Name: 환자와 같은동소 이식 동계 마우스 모델 간세포 암의 전이 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 6 s
Description: 배우세요 간세포 암 전이 연구를 위한 동소 이식 마우스 모델 수술 기법을. 면역 반응과 종양 상호작용을 분석하며 재현성이 높은 실험 방법으로 암 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

기사를 교정해 주신 Pascal DuBois에게 감사드립니다. 저자는 또한 뉴욕 시립 대학의 헌터 칼리지 (Hunter College)의 동물 시설 직원에게도 감사를 표하고 싶습니다. 이 작업은 Hunter College에 대한 NIH RCMI 보조금의 지원을 받았습니다.

윤리 선언문 모든 동물 실험은 뉴욕 시립 대학의 헌터 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었다. 주 : 에이트 BALB / c 마우스는이 실험 절차에서 사용 하였다. 다섯 BALB / c 마우스는 차 종양을 생성하기 위해 5 X 106 BNL 1ME A.7R.1 마우스 간암 세포를 이식 하였다. 아니오 주입 세 BALB / c 마우스는 대조군으로 사용 하였다. BNL 1ME A.7R.1은 쥐의 비 종양 간세포 세포주 BNL c12에에서 화학 변환에 의해 유도 된 쥐의 간세포 암 세포주이다. BNL 1ME A.7R.1는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (ATCC)로부터 수득 하였다. 1. 사전 수술 <ol><li> 모든 생존 수술은 건강을 위해 그 쥐를 확인합니다. 마우스가 건강하도록하려면, 피부의 텐팅 (tenting)에 의해 탈수의 징후를 검사합니다. 질병 또는 d의 증거와 마우스를 사용하지 마십시오이 실험에서 istress. </li><li> 그들은 저체중하지 보장하기 위해 마우스의 무게를. 무게가 적어도 16-20g 있는지 확인하십시오. </li><li> 마우스 당 주입 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1 마우스의 간세포 암 세포를 준비합니다 <ol><li> BNL 1ME A.7R.1 마우스 간암 세포의 70 % 융합 성 세포 배양 접시 - 10 ml의 60 %에서 대기음 매체. 5 ml의 PBS로 두 번 씻는다. 접시에 트립신 2 ML을 추가하고 5 분 동안 공기와 5 % CO 2 가습 배양기에서 37 ° C에서 품어. </li><li> 그 후, 피펫 10 μL은 10 배의 배율 현미경으로 세포 계수에 대한 수동 혈구로 세포를 트립신. 4 개의 큰 코너에 위치한 사각형 셀들의 총 수를 카운트하고 세포의 총 수에 의해 희석 계수를 곱한다. 이어서, (ML 당 셀) 카운트 제곱의 수로 나누어 세포 농도 10 (6)에 의해 곱. </li><li> 계산을 이용하여, 무균 마우스 당 500 만 세포를 수집1.5 ml의 마이크로 원심 튜브. 1.5 ml의 마이크로 원심 튜브 레이블. </li></ol></li><li> 포스페이트 완충 염수 100 ㎕ (PBS)에 5 × 106 BNL 1ME A.7R.1 마우스 HCC 세포 재현 탁. 수술에서 이식까지 얼음이 세포를 보관하십시오. </li><li> 마취의 유도 및 머리 오염을 방지하기 위해 멸균 장비와 물질을 멀리 클리핑 등의 수술에 대한 쥐의 준비에 필요한 활동을 수행합니다. </li><li> 분당 1 L (약. 2.1 %)의 농도를 일정한 유량으로 산소와 함께 기화기 이소 플루 란을 사용하여 이소 플루 란 흡입에 의해 마우스의 전신 마취를 유도한다. 주 : 시스템은 자립이며, 정밀 기화기, 산소 공급과 가스 / 마취제 소기 필요한 호흡 회로에 연결된 캐니스터 목탄을 포함한다. </li><li> 마취는 수술 중 통증을 겪고에서 동물을 방지하기 위해 적절한 지 확인하십시오. 발가락 핀치를 수행하고 비 respon 위해 동물을 관찰siveness 마취를 확인합니다. </li><li> 이 때, 코 콘에 밸브 라인, 인감 상자 열기를 전환합니다. </li><li> 즉시 마우스를 마취로, 건조 및 손상 예방 조치로 각막에 안과 연고의 작은 금액을 적용합니다. </li><li> 이어서, 노즈콘 제대로 (유지 마취)에 배치하고 연결하여, 준비 공간에 동물을 이동. 이 준비 영역에서 탈모에 의해 수술을위한 수술 절개 부위를 준비합니다. </li><li> 수술의 영역이 다른 모든 활동이없는 위치에 있는지 확인합니다. </li><li> 작업 표면이 견고하고 적절하게 소독, unsoiled과 혼란이없는 수술 전인지 확인하십시오. 리넨 또는 이상 수술 트레이의 살균 조각을 놓습니다. </li><li> 수술 필드는 수술을 수행하는 사람 만 사용할 수 있는지 확인합니다. 수술 방 적절한 소독과 청소하고 적절한 세제를 휩쓸 및 분사되어 있는지 확인ctant. </li><li> 그것은 또한 거리에 문 및 공기 흐름 등의 창에서 위치 사이트의 오염에 이르는 먼지를 확산 할 수 있는지 확인합니다. </li><li> 멸균 악기 생존 수술을 수행합니다. 어느 제조업체의 권장하거나 오토 클레이브에 따라 살균제에 악기를 흡수. 사용할 준비가 기본 멸균 공급 장치를 사용합니다. </li><li> 별도의 장비는 기능에 따라 멸균 지역의 오염을 방지하기 위해. </li><li> 동물의 간을 액세스 할 수 절개 (중간 선 절개)의 사이트 주위에 약 1 인치를 면도. 수술의 사이트에서 멀리 동물에서 머리를 제거합니다. </li><li> 면도 후, 비누 살균제 (betadine 수술 스크럽)와 영역을 문질러 멸균 PBS 용액에 과량의 소독제를 씻어. 약 5 분 동안 지속 전체 스크럽 과정이 여러 번 수행합니다. 제거하고 사용 장갑을 폐기. </li><li> 그 후, 같은 surgic로 보호 복으로 변경알 가운, 스크럽 상단, 얼굴 마스크입니다. 다음으로, 수술 장갑 착용하기 전에 적절한 스크럽 솔루션 손을 소독. 참고 :이 흘리기 및 잠재적 오염 물질과 수술 부위의 오염 방지하기 위해 필요한 단계입니다. </li></ol> 2. 수술 <ol><li> 마취의 전체 기간 동안 따뜻함을위한 외부 열원을 제공합니다. 마취는 체온 조절의 장애를 야기하기 때문에 동물은 일부 저체온증이 발생할 수 있습니다; 따라서, 체온을 유지한다. </li><li> 수술을 통해 그 뒷면에 마우스를 놓습니다. </li><li> 외과 테이프 조각과 수술 테이블에 앞 사지, 뒷다리와 마우스의 꼬리를 수정합니다. </li><li> xyphisternum에 직선 절개 즉시 열등합니다. </li><li> 간을 노출 멸균 자기 유지 외과 견인기를 사용합니다. </li><li> 주사기 차분히, 20G 바늘을 갖는 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1를 포함하는 PBS 100 ㎕를 주입간 우엽에 마우스 간암 세포. </li><li> 바늘을 제거한 후, 인해 간 높은 혈관에 잠재적 인 출혈을 멈추게하기 위해 적어도 1 분 동안 멸균 면봉을 적용합니다. </li><li> 수술 클립을 사용하여 피부 폐쇄 다음 흡수성 봉합사와 피하 조직을 닫습니다. 그 후, betadine 스크럽과 함께 다시 한 번 상처를 청소하십시오. 참고 :이 수술 상처의 폐쇄를 보장합니다. </li><li> 피하 생리 식염수 100 ㎕를 제공합니다. </li></ol> 3. 수술 후 <ol><li> 수술 후 즉시, 마우스 조건 관리인에게 통지 수술 후 신분증 깨끗한 케이지에 마우스를 옮긴다. 음식과 물을 제공합니다. 참고 : 우리의 경험에 의하면, 초기 24 시간의 기간 후 수술 젖은 음식과 물을 혼자 보관하면 그냥 최선을 운임됩니다 수술을 한 마우스를. </li><li> 38 ºC을 능가하지 열을 생성하는 가열 램프와 함께 동물을 따뜻하게 유지. 유마우스가 완전히 회복 될 때까지 온도를 측정하는 온도계를 SE는. </li><li> 바람직하게는 종이 침구와 케이지 하우스 동물의 편안함을 보장합니다. </li><li> 초기 복구 한 후, 불편 함, 출혈, 통증과 고통의 징후 동물을 모니터링 할 수 있습니다. 통증을 완화하기 위해 프레 노르 핀 (0.05 -0.1 ㎎ / ㎏)을 얻었다. 밀접하게 약 2 시간 동안 활성 동작과 모양뿐만 아니라 물과 음식 소비를 모니터링. 외래 경우, 마우스의 정규 일반 주택을 다시 지역에 동물을 이동하고 24 시간 후 수술 6-12 시간 간격으로 모니터링을 계속합니다. 원하는 경우 체중 검사를 수행합니다. </li><li> 동물이 문제가 회복 데 경우, 적절한지지 요법의 조치를 취할. 마우스는 복구 할 수없는 경우, 인도적으로 CO 2 질식 자궁 경부 전위를 통해 쥐를 안락사. 안락사에 대한 승인 기관의 지침을 따르십시오. </li><li> 수술 후 보통 observab입니다 간세포 암의 임상 적 증거를 확인몸 상태 점수 르로 크게 감소. 주 :이 시점에서, 일차 종양 가능성 간에서 개발 및 전이성 예금 가능성 폐에서 개발 하였다. </li><li> 이 시점에서, 인도적인 안락사에 의해 실험에 참여 (실험 및 제어) 모든 쥐를 희생. 이산화탄소로 질식 생쥐 대상 : 매우 천천히 -10 5 분에 걸쳐 챔버 내에 이산화탄소를 방출. 이것은 호흡 정지의 원인이됩니다. </li></ol>

<ol><li>Sheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capture%2C+release+and+culture+of+circulating+tumor+cells+from+pancreatic+cancer+patients+using+an+enhanced+mixing+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">Capture, release and culture of circulating tumor cells from pancreatic cancer patients using an enhanced mixing chip.</a> Lab on a Chip. 14, 89-98 (2014).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+and+prognostic+importance+of+epithelial-mesenchymal+transition+in+liver+cancers%3A+insights+from+experimental+models%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Oncology%2FHematology%22%5BJournal%5D)">Therapeutic and prognostic importance of epithelial-mesenchymal transition in liver cancers: insights from experimental models.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 83, 319-328 (2012).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Puszyk, W., Dong, H. J., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+upregulation+of+HGF+and+c-Met+drives+metastasis+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Epigenetic upregulation of HGF and c-Met drives metastasis in hepatocellular carcinoma.</a> PloS One. 8, e63765(2013).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocyte+growth+factor+upregulation+promotes+carcinogenesis+and+epithelial-mesenchymal+transition+in+hepatocellular+carcinoma+via+Akt+and+COX-2+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Hepatocyte growth factor upregulation promotes carcinogenesis and epithelial-mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma via Akt and COX-2 pathways.</a> Clinical and Experimental Metastasis. 28, 721-731 (2011).</li>
<li>Fujiwara, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+animal+model+for+in+vivo+study+of+liver+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology+%3A+WJG%22%5BJournal%5D)">A novel animal model for in vivo study of liver cancer metastasis.</a> World Journal of Gastroenterology : WJG. 18, 3875-3882 (2012).</li>
<li>Wirtz, D., Konstantopoulos, K., Searson, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physics+of+cancer%3A+the+role+of+physical+interactions+and+mechanical+forces+in+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">The physics of cancer: the role of physical interactions and mechanical forces in metastasis.</a> Nature Reviews Cancer. 11, 512-522 (2011).</li>
<li>Heindryckx, F., Colle, I., Van Vlierberghe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+mouse+models+for+hepatocellular+carcinoma+research%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">Experimental mouse models for hepatocellular carcinoma research.</a> International Journal of Experimental Pathology. 90, 367-386 (2009).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+mouse+model+of+metastatic+human+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid+Official+Journal+of+the+American+Thyroid+Association%22%5BJournal%5D)">An in vivo mouse model of metastatic human thyroid cancer.</a> Thyroid Official Journal of the American Thyroid Association. 24, 695-704 (2014).</li>
<li>Menezes, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+engineered+mice+as+experimental+tools+to+dissect+the+critical+events+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Genetically engineered mice as experimental tools to dissect the critical events in breast cancer.</a> Advances in Cancer Research. 121, 331-382 (2014).</li>
<li>Ogunwobi, O. O., Wang, T., Zhang, L., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclooxygenase-2+and+Akt+mediate+multiple+growth-factor-induced+epithelial-mesenchymal+transition+in+human+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Cyclooxygenase-2 and Akt mediate multiple growth-factor-induced epithelial-mesenchymal transition in human hepatocellular carcinoma.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 27, 566-578 (2012).</li>
<li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hallmarks+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The hallmarks of cancer.</a> Cell. 100, 57-70 (2000).</li>
<li>Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissemination+and+growth+of+cancer+cells+in+metastatic+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites.</a> Nature Reviews Cancer. 2, 563-572 (2002).</li>
<li>Kim, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+self-seeding+by+circulating+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor self-seeding by circulating cancer cells.</a> Cell. 139, 1315-1326 (2009).</li>
<li>Stolpe, A., Pantel, K., Sleijfer, S., Terstappen, L. W., den Toonder, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cell+isolation+and+diagnostics%3A+toward+routine+clinical+use%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cell isolation and diagnostics: toward routine clinical use.</a> Cancer Research. 71, 5955-5960 (2011).</li>
<li>Saad, F., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+current+role+of+circulating+tumor+cells+in+the+diagnosis+and+management+of+bone+metastases+in+advanced+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Oncology%22%5BJournal%5D)">The current role of circulating tumor cells in the diagnosis and management of bone metastases in advanced prostate cancer.</a> Future Oncology. 8, 321-331 (2012).</li>
</ol>

저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

이 문서의 방법에 대한 깊이있는 설명은 (그림 2)이 최근 Ogunwobi 및 간세포 암 전이의 동소 동계 마우스 모델의 성공적인 설립의 동료에 의해보고되었다 주어진다 3. 이 절차에 대한 종양의 테이크 속도는 일반적으로 높다. 우리는 이전에 100 % 3의 종양 걸릴 속도를 관찰했다. 그러나 테이크 속도는 연구자의 능력에 따라 변수가 될 수 있습니다. 훈련하에 새로운 대학원생 의한 최근의 실험에서, 종양 포획 율은 40 %로 낮았다. 대부분의 실험 4에서 종료되어 있지만 - 3 주 - 몸 상태 점수에 감소로 인해 6 주, 우리는 차 종양 (2)에 의해 설정 될 수있다 동일한 마우스에 동일한 세포의 피하 이식과 경험을 믿는다. 우리는 일반적으로 성공적인 실험에서 하나의 종양 결절을 볼 것으로 예상. 우리는 폐 전이가 4 사이에 개발 기대 비록 - 6 주, 그것은 conceiv입니다간에서 종양이 훨씬 일찍 일어날 수 있음을 수. <p class="jov...

간세포 암종(HCC)은 가장 치명적인 암 중 하나이며 예후가 좋지 않고 기대 수명이 낮습니다. 거의 모든 암 관련 사망은 발원 기관에서 다른 먼 장기로 질병이 전이되어 발생하기 때문입니다2-6. 간세포암 진행은 복잡한 과정입니다. 따라서 동물 모델에서 전이성 간세포에서 자연적으로 발견되는 종양 미세환경을 모델링할 수 있는 것은 인간에서 관련 메커니즘을 밝히는 성공적이고 유용한 방법임이 입증될 수 있습니다. 7불행히도 암 전이의 메커니즘은 여전히 불분명합니다. 따라서 HCC3,5와 같은 암 전이의 기저 분자 메커니즘을 규명할 수 있는 동물 모델을 확립할 필요가 있습니다.
Mouse 모델 시스템은 메커니즘을 설명하고 전이성 인간 암의 치료를 위한 새로운 전략을 평가하는 데 매우 유용한 접근 방식입니다5,8. 현재 존재하는 다양한 마우스 모델 시스템은 질병의 복잡성을 올바르게 묘사하기 위한 연구자들의 노력에 대한 증거입니다5,8,9.
Ogunwobi와 동료들은 최근 HCC3의 전이 연구를 위한 새로운 정교소 syngeneic mouse 모델의 확립을 입증하기 위해 생존 수술 접근법을 사용했습니다. 그들의 연구는 공격적이고 전이된 간암의 특징을 요약하는 "환자와 같은" 마우스 모델을 확립했습니다3. 그들은 또한 이 마우스 모델 시스템이 순환 종양 세포의 생물학을 연구하는 데 사용될 수 있으며 암 전이3의 메커니즘에 대한 새로운 통찰력을 얻을 수 있는 잠재력을 가지고 있음을 보여주었습니다.
이 논문의 목적은 HCC 전이3의 "환자와 같은" orthotopic syngeneic mouse model을 확립하는 데 사용되는 방법론을 자세히 설명하는 것입니다. BNL 1ME A.7R.1 마우스 HCC 세포를 근친 야생형 면역 유능 실험실 마우스 균주인 BALB/c3의 간(기원 기관)에 생존 수술을 사용하여 직접 이식하는 방법에 대해 설명합니다. 인간 종양 세포가 면역 결핍 마우스에 이식되는 다른 마우스 이종 이식 종양 모델과 달리 이 시스템은 공생학이므로 종양 전이에서 면역 체계의 역할을 연구하는 데 적합합니다3,5,8. 이 접근법은 고형 장기암의 전이 메커니즘을 연구하는 데 널리 사용될 것입니다.

<table><tbody><tr><td>마이크로 해부 핀셋&nbsp;</td><td>Roboz</td><td>(RS-5040)</td><td>팁 0.20 x 0.12mm</td></tr><tr><td>Graefe 마이크로 해부 집게, 톱니 모양의 곡선 팁</td><td>Roboz</td><td>(RS-5111)</td><td>1 X 2 이빨, 곡선 팁 너비 0.6mm</td></tr><tr><td>마이크로 해부 견인기-아그리콜라(3 x 3 갈래)</td><td>Roboz</td><td>(RS-6501)</td><td>무딘 3 X 3 갈래, 깊이 4mm, 스프레드 25 mm</td></tr><tr><td>마이크로 해부 견인기-Goldstein(3 x 3 갈래)</td><td>Roboz</td><td>(RS-6503)</td><td>무딘, 3 X 3 갈래, 깊이 4 mm, 퍼짐 19 mm</td></tr><tr><td>Jameson Caliper (종양 측정)</td><td>Roboz</td><td>(RS-6466)</td><td>80 mm/3 인치 스케일, 크롬 도금&nbsp;</td></tr><tr><td>마이크로 해부 가위, 큰 링 시저, 직선적이고 날카로운</td><td>Roboz</td><td>(RS-5852)</td><td>23 mm 블레이드, 길이 4인치, 평평한 샹크와 큰 링</td></tr><tr><td>섬세한 해부 절차를 위한 칼날이 있는 메스</td><td>Roboz</td><td>(RS-9861-36)</td><td></td></tr><tr><td>메스 핸들&nbsp;</td><td>Roboz</td><td>(RS-9884)</td><td>Solid</td></tr><tr><td>Littauer Stitch Sissors</td><td>Roboz</td><td>(RS-7074)</td><td>길이 4.5인치</td></tr><tr><td>갈색 바늘 홀더, 쉽게 봉합할 수 있는</td><td>Roboz</td><td>(RS-7960)</td><td>볼록한 턱, 미세한 톱니 반사</td></tr><tr><td>7MM 상처 클립과 reflex 7 클립 어플라이어</td><td>Roboz</td><td>(RS-9262)</td><td>안전하고 안전한 상처 봉합 대체 방법</td>Roboz(RS-9262)안전하고 안전한 상처 봉합 대체 방법</tr><tr><td>기구 트레이 및 뚜껑</td><td>Roboz</td><td>RT-1350S</td><td></td></tr><tr><td>탈착식 블레이드가 있는 미니 클리퍼</td><td>Roboz</td><td>(RS-5903)</td><td></td></tr><tr><td>Germinator 500 (germ terminator) 건식 살균기</td><td>Roboz</td><td>Ds-400, Ds-401, DS-501</td><td>마이크로 해부 기구의 빠른 오염 제거용.&nbsp; &nbsp; 기기는 15초 이내에 오염을 제거합니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>Microinjection 바늘</td><td>VWR</td><td>BD305125</td><td>25G 바늘</td></tr></tbody></table>

&quot;환자와 같은&quot;동소 이식 동계 마우스 모델 간세포 암의 전이

A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

암 관련 사망의 대부분은 원발성 종양 자체보다는 암의 전이에 의해 발생합니다. 그러나 암 전이의 기전은 아직 불분명합니다. 동물 모델은 메커니즘을 규명하고 전이성 암 치료를 위한 새로운 전략을 평가하는 데 필수적입니다. 여기에서는 고형 장기 종양의 전이 메커니즘을 탐색하기 위한 "환자와 유사한" orthotopic syngeneic mouse model에 대한 심층적인 설명이 제공됩니다. BNL 1ME A.7R.1 마우스 간세포 암종 세포를 근친 야생형 면역 유능 실험실 마우스 균주 BALB/c의 간(기원 기관)에 직접 이식하는 생존 외과 이식에 대해 설명합니다. 이 방법론의 성공과 재현성은 고형 장기암 전이의 생물학적 메커니즘을 밝히는 데 널리 사용할 것을 권장합니다.

을 Balb / c 마우스의 간은 5 × 106 BNL 1ME A.7R.1 마우스 간암 세포를 이식 하였다. HCC 개발의 임상 적 증거가 육십삼일 수술 후 관찰했다. 따라서, 마우스는 인도적으로 안락사시켰다. 검시는 안락사 쥐에 대해 수행 하였다. 폐 및 간을 절제하고, 조심 육안 검사를 육안 종양을 확인하기 위해 수행 하였다. 하나의 마우스에서 종양이 표면 복벽 (도 1a)에 일부 첨부 간 표면에서 발견되었다. 둘째 마우스에서 비정상적 간 예측이 관찰되었다. 이상은 매우 강력 피상적 종양 (그림 1B)처럼 보인다. 예상대로 제어 마우스에서 간 (도 1d) 및 폐 (도 1E)에 의해 입증되는 바와 같이, BNL 1ME A.7R.1 HCC 세포의 주입없이와 대조군 마우스는 종양이 전혀 개발되지. 또한, 종양을 가진 쥐에서 폐 다소 비정상적인 모습, 디스플레이출혈성 괴사 보내고 영역 <st...

암의 전이 확산 암 관련 사망의 주요 원인이다. 우리는 고형 장기의 종양에서 전이의 메커니즘을 연구하기위한 &quot;환자와 같은&quot;동 소성 동계 마우스 모델 시스템 구축을위한 우리의 생존 수술 방법에 대한 심층적 인 설명을 제공한다.

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of ...

이 실험 과정의 전반적인 목적은 간세포암의 전이 메커니즘을 연구하기 위해 환자와 유사한 동종 정위 이식 마우스 모델 시스템을 구축하는 것입니다. 이를 위해 먼저 이식용 마우스 간세포암 세포를 준비합니다. 두 번째 단계에서는 수혜 동종 동물의 복부를 절개하고 간의 우엽에 세포를 주의 깊게 주입합니다.궁극적으로, 본 방법론의 성공과 재현성은 간세포암 전이의 생물학적 기전을 규명하는 데 있어 광범위한 사용을 권장합니다. 마우스 이종 이식 종양 모델과 같은 기존 기술과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은, 당사의 동종 유전적 종양 모델 시스템을 통해 종양 전이에서 면역 반응의 역할을 조사할 수 있다는 점입니다. 이 절차의 시연은 저희 실험실의 학부생인 Michelle Nadu가 맡아 진행하겠습니다. 이식을 위해 세포를 준비하려면, 60~70% 정도로 컨플루언시(confluence)가 형성된 간세포암 세포 배양물을 5 mL의 PBS로 2회 세척하는 것부터 시작하십시오.세포 배양액에 2 mL의 trypsin을 넣고 37 °C에서 배양합니다. 5분 후, 세포 수를 측정하고 PBS를 사용하여 5 × 10⁵ cells/mL 농도로 희석합니다. 다음으로, 마우스 한 마리당 100 µL의 세포 분주액을 멸균된 1.5 mL 마이크로 원심분리 튜브에 옮긴 후, 세포를 얼음에 보관합니다.수술 절차를 시작하기 전, 발가락을 통해 마취 수준이 적절한지 확인하십시오. 16~20g의 건강한 성체 bsy 마우스의 눈에 연고를 바르고, 동물의 복부 정중선 주변으로 약 1인치 영역을 제모하십시오. 그다음 라텍스 장갑을 착용하고, 노출된 피부를 비누 소독제로 여러 번 세척한 후, 멸균 PBS로 약 5분 동안 헹구십시오.피부 준비가 완료되면 장갑을 벗고 적절한 개인 보호 장구를 착용하십시오. 시술 중 마취로 인한 저체온증을 방지하기 위해 외부 열원을 제공하고, 수술용 테이프를 동물의 사지와 꼬리에 붙여 마우스를 앙와위로 고정합니다. 다음으로, 검상돌기 바로 아래쪽에 직선 절개를 가한 후, 멸균된 자가 유지 수술용 리트랙터를 사용하여 복부를 개복합니다.간이 보이면, 20게이지 바늘이 장착된 1밀리리터 주사기로 세포 분주액 1회분을 흡입한 다음, 간세포암 세포 100 µL 전체를 간의 우엽에 천천히 조심스럽게 주입합니다. 바늘을 제거한 후, 출혈을 멈추기 위해 멸균 면봉으로 최소 1분 동안 압박합니다. 그 후 흡수성 봉합사로 피하 조직을 봉합하고, 이어서 피부를 봉합합니다.수술용 클립을 사용하여, 다른 소독제로 상처 부위를 다시 세척하고 피하에 normal saline 100 µL를 투여합니다. 그 후 수술 직후에 생쥐를 동료가 없는 깨끗한 케이지로 옮기고, 최소 24시간 동안 종이 깔개를 제공합니다. 이렇게 하여 앞서 시연한 바와 같이 BSY 생쥐 간에 5 × 10⁶개의 ME.A 생쥐 간세포암 세포를 이식하였습니다.한 마리의 마우스에서 화살표로 표시된 바와 같이 63일 후에 간세포암 발생의 임상적 증거가 관찰되었습니다. 간 표면에서 복벽에 일부 부착된 표재성 종양이 관찰되었습니다. 이 마우스의 폐는 비정상적인 형태를 보였으며, 육안으로 확인 가능한 출혈성 괴사 부위가 나타났습니다.두 번째 마우스의 경우, 간이 육안으로 보기에 비정상적이었으며, 그 이상 징후는 예상된 대조군과 같이 표재성 종양과 매우 유사했습니다. 이식되지 않은 마우스에서는 간이나 폐 모두에서 종양이 발생하지 않았습니다. 이 정위성 동종 마우스 모델을 숙달하면 전이 및 간세포암의 생물학적 기전을 규명하는 데 유용한 플랫폼을 제공할 수 있습니다.

a-patient-like-orthotopic-syngeneic-mouse-model-hepatocellular

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이게 맹장에 피하 종양의 조각의 cecal 벽이나 이식으로 암 세포 현탁액의 주입 : 두 기술이 모델을 확립하는 데 사용할 수 있습니다. 이 모델은 대장암의 자연 진행을 공부하고 대장암에 대한 새로운 치료 요원을 테스트하는 데 유용합니다.

대장암의 Orthotopic 마우스 모델

면역 결핍 쥐에서 인간 종양 이종 이식은 암 생물학을 연구하는 중요한 도구입니다. 인간의 간세포 암 세포 또는 종양 파편에서 피하 및 간내 이종 이식을 생성하는 특정 프로토콜이 설명되어 있습니다. 받는 사람 생쥐의 부분 간 절제술에 의해 유도 된 간 재생은 간내 생착을 촉진하기위한 전략으로 제시된다.

면역 결핍 마우스의 피하 및 간내 인간의 간세포 암 이종 이식의 생성

간 전이 전임상, 뮤린 모델 hemispleen 주입 기법을 통해 수행 하였다.

간 전이의 전임상 쥐과 모델

동소 유방암 차 종양 모델 원발 종양의 외과 적 제거가 기재되어 자발적 전이를 생성하는 마우스의 수명을 연장한다. 종양 성장 및 진행 모니터링하고 루시퍼 형광 이미징에 의해 정량화된다.

자발적 유방암 전이의 동소 이식 마우스 모델

전립선암은 미국에서 암 관련 사망의 두 번째로 흔한 원인입니다. 정소성 암 모델은 전립선암의 생물학을 이해하고 치료 요법의 효능을 평가하는 데 유용한 접근 방식을 제공합니다. 이 프로토콜은 정형소 전립선암 마우스 모델을 확립하는 데 필요한 자세한 단계를 설명합니다.

인간의 전립선 암의 전 임상 동소 이식 쥐 모델

면역 적격 마우스에서 신 세포 암의 동소 모델의 구현은 연구자에게 동일한 동물의 신장 차 종양 및 폐 전이의 존재에 의해 정의 된 임상 관련 시스템을 제공한다. 이 시스템은 전임상 생체 내에서 다양한 트리트먼트를 테스트하는 데 사용할 수 있습니다.

전임상 치료의 양적 및 종 방향 평가를위한 동계 마우스 모델 전이성의 신장 세포 암

여기서, 간세포암(HCC)의 전형적인 면역 특징을 재기하는 간암의 임상적으로 관련 있는 뮤린 모델의 개발을 설명한다.

간 염증과 섬유증의 설정에서 발생하는 간세포암의 종양 성 간세포 유도 직교 마우스 모델

정형외과 성 인간 간 전이성 포도막 흑색종 이종이식 마우스 모델은 배양된 인간 포도정 흑색종 세포주를 가진 환자 유래 종양 덩어리 및 바늘 주입 기술을 이용한 외과 정형외과 이식 기술을 사용하여 만들어졌습니다.

면역결핍 마우스에서 간 직교 인간 편도 흑색종 Xenograft 플랫폼의 생성

여기에서 우리는 간동맥 결찰을 포함하거나 포함하지 않는 동소 간세포 암종 이종이식편을 만들고 [18 F]플루오로미소니다졸([18 F]FMISO) 및 [18F]플루오로데옥시글루코스([18F]FDG).

간세포 암종의 동소 마우스 모델에서 비침습적 PET/MR 이미징

췌관 선암종(PDAC)의 Syngeneic mouse orthotopic 동종이식편은 질병 아형의 생물학, 표현형 및 치료 반응을 요약합니다. 빠르고 재현 가능한 종양 진행으로 인해 전임상 연구에 널리 사용됩니다. 여기에서는 syngeneic murine PDAC 배양을 췌장에 주입하여 이러한 모델을 생성하는 일반적인 방법을 보여줍니다.

췌장암을 모델링하기 위한 Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts

배우세요 간세포 암 전이 연구를 위한 동소 이식 마우스 모델 수술 기법을. 면역 반응과 종양 상호작용을 분석하며 재현성이 높은 실험 방법으로 암 연구에 활용됩니다.

"환자와 같은"동소 이식 동계 마우스 모델 간세포 암의 전이

더 많은 동영상 탐색