2015년 6월 8일
생쥐의 환경 강화는 복잡하고 도전적인 설정뿐만 아니라 생쥐의 강력한 대사 및 항암 효과를 보장하기 위한 포괄적인 사육 및 취급 기술을 필요로 합니다. 이 프로토콜은 마우스에서 위에서 언급한 효과를 재현하기 위한 자세한 절차를 제공합니다.
이 절차의 목표는 생쥐에게 강력한 대사 및 항암 효과를 생성하는 환경 강화 환경에서 동물을 수용하고 유지하는 데 필요한 세부 정보를 제공하는 것입니다. 이것은 먼저 바퀴, 흐르는 소스, 오두막, 튜브, 통나무 및 케이지와 같은 물체가 있는 큰 쓰레기통에 풍부한 주택 환경을 설정하여 수행됩니다. 두 번째 단계는 동물들에게 새로운 환경을 소개하는 것이다.
다음으로, 쓰레기통에 있는 물체의 위치와 유형을 변경하고 정기적으로 신선한 음식과 물을 제공함으로써 풍요로운 환경을 유지합니다. 마지막 단계는 환경에서 교체된 개체를 정리하여 나중에 교환할 준비가 되도록 하는 것입니다. 궁극적으로는 안락사와 동물 조직 분석에 관한 것입니다.
이 환경 강화 기술은 비만율 감소, 에너지 소비 증가, 다이어트로 인한 비만에 대한 저항력 증가, 시상하부 sym 신경 지방 세포 축을 활성화하여 백색에서 갈색 지방으로의 표현형 전환을 보여줍니다. 이 방법은 암 및 대사 질환에 대한 저항력을 향상시키는 실험실 설치류를 위한 풍부한 환경 설정에 대한 세부 정보를 설명합니다. 먼저 대형 농축통 내부에 스포리시딘 소독제를 뿌리고 닦습니다.
제조사의 안내에 따라 에탄올 30% 또는 수돗물에 적신 종이, 수건, 건조기로 쓰레기통을 닦아내고 종이 타월로 이전 소독제의 냄새를 제거합니다. SOR 타입 휠이 달린 플라스틱 튜빙 이글루와 장난감과 같은 다양한 플라스틱 허처를 사용하여 풍부한 환경에서 사용할 수 있습니다. 이 장난감은 이전과 같이 세탁하고 이전과 같이 세척된 금속 러닝 휠을 사용하십시오.
물레의 페인트가 바래기 시작하여 동물이 그 위를 달릴 때 물레에서 소리가 나기 시작하면 물레와 차축이 연결되는 곳에 소량의 바셀린을 바르십시오. 풍요로운 환경에서 나무 통나무를 사용하십시오. 침구나 기타 이물질을 손으로 제거하여 통나무를 청소하십시오.
그런 다음 15분 동안 섭씨 121도의 온도에 도달하는 건조 사이클 또는 섬유 사이클에서 통나무를 고압멸균하여 통나무를 살균합니다. 29cm x 18cm x 12.5cm 및 30.5cm x 19cm x 14cm 크기의 깨끗한 수유 케이지를 사용하여 보관할 수 있습니다. 먹이 및 마시는 철사 선반은 쥐가 출입할 수 있도록 케이지 전면 바닥에서 직경 5cm 이상의 구멍을 뚫습니다.
시작하자면. 1/4 인치 옥수수 속대 실험실 동물 침구를 2-2.5 센티미터 깊이의 깨끗한 농축 통에 넣습니다. 다음으로, 이전의 대동맥 쇄골 통나무 중 2개 또는 3개를 쓰레기통의 한쪽 모서리에 배치하여 약 1, 225cm 정사각형의 면적을 격리합니다.
그런 다음 통나무로 격리된 영역에 SOR 휠이 있는 세 개의 접착제를 위에 놓습니다. 바퀴가 자유롭게 회전할 수 있는 공간이 있는지 확인하십시오. 이제 플라스틱 튜브를 함께 연결하여 여러 암이 중앙 연결 부품에서 분기되도록 합니다.
이 튜브를 쓰레기통의 두 모서리에 있는 쓰레기통 중앙에 놓습니다. 쓰레기통과 같은 침구로 채워진 수유 케이지를 놓습니다. 각 사료 케이지 전면의 구멍은 쓰레기통 중앙을 향해야 합니다.
각 먹이 케이지 위에 마우스 차우가 들어있는 음식과 물 와이어를 놓습니다. 물병을 추가합니다. 11.5cm 바퀴, 20.5cm 바퀴, 28cm 바퀴를 쓰레기통에 넣습니다.
그런 다음 농축 쓰레기통 전체에 장난감이나 터널과 같은 플라스틱 서랍장을 4-5개 더 놓습니다. 쓰레기통을 마이크로 아이솔레이터 여과지로 덮고 바인더 클립을 사용하여 여과지를 쓰레기통에 끼웁니다. 동물을 표준 케이지에서 농축 쓰레기통에 넣을 때는 동물이 표준 케이지에서 농축 쓰레기통으로 자유롭게 이동할 수 있도록 케이지를 옆으로 눕힙니다.
둥지 재료가 농축 쓰레기통으로 옮겨지지 않도록 하십시오. 같은 연령, 성별 및 유전적 균주를 가진 10-20마리의 동물을 한 번에 농축 환경에 수용할 수 있습니다. 동물이 질병이나 고통의 징후가 있는지 매일 관찰하도록 합니다.
필요한 경우 동물을 부드럽게 다루어 일주일에 두 번 동물의 상태를 추가로 검사하십시오. 음식과 물의 수위를 확인하여 음식과 물이 앞으로 이틀 동안 지속될 수 있는지 확인하십시오. 또한 바퀴와 강화 장난감을 펴서 쉽게 사용할 수 있도록 곧게 펴십시오.
더러워진 농축 품목은 일주일에 한 번, 이상적으로는 쥐가 환경에서 제거될 때 교체하십시오. 실험적 목적을 위해 수유 케이지와 와이어 랙을 제거하고 깨끗한 케이지와 신선한 음식으로 채워진 랙으로 교체하십시오. 물병을 깨끗한 물병으로 교체하십시오.
결정적으로 보강 항목을 재정렬하여 설정의 주요 측면은 유지되지만 보강 항목은 다르게 배치됩니다. 점. 나머지 대형 농축 빈을 확인하고 필요한 경우 청소하십시오. 더러운 쓰레기를 퍼내고 2주에 한 번씩 깨끗한 새 침구를 깔
아줍니다.매주 축산을 할 때는 장난감을 손으로 씻거나 케이지 워시를 통해 보내서 씻으십시오. 매달 농축 장난감과 먹이 케이지를 제거하고 깔짚을 퍼내어 대부분의 깔짚을 청소하십시오. 3개월에 한 번 또는 동물 프로토콜에서 요구하는 대로 케이지의 모든 영역에 2cm의 침구가 있는지 확인하고 모든 침구와 장난감을 제거하고 농축 쓰레기통을 세척하여 농축 쓰레기통을 소독합니다.
농축 환경의 미세-격리 케이지에 있는 마우스로서, 농축 환경에서와 동일한 옥수수 속대 침구를 대조 케이지에 제공하고, 일반 마우스 케이지에 같은 성별의 3-5마리의 마우스를 수용하는 마이스터 메이커 둥지로 조명이 켜진 4cm x 4cm 둥지를 추가합니다. 케이지에 장난감 튜브나 허치를 제공하지 마십시오. 케이지에 음식을 담을 수 있는 철사 선반을 포함하고, 케이지가 자동 급수 시스템에 연결되어 있지 않은 경우 물병을 포함하십시오.
매일 동물의 건강을 모니터링하여 동물이 충분한 음식과 물을 섭취할 수 있도록 합니다. 케이지, 공급 와이어, 음식 및 물을 교체하거나 청소하십시오. 일주일에 한 번 이전과 같이 케이지와 와이어 랙을 청소하십시오.
생후 3주가 지난 수컷 쥐는 종양 피하 접종 전 5주 동안 농축 환경 또는 대조 케이지에 수용되었으며 동물당 10개에서 5개의 세포가 투여되었습니다. 그 결과, B 16의 흑색종 종양 체중은 접종 후 17일째로 나타났다. 각 그룹은 10마리의 동물로 구성되었습니다.
별표는 여기에서 students'T-test에 의해 계산된 0.05 미만의 P-값을 나타냅니다. 생후 3주 된 쥐를 6일 동안 환경적으로 풍부하게 했습니다. 풍요로운 환경에서 6일 동안 후복막, 백색 지방 조직, 지방 패드 체중 감소.
이 그래프는 풍부한 환경에서 6일 동안 갈색 지방 조직, 표피 백색 지방 조직 및 후복막 백색 지방 조직이 감소하여 체중에 비해 지방 패드 무게가 감소했음을 보여줍니다. 다음 두 그래프는 여기에서 볼 수 있듯이 4주 동안 풍부한 환경에서 사육된 마우스의 결과를 공유하며, 4주 동안 환경 강화에서 갈색 지방 조직을 제외한 모든 지방 유형에서 지방 패드 무게가 감소했습니다. 환경 강화 4주, 갈색 지방 조직을 제외한 모든 지방 유형에 대해 체중 대비 지방 패드 체중 감소.
이 비디오를 시청한 후에는 항암 및 항비만 효과와 마우스를 유도하는 풍부한 환경을 설정하고 유지하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.
본 프로토콜은 대사 건강을 증진하고 암 위험을 낮추는 생쥐를 위한 풍부한 환경(enriched environment)을 조성하는 절차를 설명합니다. 동물에게 최적의 조건을 제공하기 위한 환경 설정, 유지 관리 및 모니터링 방법을 상세히 다룹니다.
실험용 마우스를 위한 표준화된 환경 풍부화 프로토콜은 전임상 연구에서 재현 가능한 대사 및 종양 표현형을 생성하는 데 매우 중요합니다. 통제된 풍부화는 에너지 소비, 지방도 및 종양 생물학에 관한 견고한 가설 검증을 가능하게 하여, 표적 검증 및 기전적 리스크 감소에 직접적인 영향을 미칩니다. 일관된 구현은 대사 및 암 모델에서 중개 연구의 연속성과 포트폴리오의 신뢰성을 뒷받침합니다.
환경 풍요화 프로토콜은 초기 발견과 전임상 모델 개발의 접점에 위치하며, 타겟 검증과 중개 연구 모두를 지원합니다.