"환자와 같은"동소 이식 동계 마우스 모델 간세포 암의 전이

암의 전이 확산 암 관련 사망의 주요 원인이다. 우리는 고형 장기의 종양에서 전이의 메커니즘을 연구하기위한 "환자와 같은"동 소성 동계 마우스 모델 시스템 구축을위한 우리의 생존 수술 방법에 대한 심층적 인 설명을 제공한다.

이 절차의 전반적인 목표는 간세포 암종의 전이 메커니즘을 연구하기 위해 Orthotopic Syngeneic 마우스 모델 시스템과 같은 환자를 확립하는 것입니다. 이는 먼저 이식을 위해 마우스 간세포 암종 세포를 준비함으로써 이루어집니다. 두 번째 단계에서는 수용된 syngeneic 동물의 복부를 열고 세포를 간의 우엽에 조심스럽게 주입합니다.

궁극적으로, 이 방법론의 성공과 재현성은 간세포 암종 전이의 생물학적 메커니즘을 밝히는 데 널리 사용될 것을 권장합니다. 마우스 이종 이식 종양 모델과 같은 기존 기술에 비해 이 기술의 주요 장점은 당사의 syn 유전자 종양 모델 시스템을 통해 종양 전이에서 면역 반응의 역할을 조사할 수 있다는 것입니다. 저와 함께 이 절차를 시연하는 것은 우리 연구실의 학부생인 Michelle Nadu가 할 것입니다: 이식을 위해 세포를 준비하려면 먼저 간세포 암종 세포의 60-70% 융합 배양을 5ml의 PBS로 두 번 세척하는 것으로 시작합니다.

섭씨 37도에서 2ml의 트립신으로 세포 배양을 배양합니다. 5 분 후, 세포를 세고 PBS 밀리리터 당 5 번째 세포에 10 곱하기 5 배로 희석합니다. 다음으로, 100마이크로리터 분취액을 마우스당 하나의 멸균 1.5ml 마이크로 원심분리 튜브에 넣고 세포를 얼음 위에 놓습니다.

수술 절차를 시작하기 전에 발가락으로 적절한 마취 수준을 확인하십시오. 16-20g의 건강한 성인 bsy 마우스의 눈에 연고를 바르고 동물의 복부 정중선 주위 약 1 인치 영역을 면도하십시오. 그런 다음 라텍스 장갑을 끼고 비눗물을 탄 소독제 스크럽으로 노출된 피부를 여러 번 씻은 다음 약 5분 동안 멸균 PBS 헹굼을 합니다.

피부가 준비되면 장갑을 버리고 적절한 개인 보호 장비를 착용하십시오. 시술 중 마취적 저체온증을 방지하기 위해 외부 열원을 제공한 다음 동물, 팔다리 및 꼬리에 수술 테이프를 붙여 쥐를 누운 자세로 고정합니다. 다음으로, xiphos 흉골 바로 아래를 직선으로 절개하고 멸균 자가 유지 수술 견인기를 사용하여 복부를 엽니다.

간이 보이면 20게이지 바늘이 장착된 1ml 주사기에 세포 분취 1개를 흡인하고 간세포 암종 세포 100마이크로리터를 모두 간의 우엽에 천천히 조심스럽게 주입합니다. 바늘을 제거한 후 출혈을 멈추기 위해 멸균 면봉을 최소 1분 동안 바르십시오. 그런 다음 흡수성 봉합사를 사용하여 피하 조직을 닫은 다음 피부를 닫습니다.

수술 클립으로 다른 소독제 스크럽으로 상처를 닦고 피하에 100 마이크로 리터의 생리식염수를 투여합니다. 그런 다음 수술 직후 쥐를 동료가 없는 깨끗한 케이지로 옮기고 최소 24시간 동안 종이 침구가 깔려 있습니다. 이 BSY 쥐 간은 6 1 ME에 5 곱하기 10으로 이식되었다. 방금 시연된 바와 같이 쥐 간세포 암종 세포.

간세포 암종 발병에 대한 임상적 증거는 한 쥐의 화살표로 표시된 것처럼 63일 후에 관찰할 수 있었습니다. 복벽에 약간 붙어있는 간 표면에서 표재성 종양이 관찰되었습니다. 이 쥐의 폐는 비정상적인 형태를 보였으며 눈에 띄는 출혈성 괴사 부위를 나타냈습니다.

두 번째 쥐에서는 간이 심하게 비정상적인 것으로 보였으며, 그 이상은 예상대로 표재성 종양과 매우 매우 유사했다. 이식되지 않은 쥐는 간이나 폐에 종양이 발생하지 않았습니다. 이 orthotopic syn 유전자 마우스 모델은 전이 및 간세포 암종의 생물학적 메커니즘을 설명하기 위한 좋은 플랫폼을 제공할 수 있습니다.