Name: 쥐 신장 이식 기술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 58 s
Description: 배우세요 쥐 신장 이식을 위한 수정된 동맥 문합 기술로, 기증자 복부 대동맥에서 힐 앤 토우 커프를 만들어 혈전 형성을 최소화합니다. 이 방법은 연구자들이 성공적인 장기 이식 수술을 수행하는 데 도움을 줍니다.

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모든 마우스는 잭슨 연구소 (바 하버, ME)에서 구입하고 NIH 가이드 라인에 콜로라도 덴버 IACUC 대학의 승인에 따라 콜로라도 덴버, 바바라 데이비스 센터 동물 시설의 대학에서 병원균이없는 조건에서 보관 하였다. 1. 기증자 신장 수확 <ol><li> 모든 악기를 소독 절차를 통해 멸균 장갑을 착용하고 멸균 필드를 유지한다. 운영 현미경을 이용하여 모든 수술을 수행한다. </li><li> 수술로 펜 토바 비탈 - 마취 (60mg의 / ㎏ IP) 기증자로부터 마우스 기증자의 신장을 제거합니다. 발가락 핀치에 의한 마취의 깊이를 확인하고 호흡을 관찰한다. </li><li> 다음 4 방향 구속으로 마우스를 고정 모피 클립. 포비돈 - 요오드와 피부를 준비하고 멸균 방식으로 마우스를 드레이프. </li><li> 2cm의 중간 선 수직 복부 절개를 확인하고 복강을 입력합니다. 우량 장을 후퇴하고 구체화가슴에. 절차를 통해 멸균 촉촉한 거즈에 싸서 장을 유지합니다. </li><li> 큰 복부 혈관을 확인하고 그들을 동원, 어떤 요추 가지를 확인하고 소작 또는 10/0 나일론 봉합사를 결찰 중 하나. </li><li> 바로 왼쪽 신장 혈관 원위부는 약 2mm 이상 무딘 절개에 의한 하대 정맥 (IVC)과 떨어져 복부 대동맥 (AA)를 애타게. 10/0 나일론 결찰과 신장 혈관에서 작은 동맥과 정맥의 가지를 나눕니다. </li><li> 이제 이러한 구조의 무딘 절개에 의해 조심스럽게 신장 동맥에서 신장 정맥을 분리합니다. 이것은 수신자 IVC로 엔드 - 투 - 사이드 문합을 형성하는데 사용된다 신정맥의 기단부 카렐 패치의 정확한 생성을 위해 허용한다. </li><li> 식별, 결찰 왼쪽 부신 혈관을 나눕니다. 이것은 부신 대동맥에 대한 액세스를 허용하고 6-0 실크 봉합사 결찰에 대비 대동맥 주위에 위치하지만,이 시점에서 연결되지 않은. </리&gt; <li> 주변 간판에서 신장, 혈관과 요관을 동원. 오른쪽 결찰에 신장을 회전 / 어떤 후방 가지를 나눕니다. 그런 다음 왼쪽 신장을 반환합니다. </li><li> 이제 요관에주의를 지시. 신장 폐문이 ureteric 혈관을 유지하기 위해 주변의 간판 복용 치료에서 요관을 무료 방해하지 않고. 동맥관 정관의 수준에서 요관을 나눈다. 신장은 이제 복구하기위한 준비가되어 있습니다. </li><li> 천천히함으로써 기증자를 heparinizing 말초 IVC에 헤파린 300 단위를 주입. 부신 AA 주위에 배치 6-0 실크 봉합사를 묶고 헤파린 식염수 (100 U / ㎖)와 함께 0.8 ㎖의 원위 복부 대동맥을 통하여 좌측 신장을 관류. </li><li> 관류가 정맥 카렐 패치를 만들 중단되면 즉시 신장으로 역류를 제거합니다. AA와 아래 신장 동맥을 드러내는 신장쪽으로 신장 정맥을 후퇴. </li><li> 신장 동맥에 인접한 대동맥 뒤꿈치에를 만드는 나눈다그림 1과 같이 전자 커프. 기증자로부터 신장, 혈관과 요관을 제거합니다. </li><li> 주입 시간까지 미리 제조 수신자 (0 분 냉 허혈 시간) 또는 미리 결정된 시간에 대한 선택의 용액에 4 ℃로 보관 직접 신장을 제거한다. exsanguanation 자궁 전위에 의해 기증자를 안락사. 기증자의 신장을 복구 할 수있는 총 시간은 약입니다. 15 ~ 20 분. </li></ol> 2. 신장 이식 기법 <ol><li> 펜토 바르 비탈과받는 사람 마우스를 마취 (60mg의 / ㎏ IP 초기 용량, 25 mg의 / ㎏ IP 추가 투여 필요한 경우). 발가락 핀치에 의한 마취의 깊이를 확인하고 호흡을 관찰한다. 모피는 다음 4 방향 구속하여 마우스를 고정하고 눈 안과 연고를 적용 클립. 포비돈 - 요오드와 피부를 준비하고 멸균 방식으로 마우스를 드레이프. </li><li> 2cm의 중간 선 수직 복부 절개를 확인하고 복강을 입력합니다. 장 후퇴우량 가슴에 구체화. 절차를 통해 멸균 촉촉한 거즈에 싸서 장을 유지합니다. </li><li> 이 때 오른쪽 신장 절제술을 수행합니다. 6-0 실크 봉합사와 신장 동맥과 정맥을 결찰. 봉합에 신장의 원위을 절제. 신장에 인접 분할 후 6-0 실크 요관을 결찰하고. </li><li> 신장 혈관 아래 복부 대동맥과 하대 정맥 (IVC)를 분리합니다. 문 합부에 4-0면 대동맥 주위 관계 및 IVC 우수한 다음 열등를 놓습니다. 10-0 나일론 봉합사와 필드 내의 모든 요추 혈관을 확인하고 결찰. </li><li> 우수한 다음에 먼저 열등,면의 관계를 매듭. 이런 식으로 몇 가지 혈액 aortotomy을 쉽게 대동맥에 유지됩니다. </li><li> 대동맥의 루멘을 입력 30G 바늘 aortotomy를 형성한다. 약 2mm의 길이에 미세한 마이크로 가위로 절개를 확장 할 수 있습니다. </li><li> 기증자의 대동맥의 발 뒤꿈치와 발가락 커프의 측면 문합에에 끝을 확인다음과 같은 방식으로받는 사람 대동맥. 기증자의 대동맥과받는 사람 대동맥과 넥타이 절개의 하부 각도에 10-0 나일론 봉합사 숙박 스티치를 놓습니다. </li><li> 기증자의 대동맥의 첫 번째 및 복부 대동맥과 넥타이에 절개의 우수한 코너에 대향하는 제 2 10-0 나일론을 놓습니다. 대동맥의 측면 벽에 열등 우수에서 실행 봉합 라인을 확인하고 이전에 배치 숙​​박 스티치에 넥타이. 그런 다음 실행 패션과 넥타이 중간 벽을 봉합. </li><li> 다음과 같은 방식으로받는 사람 IVC에 기증자 신장 정맥 측 문합에 끝을 확인합니다. 30G 바늘 IVC에 구멍을 미세 마이크로 가위로 절개를 확장 할 수 있습니다. 10-0 나일론으로 IVC의 절개의 하부 모서리에 기증자 신장 정맥을 묶어. 신장 정맥과 하대 정맥과 넥타이 사이에 실행 봉합 라인을 확인합니다. 참고 : 그것은 전체 두께가 혈관 adventit을 포함하여 봉합 바늘 통과하는 것도 매우 중요합니다IA와 내막이 달성된다. 가장자리의 외반은 밀봉 및 문합의 치유에 도움 내막 - 투 - 내막 접촉이 있음을 보장합니다. 지혈 응고 에이전트가 누출을 감소하는 데 유용 할 수 있지만, 우리는 외과 의사 대신 좋은 기술에 의존하는 것이 좋습니다. </li><li> 문합은 &quot;깨끗한&quot;인지 확인합니다. 즉 바늘을 배치 할 때 상대 벽은 발견되지 않는다는 것이다. 이것은 실패한 이식과 뒷다리 마비에 극단적 인 경우가 발생합니다 그 흐름에 상당한 수축의 원인이됩니다. 주 : 또 극히 중요한 요소는 문합 봉합선의 장력이 또한 최적 인 것을 보장한다. 너무 느슨하고 돌이킬 누출, 너무 꽉 발생합니다 흐름에 협착이있을 것입니다. 동맥 측에이 이식의 가난한 관류가 발생할 경우, 정맥 측에 혼잡 신장의 원인이됩니다. </li><li> 말초 4-0면 넥타이 재 구축 정맥 흐름을 놓습니다. veno의 지혈 한 번우리의 문합은 근위 4-0면 넥타이를 풀고 지혈을 위해 동맥 문합을 준수 점차적으로 관찰되었다. </li><li> 모두 문합이 안전한 것으로 간주되면 마우스에서 면화 관계를 제거합니다. 피어스 두 개의 구멍을 만드는 20 G 바늘 방광. </li><li> 구멍을 통해 곡선 포셉의 팁을 전달하고 두 10-0 나일론 봉합사로 방광 벽에 ​​고정되는 요관의 기단부와 집게로 방광을 통해 기증자 요관을 당깁니다. 요관이 방광 내에 철회 두 10-0 나일론 봉합사로 구멍을 닫습니다 수 있도록 두 번째 구멍에서 튀어 요관의 초과 길이를 낸다. </li><li> 복부에 장을 돌려줍니다. 실행하는 방식으로 5-0 실크 봉합사를 사용하여 두 층의 복벽을 닫습니다. </li><li> 폐쇄시 유체 소생과 복부에 살균, 따뜻한 생리 식염수 1.0 ML의 덩어리를 관리하고, 생리 식염수를 피하 수술 후 0.8 ml를 주입. 다른 supporti 없습니다적이 조치는 수술 중 필요합니다. </li><li> 온난화 담요에 동물을 복구 할 수 있습니다. 총 주입 시간은 약. 35 ~ 45 분. 이러한 프레 노르 핀, 0.05 ㎎ / ㎏, SC, 절차의 시작과 72 시간의 수술 후마다 6 ~ 12 시간에서 0.1 ~ 0.2 ml의 같은​​ 진통제를 관리. </li></ol> 3. 반대쪽 신장 절제술 <ol><li> 프로토콜 요구 사항에 따라, 몇 일이 임플란트 시술 후, 이소 플루 란 마취에서 반대측 신장 절제술 (유도 5 % 흡입 이소 플루 란, 유지 보수를 위해 1.5-2.0 %)을 수행합니다. </li><li> 복강를 입력하고 부드럽게 동물의 오른쪽에있는 장을 철회. 주위의 근막에서 왼쪽 신장과 무딘 해부 노출. </li><li> 6-0 실크 봉합사와 신장 동맥, 정맥 및 요관을 결찰 한 후 봉합 위의 신장을 절제하고 신장을 제거합니다. 총 수술 시간은 약입니다. 10 분. </li></ol> 4. 이식 평가 <ol><li> 측정 혈청 creati알칼리 피크 레이트 법 (제피 반응)를 사용하여 구. </li></ol>

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</ol>

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이 이식 기술을 습득하는 것은 어렵지만 달성되면 그것은 매우 강력한 연구 도구이다. 환자 외과 의사 / 연구원은 세부 사항 및 작은 동물 모델에서 더욱 더 어떤 수술을 마스터하는 열쇠입니다 기술의 일관성에 대한 관심에 의해 보상 될 것이다. 마우스 신장 이식을 마스터의 기술적 어려움이 많은 주름, 그리고 그것은 다른 작은 동물 이식 모델에서 경험이 절차를 폭행하기 전에 얻을 수 있어야 가능성이 매우 높다. 특허 루멘을 유지하기 위해 바늘을 배치 할 때 상대 혈관 벽이 잡힐 안, 즉, 그것은 문합은 &quot;깨끗한&quot;되어 있는지 확인하는 것이 중요하다. 그렇지 않으면 실패한 이식과 극단적 인 경우에 가능성이 결과보다 것보다 그 흐름 상당한 수축이있을 것이다하는 것은 마비 - 사지 뒷다리로 이어집니다. 그것은 전체 두께가 봉합 바늘 통과하는 것도 매우 중요합니다<html> 이 밀봉 및 문합 치유 에이즈 내막 대 내막 접촉이 있음을 보장하는 적당한 에지 e...

1973 년 이후 쥐 신장 이식 모델은 유용한 연구 도구 왔지만, 기술적 인 문제는 광범위한 사용을 저해했다. 수년에 걸쳐 여러 논문 출판이 절차 개선 / 개선을 자세히 설명하고있다. 주로 혈관 고형 장기 이식의 모델로이 절차는 또한 1973 6 러셀 실험실에 의해 고안되었다 이소성 심장 이식 모델에 아마 두 번째입니다. 두 모델은 동종 거부 반응, 지연 이식 기능의 개발에 대한 연구하기 위해 자신을 빌려 허혈 및 재관류 손상. 신장 이식에보고 할 수있는 가장 일반적인 문제 중 하나는 우리는 또한 우리의 실험실에서 경험 동맥 혈전증 4,5,7의 상대적으로 높은 발병률이다. 그러므로 우리는 혈전 형성의 문헌 고찰을 수행하고 가능성이 기술적 인 문제의 원인을 찾기 위해 밖으로 설정하고 또한을 고안가능한 솔루션입니다. 혈전증의 원인은 혈액 기증자 신장 동맥에 다음 기증자 신장 대동맥으로,받는 사람 대동맥에서 걸리는 다소 고통스러운 경로입니다. 이 경로는 혈소판 활성화 및 혈전 형성으로 이어질 수 있습니다 신장 동맥에 난류가 발생합니다. 최근의 관찰과 관련 문헌 8-14의 검색을 바탕으로 우리는 0 %에 혈전증을 감소시켰다 새로운 기술 내놓았다. 여기에 기재된 기술은 시설 혈류를 개선 동맥 힐 앤드 토 커프스의 형성 이전에보고 된 방법과 크게 다르다 혈전 형성을 감소시킨다. 커프 미만 45 O 대동맥 (도 1A 및 1B)의 종축에 각도 신장 동맥의 소공면에 걸쳐 적외선 신장 대동맥을 분할함으로써 형성된다. 이 길이는 약 2mm 커프스가 발생합니다. 정맥 카렐 패치는 R을에 병행하여 형성된다IVC enal 정맥 내로함으로써 커프스의 직경을 증가시킨다. 적외선 신장 기증자 복부 대동맥 발 뒤꿈치와 발가락 커프는 엔드 - 투 -면이받는 사람 복부 대동맥 및 기증자 신장 정맥에 문합이다 / IVC 패치 (IVC) 엔드 - 투 -면이받는 사람 복부 하대 정맥에 문합이다 . 요관 다음에 도입 한 알 동부 (3)에 의해 설명 된 바와 같이 공기 주머니에 고정된다. 이 연구 단지 따뜻한 허혈 시간이 치료 이식의 경우 (예 :., 냉 허혈)는 비교되지 않습니다. 이 경우, 온 허혈 손상이 도너 신장을 통한 혈류의 중단으로부터 시간을 의미한다 (아래의 단계 1.11)와 수신자 (아래 단계 2.11)에 이식 재관류. 냉 허혈은 신장되지 않고, 관류 이식 절차를 시작할 때까지 냉장 보관되는 시간을 의미한다.

<table><tbody><tr><td>기구</td><td>Roboz #</td><td>Fine Science Tools #</td><td>Arosurgical #</td></tr><tr><td>Straight micro-dissecting forcep #5</td><td>RS-5015</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>Curved micro-dissecting forcep #7</td><td>RS-5047</td><td>11297-00</td><td></td></tr><tr><td>curved serrated forcep</td><td>RS-5137</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>Vannas micro-dissecting finger, short</td><td>RS-5610</td><td></td><td>09.140.08</td></tr><tr><td>마이크로 해부 가위, 직선, 날카롭고 긴</td><td></td><td>11.602.11</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 스프링 손잡이 바늘 홀더</td><td></td><td></td><td>11.549.15</td></tr><tr><td>스트레이트 모기 집게</td><td></td><td>91308-12</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 해부 가위, 직선, 무딘</td><td>RS-5962</td><td>14078-10</td><td></td></tr><tr><td>미세 해부 가위, 곡선, 무딘</td><td>RS-5981</td><td>14079-10</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 리트랙터</td><td>RS-6540</td><td></td><td></td></tr><tr><td>계기판 트레이, 10" x 6 &frac12; &rdquo; x &frac34; "</td><td>RT-1350S</td><td></td><td></td></tr><tr><td>실크 봉합사, 5/0, 22.5m 스풀</td><td></td><td>18020-50</td><td></td></tr><tr><td>봉합</td><td></td><td></td><td></td></tr>사 <tr><td>10/0 나일론</td><td></td><td></td><td>T4A10Q07</td></tr><tr><td>5/0 실크</td><td></td><td></td><td>E19A05N</td></tr><tr><td>장갑</td><td></td><td>드레이프</td><td></td></tr><tr><td>Medex Supply</td><td></td><td>Precept의 바이오젤, #64-9012-9</td><td></td></tr><tr><td>주사기</td><td></td><td>면 어플리케이터</td><td></td></tr><tr><td>B-D 1cc 인슐린, #329424</td><td></td><td>Fisher-brand, #23-400-100</td><td></td></tr><tr><td>포비돈-요오드 면봉</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PDI, #B40600</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4/0 면 넥타이</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>국산 면화 기구</td><td></td><td></td><td></td>로 오토클레이브</tr></tbody></table>

쥐 신장 이식 기술

Murine Kidney Transplant Technique

최초의 쥐 신장 이식 기술은 1973년 Russell 실험실에서 발표되었습니다. 다른 실험실에서 이 기술에 능숙해지고 활용하는 데 몇 년이 걸렸지만 현재 전 세계의 많은 실험실에서 널리 사용되고 있습니다. 신장 동맥 대신 동맥 문합을 형성하기 위해 기증자 대동맥을 사용하는 원래 기술에 대한 상당한 개선은 1993 년 Kalina와 Mottram 2에 의해 개발되고 보고되었으며, 1999 년 같은 실험실에서 더 발전했습니다 3. 이 모델에 능숙해질 수 있지만 문헌을 검색하면 많은 실험실에서 여전히 동맥 혈전증으로 인한 이식편 손실의 비율이 높다는 것을 알 수 있습니다. 우리는 여기에서 다른 사람들이보고 한 동맥 혈전을 크게 감소시키는 우리 실험실에서 고안 된 기술을 설명합니다 4,5. 이는 기증자 신장 하부 대동맥의 발뒤꿈치와 발가락 커프를 형성하여 더 큰 문합과 신장으로의 더 곧은 혈류를 촉진함으로써 달성됩니다.

이 수술 기법은 단순한 이식 생존 / 거부 연구, 또는 매우 복잡한 실험 프로토콜 중 하나를 수 있습니다. 도면에서 우리는이 향상된 동맥 문합 기술을 사용하는 장점을 설명 이하. 우리가 유의하게 0 %, 따라서 생산성 향상 35 %에서 동맥 혈전증의 발생을 감소이 기술을 사용. 우리는 유지 동일한 0 % 혈전증 결과에 1 년 이상이 기술을 이용했다. (1)이 새로운 기술의 기초이다 동맥 힐 앤드 토 커프스의 형성 방법을 설명도. 이 커프 이상 문합과 신장에 똑바로 혈액 유동 경로를 제공한다. 이러한 점을 모두 활성화시켜 혈소판 및 혈전 형성의 가능성을 감소 크게 줄어들 난류를 초래. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/52848/52848fig1.jpg" /> <strong&gt; 그림 기증자 커프의 준비 1...

이 원고의 목표는 동맥 문합에 대한 세부 사항에 특히 주의를 기울여 마우스에서 신장 이식을 수행하는 데 필요한 단계를 설명하는 것입니다.

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

본 절차의 전반적인 목적은 마우스 신장 이식을 위한 수정된 동맥 문합 기술을 시연하는 것입니다. 이를 위해 먼저 공여자의 관련 혈관을 정밀하게 박리합니다. 두 번째 단계는 신동맥에 인접한 공여자의 복부 대동맥에 힐 앤 토 커프(heel and toe cuff)를 만드는 것입니다.다음으로, 이 힐 앤 토 커프(heel and toe cuff)를 사용하여 수혜자의 동맥 문합을 형성합니다. 궁극적으로 이 기술은 동맥 혈전증의 발생 빈도를 매우 낮게 만들어야 합니다. 이 영상에서는 구강 내 신장 이식을 용이하게 하기 위한 동맥 힐 앤 토 커프 제작 방법을 보여드리겠습니다.이 저항 방법 기술의 주요 장점은 수혜자 대동맥에서 공여자 신동맥으로 이어지는 혈류 경로가 직선화되어, 혈소판 활성화와 혈전 형성이 감소한다는 것입니다. 수술 현미경 하에 무균 조작법을 사용하여 공여자의 신장을 적절하게 적출하십시오. 적출 시간은 15~20분 정도 소요됩니다. 털을 제거한 후 동물을 보정하십시오.포비돈 요오드로 피부를 세척하여 수술 부위를 준비하고, 마우스에 드레이프를 씌운 뒤 복부 중앙선을 따라 2 cm 절개하여 수술을 시작합니다. 장을 가슴 쪽으로 밀어내어 젖은 거즈로 감쌉니다. 시술 전 과정 동안 거즈가 마르지 않도록 유지하십시오.이제 주요 복부 혈관을 찾아 가동화합니다. 요분지(lumbar branches)는 전기소작하거나 10-0 나일론 봉합사로 결찰해야 합니다. 다음으로 좌측 신혈관 원위부에서 하대정맥과 대동맥의 2 mm 구간을 둔탁하게 박리합니다.그런 다음 신혈관에 부착된 작은 동맥 및 정맥 분지들을 결찰하고 절단합니다. 신정맥을 신동맥으로부터 분리하기 위해 둔성 박리를 계속하며, 이를 통해 추후 신정맥 근위단에 캐롤 패치(Carroll patch)를 생성할 수 있도록 합니다. 이 패치는 정맥 문합술 형성에 사용됩니다. 다음으로 좌측 부신 혈관들을 결찰하고 절단하여 신상 대동맥에 접근합니다.접근이 완료되면, 6-0 실크 루프를 사용하십시오. 추후 사용을 위해 신장 상부 대동맥 주위를 봉합합니다. 이제 주변 근막으로부터 신장 혈관과 요관을 박리하십시오.신장을 후면에서 오른쪽으로 회전시킨 후, 요관에 집중하여 모든 혈관 분지를 결찰하고 절단합니다. 주변 근막에서 요관을 조심스럽게 분리합니다. 신문(renal hilum)을 건드리지 말고 요관 혈관을 보존하십시오.다음으로, ductus deferens 수준에서 요관을 절단합니다. 이제 신장을 적출할 수 있습니다. 먼저, 공여자를 헤파린 처리하기 위해 원위부 IVC에 heparin 300 units를 천천히 주입합니다.둘째, 신상동맥 주위를 6-0 봉합사로 묶습니다. 그런 다음 복부 대동맥으로부터 왼쪽 신장에 100 units/mL 농도의 헤파린 식염수 0.8 mL를 주입하여 관류합니다. 관류 후에는 즉시 정맥 캐뉼라 패치를 만들어 신장으로의 역류를 방지합니다.신정맥을 신장 쪽으로 당겨 복부 대동맥(AA)과 신동맥을 노출시킵니다. 이제 신동맥에 인접한 대동맥을 절단합니다. 힐(heel)과 커프(cuff)를 만듭니다.그 후 냉허혈 시간이 필요하지 않은 경우, 회복된 신장을 준비된 수혜체로 이식합니다. 또는 장기를 4 °C 보관실로 옮긴 다음, 텍스트 프로토콜에 명시된 대로 공여체를 안락사시킵니다. 이 과정은 공여체 마취 때와 마찬가지로 35분에서 45분이 소요됩니다.수혜동물에게도 필요에 따라 초기 일시 투여량을 추가로 보충합니다. 수혜동물에게 안연고를 도포합니다. 그 후 동물에게 buprenorphine을 주사하고 시술 후에도 투여를 지속합니다. 공여동물과 마찬가지로 초기 절개를 수행하고 장을 밀어낸 후, 우측 신절제술을 진행하며, 6-0 봉합사로 신동맥과 신정맥을 결찰하고, 6-0 봉합사로 신장 근위측의 요관을 결찰하여 절단합니다.그런 다음 혈관 봉합 부위의 원위측에서 신장을 절제합니다. 이제 신혈관 하단에서 AA와 IVC를 분리한 후, 문합 부위의 상단에서도 동일하게 분리합니다. 대동맥과 IVC 주위에 4-0 면사 결찰사를 배치하고, 해당 부위의 하단에서도 동일하게 수행합니다.해당 영역에서 발견되는 모든 요혈관은 전기소작하거나 10-0 나일론 봉합사로 결찰해야 하며, 이때 하단의 봉합사를 먼저 단단히 묶은 후 상단의 봉합사를 단단히 묶습니다. 이렇게 하면 대동맥 내에 일부 혈액이 남아 AOR 자절술을 용이하게 합니다. 30게이지 바늘을 사용하여 자절술을 수행한 다음, 미세 가위를 사용하여 절개 부위를 약 2mm 길이로 확장합니다.다음 단계는 공여자 힐(heel) 및 토(toe) 커프와 수혜자의 대동맥 사이에 말단-말단 문합술을 시행하는 것입니다. 먼저, 10-0 봉합사를 사용하여 공여자 대동맥의 힐 부분에 고정 봉합(stay stitch)을 실시합니다. 이를 수혜자 대동맥 절개 부위의 하단 끝까지 통과시킨 후 묶어 고정합니다.둘째, 대동맥 절개부의 상단에 10-0 봉합사를 배치하고 공여자 커프(donor cuff)의 끝부분까지 계속 봉합한 후 묶어줍니다. 셋째, 상단에서 시작하여 대동맥의 외측벽에 연속 봉합을 실시하고, 이전에 배치한 하단 고정 봉합사에 맞춰 묶어줍니다. 그런 다음 신장을 뒤집어 내측벽을 따라 연속 봉합을 계속하고 상단 고정 봉합사에 맞춰 묶어줍니다.바늘을 사용하여 하대정맥(IVC)을 천자한 후, 미세 가위로 절개 부위를 확장하여 정맥 문합을 완료합니다. 10-0 나일론 봉합사를 사용하여 공여 신정맥을 하대정맥의 하단 모서리에 묶습니다. 하대정맥과 공여 정맥의 상단 끝에 또 다른 10-0 봉합사를 배치하고 양측을 따라 연속 봉합을 시행합니다.동맥 문합과 마찬가지로, 조직 가장자리를 외전시키면 밀봉과 치유에 도움이 됩니다. 이제 작업 내용을 확인하십시오. 대향벽이 봉합사에 잡히지 않아야 하며, 그렇지 않으면 혈류가 과도하게 제한될 수 있습니다.문합 봉합선의 장력을 최적 상태로 유지하는 것 또한 매우 중요한 요소입니다. 장력이 너무 느슨하면 되돌릴 수 없는 누출이 발생하고, 너무 팽팽하면 흐름에 협착이 생깁니다. 동맥측에서 이러한 현상이 발생하면 이식편의 혈류 공급이 불량해지며, 정맥측에서 발생하면 신장 울혈이 초래됩니다.문합이 완료되면, 정맥 흐름을 형성하기 위해 원위부 면사 결찰선을 풉니다. 그런 다음 근위부 결찰선을 서서히 늦추고 동맥 문합 부위의 지혈 상태를 확인하기 위해 세척합니다. 두 문합 부위가 모두 견고한 것이 확인되면, 20 gauge 바늘을 사용하여 수혜자의 방광에 두 개의 구멍을 냅니다. 그 구멍으로 포셉을 통과시켜 공여자의 요관을 방광 쪽으로 끌어당깁니다.그런 다음 요관의 근위단을 2-0 봉합사로 방광벽에 고정합니다. 돌출된 요관의 과도한 길이를 다듬어 방광 내로 함입되도록 합니다. 이어서 10-0 봉합사로 방광의 나머지 구멍을 폐쇄합니다.장관을 제자리에 넣고, 5-0 silk 봉합사로 복부를 두 층에 걸쳐 연속 봉합하며, 봉합 전 복강 내에 saline 1 µL를 주입하여 수술을 마무리합니다. 복부를 봉합한 후, 피하에 saline 0.8 mL를 추가로 주입하고 따뜻한 담요 위에서 동물을 회복시킵니다. 1년간의 데이터 수집 결과, 이 기술을 통해 동맥 혈전증의 발생률이 35%에서 0%로 유의하게 감소했으며, 면역조직화학 염색을 실시한 비이식 신장과 이식 신장에서 0%의 혈전증 발생률이 유지되었습니다. 설명된 기술을 사용하여 periodic acid shift 염색을 수행한 결과, 대조군과 공여자 모두에서 정상적인 근위 세뇨관 세포가 확인되었습니다.두 화살표가 가리키는 세포 모두 투명한 세포질과 세포 중앙의 둥글고 밝은 핵을 가진 입방형 세포입니다. 가벼운 브러시 border 손상의 증거를 확인하십시오. 하지만 대부분의 브러시 border는 규칙적이며 잘 보존되어 있습니다. 이 영상을 시청한 후에는 혈전 발생 빈도를 줄이고 신장 이식 성공률을 높일 수 있는 동맥 힐 앤 토 컵 문합술(heel and toe cup anastomosis) 수행 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

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