소스로서 역할뿐만 NG 병아리 배아 심장 단편 2. 병아리 심장 근육 세포, 섬유 아세포 및 내피 세포를 포함하고, 세포 외 매트릭스는 라미닌, 피브로넥틴 및 콜라겐의 상이한 유형으로 구성된다. 이와 같이, 삼차원 기관 배양 기술은 환자의 종양 침윤에 관련 많은 세포와 분자의 상호 작용을 포함한다. 병아리 심장 분석의 주요 장점은 간질 효과를 구현 한 것이다. 이 측면은 기저막 3 간질 매트릭스 4 분자 구성이 아닌 생활 젤로 종양 세포 침공을 기반으로 체외에서 다른 침략 분석보다 더 완료됩니다. 장기 배양 실험에서 발견 된 바와 같이, 종양 세포 및 정상 생활 숙주 조직 사이의 대결의 개념은 여러 가지로 도입 된독일 7 울프와 슈나이더 프랑스 5, 영국 6 Easty과 Easty 및 Schleich을 포함하여 저자. 위에 인용 된 방법 병아리 심장 침윤 분석의 기술적 장점은 두 조각의 양이 용이하게 표준화 될 수 있도록, 그들은 기관 배양 물 중에 기능적 무결성 모니터링을 허용 수축성 남아 있다는 것이다. 그들은 쉽게 계란의 멸균 콘텐츠 해부 될 수 있기 때문에 또한, 조류 배아 바람직하다. 분석은 종양 세포로 둘러싸 복잡한 기질을 제공하여 병아리 chorioallantois 막 세이 8 컨셉 유사성을 갖는다. 분석은 성공적 9 및 HCT-8 (결장) 10 세포주 패밀리 MCF-7 (유방)과 같은 인간의 종양 침입 및 비 침습성 세포 변형을 구별하기 위해 적용되어왔다. 기술뿐만 아니라 잠재적으로 항 - 침습 화합물을 테스트하는 데 유용 <suP&gt; (11, 12). 상기 한 바와 같이, 그것은 작은 유기 분자의 구조 - 활성 관계의 확립을 위해 사용될 수있다. 분석은, 그러나, 계정으로 암 침공에 면역 세포의 기여를 고려하지 않습니다. 이는 기술이 때문에 조작의 높은 번호, 분석 런 제한된 숫자 (최대 30 배양)과 긴 턴어라운드 시간 (약 1 개월)의, 높은 처리량 분석 시스템으로 간주 될 수 없다는 것을 강조한다.

<table><tbody><tr><td>Ringer의 소금 용액</td><td>Braun</td><td>CEO123</td><td></td></tr><tr><td>Bacto-agar</td><td>Becton Dickinson</td><td>214010</td><td></td></tr><tr><td>Tris-(hydroxymethyl)-aminomethaan Analar</td><td>VWR</td><td>103157P</td><td></td></tr><tr><td>BSA : 소 혈청의 알부민, cohn V fract.</td><td>시그마</td><td>A4503-500G</td><td></td></tr><tr><td>MEM-Rega 3</td><td>라이프 테크놀로지스&nbsp;</td><td></td><td></td>19993013</tr><tr><td>자이로토리 쉐이커</td><td>New Brunswick Scientific</td><td>G10 및 G33</td><td></td></tr><tr><td>삼각 플라스크 50ml</td><td>Novolab</td><td>92717</td><td></td></tr><tr><td>유리 페트리 접시</td><td>Novolab</td><td>68516</td><td></td></tr><tr><td>홍채 절제술 가위</td><td>Rumex</td><td>11-0625</td><td></td></tr><tr><td>보정된 안구 그리드가 있는 매크로스코프</td><td>와일드</td><td>157702</td><td></td></tr><tr><td>파라핀 왁스</td><td>국제 의료 제품</td><td>8599956</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y</td><td>Sigma</td><td>230251-25g</td><td></td></tr><tr><td>Harris의 헤마톡실린</td><td>시그마</td><td>HHS32-1L</td><td></td></tr><tr><td>커버슬립 수지(Tissue-Tek)</td><td>Sakura</td><td>4494</td><td></td></tr><tr><td>파라핀 용융 장치</td><td>GFL</td><td>1052</td><td></td></tr><tr><td>파라핀 절편용 마이크로톰</td><td>Reichert</td><td></td><td></td></tr><tr><td>가스 인/아웃렛이 있는 Erlemeyer 플라스크용 스텝퍼</td><td>Novolab</td><td>2602421 및 260243</td><td></td></tr><tr><td>Diaminobenzidine</td><td>Sigma</td><td>D8001</td><td></td></tr><tr><td>REAX 흔들 테이블</td><td>Heidolph</td><td>54131</td><td></td></tr><tr><td>24웰 티슈 접시</td><td>VWR</td><td>NUNC142475</td><td></td></tr><tr><td>안과 적출 스푼</td><td>Rumex</td><td>16-060</td><td></td></tr><tr><td>날카로운 집게</td><td>Rumex</td><td>4-111T</td><td></td></tr><tr><td>무딘 집게</td><td>Nickel-Electro Ltd</td><td>7112</td><td></td></tr><tr><td>삼각 플라스크 5ml</td><td>Novolab</td><td>211901</td><td></td></tr><tr><td>현미경 슬라이드 세척 및 탈지</td><td>국제 의료 제품</td><td>8613908</td><td></td></tr></tbody></table>

테스트를위한 병아리 심장 침략 분석 암 세포의 침윤과 잠재적 안티 침략 화합물의 활동

Chick Heart Invasion Assay for Testing the Invasiveness of Cancer Cells and the Activity of Potentially Anti-invasive Compounds

병아리 심장 분석의 목적은 입체적 종양 침윤을 연구하는 중요한 장기 배양 방법을 제공하는 것이다. 분석은 침습적 및 비 침습적 세포를 구별하고, 종양 침윤에 대한 시험 화합물의 효과에 대한 연구를 가능하게 할 수있다. 암 세포 - 중 집계 또는 단일 세포로 - 배아 병아리 마음의 조각에 직면하고 있습니다. 며칠 또는 몇 주 동안 정지에서 기관 배양 후 직면 문화는 고정 및 조직 학적 분석을 위해 파라핀에 포함. 암세포 및 정상 조직 사이의 입체적인 상호 작용은 다음 헤 마톡 실린 - 에오신으로 또는 심장 조직의 에피토프 또는 대향하는 암 세포에 대한 면역 조직 화학 염색을 한 후 염색 직렬 섹션에서 재구성된다. 분석은 암세포 침윤이 암세포 및 그들의 이웃 기질 호스트 소자 (근육 섬유 모세포, endoth 분자 사이의 상호 작용의 결과 인 것으로 최근의 개념과 일치elial 세포, 세포 외 매트릭스 성분 등). 여기서,이 기질은 환경 생체 조직 절편 같은 암세포에 제공된다. 분석의 관련성에 대한 지원은 여러 양태이다. 프로그레시브 직업 및 교체 시간과 숙주 조직의 공간 및 침입과 대향 세포의 생체 내에서 비 - 침입 일반적 분석의 결과와 상관 관계 : 분석에서 내습 암 침윤의 기준에 따른다. 또한, 생체 내에서 세포의 침입 패턴은 병리학 자에 의해 정의 된 바와 같이, 분석에서 조직 학적 이미지에 반영된다. 많은 잠재적으로 항 - 침습 유기 동족체 화합물과 얻어진 결과의 정량 구조 - 활성 관계 (QSAR) 분석은 임상에서 사용되는 플라보노이드 및 칼콘, 공지 된 항 - 전이성 약물 구조 - 활성 관계 (예를 들어, 미세 소관 억제제의 연구를 허용 )뿐만 아니라 분석에서 침입을 억제한다. HoweveR, 분석은 암 침공 계정 면역 학적 기여를 고려하지 않습니다.

도 5에 제시된 조직 학적 단면은 성공적인 분석의 숫자의 최종 결과를 나타낸다. 문화의 소리 조직학가 가능한 세포를 표시하고 종양 세포와 정상 조직 사이의 상호 작용을 해석 할 수 있습니다. 또한, 정상 조직에서 어떠한 면역 반응은 면역 거부 시스템이 개발되기 전에, 예를 들어 사용 된 병아리 배아의 정확한 기간을 확인하는 관찰 할 수 없다. 배양 기간 동안 (총) 오염의 부재를 나타냅니다 볼 수없는 박테리아는 없습니다. 마지막 부분의 둥근 가장자리는 삼각 플라스크 벽에 (임시) 준수의 흔적없이 서스펜션의 문화를 확인합니다. 많은 화합물 분석에서 테스트되었습니다. 직면 PHF / 종양 집계 쌍 작은 삼각 플라스크 (단계 2.7)이 이전 된 시점에 약은 일반적으로 순간에 문화 매체에 전달됩니다. 일부에 공지 (도구로서 사용hibitors과 활성제) 종양 침윤 과정에 연루 경로와 이펙터 분자를 해명합니다. 구조적으로 관련이 있었다 다른 화합물의 경우, 정량적 구조...

여기서는 입체적 정상 조직 절편에 살아있는 종양 세포의 침윤을 연구 프로토콜을 제시한다. 이 기관 배양 기술은 주로 시험 관내에서 잠재적으로 항 - 침습 약물을 시험에 적용된다.

The goal of the chick heart assay is to offer a relevant organ culture method to study tumor invasion in three dimensions. The assay can distinguish ...

이 절차의 전반적인 목표는 3차원적으로 종양 침습을 연구하기 위한 관련 장기 배양 방법을 제공하는 것입니다. 이는 먼저 배아 닭 심장에서 얻은 정상 조직 조각을 준비함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계에서는 종양 세포 응집체를 현탁액 상태로 준비합니다.그 다음, 종양 세포 응집체를 반고체 아가(agar) 층 위의 정상 조직 조각과 개별적으로 접촉시켜 현탁 배양하며 배양합니다. 마지막 단계로, 접촉 배양된 시료를 파라핀 매립 및 조직학적 절편 제작을 위해 고정합니다. 최종적으로, 조직 절편의 연속 현미경 분석을 통해 조직 조각 내로 침투한 종양 세포를 시각화할 수 있습니다.젤을 이용한 침습 분석과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주된 장점은 종양 세포가 3차원 살아있는 조직 조각과 직면한다는 점입니다. 이 기술의 시사점은 항침습 약물에 대한 미충족 수요가 존재하므로 암 치료로까지 확장됩니다. 일반적으로 이 방법을 처음 접하는 사람들은 어려움을 겪게 되는데, 그 이유는 조직 조각과 종양 세포 응집체의 특정 크기를 사용하는 것의 중요성을 간과하기 때문입니다.이 방법은 암 침습에 대한 통찰을 제공할 수 있을 뿐만 아니라, 다른 시스템에도 적용될 수 있습니다. 예를 들어, 염증 세포에 의한 말초 조직 침습이나 심장 조직으로의 줄기세포 통합 연구 등이 있습니다. 배양을 위해, 먼저 수정란을 37 °C에서 9일 동안 배양하여 병아리 심장 조각을 준비합니다.9일째에 70% ethanol로 껍질을 소독합니다. 그 다음 조직 배양 캐비닛 내에서 뭉툭한 핀셋을 사용하여 껍질을 엽니다. 이어서 적출용 스푼을 배아의 목 주변에 위치시키고 배아를 껍질 밖으로 끌어냅니다.배아를 5 mL의 링거 염 용액(ringer salt solution)이 담긴 5 cm 유리 페트리 접시에 넣습니다. 그 다음 양손에 예리한 포셉을 잡습니다. 흉부 복측 피부를 찢어 열고 흉골을 제거한 후, 홍채 절제 가위(iridectomy scissors)를 사용하여 심장을 적출하고 주요 혈관을 분리합니다.심장을 5% fetal bovine serum이 첨가된 5 mL의 배양액이 담긴 새로운 5 cm 유리 페트리 접시에 옮깁니다. 보정된 접안마이크로미터가 장착된 현미경 하에서, 미세해부 가위를 사용하여 심장의 상단 두개 쪽 1/3 지점을 절제하여 심방과 관련 혈관을 제거합니다.그 다음, 날카로운 핀셋을 사용하여 심실에서 심낭을 박리합니다. 다음으로, 심실에 시상면 반절개를 가하여 혈액을 제거합니다. 그런 다음 심실을 5 mL의 신선한 배양액, 배지 및 소 태아 혈청이 담긴 또 다른 5 cm 페트리 접시에 옮기고, 조직을 직경 0.4 mm 크기의 조각으로 자릅니다.모든 심실을 절단한 후, 배양 접시를 부드럽게 회전시켜 모든 파편을 접시 중앙으로 모읍니다. 그런 다음 스테인리스 스틸 바늘을 사용하여 모든 Cora Eliana를 페트리 접시의 주변부로 이동시킵니다. 이제 유리 파스퇴르 피펫을 사용하여 심장 파편들을 얇은 배양액 막으로 덮인 50 milliliter Erla Meyer 플라스크로 옮깁니다.플라스크 내부에 5% 이산화탄소를 충전하고, 37 °C의 온도와 70 rpm의 회전 속도로 24시간 동안 교반기(gyratory shaker)에서 조각들을 배양합니다. 다음 날, 조각들을 페트리 접시에 옮기고 바늘을 사용하여 Corporal Eliana, 어두운 색의 괴사된 조각 및 조직 응집물을 제거합니다. 6 mL의 배지가 담긴 50 mL 삼각 플라스크에 조각들을 넣고 교반기에서 60시간 동안 추가로 배양합니다. 2.5일 후, 현미경과 바늘을 사용하여 섬유아세포층이 얇고 균일하게 형성되었으며 직경이 0.4 mm인 스테로이드 조각들을 선택합니다.그 다음, 사전 배양된 심장 조각들을 신선한 배양액이 담긴 다른 페트리 접시로 옮깁니다. 대면 배양을 시작하기 3일 전에, 50 mL 삼각 플라스크에 6 mL의 적절한 배양액을 넣고 mL당 100,000개의 시험 세포를 부유시킵니다. 그 후, 해당 플라스크를 적절한 농도의 이산화탄소가 포함된 상태에서 37 °C, 70 rpm의 회전 진탕기(gyratory shaker)로 배양합니다.72시간 후, 현미경으로 응집체를 관찰하여 직경 0.2 millimeters의 스테로이드성 세포 응집체를 선택합니다. 다음으로, 최소량의 배양액에 부유시킨 0.4 millimeter의 사전 배양된 심장 조각 8개를 반고체 한천 배지가 담긴 배아학용 시계접시로 옮깁니다.파편들을 원형 구역으로 옮기고, 작은 필터 페이퍼 조각을 사용하여 과량의 배지를 흡입해 제거합니다. 0.2 millimeters 크기의 스테로이드 세포 응집체 10개를 해당 원형 구역에 배치합니다. 과량의 배지를 제거한 후, 각 응집체가 미리 배양된 심장 파편들과 서로 접촉할 때까지 응집체들을 각각의 파편 방향으로 이동시킵니다.이제 파라핀으로 시계 접시의 뚜껑을 밀봉하고, 시험 세포의 배양 전 심장 조각에 대한 부착 특성에 따라 37 °C에서 4~24시간 동안 공동 배양합니다. 배양이 끝나면 접합 쌍을 37 °C로 예열된 배양액에 담그고, 파스퇴르 피펫을 사용하여 각 쌍을 배양액 1.5 mL가 들어 있는 개별 5 mL 에를렌마이어 플라스크로 옮깁니다. 그런 다음 적절한 농도의 이산화탄소를 통과시키며 37 °C, 120 rpm의 회전 진탕기에서 플라스크를 배양합니다. 접합체의 조직학적 분석을 위해 링거 염 용액 2 mL가 채워진 5 mL 에를렌마이어 플라스크 2개를 추가로 준비합니다.배양 기간이 끝나면, 혈청 단백질을 제거하기 위해 배양물을 링거 염 용액(ringer salt solution)으로 몇 초간 옮깁니다. 다음으로, 배양된 배를 Bowen Holland 용액 3 mL가 담긴 각각의 3 cm 페트리 접시로 옮깁니다. 2시간 후, 고정액을 최대한 제거하기 위해 배양물을 3 mL의 탈이온수로 3회 세척한 다음, 수돗물에서 2시간 동안 배양합니다.마지막으로, 각 쌍을 3 mL의 70% ethanol에 옮겨 최대 수일 동안 보관합니다. 성공적인 배양 사례인 이 이미지들에서는 종양 조직과 심장 조직 모두에서 정상 조직에 의한 면역 반응이 관찰되지 않으며, 이는 면역 거부 체계가 발달하기 전의 병아리 배아를 사용했음을 확인시켜 줍니다. 또한 박테리아가 보이지 않아 배양 기간 동안 심각한 오염이 없었음을 나타냅니다.또한, 절편의 둥근 주변부는 배양물이 erla mire 플라스크 벽면에 일시적으로 부착된 징후 없이 부유 상태로 존재했음을 확인시켜 줍니다. 많은 화합물이 이 병아리 심장 침습 분석법(Chick heart invasion assay)으로 테스트되었습니다. 구조적으로 연관된 화합물들의 경우, 분석 결과에 기반하여 정량적 구조-활성 관계(QSAR)가 수립되었으며, 데이터는 예측된 항침습 활성과 실험적 활성 사이에 명확한 상관관계가 있음을 보여주었습니다.실제로, 이 혼동 행렬(confusion matrix)은 분석법의 약점과 강점을 요약하는 데 사용될 수 있으며, 실험의 정확도와 재현성을 대략적으로 나타내 줍니다. 이 새로운 절차를 시도할 때, 본 절차에 따라 조직 조각의 규정된 크기를 엄격히 준수하는 것이 매우 중요합니다. 염증 세포가 침범하는가와 같은 추가적인 질문에 답하기 위해 비암성 세포와의 대조군 설정과 같은 다른 방법들을 수행할 수 있습니다.이 영상을 시청한 후에는 침습성 종양 세포와 비침습성 종양 세포를 구별하는 방법에 대해 잘 이해하게 될 것입니다. 고정액을 사용하는 작업은 매우 위험할 수 있으므로, 이 절차를 수행하는 동안 공기 환기와 같은 예방 조치를 취해야 함을 잊지 마십시오.

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체외에서 FluoroBlok 종양의 침략 분석

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침입형 유체의 흐름은 고체 종양에서 상승되며 종양 세포 침공을 조절하실 수 있습니다. 여기에서 우리는 매트릭스에 포함된 세포에 침입형 유체 흐름을 적용한 다음 세포 침입에 미치는 영향을 측정할 수있는 기법을 설명합니다. 이 기술은 쉽게 다른 시스템을 연구하는 데 적용할 수 있습니다.

종양 세포 침략에 중간 유체 흐름의 효과를 측정하는 세 가지 차원 세포 배양 모델

이 비디오는 전기 임피던스를 기반으로 하는 3챔버 어레이를 사용하는 침입 분석에 대해 설명합니다. 이 기술은 종양 미세환경에서 상주하는 기질 세포가 분비하는 수용성 인자의 영향으로 암세포의 침습 가능성을 측정합니다.

Three-chambered Array-based Impedance Assay: 전기 임피던스를 측정하여 암세포의 침습 가능성을 평가하는 실시간 분석 기법

일반적으로 사용되는 체외에서 세포의 이동 및 침윤을 조사하기위한 고도의 접근 방법이 설명되어 있습니다. 첫 번째 방법은 세포 운동성을 측정하는 세포 상처 폐쇄 분석이다. 두 번째 방법은 화성과 세포의 침략적인 능력을 평가하는 트랜스 웰 마이그레이션 및 침입 분석이다.

체외 세포 이동 및 내습 분석 실험에서

이 비디오 기사는 암세포 침입을 유도하는 호르몬, 사이토카인 및/또는 성장 인자의 역할을 조사하기 위해 수정된 체외 방법에 대해 설명합니다.

수정<em&gt; 시험관</em&gt; 침공 분석은 호르몬, 중재 암 세포 침략의 사이토 카인 및 / 또는 성장 인자의 잠재적 인 역할을 확인하는

이 방법은 스페로이드에서 주변 3D 매트릭스로의 암세포 침입을 평가합니다.  스페로이드는 행잉 드롭 배양 방법을 통해 생성된 다음 기저막 재료와 I형 콜라겐으로 구성된 매트릭스에 내장됩니다.  이후에 스페로이드 외부로의 침입이 모니터링됩니다.

암 세포 회전 타원체 분석은 3D 설정에 침략을 평가하기 위해

이 프로토콜 셀 셀 microenvironment를 유지 하면서 3 차원 설정의 마이그레이션 및 침입 기능을 계량 하는 데 사용할 수 있는 반전된 세로 침공 분석 결과를 설명 합니다. 이 분석 결과 희소 한 또는 민감한 세포에 적합 합니다.

위쪽으로 이동: 간단 하 고 유연한 생체 외에서 3 차원 침공 분석 실험 프로토콜

시험관내 세포 침습 분석기는 단백질 매트릭스를 함유하는 세포 배양 삽입을 사용하여 침입 및 이동을 위한 세포 전이를 정량화함으로써 암 전이의 잠재력을 측정하는데 사용된다. 세포는 단백질 매트릭스와 다공성 막을 통해, 화학유도제를 향해, 그 때 가벼운 현미경 검사법에 의해 정량화되기 위하여 도전됩니다.

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이것은 암 전이의 억제제 또는 드라이버를 위해 검열하는 효과적인 방법입니다. 발현 라이브러리로 변환된 세포는 전이성 콜로니를 형성하기 위해 닭 초리오알란토아막 혈관에 주입됩니다. 감소 또는 증가 된 침략을 갖는 식민지는 절제, 확장, 자신의 표현형을 확인하기 위해 재주입, 마지막으로, 높은 처리량 시퀀싱을 사용하여 분석.

신속하고 정량적인 병아리 Chorioallantoic 멤브레인 모델을 사용하여 전이성 레귤레이터의 발견

우리는 침습적 세포 하위집단을 실시간으로 검출하고 포획하는 접근법을 기술한다. 실험 설계는 세포의 전기 임피던스의 변화를 모니터링하여 실시간 세포 분석을 사용합니다. 복잡한 조직에서 침습성 암, 면역, 내피 또는 기질 세포를 포획 할 수 있으며 공동 배양의 영향을 평가할 수 있습니다.

공동 배양물로부터의 침습적 세포 하위집단의 실시간 검출 및 포획

학습하세요 병아리 심장 조각을 이용한 3차원 종양 침윤 연구 방법을. 이 기술은 항침윤 약물 후보를 평가하고 암 치료 전략 개발에 기여할 수 있습니다.

테스트를위한 병아리 심장 침략 분석 암 세포의 침윤과 잠재적 안티 침략 화합물의 활동

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