Name: 공 초점 광학 이미징에 의해 로즈 벵갈 Photothrombosis 생체 : 단일 선박 스트로크의 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: 배우세요 생쥐의 체감각 피질에서 로즈 벵갈 포토트롬보시스를 이용한 단일 혈관 뇌경색 유도법을 공초점 광학 이미징으로 실시간 관찰하는 방법입니다. 이 기술은 뇌졸중 연구에 활용됩니다.

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이 작업에 대한 자금 지원은 AG007218와 NIH F32 AG031606에서 제공했습니다.
이미지는 UTHSCSA, NIH-NCI P30 CA54174(UTHSCSA의 CTRC) 및 NIH-NIA P01AG19316에서 지원하는 Core Optical Imaging Facility에서 생성되었습니다.

참고 : 모든 동물의 절차는 텍사스 건강 과학 센터 샌 안토니오 대학의 기관 동물 케어 및 사용위원회에 의해 승인 도착 도착 가이드 라인과 일치했다되었다. 1. 두피 준비를위한 마취 <ol><li> 마취를 유도하는 산소와 혼합 2~3% 이소 플루오 란으로 유도 챔버에 놓고 마우스. 마우스가 유도로 호흡 속도 감소를 관찰합니다. 마우스가 코 콘으로 이동 준비가되어 있는지 여부를 확인하려면 마우스의 발을 꼬집어. 주 : 마취 레벨이 어떤 생체 제조에서 중요한 단계 및 관리에 글로벌 허혈 발생할 수준을 유도하지 않도록주의해야한다. </li><li> 마우스가 충분히 마취되면, 수술 / 이미징 플랫폼에 동물을 전송하고 노즈콘에서 마우스의 코를 배치하고 마취 상태를 유지 1-1.2 % 이소 플루오 란을 적용한다. 마우스가 온도 공동에 누워 있는지 확인ntrolled 가열 패드 나머지 절차 내내 체온 (37 ° C +/- 0.5 ° C)를 유지한다. 마취 동안 건조를 방지하기 위해 눈을 통해 수의사 연고를 놓습니다. </li><li> 시스템과 함께 제공되는 꼬리 클립이나 발을 사용하여 산소 포화도 시스템을 사용하여 마우스의 생리 모니터. 호흡 속도가 50-65 호흡 / 분 사이에 유지되어 있는지 확인합니다. 동물의 장기 생존을 보장하기 위해 97~98% 사이에 유지되는 BPM과 산소 포화도 300-450 사이에 심장 박동이 남아 있는지 확인합니다. </li><li> 마우스가 적절하게 마취되면, 전기 면도기를 사용하여 두개골을 통해 머리를 면도 에탄올 면봉 다음 잔류 머리와 betadine 깨끗를 제거합니다. 무균 수술 환경을 보장하기 위해 세 번에이 절차를 반복합니다. </li></ol> 2. 수술 <ol><li> 완전히 청소하고 면도 두피로, 두​​개골 fissu을 나타 내기 위해 마우스의 두피에 5mm의 절개를입술과 브레 그마를 찾습니다. </li><li> 두개골 상부에 남아있는 근막을 제거하기 위해 멸균면 주걱을 사용합니다. </li><li> 브레 그마의 정위 좌표를 사용하여 두정 피질 위에 놓인 뼈 조직 접착제로 맞춤 제작 한 스테인레스 스틸 링 (그림 1) 접착제 : 측면 -1 -3 mm이고 : 2~4mm을. 주 : 접착제는 일반적으로 뼈가 상 링의 배치 후 2 분 이내에 설정한다. </li><li> 마우스를 안정화 및 이미징 동안 움직임을 방지하도록 정위 홀더 (도 2)에 링 부착합니다. </li><li> 수술 학년 해부 현미경, 천천히 속도 제어 DREMEL 같은 도구 (마이 징거 3.9 mm의 드릴 비트)가 드릴 된 바와 같이 지역 수준을 유지해야하기을 사용하여 두개골에 1-2mm 섹션을 드릴. 지그재그 패턴을 이용하여이를 달성. 열을 방지하기 위해 구축, 낮은에 드릴 속도를 설정하고 자주 휴식을 취. </li><li> 두개골 두개골 모양 시니가 될 때, 숱이 계속얇아진 표면 수준을 유지하기 위해 같은 지그재그 패턴을 이용하여 메스 블레이드를 이용하여 두개골의 뇌 두개골의 얇은 층의 제거를 용이하게 매끄럽게한다. 한 번에 뼈의 얇은 층을 제거하는 가벼운 압력으로 작은 선형 스트로크을 메스 블레이드의 팁을 사용. 혈관이 명확하게 해부 현미경을 통해 볼 때까지이 작업을 계속합니다. </li><li> 실험을 통해 천공 또는 씨닝 공정 동안에 두개골을 어기면, 인해 기저 피질 가능성 손상 동물을 안락사. 주 : 마우스의 두개골은 대략 300 μm의 두께를 얇게되어 두 치밀골 층 (외부 하나는 내부 층)과 치밀골의 두 층 사이에 개재 해면골의 층으로 구성된다. 외부 치밀골의 층과 해면골의 대부분이 남아 치밀골의 대략 50 μm의 층에 생성 5mm 시추 지역은 제거된다 (도 2b 참조). Visualiz혈관의 ATION 최종 그대로 얇게 두개골이 약 50 μm의 두께를 있는지 확인합니다. 이 두께로 얇아 때 두개골은 여전히​​ 그러므로 존재한다. </li></ol> 3. 현미경 셋업 <ol><li> 목표 인버터가 거꾸로 현미경 시스템 (종래의 공 촛점 또는 두 광자 시스템)를 사용합니다. 주 : 표준 직립 현미경을 이용하는 것도 가능하다. 제한 요소는 무대와 목표 사이의 공간이 될 것입니다. 무대에 대한 수정이 설정을 수행 할 필요가있을 수있다. </li><li> 옆 현미경의 기초를 위치 맞춤 제작 단계에 수술 / 영상 플랫폼을 고정합니다. 주 : 플랫폼 대물 하에서 수술 / 이미징 플랫폼의 수직 이동을 허용하도록 실험실 잭을 이용하여 이루어진다. 실험실 잭은 네 개의 원통형 기둥에 고정 플레이트에 장착된다. (그림 2 참조). </li><li> 20X를 포함하는 목표 인버터를 배치두개골 창을 통해 목표. 현미경의 접안 렌즈를 통해 보면 두개 창을 찾아 이미징 영역에서 목표 위치를 외부 광원을 사용한다. 주 : 촬상 영역이 혈관의 존재에 의해 표시 될 것이다. </li><li> 수성 목표를 들어, 인공 뇌척수액 (ACSF)를 사용하여 매체로 인해 잠재적으로 (30 mM의 KCl을 130 mM의 염화나트륨을 200 mM의 NaHCO3를; 30 mM의 HEPES, 100 mM의 포도당 KH 2 PO 4 12 mM의) 영상 중 두개골 공동으로 누설 (그림 3). </li></ol> 4. 로즈 벵갈 염색 준비, 관리 및 뇌졸중의 유도 <ol><li> 인공 뇌척수액 (ACSF) 로즈 벵골의 신선한 20 ㎎ / ㎖ 솔루션을 준비; 필터링 및 관리하기 전에 소독. 재사용 또는 혼합 된 후에 로즈 벵갈 보관하지 마십시오. 각 실험에 대한 새로운 솔루션을합니다. </li><li> 로즈 벵갈의 동안의 0.1 ml의 꼬리 정맥 주입을 줘561 nm의 레이저를 두개 창 통조림 것은 용액의 주입을 충분히 보장한다. 참고 : 장미 벵골은 뇌의 혈관에 주입 한 후 5 초 이내에 가시화 될 것이다. 전체 용기는 로즈 벵갈로 가득해야합니다. </li><li> 벵갈 로즈 염료의 적절한 주입에 이어 병변 특정 부피의 재현성을 보장하기 위해 용기 직경 (40-80 μm의)에 기초하여, 혈전증 적절한 용기를 선택한다. 혈액 흐름의 방향을보고 동맥과 정맥 사이에 차별화 : 동맥 작은 직경의 혈관에 더 큰 직경에서 이동, 혈관 직경이 큰 혈관에 작은에서 이동합니다. 로즈 벵갈가 주입되면이 쉽게 시각화하여 수행됩니다. </li><li> 다음과 같이 현미경 설정을 변경 : <ol><li> 지속 시간을 늘립니다. 참고 :이 사용되는 현미경 시스템에 따라 달라질 수 있습니다. </li><li> 100 %로 레이저 파워를 높입니다. </li><li> 를 사용하여 1 프레임 / sec로 시계열 화상 모아서최대 스캔 속도. </li></ol></li><li> 안정된 혈전이 혈관 내에서 형성 될 때까지 마우스를 스캔합니다. 참고 :이 일반적으로 연속 스캔의 5 분 이내에 달성된다 (그림 4 참조). </li><li> 벵갈 로즈를 이용하여 혈전 형성의 유도에 따라, 다시 해부 현미경으로 촬상 영역에서 마우스를 제거한다. 조심스럽게 두개골 두개골에서 스테인리스 스틸 링을 제거합니다. 출혈의 두개골 창을 검사합니다. 출혈이 발생하면, 실험 종료. </li><li> 두개골을 통해 절개를 닫 6.0 모노 필라멘트 봉합사를 사용합니다. 감염을 방지하기 위해 봉합 라인을 따라 항생제 연고를 놓습니다. Buprenex (0.05 ㎎ / ㎏) 통증 관리를위한 3 일 동안 피하 매 12 시간을 주입한다. </li><li> 완전히 깨어 자유롭게 이동 될 때까지 마취에서 제거 다음 복구 챔버에 마우스를 돌려줍니다. </li><li> 나중에 추가 조사를 위해 깨끗한 케이지에 마우스를 돌려줍니다. </li></ol> (5). 이후의 일에 종 이미징 <ol><li> 이후 일 이후 photothrombosis에 종 이미징을 수행하기 위해 다음과 같은 방법을 사용합니다. <ol><li> 방법 1 섹션에 기재된 바와 같이, 마우스를 마취. </li><li> 적절한 마취되면 미리 드릴 된 촬상 필드를 덮는 피부를 다시 봉합하는 임의의 잔류를 제거하여 두피를 다시 연다. </li><li> 두개골 상부에 남아있는 근막을 제거하기 위해 멸균면 주걱을 사용합니다. </li><li> 이전 이미지 필드를 덮는 뼈 조직 접착제 주문품 스테인리스 링 (도 1)을 붙인다. </li><li> 마우스를 안정화 및 이미징 동안 움직임을 방지하도록 정위 홀더 (도 2)에 링 부착합니다. </li><li> 이전에 얇게 두개골의 기초가되는 혈관을 찾습니다. 이전에 유도 된 혈전의 존재를 확인하기 위해 FITC 덱스 트란의 꼬리 정맥 주사를 사용한다. </li><li> 의를 닫 6.0 모노 필라멘트 봉합사를 사용하여두개골을 통해 정밀도 범위. 감염을 방지하기 위해 봉합 라인을 따라 항생제 연고를 놓습니다. Buprenex (0.05mg / kg) 통증 관리를위한 3 일 동안 피하 매 12 시간을 주입한다. </li><li> 완전히 깨어 자유롭게 이동 될 때까지 마취에서 제거 다음 복구 챔버에 마우스를 돌려줍니다. </li></ol></li></ol> 스트로크 유도 6. 확인 (사후) <ol><li> 연구의 결론에서,도 5에 도시 된 바와 같이, 2,3,5- 트리 페닐 테트라 졸륨 클로라이드 (TTC) 염색을 이용하여 심 박출량을 확인. 전체 방법은 12에서 찾을 수있다. </li></ol>

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</ol>

저자는 그들이 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

인간의 응용 프로그램에 동물 실험에서 스트로크 병태 생리를 번역 할 수있는 능력은 실패로 고생하고있다. 그러나, 이러한 모델 photothrombosis 같은 동물 모델의 사용은 개선 된 뇌졸중 병태 생리에 대한 이해와 스트로크 다음 신경 보호를 제공하기위한 새로운 치료 적 접근법의 탐색을 허용한다. 작은 대뇌 피질의 스트로크와 photothrombotic 모델에 의해 생성 microinfarctions은 높은 유병률을 가지고 있으며, 미국 인구 (약 1천1백만명) 매년 16의 약 4 %에 영향을 미치는 무증상 또는 &quot;침묵&quot;뇌졸중 13-15에 임상 적이다. 자동 스트로크는 중간 대뇌 동맥 (MCA) 폐색 또는 일과성 허혈 발작 (TIA) (17)에서 볼 수 있듯이 이러한 마비, 감각 손실과 어려움으로 큰 스트로크에 존재하는 고전적인 뇌졸중 증상이, 발표자가 없습니다. 또한, 침묵 뇌졸중은 열공 뇌졸중, 다른 어떤깊은 뇌 구조 또는 뇌간 내에서 하나의 ...

바로 로즈 벵갈 유도 다음과 같은 생체 내 세포 반응의 기술 설명을 허용 시각화는 그대로 마우스에 photothrombosis. 로즈 벵골 (4,5,6,7- 테트라 클로로 -2 &#39;, 4&#39;, 5 &#39;, 7&#39;- tetraiodofluorescein)는 동물 모델에서 허혈성 뇌졸중 (마우스 및 래트)을 유도하기 위해 사용되는 감광성 염료이다. 564 nm의 레이저 광에 얇게 두개골을 통해 꼬리 정맥을 통해 조사 및 후속 RB의 볼 루스 주입 후, 혈전 생리적 뇌졸중을 일으키는 한 유도된다. 이 방법은 원래 1977 년에 로젠과 엘 Sabban 설명하고, 이후 1980 년대 중반 1, 2에서 왓슨에 의해 채택되었다. 요컨대, 로즈 벵갈이어서 조직 인자, 혈액 응고 캐스케이드의 개시제를 활성화 반응성 산소 종의 생성을 생성 녹색 여기 광 (우리의 경우에 561 nm의 레이저)을 조사한다. 응고 캐스케이드의 유도는 레 허혈성를 생산임상 스트로크 3 병리학 관련 이온. 스트로크는 뉴런, 아교 세포, 내피 세포 및 면역계 세포 등 다양한 종류의 상호 작용으로 인해 복잡한 기전을 갖는다. 최고의 기술을 선택하는 것은 특정 세포 프로세스가 여러 고려 사항을 필요로 공부한다. 실험 방법은 세 개의 범주에 폭넓게 나뉘어 시험 관내에서, 각각 갖는 장단점 생체 내 및 실리코 체외 연구는 자연 환경으로부터 세포를 제거하는 주요 단점이 있으므로 그대로 볼 효과를 재현 할 수있다. 살아있는 동물. 생체 기법 증가 병진 의미와 질환 상태의 개선 실험 복제를 제공한다. 실리코 일반적 질환 또는 세포 처리의 컴퓨터 모델링을 의미하며, 점점 시험을위한 잠재적 약물 상호 작용을 연구하는데 이용하면서PLE, 수집 된 정보는 여전히 세포 나 조직 생활에서 테스트해야합니다. 실험실 설정에서 뇌졸중의 이상적인 모델은 인구에서 본 것과 유사한 병리학 적 특징을 설명한다. 인구 뇌졸중 일반적인 생리적 특성이 있지만, 손상 발생의 종류에 따라 많은 차이도있다. 인구의 스트로크는 다양한 경색 볼륨뿐만 아니라 각 병리에 관한 메커니즘의 차이에 그 결과 크고 작은 혈관 폐색, 출혈 병변과 동맥이나 심장 - 색전증 동맥에 발생합니다. 뇌졸중 동물 모델을 이용하는 이점은 인간 스트로크 특성을 모방 재현성 경색의 발생이다. 중간 대뇌 동맥 폐색 (색전이나 혈관 필라멘트 방법)하는 모델 말단 MCAO 및 photothrombosis 모델 : 가장 일반적인 동물 스트로크 모델은 사용 동맥 폐쇄를 포함한다. 장점각 모델의 D 단점은 (4 및 5 참조) 다른 곳에서 검토되고있다. 글로벌 허혈성 모델 (MCAO), 수행 상대적으로 쉬운 초점 뇌졸중 모델보다 인간의 스트로크에 덜 관련이있다. 또한, 이러한 방법은 재현성 뇌 경색 병변을 유도 매우 다양하다. 실험이 MCAO 모델을 통해 분명한 이점을 제공 아니라 자신의 실험을 제어로 photothrombosis 모델만큼 높은 재현성이다. 그러나, 미세 혈관 비방에 모델은 최소한의 허혈성 주변부, 세포 -6,7- 살릴 것으로 생각되는 영역을 표시하기 위해 설명되었다. 또한 vasogenic 부종 및 세포 독성 부종 형성은 또한 이미징 영역의 다음 조사를 유도 할 수있다. 이러한 제한에도 불구하고 기술은 스트로크 8, 9, 10, 11 다음의 많은 생리적 과정에 새로운 통찰력을 제공했다.

<table><tbody><tr><td colspan="4">시약</td></tr><tr><td>로즈 벵골</td><td>시그마</td><td>330000</td><td></td></tr><tr><td>이소플루란 마취</td>제 <td>MWI 수의학 공급</td><td>088-076</td><td></td></tr><tr><td>Vetbond</td><td>1469SB</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>aCSF&nbsp;</td><td>126 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 1.25 mM NaH2PO4, 2 mM MgCl2, 2 mM CaCl2, 10 mM 포도당 및 26 mM NaHCO3 (pH 7.4).</td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td colspan="4">장비</td></tr><tr><td>해부 가위</td><td>생명 산업 제품</td><td>500-410</td><td></td></tr><tr><td>작동 가위 14 cm</td><td>생명 산업 제품</td><td>12-055</td><td></td></tr><tr><td>집게 Dumont 하이테크 #5 스타일, 스트레이트</td><td>생명 산업 제품</td><td>TWZ-301.22</td><td></td></tr><tr><td>LabJack 132X80</td><td>Optosigma Co</td><td>123-6670</td><td></td></tr><tr><td>Labjack 8X 8</td><td>Optosigma Co</td><td>145-1110</td><td></td></tr><tr><td>스테레오 셋업의 이어 바 홀더</td><td>Stoelting/Cyborg</td><td>51654</td><td></td></tr><tr><td>Dispomed Labvent 설치류 마취기</td><td>DRE, Inc.</td><td>15001</td><td></td></tr><tr><td>Tech IV Isoflurane 기화기</td><td>DRE, Inc.</td><td>34001</td><td></td></tr><tr><td>F 에어 캐니스터</td><td>DRE, Inc</td><td>80120</td><td></td></tr><tr><td>베인 회로 호흡 튜브</td><td>DRE, Inc</td><td>86111B</td><td></td></tr><tr><td>베인 튜브용 설치류 어댑터</td><td>DRE, Inc</td><td>891000</td><td></td></tr><tr><td>산소 탱크용 O2 레귤레이터</td><td>DRE, Inc</td><td>CE001E</td><td></td></tr><tr><td>설치류 유도 챔버</td><td>DRE, Inc</td><td>15004C</td><td></td></tr><tr><td>Ethicon Silk 6-0; 18 인치 P-3 바늘</td><td>봉합사 익스프레스</td><td>1639G</td><td></td></tr><tr><td>목표 인버터 광학 어댑터</td><td>LSM 기술</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Foredom 드릴 듀얼 전압 110/120</td><td>Foredom</td><td>134.53</td><td></td></tr><tr><td>Meisinger 3.9 mm 드릴 비트</td><td>Meisinger</td><td></td><td>(Ref#310 104 001 001 009)</td></tr></tbody></table>

공 초점 광학 이미징에 의해 로즈 벵갈 photothrombosis<em&gt; 생체</em&gt; : 단일 선박 스트로크의 모델

Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo: A Model of Single Vessel Stroke

최근 이미징 염료 및 광학 기술의 발전으로 인해 생체 내 이미징 기술의 활용이 증가하여 손상되지 않은 동물의 세포 이벤트를 이미지화할 수 있게 되었습니다. 또한 생체 내에서 뇌졸중과 같은 생리적 질병 상태를 유도하는 능력은 그 유용성을 증가시킵니다. 본원에 기술된 기술은 뇌졸중 후 중추신경계 내의 세포 반응의 생리학적 평가를 가능하게 하고, 연구되고 있는 다른 병리학적 상태에 대해 적용될 수 있다. 제시된 기술은 생체 내에서 감광성 염료 Rose Bengal의 레이저 여기를 사용하여 단일 혈관에서 국소 허혈 이벤트를 유도합니다. 
비디오 프로토콜은 로즈 벵골 광혈전 이벤트의 유도를 위해 마우스의 체성 감각 피질 위에 얇은 두개골 창을 준비하여 기저 경막 물질과 뇌의 손상을 최소화하는 것을 보여줍니다. 수술 준비는 처음에 맞춤형 수술/이미징 플랫폼이 있는 해부 현미경으로 수행된 다음 도립 대물 어댑터가 장착된 컨포칼 현미경으로 전송됩니다. 이 프로토콜을 사용하여 획득한 대표 이미지와 스트로크 유도의 타임 랩스 시퀀스가 제공됩니다. 이 기술은 동일한 영역을 다음 날에 반복적으로 이미지화할 수 있어 뇌졸중 후 병리학적 과정에 대한 종단적 생체 내 연구를 용이하게 한다는 점에서 강력합니다.

이 방법의 목적은 561 nm의 레이저 광과 두개골의 박형화 꼬리 정맥을 통해 조사 및 후속의 RB 루스 주사 다음 동물 모델에서 허혈성 뇌졸중 (마우스 및 래트)을 유도했다. 도 4의 이미지는 0, 1, 1.5, 2 분으로 조사 영역의 다음 단일 용기 내 혈전 형성의 진행을 보여준다. 혈전 형성하기 전에 전체 선박 로즈 벵갈 흐르는 확보로 인해 흰색입니다. 선박의 조사의 유도에 따라이 선박의 부분에 명백한 어둡게하고 혈전 형성 (프레임 1과 1.5 분)의 유도를 나타냅니다. 완전한 폐쇄 후 혈관 내 응고 (검은 부분) 앞의 장미 벵골 염료 (흰색 영역)의 현저한 축적이있다. 이분 프레임은 동맥의 완전한 폐색을 보여준다. 허혈성 뇌졸중의 TTC 염색의 존재가 활용 될 수 확인합니다. TTC는 공동mmonly 건강한 조직에서 붉은 TTC 포르 마잔 생성물의 형성에 의해 뇌경색의 검출에 얼룩을 사용했다. 포르 마잔 생산 (흰색 조직)의 결여는 경색 ...

여기에서는 생체 내 마우스의 체성 감각 피질에서 Rose Bengal 광혈전 혈전을 유도하기 위한 반침습적 광학 현미경 접근 방식을 설명합니다. 이미징 절차의 기술적 측면은 광혈전 이벤트의 유도에서 적용 및 데이터 수집에 이르기까지 설명됩니다.

공 초점 광학 이미징에 의해 로즈 벵갈 Photothrombosis<em&gt; 생체</em&gt; : 단일 선박 스트로크의 모델

In vivo imaging techniques have increased in utilization due to recent advances in imaging dyes and optical technologies, allowing for the ability to ...

이 실험 절차의 전체적인 목표는 반침습적 광학 현미경 접근법을 사용하여 마우스의 체성감각 피질에 로즈 벤갈 광혈전 클롯을 유도하는 것입니다. 이를 위해 마우스를 마취하고 이미징을 위한 얇은 두개골 창을 준비합니다. 다음으로, 로즈 벤갈을 주입하고 레이저를 사용하여 광혈전을 유도합니다.궁극적으로, rose Bengal 광혈전증으로 형성된 혈전의 효과는 마취에서 회복된 후 즉시 분석할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 rose bengal 광혈전증이 유도된 직후에 생체 내 세포 반응을 바로 관찰할 수 있다는 점입니다. 이 기술이 처음인 경우에는 얇은 두개골 창을 만드는 과정이 어렵고 시간이 많이 소요되어 어려움을 겪을 수 있습니다.먼저 2~3% isof fluorine과 산소 혼합 가스로 마우스를 마취합니다. 마우스가 유도됨에 따라 호흡이 감소하는지 확인하십시오. 그런 다음 마우스의 발바닥을 꼬집습니다.마취 상태를 확인하고, 가열 패드와 온도 프로브를 사용하여 시술 전 과정 동안 체온을 37 °C의 ±0.5도 범위 내로 유지하십시오. 그 다음 안연고를 도포하여 동물의 활성 징후를 모니터링하십시오. 꼬리 또는 발에 옥시미터 시스템을 부착하십시오.분당 호흡수 50~65회 및 심박수 300~450회 사이를 유지하도록 마취제를 조절합니다. 산소 포화도는 97~98%로 유지하는 것이 이상적입니다. 이러한 모든 파라미터가 유지된다면 장기 생존이 가능합니다. 마지막으로, 수술을 위해 피부를 준비합니다.두피의 털을 깎아내고 베타딘으로 반복해서 문질러 닦은 후, 에탄올을 사용하여 피부를 세척합니다. 두피에 5 mm 절개를 가하여 두개 균열을 노출시키며 수술을 시작합니다. 면봉으로 상부 근막을 제거하고 bgma를 찾습니다.다음으로 접착제를 도포합니다. 맞춤 제작된 스테인리스강 링을 두정엽 피질 위의 뼈에 고정합니다. 이 위치는 bma로부터 수평으로 -1~3mm, 외측으로 +2~4mm 범위로 설정합니다.2분 후에 접착제가 굳을 것입니다. 그다음 동물을 고정하기 위해 링을 정위 고정 홀더에 부착하십시오. 이제 수술용 해부 현미경 하에서 체성감각 피질 상단의 두개골을 1~2mm 깊이로 천천히 드릴링하십시오. 지그재그 패턴으로 드릴링하며, 열 발생을 방지하기 위해 두개골이 깎여 나가는 동안 수평을 유지하도록 하십시오.뼈가 빛나기 시작하면 드릴을 저속으로 사용하고 자주 휴식을 취하십시오. 두개골을 얇게 만들기 위해 지그재그 패턴으로 계속

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

출처: Talley Watts, L., et al. 컨포칼 광학 이미징 In Vivo에 의한 로즈 벵골 광혈전증: 단일 혈관 뇌졸중 모델. J. Vis. Exp. (2015)이 비디오는 쥐의 뇌에서 혈전 형성을 유도하는 기술을 보여줍니다. 두개골 창과 얇아진 두개골을 가진 마취된 쥐는 고강도 빛을 사용하여 감광성 염료의 활성화를 통해 광혈전증을 겪습니다. 이 과정은 혈관 벽을 손상시키고 혈전 형성을 유발하여 궁극적으로 뇌로 가는 혈류를 방해하는 활성 산소 종을 생성합니다.

 Inducing Blood Clot Formation in the Mouse Brain Using a Photosensitive Dye

Photothrombosis 매우 재현성 방식으로 관심 분야의 작은 잘 구분 경색을 유도하기위한 빠르고, 최소 침습 기술입니다. 그것은 형질 전환 생쥐에서 뇌의 가소성을 기본 세포 및 분자 반응 연구를 위해 특히 적당하다.

Photothrombotic 국소 빈혈 : 마우스 스트로크 연구를위한 최소 침습 및 재현성 광화학 대뇌 피질의 병변 모델

이 프로토콜은 대뇌 thromboemboli을 시각화 결합 된 근적외선 형광 (NIRF) 이미징 및 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 (microCT)의 응용 프로그램을 설명합니다. 이 기술은 혈전 부담과 진화의 정량화 할 수 있습니다. microCT 기술은 금 나노 입자를 사용하여 살아있는 동물 내부 혈전 가시화하면서 NIRF 이미징 기술은 형광 절제 뇌 혈전 표지 가시화.

직접 대뇌 Thromboemboli 시각화를위한 결합 된 근적외선 형광 이미징 및 마이크로 계산 된 단층 촬영

기존의 광혈전제 뇌졸중(PTS) 모델은 주로 조직 플라스미노겐 활성제(tPA) 용해 치료에 대한 내성이 높은 고밀도 혈소판 응집체를 유도합니다. 여기서 변형된 쥐 PTS 모델은 광활성화를 위해 트롬빈과 감광성 염료를 함께 주입하여 도입됩니다. 트롬빈 강화 PTS 모델은 혼합 혈소판:피브린 응고를 생성하며 tPA 혈전용해에 매우 민감합니다.

피브린이 풍부하고 tPA에 민감한 광혈전 뇌졸중 모델

여기에 설명된 광혈증 뇌졸중 모델은 감광성 염료투여 후 레이저 조명을 이용하여 영구 미생물 폐색을 유도하여 손상되지 않은 두개골을 통해 뇌졸중이 생성된다.

마우스에서 뇌졸중 모델링: 포심 피질 병변

여기에서는 장미 벵골을 사용한 망막 정맥 폐색에 최적화된 프로토콜과 유전자 변형 균주에서 재현성을 극대화하기 위한 권장 사항과 함께 레이저 유도 망막 영상 현미경 시스템에 대해 설명합니다.

가변성을 제한하기 위한 망막 정맥 폐색 마우스 모델의 최적화

이 작업은 허혈성 뇌졸중의 비침습적 이미징을 위한 다중 모드 초음파 기반 이미징 플랫폼의 사용을 보여줍니다. 이 시스템은 광음향 영상을 통한 혈액 산소화의 정량화와 음향 혈관 조영술을 통한 뇌의 관류 장애를 허용합니다.

허혈성 뇌졸중의 비침습적 전뇌 영상을 위한 통합 광음향, 초음파 및 혈관조영 단층촬영(PAUSAT)

이 프로토콜은 형광 스티렌 미세구를 이용한 생 체 내 2광자 현미경 영상에 최적화된 만성 두개골 창문 및 미세혈관 색전증 마우스 모델에 대한 단계별 접근법을 상세히 설명하고 있습니다.

형광 폴리스티렌 미세구를 이용한 생체 내 2광자 현미경용 미세혈관 색전증 마우스 모델

모든 광학 접근 방식을 사용하여 허혈성 뇌졸중을 유도하는 동시에 깨어 있고 행동하는 마우스의 새로운 뇌졸중 코어에서 형광 바이오센서를 사용하여 신경 Ca2+ 활동을 기록합니다.

행동하는 마우스에서 허혈성 뇌졸중을 유도하고 모니터링하기 위한 동시 광혈전증 및 섬유 측광

이 프로토콜은 바이러스 전달, 광혈전 이식, 광혈전 유도, 성상교세포 및 신경세포 활동의 동시 기록, 성상교세포의 광유전학적 자극을 포함하는 통합 방법을 제공합니다. 이 통합 방법은 허혈성 뇌졸중의 급성기부터 만성기까지의 성상교세포-뉴런 관계를 동시 조사하는 것을 목표로 합니다.

광혈전성 뇌졸중 모델링과 행동하는 쥐의 신경 및 성상세포 활동의 생체 내 옵트로드 기록을 위한 통합 방법

배우세요 생쥐의 체감각 피질에서 로즈 벵갈 포토트롬보시스를 이용한 단일 혈관 뇌경색 유도법을 공초점 광학 이미징으로 실시간 관찰하는 방법입니다. 이 기술은 뇌졸중 연구에 활용됩니다.

공 초점 광학 이미징에 의해 로즈 벵갈 Photothrombosis

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