임상 적으로 구축 전의 VIVO 모의 백내장 수술 모델

이 절차의 전반적인 목표는 본래의 미세환경에서 상처 복구를 따를 수 있는 임상적으로 관련된 모델을 만드는 것입니다. 이것은 먼저 닭 배아의 눈에서 수정체를 제거함으로써 이루어집니다. 두 번째 단계는 수정체 앞쪽을 작게 절개

그런 다음 렌즈 섬유 세포 덩어리를 수압 용출합니다. 다음으로, 관련 상피가 있는 수정체 캡슐은 전방 캡슐을 추가로 절단하여 평평하게 만듭니다. 마지막 단계는 상처 치유가 진행되는 동안 이를 추적하기 위해 상처 배양 접시에 상처 배양 접시를 고정

궁극적으로, 타임 랩스 현미경 검사, 컨포칼 현미경 검사 및 생화학 분석을 사용하여 생체 내 환경을 밀접하게 요약하는 모델에서 상처 복구 메커니즘을 보여줍니다. 이 방법은 상처를 봉합하기 위해 세포가 어떻게 함께 협력하는지 등 상처 치유 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 방법은 상처 치료 과정에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다.

또한 ABER 상처 치유, 특히 섬유증 및 흉터 연구에 적용할 수 있습니다. 3개의 100mm 페트리 접시를 멸균 층류 후드에 넣는 것으로 시작합니다. 페트리 접시 중 두 개를 실온에서 트리스 포도당 완충액으로 반쯤 채우고 세 번째 접시는 비워 둡니다.

그런 다음 섭씨 37.7도의 인큐베이터에서 수정 가능한 배아 15일차 흰다리뿔 병아리 알을 제거하고 껍질 외부를 70% 에탄올로 청소하여 살균합니다. 다음으로 조심스럽게 달걀을 깨뜨려 내용물을 빈 100mm 페트리 접시에 넣습니다. 표준 집게와 가는 가위를 사용하여 배아의 목을 자르고 TST 포도당 완충액이 들어 있는 접시 중 하나에 머리를 넣습니다.

15분 이내에 병아리 배아 머리를 페트리 접시 뚜껑으로 옮깁니다. 고정밀 집게를 사용하여 눈 뒤쪽을 꼬집어 눈 뒤쪽에 작은 구멍을 만듭니다. 그런 다음 집게로 유리체액을 잡고 롤링 동작으로 유리체액을 부드럽게 잡아당깁니다.

수정체가 부착된 유리체가 눈에서 떨어져 나옵니다. Tex extras Buffer가 들어 있는 나머지 페트리 접시에 렌즈와 유리체를 놓습니다. 해부를 계속하기 전에 렌즈를 버퍼에 30분 이상 두지 마십시오.

다음으로, 고정밀 집게가 있는 해부 현미경 아래의 새 페트리 접시 뚜껑으로 렌즈를 옮기고 집게의 가장자리를 사용하여 렌즈와 함께 제거된 섬모 세포를 조심스럽게 털어냅니다. 그런 다음 유리체와 수정체 캡슐의 연관성을 꼬집어 수정체액에서 수정체를 분리합니다. 분리되면 35mm 조직 배양 접시에 담긴 200마이크로리터의 트리스 포도당 완충액으로 렌즈를 옮기고 수정체의 앞쪽이 위를 향하도록 방향을 잡습니다.

수정체의 앞쪽은 수정체 상피의 내부와 적도 지역 사이의 경계를 표시하는 조직에 조밀한 고리가 있어 쉽게 식별할 수 있습니다. 두 개의 고정밀 집게를 사용하여 양손에 하나의 집게로 조직을 잡고 반대 방향으로 부드럽게 잡아당겨 수정체 캡슐 중앙을 약 850미크론 길이의 작은 절개를 만듭니다. 다음으로, 27.5 게이지 바늘 끝이 있는 1ml 주사기를 300마이크로리터의 TST 포도당 완충액으로 채웁니다.

수정체 앞쪽 캡슐에 만들어진 절개 부위에 바늘 끝을 삽입하고 수정체의 절반 정도에 삽입합니다. 그런 다음 주사기를 부드럽게 눌러 TST 포도당 완충액을 렌즈에 주입합니다. 섬유 세포 질량.

50-200마이크로리터의 완충액을 주입하여 주변 상피와 수정체 캡슐에서 섬유 세포 덩어리를 느슨하게 합니다. 300마이크로리터 이상을 주입하지 마십시오. 고정밀 겸자를 사용하여 전방 절개 부위를 통해 수정체에서 느슨해진 섬유 세포 덩어리를 제거합니다.

후방 캡슐에 부착된 섬유 세포 덩어리를 제거하면 상처 입은 상피로 둘러싸인 기저막에 재현성이 높은 상처 부위가 생성됩니다. 캡슐 주머니부터 시작하여 수정체의 앞쪽을 지나 적도까지 5번 자릅니다. 그 결과로 생긴 렌즈 캡슐 5개의 플랩을 배양 접시 캡슐 면이 아래로, 세포 면이 위로 향하게 하여 부착된 상피와 함께 평평하게 만듭니다.

별의 각 지점에 있는 집게로 부드럽게 눌러 캡슐을 접시에 고정합니다. 이렇게 하면 x 엑스플랜의 가장 바깥쪽 팁 5개에 작은 움푹 들어간 곳이 생겨 접시에 지속적으로 부착됩니다. 그런 다음 35mm 접시에서 트리스 포도당 완충액을 제거하고 1.5ml의 전쟁 전 M1 99로 교체하십시오.

L-글루타민과 페니실린의 1%가 보충된 미디어. 스트렙토마이신은 접시를 뚜껑으로 덮고 인큐베이터에 넣었습니다. 배양 접시를 해부 현미경 아래에 놓고 상피 세포의 중앙 이동 영역과 원래 부착 영역 사이의 경계를 관찰합니다.

그런 다음 두 개의 고정밀 집게를 사용하여 두 구역 사이의 경계선 양쪽 가장자리를 잡습니다. 선을 따라 원래 부착 영역을 부드럽게 당겨 두 영역을 쉽게 분리할 수 있습니다. 두 영역이 완전히 분리될 때까지 전체 배양권에서 두 영역을 계속 분리합니다.

표준 분자 또는 생화학 분석 기술을 사용하여 두 분획을 연구합니다. 섬유 세포 덩어리가 제거된 직후, ment를 농축한 중간엽 복구 세포의 하위 집단이 활성화되어 상피의 상처 가장자리로 이동합니다. 이 세포는 치유를 시작하기 위해 중앙 이동 영역인 내인성 기저막 캡슐의 무세포 영역으로 빠르게 이동합니다.

여기에 설명된 기법인 상처는 현미경 또는 비디오 카메라로 이 과정을 볼 수 있도록 이 모델 시스템을 완벽하게 준비하며, 상처 치유는 배양 첫날까지 상처의 상당 부위를 빠르게 커버합니다. 3일째가 되면, 상처 치유 과정은 일반적으로 중앙 이동 부위와 원래 부착 부위가 분리된 후 완료됩니다. 이러한 뚜렷한 영역 간의 분자 차이가 여기에서 분석되었습니다.

국소 접착 키나아제의 수준은 두 영역에서 측정되었으며, 인산화된 국소 접착 키나아제의 양은 이동 특이적 중앙 이동 영역에서 증가한 것으로 밝혀졌습니다. 이 모의 백내장 수술 기법을 숙달하면 제대로 수행되면 3분 안에 완료할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 자연스러운 미세환경에서 상처 복구를 밀접하게 모방하는 모의 백내장 수술 모델을 만드는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.